非无菌产品微生物检查：控制菌检查法
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通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时,按一次检出结果为准,不再复试。
供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC（B）10 104〕大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC（B）44 102〕乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC（B）50 094〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC（F）98 001〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24 小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3 天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48 小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24 小时。
(整理)年药典通则1106非无菌产品微生物限度检查.
通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时,按一次检出结果为准,不再复试。
供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC（B）10 104〕大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC（B）44 102〕乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC（B）50 094〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC（F）98 001〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24 小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3 天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48 小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24 小时。
非无菌制剂微生物限度检查操作标准程序
非无菌制剂微生物限度检查操作标准程序起草人日期年月日执行日期2015年12月01日审核人日期年月日颁发部门质保部批准人日期年月日分发部门质保部（）生产部（）采供部（）销售部（）设备部（）物资部（）销售部（）行政部（）财务部（）变更记载：修订号执行日期00 2012年06月01日01 2014年05月01日02 2015年12月01日1. 目的：建立非无菌药品微生物限度检查检验标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确。
2. 适用范围：适用于本公司所有采用非无菌药品微生物限度检查法测定的供试品。
3. 责任者：QC检验员、QC经理。
4. 正文：4.1 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法4.1.1 简述微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。
微生物计数试验应在受控洁净环境下的局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
4.1.2 计数方法计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-NumberMethod，简称MPN 法）。
MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方法。
供试品检查时, 应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，所选的方法必须具备检测充足样品量的能力，以保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
USP 非无菌产品微生物限度检查 控制菌 USP
62 MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: TESTS FOR SPECIFIEDMICROORGANISMS非无菌产品微生物限度检查:控制菌（USP38）1.INTRODUCTION导言The tests described hereafter will allow determination of the absence of, or limited occurrence of, specified microorganisms that may be detected under the conditions described.控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
The tests are designed primarily to determine whether a substance or preparation complies with an established specification for microbiological quality. When used for such purposes, follow the instructions given below, including the number of samples to be taken, and interpret the results as stated below.当本法用于检查非无菌制剂及其原辅料是否符合相应的微生物限度标准时,应按下列规定进行检验，,包括样品的取样量,结果的判断.Alternative microbiological procedures, including automated methods, may be used, provided that their equivalence to the Pharmacopeial method has been demonstrated.可以使用包括自动化法在内的方法,需确认与药典方法的等同性.2.GENERAL PROCEDURES通用规程The preparation of samples is carried out as described in Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests 61.供试品制备,同USP<61>If the product to be examined has antimicrobial activity, this is insofar as possible removed or neutralized as described in Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests 61.若供试品有抗菌活性,应尽可能中和或去除,中和或去除的方法同USP<61>If surface-active substances are used for sample preparation, their absence of toxicity for microorganisms and their compatibility with any inactivators used must be demonstrated as described in Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests 61.若供试品制备过程中使用了表面活性剂,应确认其对微生物的无毒性以及与所用的中和剂/灭活剂的相容性，同USP<61>3.GROWTH-PROMOTING AND INHIBITORY PROPERTIES OF THE MEDIA, SUITABILITYOF THE TEST AND NEGATIVE CONTROLS 培养基适用性检查，控制菌检查方法的适用性确认，阴性对照The ability of the test to detect microorganisms in the presence of the product to be tested must be established. Suitability must be confirmed if a change in testing performance or a change in the product that may affect the outcome of the test is introduced.在有供试品存在的情况下，所建立的方法应能检测微生物。
非无菌产品微生物检查：控制菌检查法
培养基适用性检查
配制培养基的保存 ⒈培养基灭菌后，不得在高压锅内过夜； ⒉固体培养基灭菌或融化后，放置不得超过8h； ⒊培养基于2～25 ℃保存，但不应超过21 d； ⒋固体琼脂培养基 熔化再使用应不超过1次。
菌种及菌液制备
菌种来源 国内外认可的菌种保藏中心。
试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心 获得的干燥菌种为第0
非无菌产品微生物检查：控制 菌检查法
概述
控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物标准时，应按规定进行检验， 包括样品取样量和结果判断等。
本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法， 但必须证明替代方法等效于 药典规定的检查方法。
检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形 态特征应一致。
培养基适用性检查
培养基抑制能力检查
接种不少于100cfu的试验菌于被检培养基。不短于规定的最长培养时间下培养。 试验菌应不得
生长。 培养基指示特性检查
取试验菌悬液各0.1ml涂布于培养基平板上在不长于规定的最短时间下培养， 被检培养基上试
验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
方法适用性试验—试验菌
修订前 大肠菌群的验证，采取大肠埃希菌为验证菌株。 修订后 耐胆盐革兰阴性菌检查方法，采取大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为试验菌。
方法适用性试验
修订前验证方法 取规定量供试液及10 ～100cfu试验菌接入增菌培养基中依相应的控制菌检查方法进行检 查。 当采用薄膜过滤时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中， 过滤后，注入增菌培养基或取出接入增菌培养基中. 修订后适用性试验 按控制菌检查法取规定量供试液及不大于100cfu的试验菌接入规定的培养基中； 采用薄膜过滤时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中，过 滤 ,注入规定的培养基或取出滤膜接入规定的培养基中。 依相应的控制菌检查方法，在规定的温度及最短时间下培养，应能检出所加试验菌相应 的反应特征
中国药典2015版 四部 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则
为更好应用非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则1106）及非无菌药品微生物限度标准（通则110 7），特制定本指导原则。
非无菌药品中污染的某些微生物可能导致药物活性降低，甚至使药品丧失疗效，从而对患者健康造成潜在的危害。
因此，在药品生产、贮藏和流通各个环节中，药品生产企业应严格遵循GMP的指导原则，以降低产品受微生物污染程度。
非无菌产品微生物计数法、控制菌检查法及药品微生物限度标准可用于判断非无菌制剂及原料、辅料等是否符合药典的规定，也可用于指导制剂、原料、辅料等微生物质量标准的制定，及指导生产过程中间产品微生物质量的监控。
本指导原则将对微生物限度检查方法和标准中的特定内容及应用做进一步的说明。
1. 非无菌产品微生物限度检查过程中，如使用表面活性剂、灭活剂及中和剂，在确定其能否适用于所检样品及其用量时，除应证明该试剂对所检样品的处理有效外，还须确认该试剂不影响样品中可能污染的微生物的检出（即无毒性），因此无毒性确认试验的菌株不能仅局限于验证试验菌株，而应当包括产品中可能污染的微生物。
2. 供试液制备方法、抑菌成分的消除方法及需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法应尽量选择微生物计数方法中操作简便、快速的方法，同时，所选用的方法应避免损伤供试品中污染的微生物。
对于抑菌作用较强的供试品，在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法进行试验。
3. 对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查，以保证药品微生物检验用培养基的质量。
对照培养基由中国食品药品检定研究院研制及分发。
4. 进行微生物计数方法适用性试验时，若因没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用而导致微生物回收的失败，应采用能使微生物生长的更高稀释级供试液进行方法适用性试验。
此时更高稀释级供试液的确认要从低往高的稀释级进行，最高稀释级供试液的选择根据供试品应符合的微生物限度标准和菌数报告规则而确定，如供试品应符合的微生物限度标准是lg需氧菌总数不得过10 3 cfu，那么最高稀释级是1：10 3 。
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
2、大肠埃希菌 (Escherichia coli)
大肠埃希菌是两端钝圆的短小直杆菌 革兰阴性 无芽孢，多有鞭毛 培养最适温度为37℃ 可在15-46℃生长 兼性厌氧
大肠埃希菌检查流程
结果判断 若麦康凯琼脂平板上有菌落生长，应鉴定 若麦康凯琼脂平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长 但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌
供试液制备及实验环境要求同微生物计数法
若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及无毒性
如果使用了表面活性剂，应确认其无毒性以及相容性
可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但 必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。 ——新增内容
3、结果判断方式
在各控制菌项下：较少的生化实验或“进一步进行 适宜的鉴定试验” 没长：未检出
5、金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus）
属于葡萄球菌属 菌体呈球形或略呈椭圆 形，菌体较小 需氧或兼性厌氧 最适生长温度为37℃， 最适生长pH为7.4
金黄色葡萄球菌检查流程
结果判断 若甘露醇氯化钠琼脂平板上有黄色菌落或外周有黄色 环的白色菌落生长，应鉴定 若没有疑似的菌落生长，或虽有相符或疑似的菌落生 长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出金黄色葡萄球 菌
琼脂 方法：涂布 至少2皿 ①是否生长 ②比较菌落特征
液体 方法：直接接种 培养基是否浑浊、 比较浑浊程度
③要求： 菌株：根据表格要求接种 接种量：根据测试指标而定 ①+&指示：不大于100cfu ②—：不少于100cfu，也不能过多 ③涂布：不少于0.1mL接种，也不能过多 培养时间 ① +&指示：不长于规定的最短培养时间 ②—：不短于规定的最长培养时间
*铜绿假单胞菌（Ps.aeruginosa） 铜绿假单胞菌（Ps.aeruginosa） *金黄色葡萄球菌（S.aureus） 梭菌（Clostridia） 白色念珠菌（C.albicans） 金黄色葡萄球菌（S.aureus） 梭菌（Clostridia） 白色念珠菌（C.albicans）
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程1 目的明确微生物限度检查-控制菌检查法的过程，保证产品质量。
2 适用范围检查非无菌制剂及其原、辅料等是否存在特定的微生物（如：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）, 从而判断是否符合相应的微生物限度标准。
3 定义无。
4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。
负责人：监督执行情况，审批最终结果。
5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。
5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.1.3 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
5.2 检验量从一批中随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合后，从中抽取10g或10mL。
5.3 实验材料与用具5.3.1 混合后的待检品（供试品）、TSB培养基（9mL/管）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；5.3.2 铜绿假单胞菌实验用材料：铜绿假单胞菌菌悬液（≤100cfu/mL）、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、1%二盐酸N,N-二甲基对苯二胺试液（即用即配）；5.3.3 金黄色葡萄球菌实验用材料：金黄色葡萄球菌菌悬液（≤100cfu/mL）、甘露醇氯化钠琼脂培养基；5.3.4 用具：培养皿、接种环、洁净滤纸片、无菌玻棒。
5.4 供试液制备5.4.1 取供试品和pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以1:10稀释成供试液。
5.4.2 必要时，用统一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释；也可用混合的供试品原液作为供试液。
5.5 增菌培养5.5.1 供试品组：取1mL供试液，接种至9mL的TSB中，混匀，共接种2管。
5.5.2 阳性对照：取1mL菌液，与供试液同法操作，接种至9mL的TSB中，混匀，接种1管。
5.5.3 阴性对照：取1mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，与供试液同法操作，接种至9mL 的TSB中，混匀，接种1管。
2015版中国药典微生物限度
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品， 用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或 pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。 分散力较差的供试品，可在稀释液中加入 表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80，使供 试品分散均匀。若需要，调节供试液 pH 值至 6～8。必要时，用同一稀释液将供 试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的 总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上 生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌 和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可 使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡 萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红 钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每 稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养 基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂 培养基平板在20～25℃培养5 ~7天， 观察菌落 生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时 可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告 。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落 数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌 数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15， 则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。
2015年药典通则1106非无菌产品微生物限度检查
通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时,按一次检出结果为准,不再复试。
供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC（B）10 104〕大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC（B）44 102〕乙型副伤寒沙门菌(Salmonellaparatyphi B)〔CMCC（B）50 094〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC（F）98 001〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24 小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3 天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48 小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24 小时。
非无菌产品微生物限度检查方法的验证
非无菌产品微生物限度检查方法的验证一、验证的目的由于某些供试品具有抗菌活性，在药品质量标准建立时或处方改变，检验条件发生改变时，可能影响到检验结果的准确性，必须对供试品的微生物限度测定方法的可靠性进行验证，以确定采用的供试液制备和细菌、霉菌和酵母菌计数方法、控制菌检查方法能够准确检出供试品中存在的活的微生物的数量及存在致病菌的种类。
二、验证用菌株1 、细菌计数验证用标准菌株：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌。
霉菌和酵母菌计数验证用标准菌株：白色念珠菌、黑曲霉。
控制菌检查方法验证用菌株：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌，沙门菌，铜绿假单胞杆菌，生胞梭菌。
2 、菌种的传代次数：不得超过5代。
采用适宜的方法保存。
加菌量：50-100cfu，控制菌验证加菌量为10-100cfu。
加菌量过多，菌落拥挤，不好计数；加菌量过少，实验误差大。
三、验证方法选择平皿法、薄膜过滤法、MPN法等。
四、稀释级的选择固体制剂，取1:10 或1:20的供试液，液体制剂直接取1ml 进行验证试验。
五、培养基及稀释剂营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、改良马丁培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基、PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%氯化钠溶液。
六、菌液制备1、细菌、霉菌和酵母菌计数用试验菌(1) 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌、乙型付伤寒沙门菌的斜面新鲜培养物至10ml营养肉汤中，30-35℃培养18-24小时，取此培养液lml加0.9％无菌氯化钠溶液9m1，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5-10-7,使菌数约为50-100cfu/ml。
(2) 接种白色念珠菌的斜面新鲜培养物至l0ml改良马丁培养基中，23-28℃培养18-24小时，取此培养液lml加0.9％无菌氯化钠溶液9m1,采用10倍递增稀释法，稀释至10-5_ 10-7，使菌数约为50 - 100cfu/ml。
(3) 取黑曲霉的斜面新鲜培养物加3～5m1 0. 9％无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸出孢子液lml加置0.9％无菌氯化钠溶液9m1中，采用10倍递增稀释法，稀释菌数约为50- 100cfu/ml。
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
学习：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
学习：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。
计数方法……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
……提示：后文增加了对于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因注意结合此处的要求。
计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……学习：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。
培养基适用性检查微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述更准确，下文还有，不再赘述。
……计数方法适用性试验1.供试液制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°C。
供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
……学习：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。
非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
2020版药典非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）”。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所釆用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC（B）10 104〕大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44 102〕乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）〔CMCC（B）50 094〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（B）98 001〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24小时。
4 非无菌产品微生物检查：控制菌检查法
大肠埃希菌
麦康凯肉汤 麦康凯琼脂
大肠埃希菌
麦康凯肉汤
麦康凯琼脂
促生长能力 大肠埃希菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 促生长能力+指示 大肠埃希菌
培养基适用性检查
沙门菌 RV沙门菌增菌肉汤 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 三糖铁琼脂培养基 铜绿假单胞菌 溴化十六烷基三甲铵琼脂 促生长能力 抑制能力 促生长能力 +指示特性 指示能力 促生长能力 抑制能力 促生长能力 +指示特性 抑制能力 促生长能 促生长能力 生孢梭菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 生孢梭菌
培养基适用性试验
培养基是绝大多数微生物试验的基础其质量是微生物试验成功关键因素。 适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保 证。
培养基适用性试验
培养基的配制 可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品化成品培养基，脱水培 养基除附有处方和使用说明外还应注明有效期、贮存条件、适用性试验的质 控菌株和用途。配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，确 保培养基的质量符合要求。
划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上，置 30～35℃，培养18～24小时。 平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性
耐胆盐革兰阴性菌检查 定量试验 1、取定量供试品的预培养物或其稀释液分别接种至肠道菌 增菌肉汤中。 30～35℃，培养24～48小时。 2、上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄 糖琼脂平板上。 30～35℃，培养18～24小时。 若紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴 性。根据各培养管检查结果，从表2查对1g或1ml供试品中含有耐胆盐革兰阴 性菌的最大可能数。
2015版中国药典关于微生物检验有关变化的解读
黑龙江省食品药品检验检测所
杨利红
目
录
1 2
3
概况及背景 标准修订内容
执行及制定标准的注意事项
4 5
标准与方法 国外药典的标准收载情况
一、概况及背景
参照欧、美药典中“微生物限度”相关内容的组织形 式，将原“微生物限度检查法”修订后拆分为3个附录， 并在药典会网站上公示： -1、非无菌产品微生物检查：微生物计数法（一、二、 三部相同） -2、非无菌产品微生物检查：控制菌检查法（一、二、 三部相同） -3、药品微生物限度标准（一部；二部同三部）
在2005版chp收载微生物限度标准的基 础上，眼用制剂修订为无菌要求；阴 道、尿道给药制剂增加白色念珠菌 的控制；增加了贴膏剂的控制菌检查。
二、标准修订内容
1、药典标准的修订思路 （1）三部药典的合并 现行2010版《中国药典》三部分在微生物限度标准有 重叠，一部多于二部、三部。
一部标准为 基础
二、标准修订内容
非无菌药用原料及辅料微生物限度标准中药提取物及中药饮片微生物限度标准
制剂类型
TAMC
TYMC
控制菌
药用原料及辅料
103
102
未统一要求
中药提取物
103
102
未统一要求
中药饮片
未统一要 未统一要 求 求
不得检出沙门菌(10g)，耐胆盐 的阴性菌应小于104(1g)
二、标准修订内容
（4）实验环境的重大修订 ①无菌检查环境洁净度规定 GMP2010年版对洁净度的规定及确认标准 无菌检查： 2010年版：应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流 空气区域内或隔离系统中进行。 2015年版：应在洁净度B级背景下的局部A级单向流空气区 域内或隔离系统中进行。 ②微生物限度检查环境洁净度规定 微生物限度检查： 2010年版：应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流 空气区域内进行。 2015年版：应在受控洁净环境下（不低于D级）的局部不 低于B级单向流空气区域内进行。
2015年版中国药典微生物限度检查法
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为 菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最 高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低 稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小 于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进 一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也 可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株 试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时
非无菌产品微生物限度检查中控制菌检查原理
非无菌药品微生物限度检查中控制菌检查及原理一、大肠埃希菌1.菌体特性大肠埃希菌属于肠杆菌科埃希菌属，菌体细胞两端钝圆，为革兰染色阴性无芽孢杆菌，细胞大小为1.1～1.5×2～6.0 µm。
周身鞭毛、运动或不运动。
能形成荚膜和微荚膜。
最适生长温度37℃，可在15～46℃生长。
最适pH为7.4～7.6。
在营养肉汤培养基中，37℃培养24小时后，形成菌膜，管底粘液状沉淀，培养物有粪臭味。
在伊红美兰琼脂（EMB）平板上，典型的菌落呈紫黑色，有金属光泽，菌落扁平，低度凸起，光滑湿润。
也有呈粉红色、无金属光泽、中心紫色的菌落。
在麦康凯琼脂（MaCC）平板上，菌落扁平、圆形、光滑湿润。
呈桃红色、微红色或菌落中心桃红色。
2. 生化实验原理（1）MUG试验97％的大肠埃希菌含有β—葡萄糖醛苷酶，可分解4—甲基伞形酮β－D－葡萄糖苷酸，生成的4—甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。
（2）靛基质试验（I实验)有些细菌具有色氨酸酶，在蛋白胨水培养基中生长时，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。
靛基质无色，不能直接观察，加入靛基质试液（对二甲氨基苯甲醛试液），产成红色的玫瑰靛基质。
色氨酸酶活性的最适pH为7.4～7.8。
pH降低，靛基质产生减少，可能出现假阴性或弱阳性反应，故培养基pH应为7.4～7.6 。
因产生靛基质的细菌都能发酵糖类而产酸，增加培养基的酸度，不宜用含葡萄糖的培养基进行此试验。
（3）甲基红试验（M）肠杆菌科细菌均可发酵葡萄糖产生酸性代谢产物，使培养基pH值下降，最初可使甲基红指示液［变色域pH4.5－5.4（红→黄）］变色而呈现阳性反应。
但继续培养后，产气杆菌能将两分子的丙酮酸脱羧生成一分子的中性乙酰甲基甲醇而使培养基pH值上升至5.4以上，使甲基红指示液变为桔黄色（甲基红试验阴性）。
而大肠埃希菌则继续产生大量的酸，如甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，保持高氢离子浓度，故甲基红试验为阳性反应。
非无菌产品微生物限度检查,控制菌检查法
结果判断 若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上有疑似菌落生长，且三糖铁 琼脂培养基的斜面为红色、底层为黄色，或斜面黄色、底层有黑色，应进一步进 行适宜的鉴定试验, 确证是否为沙门菌。如果平板上没有菌落生长，或虽有菌落 生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色； 或斜面黄色、底层无黑色，判供试品未检出沙门菌。
则每 1g(或 1mL)供试品中可能的菌数（N）应相应增加 10 倍。
大肠埃希菌(Escherichia coli) 供试液制备和增菌培养 取供试品，照“非无菌产品微生物限度检查：微生
物计数法” （附录×××）制成 1：10 供试液。取相当于 1g 或 1mL 供试品的供 试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定的）的胰酪大豆胨肉汤中，混匀， 30～35℃培养 18～24 小时。
耐胆盐革兰阴性菌的最大可能数。
表 2 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数
各供试品量的检查结果
0.1g 或 0.1ml ＋
0.01g 或 0.01ml
＋
0.001g 或 0.001ml
＋
每 1g(或 1mL)供试品中可能的菌数（N） N＞103
＋
＋
－
102＜N＜103
＋
－
－
10＜N＜102
－
－
－
N＜10
注：⑴ ＋代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长；－代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上 无菌落生长。 ⑵ 若供试品量减少 10 倍（如 0.01g 或 0.01ml，0.001g 或 0.001ml，0.0001g 或 0.0001ml），
2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查本文介绍了非无菌产品微生物限度检查中的微生物计数法。
该方法适用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
在检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应严格遵守无菌操作，防止再污染。
计数方法的选择应考虑供试品理化特性和微生物限度标准等因素，并经过确认。
此外，商品化的预制培养基和由脱水培养基或按处方配制的培养基都应进行培养基适用性检查。
在供试液制备过程中，应根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液，并在加温时均匀加热，且温度不应超过45°C。
供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
在进行多种品种计数方法的适用性试验时，需要注意时效问题。
在“供试液制备”这一节中，水溶性供试品、水不溶性非油脂供试品、油脂类供试品的制备方法没有变化。
在2020版药典中，将原来的“需用特殊方法制备供试液的供试品”中的小类（四种）提升至与上述三类并列，除气雾剂供试品外，制备方法没有变化。
具体是膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂供试品（2015版：气雾剂、喷雾剂供试品）、贴剂、贴膏剂供试品（2015版：贴膏剂供试品）。
需要注意的是，气雾剂供试品的变化较大，需要特别注意。
在进行供试液接种后的抗菌活性去除或灭活时，可以使用中和剂或灭活剂（表2)来消除干扰物的抑菌活性。
最好在稀释液或培养基灭菌前加入。
如果使用中和剂或灭活剂，试验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量含中和剂或灭活剂的稀释液替代供试品同试验组操作。
需要注意的是，在方法学中，这个对照组的稀释液中显然要含有相应的中和剂或者灭活剂，进一步明确，以防止错误套用。
在供试品中微生物的回收中，涂布法中“取15~20ml”修订为“取适量（通常为15~20ml）”。
在薄膜过滤法中，所采用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。
如果采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。
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替代法的应用原则
本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法 等效于药典规定的检查方法。
收载方式及结果判断方式
修订前 增菌、分离(纯化)、生化试验 适宜的鉴定试验。 修订后 增菌、分离(纯化)、生化试验
其它适宜方法进一步鉴定。
培养基适用性试验
修订内容 控制菌检查用培养基数量减少7个；在增菌过程，使用无选择性增菌培养 基培养 理由 污染菌受到环境、加工过程及储存等影响，受到损伤，使用无选择性增 菌培养基培养，使受损伤的细菌得到修复，提高检出率。
增修订内容
收载方式 检验项目 替代法的应用原则 结果判断方式
收载方式
修订前 微生物限度检查 修订后 非无菌产品微生物检查：微生物计数法 非无菌产品微生物检查：控制菌检查法 非无菌药品微生物限度标准
检验项目
修订前 大肠杆菌、 大肠菌群、 沙门菌、 铜绿假单胞菌、 金黄色葡萄球菌 梭菌、 白色念珠菌 修订后 大肠杆菌、 耐胆盐革兰阴性菌、 沙门菌、 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌、 梭菌、 白色念珠菌
培养基适用性检查
控制菌检查
培养基
特性
试验菌株
耐胆盐革兰阴性菌
肠道菌增菌肉汤 促生长能力
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
紫红胆盐葡萄糖琼脂 促生长能力+指示特性 大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌 大肠埃希菌
麦康凯肉汤 麦康凯琼脂
麦康凯肉汤 麦康凯琼脂
促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示
培养基适用性试验
培养基是绝大多数微生物试验的基础其质量是微生物试验成功关键因素。 适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保 证。
培养基适用性试验
培养基的配制 可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品化成品培养基，脱水培 养基除附有处方和使用说明外还应注明有效期、贮存条件、适用性试验的质 控菌株和用途。配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，确 保培养基的质量符合要求。
菌液制备
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌 胰酪大豆胨肉汤或在胰酪大豆胨琼脂30～35℃，18～24h 白色念珠菌 沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤20℃～25℃， 2～3天 生孢梭菌梭菌增菌培养基30～35℃，置厌氧条件下培养24～48小时
菌液制备
菌悬液的制备 稀释剂 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。 菌悬液的贮存 若在室温下放置，应在2小时内使用； 若保存在2～8℃，可在24小时内使用。 生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，稳定的孢子悬液可保 存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌
促生长能力
大肠埃希菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
促生长能力+指示
大肠埃希菌
培养基适用性检查
沙门菌
RV沙门菌增菌肉汤 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 三糖铁琼脂培养基
促生长能力 抑制能力 促生长能力 +指示特性
指示能力
乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌
乙型副伤寒沙门菌
乙型副伤寒沙门菌
培养基适用性检查
配制培养基的保存 ⒈培养基灭菌后，不得在高压锅内过夜； ⒉固体培养基灭菌或融化后，放置不得超过8h； ⒊培养基于2～25 ℃保存，但不应超过21 d； ⒋固体琼脂培养基 熔化再使用应不超过1次。
菌种及菌液制备
菌种来源 国内外认可的菌种保藏中心。
试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心 获得的干燥菌种为第0
代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性
金黄色葡萄球菌
〔CMCC（B）26 003〕
铜绿假单胞菌
〔CMCC（B）10 104〕
大肠埃希菌
〔CMCC（B）44 102〕
乙型副伤寒沙门菌 〔CMCC（B）50 094〕
白色念珠菌
〔CMCC（F）98 001
生孢梭菌
〔CMCC（B）64 941
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
溴化十六烷基三甲铵琼脂
促生长能力 铜绿假单胞菌
抑制能力
大肠埃希菌
甘露醇氯化钠琼脂
促生长能力 +指示特性 抑制能力金黄色萄球菌 大肠埃希菌梭菌
梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂
白色念珠菌 沙氏葡萄糖肉汤
沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基
促生长能
生孢梭菌
促生长能力
生孢梭菌
促生长能力
培养基适用性检查试验
再验证 ⒈如果其中有任一控制点发生变化,应重新进行培养基适用性检查。 ⒉当检验结果出现异常或实验室质量控制需要，也可通过培养基适 用性检查提供一定依据。
培养基适用性检查
⒈固体培养基或原料变质不应使用；配制培养基储存过程中发现 浑浊、变色、 有菌生长、严重脱水等变化不应再使用。 ⒉不同处方培养基的替代使用不能通过培养基适用性试验确定。 ⒊除特殊规定外，培养基配制采用蒸馏水或纯化水，但应进行检测控制，如蒸 馏水pH值应为5～7。 ⒋尽量临用现配。
阴性对照试验
确认试验条件是否符合要求。 稀释剂代替供试品进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。 供试品检查时也需进行阴性对照试验。如果阴性对照有菌生长，应 进行偏差调 查。
培养基适用性检查
成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基 的适用性检查。 促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。 菌株见表
非无菌产品微生物检查：控制菌检查法
概述
控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物 。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物标准时，应按 规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法， 但必须证明替代方 法等效于药典规定的检查方法。
概述
微生物限度检查法中的控制菌检查在药典一、二、三部附录中内容基本一致 参照ICH协调案”非无菌药品微生物限度检查：控制菌检查”进行修订。 主要修订内容 控制菌检查项目、培养基体系、 培养基适用性检查、 检查方法适用性试验、 结果判断等。
控制菌检查法
供试液制备及实验环境要求 -同《非无菌产品微生物检查：微生物计数法》。 -如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。 -中和剂或灭活剂的使用 使用了中和剂或灭活剂应确认有效性及对微生物的无毒 性并应确认供试液 与所使用的中和剂或灭活剂的相容性。