液相色谱-三重四极杆质谱法
液相色谱——三重四极杆串联质谱联用法测定水中的草甘膦
黧 Ｃ Ｉ Ｔ Ｙ Ａ Ｎ Ｄ Ｔ Ｏ Ｗ Ｎ Ｗ Ａ Ｔ Ｅ Ｒ Ｓ Ｕ Ｐ Ｐ Ｌ Ｙ
・ 水 质 分析 与监 测 ・
液相色谱—— 三重 四极杆 串联 质谱联用法 测 定水 中的草甘膦
罗小勇
（ 贵阳北控水务有限责任公 司，贵州贵 阳 ５ ５ ０ ０ ０ ８ ）
１ ． １ ． １流 动 相 Ａ ： ０ ． １ ％ 甲酸 的 乙腈 溶 液 ，移 取 ｌ ｍｌ 甲酸 于 １ ０ ０ ０ ｍｌ 乙腈 溶 液 中 ，混匀 。 １ ． １ ． ２流 动 相 Ｂ ： 称取 ０ ． １ ５ ４ ｇ 无 水 乙酸胺 溶 解 于
适 量水 中加入 ｌ ｍ ｌ 甲酸 ，用 水定 溶 至 ｌ Ｏ ０ ０ ｍ ｌ 。
２ ０ ０ ｇ ／ Ｌ、４ ０ ０ ｇ ／ Ｌ、８ ０ ０ ｇ ／ Ｌ的标 准系列 。 １ ． ４样 品制备
色谱纯 ） ； 乙酸胺 （ 进 口色谱纯 ） ； 甲酸 （ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ 公 司 ，色 谱纯 ） ； 无水 乙酸 （ 进 口色谱 纯 ） ； 硼 酸钠 （ Ｎ ａ ２ Ｂ Ｏ ． １ ０ Ｈ２ ０） ； 丙酮 （ 液相 色 谱 纯 ） ； 乙腈 （ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ 公 司 ，液相 色谱 纯 ） ；甲醇 （ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ 公 司 ，液 相 色谱
白色 固体 ，大约在 ２ ３ ０ ℃左右熔化 ，并伴随分解。微 溶 于 水 ，不 溶 于 一 般有 机 溶 剂 ，其 异丙 胺盐 完 全 溶 解 于 水 。草 甘 膦 主要 用 于 内吸传 导 型 慢 性 广谱 灭 生 性除草剂 ，人土后很快 与铁 、铝等金属离子结合而 失去活性 ，对土壤 中潜藏 的种子和土壤微生物无不 良影响。新制定的 《 生活饮用水卫生标准 》中 ， 增加
三重四级杆液相色谱质谱联用仪原理
三重四级杆液相色谱质谱联用仪原理
三重四级杆液相色谱质谱联用仪的结构由三个四级杆（Q1，Q2，Q3）
组成，其作用分别为：Q1作为入口四级杆，通过调整电压和磁场来选择
特定的前驱离子（precursor ion）进入系统；Q2作为碰撞池，用于离子
的碰撞解离和选择性筛选；Q3作为出口四级杆，根据质量/荷电比（m/z）对产生的离子进行进行分离和检测。
1.采样和预处理：样品通过进样系统进入色谱柱进行分离。
在进样之前，可以对样品进行前处理，如样品制备、固相萃取等。
3. 离子化：分离后的化合物分子进入质谱部分，通常采用电喷雾（electrospray ionization，ESI）或大气压化学电离（atmospheric pressure chemical ionization，APCI）等离子化方式进行离子化。
离子
化过程中，化合物分子失去或获得一个或多个电子而变成带电离子。
4. 离子的选择性解离：离子进入Q2碰撞池后，在与碰撞气体（collision gas）碰撞的过程中发生解离反应。
这些反应是高度选择性的，只能发生在特定离子对中。
5.质谱分析：环境中的离子经过Q3四级杆的分离后，根据其质量/荷
电比（m/z）和强度进行检测。
通过对质谱图的分析，可以确定样品中存
在的化合物种类和含量。
总之，三重四级杆液相色谱质谱联用仪通过液相色谱和质谱的联用，
结合分离和离子化技术，实现了复杂样品的分离、检测和分析。
其原理和
操作流程相对复杂，但能够提供高灵敏度和高选择性的分析结果，广泛应
用于食品安全、环境监测、药物分析等领域。
液相色谱-三重四级杆质谱法测定水中9种微囊藻毒素
随着水体富营养化日益严重袁由蓝藻水华引起的 污染事件在我国频繁发生袁不仅破坏了水生生态系统 的健康尧平衡袁而且因藻细胞破裂后释放出微囊藻毒 素尧节球藻毒素尧数丝藻毒素等多种毒素而对饮用水 的安全构成了严重的威胁[1-3]遥 微囊藻毒素即为水体中 蓝藻类如铜绿微囊藻尧鱼腥藻和念珠藻等水华释放的 一类具有强致癌作用和肝毒性的单环七肽化合物遥 目 前已发现 60 多种同分异构体袁其中存在最普遍尧含量 较多尧 毒性较大的是 MC-LR尧MC-RR 和 MC-YR渊L尧 R尧Y 分别代表亮氨酸尧精氨酸和酪氨酸冤[4]遥 由于微囊 藻毒素毒性大尧分布广尧结构稳定袁从而成为环境中潜 在的危害物质[5-6]遥 世界卫生组织和叶生活饮用水标准曳 均推荐水中微囊藻毒素的安全浓度为 1 滋g/L遥 目前袁水 中微囊藻毒素的检测方法主要分为化学法尧生物法和 免疫化学法 3 类院化学法主要包括薄层层析法尧液相 色谱法尧液相色谱-质谱联用法和毛细管电泳法曰生物 法包括生物体法尧酶抑制-蛋白磷酸酶法曰免疫化学法 包括放射免疫法尧.056 0.048 0.045 0.053 0.033 0.051 0.047 0.046 0.038
平均值 0.052 0.048 0.045 0.055 0.036 0.049 0.040 0.042 0.032
标准偏差/ 滋g窑L-1 0.004 0.003 0.003 0.004 0.004 0.004 0.005 0.003 0.003
进样量 25 滋L曰 流动相袁A 为 0.1%甲酸水溶液袁B 为 0.1%甲酸乙腈溶液遥 梯度洗脱程序见表 1遥
表 1 梯度洗脱程序
时间/min 0 4.5 10.0 12.0 12.5 15.0
流动相 A/% 90 90 20 20 90 90
超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪技术参数
超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪技术参数一、应用范围本设备主要用于食品安全，药物代谢，毒物分析，代谢组学，脂质组学等小分子化合物的快速同步定性、定量分析。
1.工作条件1. 1.1电源电压：230V±10%,50∕60Hz,16Λ1.1.2环境温度：15-27βC（最优：18~21C）1.1.3相对湿度：20-80%二、技术要求1.超高效液相色谱仪1.1二元超高效梯度泵（带真空在线脱气机）1. 1.1流量范围:0~8m1.∕min,步进0.001m1./min▲1.1.2最大压力：≥103.4Mpa1.1.3流量准确度:＜0.1%1.1.4流量精密度：＜0.05%1.1.5梯度混合精确度：＜0.15%1.1.1.6梯度混合类型：二元高压混合1.2.7泵清洗系统：主动式单独流路清洗柱塞1.3.动进样器：1.4.1进样体积：0.01-IOO P1.1.4.2进样体积准确度：0.5%1.4.3交叉污染：0.004%1.5.温箱1.6.1温控范围：5~80°C1.3.2温度准确度：±0.5C1.3.3温度精度±0.1C1.3.4容量：最多12支色谱柱2.质谱部分技术性能2.1.离子源2.1.2离子源：独立的可加热电喷雾离子源（ESI源），全内置式气路电路接口设计，安装离子源时即可实现气路电路连接，自动识别，实现零误操作；▲2.1.2可加热ES1.源，加热温度最高可达550C,不分流的情况下采用纯水作为溶剂，流速为1.u1.-2000μ1.∕min;2.1.3探针采用60度最优喷雾设计，可在任意位置固定并实现前后直线型、左右圆弧型调节，高低连续可调；2.1.4内置大面积多边形同轴主动排废气设计，消除废气涡流，降低化学噪音，不锈钢排废管路，实现离子源腔体高温自洁净；2.1.5具有雾化气、辅助雾化气、可调式吹扫气（0-151.∕min可调），进一步提高雾化效率和稳定性；2.1.6可拆卸的吹扫挡锥，非对称锥面设计，在富灵敏度的情况下确保长期耐用性；2.1.7内置六通阀，实现流动相自由切换2.2离子传输系统▲2.2.1离子传输系统必须配有离子传输管设计，保护分子涡轮泵，减少真空负担；2.2.2大口径非对称高通量离子传输管，确保更多离子进入质谱系统，提高灵敏度；2.2.3离子传输管双独立加热，最高温度可达400℃,进一步提高脱溶剂效率和确保离子传输系统抗污染能力；2.2.4具有真空隔断阀设计，在移去、清洗离子传输部件时，不需破坏真空即可实现快速更换，待机时不需要消耗氮气；2.3四极杆质量分析器2.3.1碰撞气为高纯高惰性氧气或氮气，确保母离子碎裂效率；2.3.2四极杆分辨率：QI和Q3在全质量范围，分辨率可到0.2amu的高选择性，在只需在方法设定设定界面简单选择即可，无需特殊手动调谐。
高效液相色谱-三重四级杆质谱法测定水中15种氨基甲酸酯类农药
广东化工2021年第3期· 174 · 第48卷总第437期高效液相色谱-三重四级杆质谱法测定水中15种氨基甲酸酯类农药曾家源，张晓淳，陈嘉文(中山市环境监测站，广东中山528400)[摘要]建立了直接进样-高效液相质谱法测定水中15种氨基甲酸酯类农药的测定方法。
本方法采用水样过滤后直接进样，根据保留时间和特征离子定性，内标法定量。
方法线性良好，相关系数均大于0.995，RSD和回收率满意。
方法可用于地表水中15种氨基甲酸酯农药测定工作。
[关键词]直接进样；高效液相色谱-三重四级杆质谱法；氨基甲酸酯类农药[中图分类号]O65 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2021)03-0174-03 Determination of 15 Carbamate Pesticides in Water by High-performance Liquid Chromatography-triple Quadrupole Mass SpectrometryZeng Jiayuan, Zhang Xxiaochun, Chen Jiawen(Zhongshan Environmental Monlitoring Station, Zhongshan 528400, China)Abstract: A method has been developed for the determination of 15 Carbamate pesticides in water by direct injection-high performance liquid chromatography-mass spectrometry. In this method, water samples are filtered and injected directly, and the samples are qualitative tested by retention time and characteristic ions, and quantitatively by internal standard method. The Correlation Coefficient was greater than 0.995, RSD and recovery rate were satisfactory. The method can be used for the determination of 15 Carbamate pesticides in water.Keywords: direct injection；high-performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry；Carbamate pesticides氨基甲酸酯类农药是20世纪50年代发展起来的有机合成杀虫剂，是继有机磷农药后发展较为迅速的新型杀虫剂和除草剂，20世纪70年代以来，由于有机氯农药和有机磷农药的禁用和限用,氨基甲酸酯类农药的使用量逐年增加，氨基甲酸酯类农药就成为和有机磷、拟除虫菊酯并驾齐驱的三大农药之一[1-2]。
三重四极杆液相色谱质谱
三重四极杆液相色谱质谱一、液相色谱部分液相色谱法是一种常用的分离和分析方法，主要用于分离和检测化学物质。
其原理是基于物质在固定相和流动相之间的分配平衡，实现物质的分离。
在液相色谱法中，常用的色谱柱包括硅胶、氧化铝、活性炭、C8、C18等。
这些色谱柱可以根据物质的极性和吸附性质进行选择。
在液相色谱法中，流动相的选择也非常重要。
常见的流动相包括甲醇、乙醇、乙腈、水等。
流动相的极性和组成可以影响物质的分离效果。
二、四极杆部分四极杆是液相色谱质谱联用仪的核心部件之一，用于加速带电粒子，控制带电粒子的能量和聚焦带电粒子。
四极杆由四根平行金属杆组成，每两根金属杆之间通过绝缘材料隔开。
四极杆的主要作用是通过对离子施加射频电压来控制离子的运动轨迹。
离子在四极杆中受到交替的电场和磁场的作用，经过四极杆后，离子的运动轨迹会发生变化，从而实现离子的聚焦和能量控制。
三、质谱部分质谱是液相色谱质谱联用仪的核心部件之一，用于对物质进行高精度的质量分析。
质谱部分主要由离子源、质量分析器和检测器组成。
离子源的作用是将样品离子化，产生带电粒子。
质量分析器的作用是将带电粒子按照质量分离，不同的质量粒子进入检测器进行检测。
检测器的作用是将进入检测器的粒子转换成电信号，并进行放大和记录。
四、数据处理与分析在液相色谱质谱联用仪中，数据处理与分析是非常重要的环节。
数据处理的主要任务是对采集到的数据进行整理、去噪、提取有效信息等操作，以便进行后续的分析。
数据分析则是对处理后的数据进行深入挖掘，提取有关物质组成、含量、结构等信息，为研究提供科学依据。
在数据分析过程中，需要借助各种化学计量学方法和技术，如主成分分析、聚类分析、模式识别等，以实现更准确和深入的分析结果。
五、应用领域三重四极杆液相色谱质谱联用仪在多个领域都有广泛的应用，如生命科学、环境科学、药物化学等。
在生命科学领域，该仪器可用于研究生物分子相互作用、蛋白质组学、代谢组学等；在环境科学领域，可用于检测环境污染物的组成和含量；在药物化学领域，可用于研究新药的发现和开发。
三重四极杆液相色谱质谱联用仪原理
三重四极杆液相色谱质谱联用仪原理三重四极杆液相色谱质谱联用仪是一种高性能分析仪器，它将液相色谱和质谱分析技术结合起来，能够更加敏感、准确地检测和分析物质的组成、结构和性质。
其原理主要包括三个方面：离子化、分离和检测。
在离子化过程中，样品分子首先通过电离源获得电离能量，从而产生带电离子。
常见的电离方式有电子轰击（EI）和电喷雾（ESI）等。
其中，EI适用于不易挥发的样品，能够产生非常多的碎片离子，而ESI适用于挥发性较好的样品，能够产生分子离子和阳离子等。
在离子化后，产生的离子将进入三重四极杆中进行分离。
三重四极杆是一种电场作用下的质谱分离仪器，由三个正交的四极杆组成。
其主要原理是利用不同的离子的质荷比（m/z）在杆场中具有不同的运动轨迹和稳定区域，从而将离子按照m/z值大小进行分离。
通过调节杆场电势、离子能量和气压等参数，可以实现高效、快速和准确的离子分离和检测。
最后，在分离后的离子到达检测器时，将产生电离信号和检测信号。
电离信号主要是指离子到达检测器时发生的电离造成的电流或电荷信号，而检测信号则可以是质量光谱图或离子强度信号等。
这些信号可以通过数据采集与处理系统进行展示和处理，进而得到样品的组成、结构和性质信息。
除了以上的主要原理外，三重四极杆液相色谱质谱联用仪还包括许多其他技术和方法，如小柱液相色谱（nanoLC）、多级质谱（MSn）、离子陷阱（IT）等。
这些技术和方法可以进一步提高分析的分辨率、灵敏度和特异性等，有助于更深入地了解样品的性质和特征。
总之，三重四极杆液相色谱质谱联用仪是一种能够有效分离和检测复杂化合物的高性能分析仪器。
其结合了液相色谱和质谱分析技术，能够提供高效、快速和准确的分析结果，对于许多生命科学和化学领域的研究有着重要的应用价值。
QuEChERS-高效液相色谱
第 29 卷第 4 期分析测试技术与仪器Volume 29 Number 4 2023年12月ANALYSIS AND TESTING TECHNOLOGY AND INSTRUMENTS Dec. 2023分析测试经验介绍(384 ~ 391)QuEChERS-高效液相色谱/三重四极杆质谱联用法测定化妆品中防晒剂的检测方法潘秀丽，邵长春，李 赟，许晓辉，王小乔，张虹艳（兰州市食品药品检验检测研究院，甘肃兰州 730050）摘要：建立了防晒类化妆品中常用15种防晒剂的高效液相色谱/三重四极杆质谱联用分析方法和样品前处理方法. 样品中加入1 mL无水乙醇，用乙腈︰水（体积比4∶1）定容，超声提取后，QuEChERS柱净化，0 ℃下10000 r/min 离心10 min，以含0.1%甲酸的乙腈溶液-含0.1%甲酸的2 mmol/L乙酸铵溶液为流动相，梯度洗脱，C18（2.1 mm×50 mm, 1.8 µm）色谱柱分离，多反应监测（MRM）正离子模式扫描，外标法定量. 结果显示：15种防晒剂在一定浓度范围内呈良好线性关系，相关系数均大于0.99，方法检出限为10~50 µg/kg. 方法平均回收率为68.4%~84.2%.相对标准偏差（RSD）为1.7%~9.0%. 方法可用于防晒剂的检测，灵敏度高，重现性好，具有良好适应性.关键词：化妆品；防晒剂；QuEChERS净化柱；质谱法中图分类号：O657. 63 文献标志码：B 文章编号：1006-3757（2023）04-0384-08DOI：10.16495/j.1006-3757.2023.04.007Determination of Sunscreens in Cosmetics by QuEChERS-HighPerformance Liquid Chromatography/Triple Quadrupole MassSpectrometryPAN Xiuli， SHAO Changchun， LI Yun， XU Xiaohui， WANG Xiaoqiao， ZHANG Hongyan（Lanzhou Institutes For Food And Drug Testing, Lanzhou 730050, China）Abstract：The high performance liquid chromatography (HPLC) /triple quadrupole mass spectrometry method for analysis and sample pretreatment of 15 sunscreens commonly in sunscreen cosmetics was established. 1 mL of anhydrous ethanol was added to the sample, and the volume of the sample was fixed with acetonitrile∶water (volume ratio: 4∶1).After ultrasonic extraction, the sample was purified by a QuEChERS column, centrifuged at 0 ℃ for 10 min at 10 000 r/min. The sample was used as mobile phase with acetonitrile solution cotaining 0.1% formic acid-2 mmol/L ammonium acetate solution containing 0.1% formic acid, and then gradient elution was performed. The separation was carried out ona C18 (2.1 mm × 50 mm, 1.8 µm) column, scanned in positive ion mode with multiple reaction monitoring (MRM) andquantified by external standard method. The results showed that the 15 sunscreens showed good linearity in a certain concentration range, and the correlation coefficient was greater than 0.99. The detection limits of the method were 10~50µg/kg. The average recoveries were 68.4%~84.2%, and the relative standard deviations (RSD) were 1.7%~9.0%. The method has a high sensitivity, good reproducibility and good adaptability for the detection of sunscreens.Key words：cosmetic；sunscreen；QuEChERS purification column；mass spectrometry收稿日期：2023−09−06； 修订日期：2023−11−23.基金项目：兰州市科技发展指导性计划项目（2022-5-6）；兰州市科技计划项目（2023-2-64）；甘肃省药品监督管理局药品科研项目（2022GSMPA0068 ）作者简介：潘秀丽（1987−），女，本科，研究方向：食品化妆品的仪器分析，E-mail：****************通信作者：邵长春（1983−），女，博士，研究方向：食品药品安全控制，E-mail：****************.防晒剂是指利用光的吸收、反射或散射作用，以保护皮肤免受特定紫外线所带来的伤害或保护产品本身而在化妆品中加入的物质. 它能吸收紫外线中可引起人产生急性皮炎（红斑）及皮肤灼伤的波长为280~320 nm的中波紫外线（即UVB），以及可使皮肤变黑的320~400 nm的长波紫外线（即UVA）.随着人们生活水平的提高，消费者对化妆品的需求不断增加[1]. 作为特殊类化妆品，防晒类化妆品中含有的各类防晒剂对人体的安全性和环境的危害性并不相同，因此，一直以来国内外对防晒剂的使用种类和使用量有严格的管理和限制[2-3].《化妆品安全技术规范》（2015年版）列出的化学防晒剂的检测方法为高效液相色谱法，但检测费时费力，可操作性欠佳. 经查阅文献，目前化妆品中防晒剂的检测方法有气相色谱法[4]、高效液相色谱法[5-11]、静电场轨道阱高分辨质谱法[12]、气相色谱-质谱法[13]和液相色谱-质谱法[14-15]等. 液相色谱-质谱法灵敏度高，不用保留时间定性，一针混标就可以检测出目标物，从而实现对其定性和定量，检验效率高，是目前检验中比较高效的一种检测方法.本试验采用三重四极杆液相色谱-质谱联用法，对文献中液相色谱-质谱法中的防晒剂项目和质谱参数以及样品前处理做了一个补充，开发出15种防晒剂的高通量样品前处理方法和仪器分析方法.1 材料与方法1.1 仪器与试剂高效液相色谱/三重四极杆质谱联用仪：Agilent 1260+6460，安捷伦科技有限公司；千分之一天平：MS105DU，十万分之一天平：XSE205DU，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；离心机：H1850，湖南湘仪实验室开发有限公司；智能恒温槽：SCG-6，宁波新芝生物科技股份有限公司；IKA振荡器：VXR，艾卡（广州）仪器设备有限公司；QuEChERS试剂盒：5982-1010、G7750-10001，安捷伦科技有限公司；HLB柱：HLB 6cc（500 mg），沃特世科技（上海）有限公司（Waters）；MCX柱：Oasis MCX 6cc（150 mg），沃特世科技（上海）有限公司（Waters）；FaAEx-AD-001 kits柱：巨研科技股份有限公司.甲酸（色谱纯），东京化成工业株式会社；甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），默克股份两合公司；乙酸铵（优级纯），天津市凯信化学工业有限公司.对照品：奥克立林（批号：752831；纯度：98.7%）、苯基苯并咪唑磺酸（批号：C15894540；纯度：93.3%）、对氨基苯甲酸异辛酯（PABA乙基己酯）（批号：458726；纯度：100%）、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷（批号：1124793；纯度：99.1%）、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮（批号：G1013005；纯度：100%）、3-亚苄基樟脑（批号：CCHM700478；纯度：96.0%），以上对照品生产单位为Dr.Ehrenstorfer公司；二乙胺基羟苯甲酰基苯甲酸己酯（批号：G139993；纯度：99.4%）、胡莫柳酯（批号：G164621；纯度：98.8%）、二苯酮-3（批号：14971-01；纯度：100%）生产单位为Accustandard；甲酚曲唑三硅氧烷（批号：D679410；纯度：97.3%），生产单位为Toronto Research Chemicals；亚苄基樟脑磺酸（批号：97085；纯度：97.0%）生产单位为SIGMA-ALORICH；对氨基苯甲酸（批号：100017-201704；纯度：99.8%）、4-甲基苄亚基樟脑（批号：800110-202001；纯度：98.4%）生产单位为中国食品药品检定研究院；对甲氧基肉桂酸异戊酯（批号：GOL414；纯度：96.9%）生产单位为美国药典USP；甲氧基肉桂酸乙基己酯（批号：S102885；纯度：99.8%）生产单位为阿尔塔科技有限公司. 15种防晒剂化合物信息如表1所列.表 1 15种防晒剂化合物信息Table 1 Informations of 15 sunscreen compounds序号防晒剂名称缩写CAS号化学结构分子式分子质量1奥克立林OC 6197-30-4OONC24H27NO2361.52苯基苯并咪唑磺酸PBSA 27503-81-7HO HNNOOSC13H10N2O3S274.3第 4 期潘秀丽，等：QuEChERS-高效液相色谱/三重四极杆质谱联用法测定化妆品中防晒剂的检测方法385续表 1序号防晒剂名称缩写CAS 号化学结构分子式分子质量3PABA 乙基己酯EHDP 26218-04-2OOH 2NC 15H 23NO 2249.34丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷BMDM 70356-09-1O O OC 20H 22O 3310.454-甲基苄亚基樟脑4-MBC 36861-47-9OC 18H 22O 254.46对甲氧基肉桂酸异戊酯IMC 71617-10-2O O O C 15H 20O 3248.37对氨基苯甲酸PABA 150-13-0OOHH 2NC 7H 7NO 2137.182-羟基-4-甲氧基二苯甲酮BP3131-57-7OHOO CCH 3C 14H 12O 3228.293-亚苄基樟脑BEC 15087-24-8OC 17H 20O240.310二苯酮-3BZ3131-57-7OO HOC 14H 12O 3228.211二乙胺基羟苯甲酰基苯甲酸己酯DHHB 302776-68-7NOH O O O C 24H 31NO 4397.512胡莫柳酯HMS 118-56-9OH O OC 16H 22O 3262.313甲酚曲唑三硅氧烷DTT 155633-54-8OON N NOHSiSi SiC 24H 39N 3O 3Si 3501.814亚苄基樟脑磺酸BCSA 56039-58-8OHO O O S C 17H 20O 4S 320.415甲氧基肉桂酸乙基己酯EHMC 5466-77-3OOO C 18H 26O 3290.4386分析测试技术与仪器第 29 卷样品：试验中所用样品均从西太华、兰州中心、屈臣氏购买，包含美素、铠丽、新碧、佰草集、欧诗漫、花印、露得清、理肤泉、春莹等品牌.1.2 试验方法1.2.1 色谱条件Agilent C18（2.1 mm×50 mm，1.8 µm）；流动相A为含0.1%甲酸的2 mmol/L乙酸铵溶液，流动相B为含0.1%甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱；柱温35℃；进样量2 µL；流速0.2 mL/min. 梯度洗脱程序如表2所列.1.2.2 质谱条件电喷雾（ESI）离子源；扫描模式：正离子模式；检测方式：多反应监测（MRM）；干燥气温度：325 ℃；干燥气流速：6 L/min；喷雾电压：45 psi（1 psi=6.895 kPa）；鞘气温度：400 ℃；鞘气流速：12 L/min；毛细管电压：4 000 V. 其他参数如表3所列.表 3 15种防晒剂的质谱条件Table 3 Mass spectrometer conditions of 15 sunscreens化合物母离子/(m/z)子离子/(m/z)碎裂电压/V碰撞能/eV化合物母离子/(m/z)子离子/(m/z)碎裂电压/V碰撞能/eV OC362.2232.2*/105.212020/35BEC241.2142.8*/97.48515/20 PBSA275.1193.9*/92.111035/45BZ3229.095.1*/150.99535/20 EHDP249.8138.1*/94.07012/30DHHB398.2149.0*/296.09515/20 BMDM311.2135.0*/161.19025/25HMS263.281.1*/93.013530/304-MBC255.2105.0*/170.88035/17DTT503.2146.9*/281.018230/16 IMC249.3160.9*/133.27015/30BCSA321.2196.9*/240.211020/12 PABA138.165.2*/77.19030/20EHMC291.2179.0*/161.08020/20 BP3229.1105.0*/151.08618/20注：带*为定量离子1.2.3 样品前处理准确称取样品1.0 g（精确到0.001 g）于10 mL 具塞离心管中，加入1 mL无水乙醇，涡旋1 min，用乙腈∶水（体积比为4∶1）定容至刻度，加入QuEChERS盐包一包，混匀，40 ℃下超声振荡30 min，在0 ℃下于3 900 r/min离心10 min. 吸取离心好的样品溶液3 mL于QuEChERS净化管中，涡旋2 min，在0 ℃下10000 r/min离心10 min. 如要稀释，取上清液，用乙腈∶水（体积比4∶1）进行适当稀释，经0.22 µm有机滤膜过滤后作为待测溶液.1.2.4 标准溶液配制准确称取固体对照品各10 mg，置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成质量浓度为1 mg/mL的标准储备液. 其中苯基苯并咪唑磺酸标准溶液在加入定容溶剂前，预先加入少量无水乙醇使其溶解，再用乙腈定容至刻度，配制成l mg/mL的标准储备液. 精密吸取上述各溶液适量，置于容量瓶中用乙腈稀释，配制成胡莫柳酯和亚苄基樟脑磺酸质量浓度为2 µg/mL，其余成分质量浓度为1 µg/mL的混合标准溶液，于−18 ℃冷冻条件下保存备用. 系列标准溶液的配制：取混合标准溶液配制成胡莫柳酯和亚苄基樟脑磺酸质量浓度分别为10、20、40、80、120、200、400 ng/mL，其余成分质量浓度分别为5、10、20、40 、60、100、200 ng/mL 的15种紫外吸收剂的标准系列溶液，混匀后，经0.22 µm有机滤膜过滤，备用.表 2 高效液相色谱流动相条件Table 2 Mobile phase conditions of high performanceliquid chromatography时间/min流动相A/%流动相B/%流速/(mL/min)0.0030700.22.0030700.210.005950.211.005950.211.0530700.215.0030700.2第 4 期潘秀丽，等：QuEChERS-高效液相色谱/三重四极杆质谱联用法测定化妆品中防晒剂的检测方法3872 结果与讨论2.1 提取溶剂的选择化妆品规范中使用的提取液是四氢呋喃、高氯酸、甲醇、水. 其中，四氢呋喃和高氯酸属于高毒、强刺激性气味的试剂，对身体危害极大，同时四氢呋喃和高氯酸对管路和质谱的损害较大，在质谱检测中是尽量避免使用的. 因此优先选择甲醇和乙腈作为提取溶剂，但直接用甲醇和乙腈提取，样品溶解不理想，悬浮物较多. 加入1 mL 水，涡旋1 min ，再分别用甲醇和乙腈进行提取比较，发现防晒剂的提取效果大大增加，而乙腈对丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷和奥克立林的提取率更好，最后选择用乙腈-水（体积比为4∶1）溶解，为了提高苯基苯并咪唑磺酸的回收率，在样品中先加入1mL 无水乙醇，再用乙腈-水（体积比为4∶1）定容至刻度.2.2 提取液净化的选择选择QuEChERS 柱、HLB 柱、MCX 柱、FaAEx-AD-001 kits 柱对样品进行净化比较，回收率较高的为QuEChERS 柱，但是净化效果不太好，增加离心步骤后，杂质沉淀，待测液澄清，经上机检测，柱压稳定，回收率较高，能满足质谱检测要求. 使用4种净化柱净化样品的色谱图如图1所示.2.3 离心条件的选择选择冷冻离心机，在0、5、10、25 ℃离心温度下，转速分别为3 900、6 000、8 000、10 000 r/min ，分别离心5、10、15 min ，发现在0 ℃、10 000 r/min 条件下，离心效果最好，这是因为样品乳液密度较小，温度越低，转速越快，样品杂质沉淀越好. 离心时间为10和15 min 时质谱图杂质峰相当，故选择0 ℃、10 000 r/min 、离心10 min 作为离心条件.2.4 流动相选择首先使用乙腈-水和甲醇-水进行色谱比对，结果表明：使用乙腈-水在梯度洗脱中柱压更低，目标物保留时间更短，分离效果好，同时对泵也有较好的保护作用. 其次由于15种目标物使用的是正离子扫描模式，酸性环境更有利于目标物的质谱响应，故可以在流动相中添加甲酸或乙酸，由于甲酸比乙酸具有更好的挥发性，故选择甲酸作为流动相的调节剂. 比较乙腈-水和乙腈（0.1%甲酸）-水（0.1%甲酸）两种流动相，结果表明：乙腈（0.1%甲酸）-水（0.1%甲酸）为流动相其目标物的响应值较好，但是二苯酮-3和PABA 乙基己酯的峰形较宽，有拖尾. 比较乙腈（0.1%甲酸）-2 mmol/L 的乙酸铵水溶液（0.1%甲酸）和乙腈（0.1%甲酸）-水（0.1%甲酸），发现添加乙酸铵后两种成分的峰形有了明显的改善. 故选择乙腈（0.1%甲酸）-2 mmol/L 的乙酸铵水溶液（0.1%甲酸）作为流动相.2.5 质谱条件优化采用负离子扫描模式进行SCAN 全扫描，部分目标物找不到离子对，对于找到离子对的目标物进行MRM 检测，响应值很低，达不到检测的需求. 采用正离子扫描模式进行SCAN 全扫描，能找到母离子，通过product ion 扫描方式可以找到2种以上定量定性离子对，选用正离子模式来对15种目标物的母离子、子离子、碰撞电压和碰撞能Acquisition time/min10234567891011121314Acquisition time/min10234567891011121314Acquisition time/min1234567891011121314Acquisition time/min10234567891011121314C o u n t s /×104C o u n t s /×104C o u n t s /×104(a)(b)(c)(d)0.10.30.50.70.91.11.30.10.30.50.70.90.20.61.01.41.82.2C o u n t s /×1031.02.03.04.05.0图1 4种净化柱处理的样品色谱图（a ）QuEChERS 柱，（b ）HLB 柱，（c ）MCX 柱，（d ）FaAEx-AD-001 kitsFig. 1 Chromatograms of samples treated with 4 kinds of purification columns388分析测试技术与仪器第 29 卷量等质谱参数进行优化，使碎片离子的响应度达到最大，从而确定最优的质谱条件，15种防晒剂的定性（黑色）、定量（蓝色）离子对色谱图如图2所示.2.6 各防晒剂的线性关系和检出限将各成分配制成系列标准溶液，绘制一系列标准曲线，相关系数（R 2）不小于0.99时认为线性关系良好. 配制一定质量浓度的标准溶液确定检出限，当检测结果为3倍信噪比时确定为检出限. 各成分标准曲线和检出限结果如表4所列. 试验表明，HMS 和EHMC 在10~400 ng/mL 、其余防晒剂在5~200 ng/mL 范围内有良好的线性关系，R 2均大于0.99，检出限均不小于10 µg/kg ，满足试验要求.2.7 各防晒剂成分的回收率试验称取一定量的空白样品，加入混合标准溶液，配制成HMS 和BCSA 加入量分别为60、120、240ng/mL ，其余防晒剂成分加入量分别为30、60、120ng/mL 的3个浓度水平，每个水平作3个平行样，以平均值计算回收率. 结果如表5所列. 15种防晒剂在不同水平下的回收率为68.4%~84.2%，相对标准偏差（RSD ）为1.7%~9.0%，符合试验对回收率和精密度的要求.Acquisition time/minAcquisition time/min Acquisition time/min Acquisition time/minAcquisition time/minAcquisition time/minAcquisition time/min Acquisition time/min Acquisition time/minAcquisition time/minAcquisition time/minAcquisition time/min10.511.011.512.0(a)(b)(c)(d)(e)(f)(g)(h)(i)(m)(n)(o)(j)(k)(l)362.2>232.2, 362.2>105.2Ratio=19.6 (101.3%)0.20.6 1.0 1.4 1.8275.1>193.9, 275.1>92.1Ratio=5.8 (91.8%)7.47.88.28.69.0249.8>138.1, 249.8>94.0Ratio=36.2 (100.9%)10.511.011.512.0311.2>161.1, 311.2>135.0Ratio=69.2 (107.8%)4.6 5.0 5.4 5.8 6.2229.1>151.0, 229.1>105.0Ratio=41.9 (104.8%)7.47.88.28.69.0138.1>77.1, 138.1>65.2Ratio=71.6 (91.7%)8.08.48.89.29.6249.3>160.9, 249.3>133.2Ratio=31.6 (96.2%)9.09.510.010.5255.2>105.0, 255.2>170.8Ratio=85.5 (101.2%)7.88.28.69.09.4241.2>97.4, 241.2>142.8Ratio=96.3 (113.2%) 4.6 5.0 5.4 5.8 6.2229.0>150.9, 229.0>95.1Ratio=26.2 (87.2%)10.010.511.011.5398.2>149.0, 398.2>296.0Ratio=7.9 (100.3%)7.47.88.28.69.0263.2>81.1, 263.2>93.0Ratio=20.8 (91.0%)12.012.513.013.5503.2>281.0, 503.2>146.9Ratio=68.0 (101.7%)9.09.510.010.5291.2>161.0, 291.2>179.0Ratio=0.7 (91.7%)Acquisition time/minAcquisition time/minAcquisition time/min0.20.6 1.0 1.4 1.8321.2>240.2, 321.2>196.9Ratio=8.4 (83.7%)R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%20406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100020406080100R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%R e l a t i v e a b u n d a n c e /%图2 15种防晒剂的MRM 图谱Fig. 2 MRM spectra of 15 sunscreens（a ）OC ，（b ）PBSA ，（c ）EHDP ，（d ）BMDM ，（e ）4-MBC ，（f ）IMC ，（g ）PABA ，（h ）BP3，（i ）BEC ，（j ）BZ3，（k ）DHHB ，（l ）HMS ，（m ）DTT ，（n ）BCSA ，（o ）EHMC第 4 期潘秀丽，等：QuEChERS-高效液相色谱/三重四极杆质谱联用法测定化妆品中防晒剂的检测方法3893 结论本研究使用QuEChERS前处理技术结合高效液相色谱/三重四极杆质谱联用仪，测定防晒类化妆品中奥克立林、苯基苯并咪唑磺酸等15种防晒剂，可在15 min内完成对防晒剂的分离测定，所选用的表 4 15种防晒剂的标准曲线和检出限Table 4 Standard curves and limits of detection of 15 sunscreens防晒剂线性方程相关系数R2线性范围/（ng/mL）检出限/（µg/kg）OC y=376.4x + 8390.997 05~20020 PBSA y=100.3x − 4030.999 05~20020 EHDP y=356.6x + 2540.999 15~20020 BMDM y=1 238.5x − 7450.999 75~200204-MBC y=115.9x − 810.997 05~20020IMC y=468.6x − 1120.999 25~20020 PABA y=85.1x − 470.998 85~20020BP3y=332.4x − 1 1680.998 85~20020BEC y=35.7x − 2420.997 65~20020BZ3y=332.4x − 1 1680.998 85~20020 DHHB y=1 506.8x − 2 9410.999 15~20010HMS y=2.9x + 5070.993 310~40050DTT y=266.4x + 5 6190.993 85~20020 BCSA y=16.7x − 270.999 25~20050 EHMC y=131.8x − 190.999 310~40010表 5 15种防晒剂的回收率及相对标准偏差Table 5 Recoveries and relative standard deviations of 15 sunscreens防晒剂加标水平/（ng/mL）回收率/%RSD/%防晒剂加标水平/（ng/mL）回收率/%RSD/%防晒剂加标水平/（ng/mL）回收率/%RSD/%OC3070.5 5.8IMC3075.2 5.3DHHB3075.9 4.3 6073.26083.46069.912078.912081.012074.8PBSA3075.0 5.7PABA3080.1 2.7HMS6077.8 4.0 6082.16082.412081.912083.512078.124084.2EHDP3069.79.0BP33070.2 1.7DTT3068.4 3.7 6078.26069.86073.512077.312072.112072.1BMDM3072.1 5.2BEC3077.5 3.0BCSA6069.9 4.6 6072.66082.012076.312079.012081.224074.94-MBC3078.9 4.4BZ33081.0 2.3EHMC3075.2 5.6 6077.16079.26081.712072.412077.312083.8390分析测试技术与仪器第 29 卷提取试剂替代了传统毒性较大的四氢呋喃和高氯酸. 该方法前处理简单，回收率高，QuEChERS柱净化能满足质谱对样品的要求，适用于化妆品中15种防晒剂的定性定量分析，能满足市场监管部门对防晒类化妆品的监督要求.参考文献：谢嘉颖, 朱家亮. 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土壤和沉积物 13种苯胺类和2种联苯胺类化合物的测定 液相色谱-三重四极杆质谱法HJ 1210
土壤和沉积物 13种苯胺类和2种联苯胺类化合物的测定液相色谱-三重四极杆质谱法警告：实验中使用的标准物质具有较高的毒性或致癌性，溶液配制及样品前处理过程应在通风橱内进行；操作时应按要求佩戴防护器具，避免吸入呼吸道或接触皮肤和衣物。
1 适用范围本标准规定了测定土壤和沉积物中苯胺类和联苯胺类化合物的液相色谱-三重四极杆质谱法。
本标准适用于土壤和沉积物中联苯胺、苯胺、4-甲基苯胺、2-甲氧基苯胺、3-甲基苯胺、2-甲基苯胺、2,4-二甲基苯胺、4-硝基苯胺、3-硝基苯胺、4-氯苯胺、2-萘胺、2,6-二甲基苯胺、3-氯苯胺、3,3'-二氯联苯胺和N-亚硝基二苯胺共13种苯胺类和2种联苯胺类化合物的测定。
当取样量为5.0 g，定容体积为1.0 ml时，13种苯胺类和2种联苯胺类化合物的方法检出限为2 μg/kg～4 μg/kg，测定下限为8 μg/kg～16 μg/kg。
详见附录A。
2 规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。
凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。
凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB 17378.3 海洋监测规范第3部分：样品采集、贮存与运输GB 17378.5 海洋监测规范第5部分：沉积物分析HJ/T 166 土壤环境监测技术规范HJ 494 水质采样技术指导HJ 613 土壤干物质和水分的测定重量法3 方法原理土壤或沉积物中苯胺类和联苯胺类目标化合物，在碱性条件下提取，经净化、浓缩、定容后，用液相色谱-三重四极杆质谱仪分离检测。
根据保留时间和特征离子定性，内标法定量。
4 干扰和消除当样品中存在基质效应干扰时，可通过净化样品、优化色谱条件、减少取样量或进样体积等方法降低或消除干扰。
15 试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的、不含目标化合物的纯水。
5.1 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。
三重四级杆液相色谱质谱联用仪原理
三重四级杆液相色谱质谱联用仪原理三重四级杆液相色谱质谱联用仪（Triple Quadrupole Liquid Chromatography-Mass Spectrometry）是一种分析仪器，它通过液相色谱和质谱两种技术的结合，可以实现对复杂样品中目标化合物的分离、检测和定量分析。
三重四级杆液相色谱质谱联用仪的原理如下：1. 液相色谱（Liquid Chromatography, LC）部分：样品经过样品进样器进入色谱柱，进行分离。
色谱柱可以根据目标化合物的性质选择不同的相（如正相、反相、离子交换柱等），并通过溶剂梯度洗脱以实现化合物的分离。
分离后的化合物进入质谱部分进行进一步的分析。
2. 质谱（Mass Spectrometry, MS）部分：分离后的化合物进入质谱部分，首先经过电离源获得离子。
常用的电离方式包括电喷雾（Electrospray Ionization, ESI）和大气压化学电离（Atmospheric Pressure Chemical Ionization, APCI）。
离子经过质量分析器进行质量选择，只有质量符合设定的目标离子才能通过。
其中，三重四级杆质谱仪中的四级杆（Quadrupole）用于对质子探测器（Proton Detector）前进的离子进行质量筛选。
通过改变四级杆的电压，可以选择不同的目标离子，实现质量选择。
3. 数据分析：离子通过质量分析器后，到达质子探测器产生信号。
这些信号可以通过数据采集系统进行采集，最终得到对样品中目标化合物的质量信息。
根据信号的大小和比例关系，可以对目标化合物进行定量分析。
通过将液相色谱和质谱技术结合在一起，三重四级杆液相色谱质谱联用仪可以充分利用两者的优势，实现对复杂样品中目标化合物的高效分离和灵敏检测。
同时，它还可以进行定量分析、结构鉴定和代谢物标识等应用。
液相色谱-三重四级杆质谱法测定地表水中的丙烯酰胺
t创新性研究液相色谱-三重四级杆质谱法 测定地表水中的丙烯酰胺引言丙烯酰胺是一种不饱和酰胺，别名AM袁是聚丙烯酰胺的合成原料，也经常作为医药、染料、涂 料行业的中间体由于其在化工领域广泛应用，常在废水和地表水中检出丙烯酰胺。
丙烯酰胺具 有潜在的神经毒性、遗传毒性和致癌性，国际癌症 研究机构(IARC)将丙烯酰胺列为“2A组可能人类 致癌物冶|2,3,41，丙烯酰胺可通过消化道、呼吸道和皮 肤黏膜等多种途径进入人体，饮水是一种重要的 途径。
世界卫生组织认为水中丙烯酰胺的量最多 不能超过〇.5ug/L。
《生活饮用水卫生规范》|2|(2001) 规定饮用水中丙烯酰胺不得高于〇.5ug/LM i。
丙烯 酰胺的检测方法主要有气相色谱法|7,81、气相色谱- 质谱法19,101、液相色谱法111,121、液相色谱一质谱法113,141及紫外分光光度法1151等。
本文在前人工作的基础上，采用直接进样法在 液相色谱-质谱联用仪上建立了丙烯酰胺的测定 方法，该法简便、快捷、高效、检出限低、重现性好 且有效减少了前处理过程对操作人员的伤害。
实验部分1.仪器与试剂Agilent公司液相1100色谱仪，Agilent公司三刘艳其重四级杆质谱6410A;色谱柱ZORBAX C18(2.1X 100mni，3.5um);甲醇(色谱纯)德国Merck公司；甲酸(分析纯)美国Fisher公司；丙烯酰胺标准溶液 (100mg/L)购于国家标准物质中心;超纯水，电阻 率逸18.2M赘•cm;高纯氮气(纯度>99.999%)。
2.样品的采集和前处理样品米集：样品采用50m l配有聚四氟乙烯盖子的棕色 玻璃瓶采集，瓶内注满水样赶出气泡，不留空间，拧紧瓶盖，尽快分析，如不能立即分析需置于4益 冰箱中保存。
样品前处理：将水样经0.2um聚醚砜滤膜过滤后直接上机。
结果与讨论1.分析条件色谱条件:对乙腈-0.1%甲酸水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液不同流速和不同配比溶剂的洗脱效率进 行比较，最终确定色谱条件为:柱温30益，进样量 2ul，流动相由甲醇和0.1%甲酸水溶液(1:9)组成，流 速为 0.3ml/min。
高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料、养殖用水中五氯酚的残留
中国畜牧兽医 2024,51(4):1438-1447C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留朱季升1,2,邢维海2,李 政3,王 力3,张亚伟1,张元庆1,杨 丹4,杨悠悠2(1.山西农业大学动物科学学院,晋中030801;2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;3.中粮家佳康食品有限公司,北京100020;4.国贸食品科学研究院有限公司,北京102209)摘 要:ʌ目的ɔ本试验旨在建立一种测定猪饲料㊁饲料添加剂㊁水等养殖环节投入品中五氯酚残留的高效液相色谱-三重四极杆质谱方法㊂ʌ方法ɔ待测样品经碱性甲醇水溶液提取,使用阴离子固相萃取柱富集净化,经氮吹浓缩后用2%甲酸甲醇复溶,以5m m o l /L 乙酸铵溶液-甲醇为流动相,经P o r o s h e l l 120E C -C 18(3m mˑ100m m ,2.7μm )色谱柱分离;负离子模式下,采用多反应监测模式(m u l t i p l e r e a c t i o nm o n i t o r i n g ,M R M )进行检测;使用基质匹配外标法测定五氯酚的含量,并对所建方法的线性关系㊁检测限(l i m i to fd e t e c t i o n ,L O D )㊁定量限(l i m i to fqu a n t i t a t i o n ,L O Q )㊁回收率㊁准确度㊁精密度㊁基质效应等指标进行考察㊂ʌ结果ɔ猪饲料和饲料添加剂中五氯酚的检测限和定量限分别为0.1和0.5μg /k g ,养殖用水中五氯酚的检测限和定量限分别为5和12.5n g /L ;饲料和饲料添加剂中五氯酚定量范围为0.5~20μg /k g ,养殖用水中五氯酚定量范围为12.5~500n g /L ,方法线性关系良好,相关系数(R 2)均>0.999㊂该方法在饲料和饲料添加剂以及养殖用水中的平均加标回收率为69.8%~119.5%,相对标准偏差(r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ,R S D )为1.62%~9.86%,基质效应(m a t r i xe f f e c t ,M E )为0.62~1.29㊂ʌ结论ɔ本试验所建方法简便㊁快捷㊁灵敏度高㊁重复性好,适用于猪配合饲料等养殖投入品中五氯酚的测定,可为养殖环节投入品中五氯酚污染筛查提供准确高效的技术手段,从源头保障动物源性产品安全㊂关键词:五氯酚;饲料;固相萃取;高效液相色谱-三重四极杆质谱中图分类号:S 816文献标识码:AD o i :10.16431/j .c n k i .1671-7236.2024.04.012 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-08-30基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Y 2023P T 14);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2022-YW F -Z Y S Q -09);北京市科技计划课题(Z 221100007122006)联系方式:朱季升,E -m a i l :z h u j i s h e n g 2022@163.c o m ㊂通信作者张元庆,E -m a i l :y u a n q i n g _z h a n g @163.c o m ;杨丹,E -m a i l :y a n g_d a n @c o f c o .c o m ;杨悠悠,E -m a i l :y a n g y o u 229@126.c o m D e t e r m i n a t i o no f P e n t a c h l o r o ph e n o lR e s i d u e s i nS w i n eF o r m u l aF e e d a n dF a r m W a t e r U s i n g H i g hP e r f o r m a n c eL i q u i dC h r o m a t o g r a p h y -t r i p l e Q u a d r u p o l eM a s s S p e c t r o m e t r yZ HUJ i s h e n g 1,2,X I N G W e i h a i 2,L I Z h e n g 3,WA N GL i 3,Z H A N G Y a w e i 1,Z HA N G Y u a n q i n g 1,Y A N G D a n 4,Y A N G Y o u yo u 2(1.C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e ,S h a n x i A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,J i n z h o n g 030801,C h i n a ;2.S t a t eK e y L a b o r a t o r y o f A n i m a lN u t r i t i o n ,I n s t i t u t e o f A n i m a l S c i e n c e o f C A A S ,B e i j i n g100193,C h i n a ;3.C O F C OJ i a k a n g F o o dC o .,L t d .,B e i j i n g 100020,C h i n a ;4.C h i n a I n t e r n a t i o n a l T r a d eF o o dS c i e n c eR e s e a r c h I n s t i t u t eC o .,L t d .,B e i j i n g 102209,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b j e c t i v e ɔA h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y -t r i p l e q u a d r u po l e m a s s s p e c t r o m e t r y (H P L C -M S /M S )m e t h o dw a s d e v e l o p e d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f p e n t a c h l o r o p h e n o l (P C P )i ns w i n ef e e d ,f e e da d d i t i v e sa n d w a t e r .ʌM e t h o d ɔT h es a m pl e s w e r ee x t r a c t e d w i t h a q u e o u sa l k a l i n e m e t h a n o l i cs o l u t i o n ,e n r i c h e d a n d c l e a n e d u p u s i n g an a n i o n i cs o l i d p h a s e4期朱季升等:高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留e x t r a c t i o n c o l u m n,r e c o n s t i t u t e dw i t h2%f o r m a t em e t h a n o l a f t e r n i t r og e n d r y i n g.W i t h5m m o l/La m m o n i u ma c e t a t e s o l u t i o n-m e t h a n o l a sm ob i l e p h a s e,P o r o s h e l l120E C-C18(3m mˑ100m m,2.7μm)c o l u m n w a su s e dt os e p a r a t e P C P.U n d e rt h en e g a t i v ei o n i z a t i o n,m u l t i p l er e a c t i o n m o n i t o r i n g m o d e(M R M)w a su s e dt od e t e r m i n et h ec o n t e n to fP C P.M a t r i x-m a t c h e de x t e r n a l q u a n t i f i c a t i o n m e t h o d w a su t i l i z e dt o q u a n t i t a t e P C P.L i n e a rr e l a t i o n s h i p,l i m i t so fd e t e c t i o n (L O D),l i m i t so f q u a n t i f i c a t i o n(L O Q),r e c o v e r y,a c c u r a c y,p r e c i s i o n,m a t r i xe f f e c ta n do t h e ri n d i c a t o r s o f t h e e s t a b l i s h e dm e t h o dw e r e i n v e s t i g a t e d.ʌR e s u l tɔT h eL O Da n dL O Q w e r e0.1a n d0.5μg/k g i n l i v e s t o c kf e e d,f e e d i n g r e d i e n t sa n df e e da d d i t i v e s,w h i l e5a n d12.5n g/Li nf a r m w a t e r,r e s p e c t i v e l y.T h e l i n e a r r a n g eo fP C P i n l i v e s t o c k f e e d,f e e d i n g r e d i e n t s a n d f e e da d d i t i v e s w a s f r o m0.5t o20μg/k g,a n d t h e l i n e a r r a n g eo f f a r m w a t e rw a s f r o m12.5t o500n g/L.T h e l i n e a r c o e f f i c i e n t(R2)w a sm o r e t h a n0.999,s h o w i n g t h e g o o d l i n e a r i t y.I n a d d i t i o n,t h e r e c o v e r i e s r a n g e d f r o m69.8%t o119.5%a n d t h e r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a t i o n(R S D)w e r e f r o m1.62%t o9.86%. T h em a t r i xe f f e c t(M E)w a s0.62-1.29.ʌC o n c l u s i o nɔT h em e t h o de s t a b l i s h e d i n t h i s s t u d y w i t h h i g hs e n s i t i v i t y,h i g ha c c u r a c y a n d g o o d r o b u s t n e s sw a s s u i t a b l e f o r t h e s c r e e n i n g o f P C P i n s w i n e f o r m u l a f e e d a n do t h e r f a r m i n g i n p u t s t o e n s u r e t h e q u a l i t y a n d s a f e t y o fm e a t p r o d u c t s.K e y w o r d s:p e n t a c h l o r o p h e n o l;f e e d;s o l i d p h a s e e x t r a c t i o n;H P L C-M S/M S五氯酚(p e n t a c h l o r o p h e n o l,P C P)是一种有机氯农药,在杀虫㊁除草㊁杀菌㊁木材防腐等方面效果良好[1],其化学性质稳定,难以降解,可溶于甲醇㊁乙腈等有机溶剂,微溶于水;五氯酚分子结构中含有酚羟基,极性较强,在碱性条件下可转化为五氯酚酸盐,自然环境中多以五氯酚酸钠的形式存在,具有良好的水溶性(图1)㊂在20世纪,五氯酚及其钠盐曾被广泛用于养殖水体消毒和血吸虫病防治[2],在发挥其功效的同时对环境造成了严重污染[3]㊂五氯酚在生物体内蓄积可引起氧化磷酸化途径解偶联,造成能量代谢障碍[4],长期暴露有致畸㊁致癌㊁致突变等毒副作用,严重时会导致生物体的死亡㊂当前在水生动物[5-6]㊁畜禽动物[7]㊁人体血液[8]㊁尿液[9-10]等组织中皆有检出案例,说明五氯酚已经进入食物链[11],并且通过生物富集作用严重威胁到了人类的生命安全㊂因五氯酚具有生物毒性㊁难以降解㊁易生物富集等特点,国际上将其认定为持久性有机污染物(P O P s)[12],世界卫生组织也将其列为一类致癌物;2019年底,中国农业农村部发布第250号公告明确规定,五氯酚在动物性食品中不得检出㊂但近年来在畜禽产品中检出五氯酚的情况仍屡有报道,据市场监督管理总局统计结果,2020年1月 2021年11月期间,在猪肉中共检出43次㊁牛肉中18次㊁羊肉中12次[13],禽肉中2次[14]㊂究其原因主要来源于畜禽养殖生产过程中的饲料及水污染[15-16],目前有关饲料和水等养殖投入品中五氯酚的检测方法存在灵敏度低㊁操作繁复等问题[17-18],因此,亟需建立一种更加简便快捷㊁灵敏度高㊁准确性高的饲料等养殖投入品中五氯酚的检测方法,从源头保障动物源性产品安全㊂图1五氯酚及五氯酚酸钠化学结构图F i g.1C h e m i c a l s t r u c t u r eo f p e n t a c h l o r o p h e n o la n ds o d i u m p e n t a c h l o r o p h e n o l a t e由于饲料等养殖投入品中含有较多的蛋白质㊁脂肪㊁色素等物质,会严重影响分析结果的准确性,并极易污染检测设备,因此需寻求合适的样品前处理方法㊂目前,五氯酚测定的前处理方法主要有液液萃取法(L L E)[19]㊁加速溶剂萃取法(A S E)[20]㊁Q u E C h E R S[21]㊁固相萃取法(S P E)[22-23]㊁固相微萃取法(S P M E)[24-25]㊁分子印迹法(M I T)[26-27]等,其中S P E法是通过选择性吸附或选择性洗脱,实现目标化合物与基质中干扰物质的分离方法,可显著降低基质效应㊂固相萃取柱的选择需要综合考虑目标化合物的性质与基质的种类㊂分析检测的方法主要是色谱法和质谱法,常用的分析仪器有液相色谱仪(L C)[22]㊁气相色谱仪(G C)[28]㊁液相色谱-质谱联用仪(L C-M S)[29]㊁气相9341中国畜牧兽医51卷色谱-质谱联用仪(G C-M S)[30-31]㊂其中L C和G C 法仅通过保留时间定性,存在灵敏度低,易存在假阳性的情况,且由于五氯酚强极性㊁高沸点等特点,在使用G C和G C-M S时,需进行衍生化反应,操作复杂耗时,因此,液相色谱-串联质谱联用仪在五氯酚精准检测方面具有较明显优势㊂本研究为重点考察养殖环节是否存在五氯酚酸钠污染的风险,拟建立一种基于固相萃取法等样品前处理方法,结合高效液相色谱-三重四极杆质谱(H P L C-M S/M S)的猪配合饲料㊁添加剂等养殖投入品中五氯酚的分析方法,以期为生猪养殖过程中的五氯酚污染筛查提供参考和依据㊂1材料与方法1.1样品采集2023年3月-2023年5月,依照‘饲料采样“(G B/T14699.1-2005)和‘水质采样技术指导“(H J494-2009)从北京周边养殖场采集了具有代表性的33种各阶段猪配合饲料㊁22种饲料原料㊁49种饲料添加剂和22份水样,样品种类信息见表1㊂空白猪配合饲料㊁饲料添加剂㊁养殖用水样品均由国贸食品科学研究院有限公司提供,经方法验证后均为五氯酚阴性㊂表1样品信息T a b l e1S a m p l e i n f o r m a t i o n样品S a m p l e s种类T y p e s数量N u m b e r 猪配合饲料仔猪配合饲料9S w i n e f o r m u l a f e e d中猪配合饲料4大猪配合饲料5生长育肥猪配合饲料8妊娠母猪配合饲料2哺乳母猪配合饲料3后备母猪配合饲料2饲料原料鱼粉2F e e d i n g r e d i e n t玉米2碎米3小麦麸2亚麻籽1膨化大豆1菜籽粕2豆粕4续表样品S a m p l e s种类T y p e s数量N u m b e r小麦次粉3小麦1大麦壳1饲料添加剂氨基酸㊁氨基酸盐及其类似物17 F e e da d d i t i v e矿物元素及其络(螯)合物9维生素及类维生素8防腐剂㊁防霉剂和酸度调节剂5抗氧化剂2酶制剂5微生物3养殖用水饲用水15 F a r m w a t e r清洁用水4污水3 1.2主要试剂五氯酚标准品(纯度>98.9%),购自D r.E h r e n s t o r f e r公司;乙腈㊁甲醇(色谱纯)㊁乙酸铵(质谱纯)均购自T h e r m oF i s h e r公司;25%氨水㊁甲酸㊁三乙胺(色谱纯)均购自阿拉丁试剂(上海)有限公司;试验用水为经M i l l i-Q处理后的一级水(>18.2MΩ)㊂1.3主要仪器高效液相色谱-质谱联用仪(6470T r i p l eQ u a d L C/M S,安捷伦科技有限公司);数控超声波清洗器(K Q-500D E,昆山市超声仪器有限公司);小型高速冷冻离心机(5810R,艾本德股份公司);涡旋混合器(V O R T E X-5,其林贝尔仪器制造有限公司);分析天平(J A3003,上海力辰仪器科技有限公司);隔膜真空泵(GM-0.33A,天津津腾实验设备有限公司);小型粉碎机(S M-3L,台湾祥泰精机股份有限公司);超纯水制备仪(M i l l i-Q A d v a n t a g eA10,默克密理博公司);MA X固相萃取小柱(60m g/3m L,北京康普兴科技有限公司)㊂1.4色谱与质谱条件1.4.1色谱条件使用A g i l e n tP o r o s h e l l120E C-C18(3m mˑ100m m,2.7μm)色谱柱;柱温40ħ;进样量为5μL;流速:0.3m L/m i n;流动相A 相为5m m o l/L乙酸铵水溶液,B相为甲醇,梯度洗脱方法见表2㊂04414期朱季升等:高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留表2梯度洗脱条件T a b l e2M o b i l e p h a s e g r a d i e n t e l u t i o nm e t h o d s时间T i m e/m i n流动相M o b i l e p h a s e/%A B 06040 16040 5595 85951.4.2 质谱条件采用喷射流电喷雾离子源(A J SE S I),负离子模式;毛细管电压-3500V;喷嘴电压-500V;雾化气温度300ħ,雾化气流速12L/m i n,雾化器压力40p s i;鞘气温度350ħ,鞘气流速10L/m i n;采用多反应监测模式(M R M)进行离子监测,其余质谱参数见表3㊂表3五氯酚M R M监测参数T a b l e3P e n t a c h l o r o p h e n o lM R M m o n i t o r i n gp a r a m e t e r s前体离子P r e c u r s o r i o n/(m/z)产物离子P r o d u c t i o n/(m/z)驻留时间D w e l l/m s碎裂电压F r a g m e n t o r/V碰撞池加速电压C e l l a c c e l e r a t o r v o l t a g e/V 262.7262.71001354 264.7*264.7*1001354 266.7266.71001354 268.7268.71001354*,定量离子对*,Q u a n t i t a t i v e i o n p a i r s1.5样品前处理1.5.1饲料及饲料原料样品前处理样品粉碎后称取2.00g置于离心管中,加入6m L含5%三乙胺的甲醇水(V/V为7ʒ3)溶液,涡旋混匀1m i n,超声提取5m i n,3000r/m i n离心5m i n,收集上清液,重复上述步骤1次,合并两次所得上清液㊂将上清液移入经5m L甲醇㊁5m L水活化后的MA X固相萃取小柱,自然流出,然后依次加入5m L5%氨水㊁5m L甲醇㊁5m L2%甲酸甲醇水(V/V为1ʒ1)淋洗,抽干萃取柱5m i n后使用4m L8%甲酸甲醇洗脱,收集洗脱液,氮吹浓缩至近干,加入2m L2%甲酸甲醇溶液涡旋混匀,过0.22μm有机相滤膜后,供检测分析㊂1.5.2水样前处理量取40m L水样于离心管中,加入10m L25%氨水,涡旋混匀1m i n,移入经5m L甲醇㊁5m L水活化后的MA X固相萃取小柱,自然流出,然后依次加入5m L甲醇㊁5m L2%甲酸甲醇水淋洗,后续步骤同饲料及饲料原料样品前处理㊂1.5.3饲料添加剂样品前处理称取2.00g样品,置于离心管中,加入6m L含5%三乙胺的甲醇水溶液,涡旋混匀1m i n,超声提取5m i n,3000r/m i n 离心5m i n,收集上清液,重复上述步骤1次,合并两次所得上清液,氮吹至近干,后续步骤同饲料及饲料原料样品前处理㊂1.6溶液制备1.6.1标准溶液制备准确称取1m g五氯酚标准品,使用100m L甲醇溶解配为10m g/L的五氯酚标准储备溶液,于-20ħ保存备用㊂1.6.2空白基质溶液制备取空白猪配合饲料㊁饲料添加剂㊁养殖用水样品,经1.5所述样品前处理方法处理后,制为空白基质溶液,于-20ħ保存备用㊂1.7方法学验证1.7.1线性关系标准溶液经甲醇梯度稀释后,配制成浓度为5㊁12.5㊁25㊁50㊁100㊁200㊁500㊁1000μg/L的标准工作液,准确移取1.6.2所制空白基质溶液(980μL)和20μL不同浓度的标准工作液,涡旋混匀,配制不同浓度的基质匹配标准溶液(表4),上机检测后,以浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制基质匹配标准曲线㊂1441中国畜牧兽医51卷表4各基质匹配标准溶液中五氯酚折算后浓度T a b l e4T h e c o n v e r t e d c o n c e n t r a t i o no f p e n t a c h l o r o p h e n o l i n t h e s t a n d a r d s o l u t i o nm a t c h e db y e a c hm a t r i x基质M a t r i c e s浓度C o n c e n t r a t i o n饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n g r e d i e n t s/(μg/k g)0.10.5151020饲料添加剂F e e da d d i t i v e s/(μg/k g)0.10.5151020养殖用水F a r m w a t e r/(n g/L)512.5501002005001.7.2检测限和定量限取所制各基质匹配标准溶液,经仪器检测后,以五氯酚定量离子色谱信号信噪比(S/N)ȡ3作为检测限(l i m i to fd e t e c t i o n, L O D),以S/Nȡ10作为定量限(l i m i t o f q u a n t i t a t i o n,L O Q)㊂1.7.3准确度与精密度以加标回收试验验证方法的准确度与精密度,空白猪配合饲料㊁饲料添加剂㊁养殖用水样品各称取6份,通过添加五氯酚标准储备溶液制为低㊁中㊁高3水平的加标样品,按照1.5样品前处理方法处理后检测分析,每个添加水平重复测定6次,计算回收率及相对标准偏差(r e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n,R S D,%),考察方法的准确度及精密度㊂1.7.4基质效应绘制甲醇溶剂标准曲线(斜率为K2)和各基质匹配标准曲线(斜率为K1),定义基质因子(m a t r i x f a c t o r,M F)=K1/K2[32]㊂2结果2.1方法线性关系按1.7.1所述方法绘制基质匹配标准曲线,测定结果表明,不同基质中五氯酚的质量浓度与对应的峰面积在定量范围内线性关系良好,饲料与饲料原料㊁饲料添加剂㊁水的基质匹配标准曲线相关系数(R2)分别为0.9997㊁0.9994㊁0.9992;饲料与饲料原料㊁饲料添加剂基质中五氯酚线性范围为0.5~ 20μg/k g,养殖用水基质中五氯酚线性范围为12.5~500n g/L(表5)㊂表5不同基质中五氯酚的线性方程㊁相关系数㊁线性范围T a b l e5L i n e a r e q u a t i o n s,c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t s,l i n e a r r a n g e s o f p e n t a c h l o r o p h e n o l i nd i f f e r e n tm a t r i c e s基质M a t r i c e s线性方程L i n e a r e q u a t i o n相关系数R2线性范围L i n e a r i t y r a n g e 饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n g r e d i e n t s Y=1639.87X+351.750.99970.5~20μg/k g 饲料添加剂F e e da d d i t i v e s Y=3415.14X+1668.320.99940.5~20μg/k g 养殖用水F a r m w a t e r Y=62.96X+173.980.999212.5~500n g/L Y为峰面积,X为折算后样品中五氯酚浓度Yi s t h e p e a ka r e a,a n dXi s t h e c o n c e n t r a t i o no f p e n t a c h l o r o p h e n o l i n t h e c o n v e r t e d s a m p l e2.2方法检测限㊁定量限㊁基质效应饲料与饲料原料㊁饲料添加剂㊁水中五氯酚的L O D分别为0.1μg/k g㊁0.1μg/k g㊁5n g/L,L O Q 分别为0.5μg/k g㊁0.5μg/k g㊁12.5n g/L㊂绘制饲料与饲料原料㊁饲料添加剂㊁养殖用水的基质匹配标准曲线,与甲醇溶剂标准曲线进行比较,测得M F分别为0.62㊁1.29㊁1.19(表6)㊂表6不同基质中五氯酚的检测限㊁定量限㊁基质效应因子T a b l e6L O D,L O Q a n dM Fo f p e n t a c h l o r o p h e n o l i nd i f f e r e n tm a t r i c e s基质M a t r i c e s检测限L O D定量限L O Q基质因子M F 饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n g r e d i e n t s0.1μg/k g0.5μg/k g0.62饲料添加剂F e e da d d i t i v e s0.1μg/k g0.5μg/k g1.29养殖用水F a r m w a t e r5n g/L12.5n g/L1.19 24414期朱季升等:高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定猪饲料㊁养殖用水中五氯酚的残留2.3 方法准确度与精密度由表7可知,饲料与饲料原料中五氯酚的回收率为69.80%~93.76%,R S D 为4.31%~9.86%,饲料添加剂中五氯酚回收率为73.16%~96.32%,R S D 为0.89%~5.16%,水中五氯酚的回收率为76.89%~119.50%,R S D 为1.62%~7.23%㊂样品测定准确度与精密度均良好㊂表7 不同基质中五氯酚加标回收率及精密度T a b l e 7 S p i k e d r e c o v e r i e s a n d p r e c i s i o no f p e n t a c h l o r o p h e n o l i nd i f f e r e n tm a t r i c e s 基质M a t r i c e s 加标量S p i k i n g l e v e l 回收率R e c o v e r y /%相对标准偏差R S D/%饲料与饲料原料F e e da n d f e e d i n gr e d i e n t s 0.5μg /k g 69.804.312μg /k g 93.769.8610μg /k g 76.505.89饲料添加剂F e e da d d i t i v e s0.5μg /k g73.165.162μg /k g 77.230.8910μg /k g 96.321.21养殖用水F a r m w a t e r12.5n g/L 76.897.2325n g /L 119.502.7150n g /L 111.281.622.4 实际样品检测使用本研究所建方法对33种猪配合饲料㊁22种饲料原料㊁49种饲料添加剂以及22种养殖用水样品进行分析,其中2种饲料样品中检出了五氯酚,但低于方法定量限,2种饲料添加剂中检出了五氯酚,含量分别为1.8和15.5μg/k ,阳性样品中五氯酚的多反应监测图见图2㊂图2 阳性样品中五氯酚的M R M 监测图F i g .2 M R M m o n i t o r i n g c h r o m a t o g r a mo f p e n t a c h l o r o p h e n o l i n p o s i t i v e s a m pl e s 3 讨 论3.1 前处理条件的优化五氯酚为弱酸性化合物,pK a 为4.73,目前复杂基质中五氯酚的提取主要为酸提取[33]和碱提取[34]两种方式,酸提取是通过调节p H 使五氯酚以酚羟基形式存在,较易溶于有机试剂,碱提取是在碱性条件下,五氯酚的酚羟基发生解离形成阴离子,而易溶于水中㊂MA X 固相萃取柱为混合型阴离子交换柱,在碱性环境中,五氯酚可与MA X 柱填料上的季铵基发生离子交换作用而被保留,可适用于饲料提取液及养殖用水中五氯酚的富集净化㊂本研究所使用的色谱柱p H 耐受范围为2.0~9.0,饲料添加剂的提取液㊁饲料及水样的洗脱液,p H 均超过色谱柱的耐受范围,无法直接检测,需氮吹浓缩复溶处3441中国畜牧兽医51卷理㊂为使五氯酚在色谱柱中良好保留,并考虑色谱柱的p H耐受范围,经试验对比,选用2%甲酸甲醇作为复溶试剂,可获得理想的色谱峰形㊂目前水中五氯酚的检测常使用C18[35]㊁H L B等反相固相萃取柱,而MA X固相萃取柱的应用较少,李丽等[36]使用H L B固相萃取柱对地下水中五氯酚富集净化,检测限为30n g/L;万译文等[17]分别采用H L B固相萃取柱和MA X固相萃取柱对渔业水体和渔业饲料中的五氯酚进行富集净化,检测限分别为50n g/L和0.8μg/k g㊂本研究采用MA X固相萃取柱对水样及饲料中的五氯酚进行富集净化,较现有方法达到了更高的灵敏度,水样及饲料中的五氯酚检测限分别降低至5和0.1μg/k g㊂3.2基质效应的校正在L C-M S检测分析中,由于共流出以及电离竞争抑制现象的存在,往往会使目标化合物的响应信号偏离,存在基质效应[37]㊂基质效应会影响方法的灵敏度㊁精密度及准确度㊂本试验中以M F衡量基质效应,当M F值=1时,表示无基质效应;M F 值<1时,则基质抑制;M F值>1时,则基质增强㊂由本试验测定结果可知,各基质养殖投入品中,存在较强的基质效应干扰㊂目前降低基质效应的方法主要包括稀释样品溶液㊁增加净化步骤㊁优化色谱分离条件㊁采用同位素内标物㊁配制基质匹配标准溶液等,其中采用同位素内标法可准确地消除基质效应带来的影响,但市场上暂无五氯酚同位素内标的售卖,且由于稀释样品溶液㊁增加净化步骤等处理皆会使方法灵敏度和准确性下降,因此为了得到准确结果,减少基质效应对结果的影响,本研究采用绘制基质匹配标准曲线进行定量㊂由本试验结果可知,各基质匹配标准曲线线性关系良好(R2>0.999),精密度及准确度均可满足检测要求,因此采用基质匹配外标法可较好地抵消基质效应对五氯酚定量结果的干扰㊂3.3五氯酚风险监测使用本研究所建方法对配合饲料㊁饲料原料㊁饲料添加剂以及养殖用水等养殖投入品进行筛查,由结果可知,饲料原料和养殖用水中均未检出五氯酚;配合饲料中仅有两份检出五氯酚,且含量较低,低于方法定量限;而饲料添加剂样品存在较高污染风险,其中一些含氯元素的氨基酸盐酸盐及类维生素添加剂中检测到了较高含量的五氯酚,疑似生产过程中引入杂质所产生的副产物,需要进行重点关注㊂4结论本研究采用固相萃取法及H P L C-M S/M S技术建立了猪配合饲料㊁饲料原料㊁饲料添加剂㊁养殖用水中五氯酚检测方法,通过优化前处理条件及仪器条件,该方法在各基质定量范围内线性关系良好,灵敏度高,准确性好,重现性高,加标回收率试验和精密度试验结果均符合相关要求,适用于猪配合饲料等养殖投入品中五氯酚的测定,可应用于五氯酚风险筛查㊂经研究发现含氯添加剂样品较易受五氯酚污染,应当予以关注㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1]潘胜东,陈晓红,何仟,等.超高效液相色谱-高分辨质谱确证分析泥鳅体内五氯酚代谢物[J].色谱,2017,35(12):1245-1250.P A NSD,C H E N X H,H E Q,e t a l.C o n f i r m a t i o na n da n a l y s i s o f t h e m e t ab o l i t e s o f p e n t ac h l o r o p h e n o l i nl o a c h e su s i n g u l t r a-p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y-h i g hr e s o l u t i o n m a s ss p e c t r o m e t r y[J].C h i n e s eJ o u r n a lo f C h r o m a t o g r a p h y,2017,35(12):1245-1250.(i nC h i n e s e)[2]黄轶昕.我国灭螺药物研究和现场应用[J].中国血吸虫病防治杂志,2019,31(6):679-684.HU A N G Y X.R e s e a r c ha n d f i e l da p p l i c a t i o no f s n a i lk i l l i n g d r u g s i n C h i n a[J].C h i n e s e J o u r n a l o fS c h i s t o s o m i a s i sC o n t r o l,2019,31(6):679-684.(i nC h i n e s e)[3] X U Q,A I S,G E G,e t a l.H u m a n h e a l 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HJ1048-2024水质17种苯胺类化合物的测定液相色谱-三重四极杆质谱法
HJ1048-2024水质17种苯胺类化合物的测定液相色谱-
三重四极杆质谱法
苯胺类化合物是一类有机污染物，常见于工业废水中，对人体健康和环境都具有潜在危害。
因此，对水中苯胺类化合物的测定非常重要，可以用于监测水质安全，并采取相应的治理措施。
1.采样：根据实际情况选择合适的采样方法和位置，确保采样的水样具有代表性。
2.样品处理：首先，将水样经过预处理，去除悬浮物和固体颗粒。
然后，使用适当的方法提取苯胺类化合物。
3.质谱条件设置：根据质谱仪的要求，设置适当的离子源温度、干燥气流量、离子源电压等条件，使质谱仪能够适应样品的性质。
4.色谱条件设置：通过优化流动相组成、流速和柱温等参数，使目标化合物在色谱柱中得到有效分离。
5.质谱测定：将经过色谱分离的样品引入质谱仪，进行质谱测定。
在三重四极杆质谱仪中，通过选择合适的多级碰撞能量和扫描模式，获得准确的质谱图。
6.定量：通过比对样品的质谱图和标准品的质谱图，可以确定目标化合物的浓度。
根据分析实验的结果，计算出样品中苯胺类化合物的含量。
总之，HJ1048-2023方法为水质中苯胺类化合物的测定提供了一种有效、可靠的分析方法，能够帮助我们更好地评估水质的安全性，并采取相应的措施保护水环境和人民的健康。
超高效液相色谱-三重四级杆质谱法测定地表水中10种苯胺类化合物
超高效液相色谱-三重四级杆质谱法测定地表水中10种苯胺类化合物摘要：对地表水样品进行富集-净化，利用超高效液相色谱仪对化合物进行分离，三重四级杆质谱仪进行定性定量分析。
以甲醇和0.005%甲酸为流动相梯度洗脱，采用电喷雾离子源（ESI）正电离模式扫描，多反应监测模式进行检测，内标法定量。
试验结果表明，10种苯胺类化合物具有良好的响应值，且标准曲线线性良好，每个化合物的相关系数R2均在0.995以上，检出限范围为0.002μg/L~0.01μg/L，六次平行测定试验相对标准偏差在2.6%~8.5%之间，加标回收率在75.6%~97.2%之间。
该方法适用于地表水中低含量苯胺类化合物的测定。
关键词：苯胺类化合物，超高效液相色谱-三重四级杆质谱法，地表水1 引言苯胺类化合物是芳香烃的代表，指苯胺分子中的氢原子被其它功能团取代后形成的一类化合物。
苯胺类化合物质具有特殊的颜色和气味，易溶于甲醇、乙醇、乙醚及丙酮，具有较强极性。
苯胺类化合物是工业、农药、医药等行业中的重要原料，且在环境水体中具有吸附作用和生物降解作用，可通过颗粒物或沉积物对苯胺类进行吸附。
苯胺类化合物具有很高的毒性，其中一些具有明显的致癌作用，是我国规定的优先控制污染物[1]。
随着工农业的发展，苯胺类化合物在环境中的排放残留量日趋增多，对环境及人们的身体健康所产生的危害日益严重[2]。
因此，对苯胺类化合物的测定至关重要。
对于苯胺类的测定方法主要有气相色谱法、分光光度法、液相色谱法、液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法等[3]。
本文采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法对地表水中低含量苯胺类化合物进行分析测定。
2 实验部分2.1 方法原理样品经阳离子交换固相萃取柱富集和净化后进样，用超高效液相-三重四级杆质谱分离检测苯胺类化合物。
以苯胺—d5作为内标，以苯胺—d8作为替代物，根据保留时间和特征离子定性，内标法定量。
2.2 试剂和材料试剂：甲醇（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、乙酸（色谱纯）、氨水（优级纯）、氢氧化钠（优级纯）、氮气（载气，纯度≥99.99%）、氩气（辅助气，纯度≥99.99%）。
三重四极杆液相色谱质谱联用仪技术指标
三重四极杆液相色谱质谱联用仪技术指标一、引言在现代科学中，液相色谱质谱联用仪（LC-MS/M S）逐渐成为了分析化学领域中的重要工具。
它将液相色谱（L C）和质谱（MS）相结合，充分发挥两种技术的优势，可用于定性和定量分析。
本文将重点介绍三重四极杆液相色谱质谱联用仪的技术指标，探讨其在化学分析领域中的应用。
二、基本概念2.1三重四极杆技术三重四极杆液相色谱质谱联用仪是一种利用两种离子过滤技术（电子喷雾离子源和四极杆质谱分析器）将分离和识别结合起来的仪器。
通过控制离子的通量和质荷比，并应用高精度的质谱仪，可以实现对复杂样品的高灵敏度和高选择性分析。
2.2技术指标三重四极杆液相色谱质谱联用仪的技术指标是衡量其性能的重要指标。
以下是一些常见的技术指标：-分辨力：指样品中两个峰之间的峰宽能否被清晰分开，用于评估分离能力。
-灵敏度：指仪器对非常低浓度组分的检测能力。
-线性范围：指仪器对于不同浓度下的样品响应是否呈线性关系。
-选择性：指仪器在存在其他化合物的干扰下，是否能够准确识别和定量目标化合物。
-准确度和精密度：指仪器的分析结果与真实值的接近程度和重复性。
-响应时间：指仪器从样品进入装置到产生结果所需的时间。
三、应用案例三重四极杆液相色谱质谱联用仪在许多领域都有广泛的应用。
以下是一些应用案例的描述：3.1药物分析在药物研究和制造中，三重四极杆液相色谱质谱联用仪被广泛用于药物代谢动力学、药物测定以及药物残留的分析。
其高灵敏度和选择性使其成为药物分析的理想工具。
3.2环境监测三重四极杆液相色谱质谱联用仪在环境监测中的应用越来越重要。
它可以准确检测和定量各种环境污染物，如农药残留、水体中的有机物和无机离子等，为环境保护提供重要的数据支持。
3.3食品安全食品安全是社会关注的焦点之一，三重四极杆液相色谱质谱联用仪在食品安全领域中发挥着重要作用。
它可以对食品中的农药残留、重金属和有害物质进行快速、准确的分析，保障公众的食品安全。
三重四极杆液相色谱质谱联用仪原理
三重四极杆液相色谱质谱联用仪原理三重四极杆液相色谱质谱联用仪（Triple Quadrupole Liquid Chromatography Mass Spectrometer，TQ-LCMS）是一种结合了液相色谱（Liquid Chromatography，LC）和质谱（Mass Spectrometry，MS）的分析仪器。
它由三重四极杆质谱仪和液相色谱仪两部分组成，可以进行高效的化合物分析和结构鉴定。
三重四极杆液相色谱质谱联用仪的原理是基于质谱分析技术和色谱分离技术的结合。
色谱分离技术通过不同分子间相互作用力的差异，使样品中的物质在色谱柱中进行分离。
而质谱分析技术则通过对样品分子进行离子化和质荷比（m/z）分析，得到样品的质谱图。
三重四极杆质谱仪是质谱仪的核心部分，它由三个四极杆组成。
第一个四极杆（Q1）用于进样离子化后的化合物。
通过控制Q1的电压，显性地选择特定离子种类进入下一个四极杆。
第二个四极杆（Q2）用于碎片离子的选择和分离。
第三个四极杆（Q3）用于质谱分析，同时可以对碎片离子进行筛选，控制离子流入检测器。
质谱仪通过不断地改变四极杆的电压和电场，选择离子的通道，从而实现样品质谱图的获取。
液相色谱仪是通过液相的分离原理将样品中的混合物分离开来。
它由进样系统、色谱柱和检测器三部分组成。
进样系统用于将样品引入色谱柱，色谱柱则根据各组分在固定相上的亲和力不同进行分离，最后通过检测器对分离后的物质进行检测。
三重四极杆液相色谱质谱联用仪的工作流程如下：首先，样品通过进样系统进入液相色谱仪，经过色谱柱进行分离。
然后，分离后的化合物进入质谱仪的离子源中进行离子化。
离子化后的化合物离子进入质谱仪中的四极杆，并根据四极杆的电压和电场进行质谱分析。
最后，得到的质谱图通过计算机系统进行处理和分析，可以得到样品中各组分的信息。
三重四极杆液相色谱质谱联用仪具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的特点，可以广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
液相色谱-三重四级杆质谱
液相色谱-三重四级杆质谱
液相色谱-三重四级杆质谱（LC-QQQ）是一种化学分析技术，广
泛应用于食品、医药、环境等领域的质量控制中。
LC-QQQ使用高效分
离的液相色谱技术将分析的混合物分离成各种成分，再通过三重四级
杆质谱对分离后的成分进行筛选和识别，从而达到快速、准确地分析
复杂混合物的目的。
液相色谱技术通过流动相与固定相之间的相互作用力，将混合物
分离成不同的成分，常用固定相包括反相、离子交换、凝胶等；流动
相包括水、乙腈、甲醇等。
分离完成后，各个成分进入三重四级杆质谱，通过碰撞诱导解离、多反应监测等方法对样品进行分析，最终得
出化合物的质量、结构等信息。
由于液相色谱和三重四级杆质谱都具有高灵敏度、高准确性、高
选择性的特点，因此可以对非常低浓度的物质进行检测，并且在样品
中存在其他复杂物质的情况下，也可以准确地检测出目标化合物的存在。
同时，由于LC-QQQ技术具有高度的自动化和高通量的特点，可
以在较短的时间内对大量样品进行分析，从而使得质检过程更加高效、可靠、准确。
总之，液相色谱-三重四级杆质谱作为一种现代化学分析方法，
已经成为食品、医药、环境等领域中不可或缺的分析技术之一。
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中华人民共和国国家环境保护标准HJ 1049-2019水质 4种硝基酚类化合物的测定液相色谱-三重四极杆质谱法Water quality —Determination of 4 nitrophenol compounds—Liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry（发布稿）本电子版为发布稿。
请以中国环境出版集团出版的正式标准文本为准。
2019-10-24发布 2020-04-24实施目次前言............................................................................................................................................... i i 1适用范围. (1)2规范性引用文件 (1)3方法原理 (1)4干扰和消除 (1)5试剂和材料 (2)6仪器和设备 (2)7样品 (3)8分析步骤 (3)9结果计算与表示 (5)10精密度和准确度 (6)11质量保证和质量控制 (7)12废物处理 (7)附录A（规范性附录）方法的检出限和测定下限 (8)附录B（资料性附录）质谱参考条件 (9)附录C（资料性附录）方法的精密度和准确度 (10)i前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水中硝基酚类化合物的测定方法，制定本标准。
本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中4种硝基酚类化合物的液相色谱-三重四极杆质谱法。
本标准的附录A为规范性附录，附录B～附录C为资料性附录。
本标准为首次发布。
本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。
本标准起草单位：四川省生态环境监测总站。
本标准验证单位：重庆市生态环境监测中心、广元市环境监测中心站、攀枝花市环境监测中心站、泸州市环境监测中心站、宜宾市环境监测中心站和南充市环境监测中心站。
本标准生态环境部2019年10月24日批准。
本标准自2020年4月24日起实施。
本标准由生态环境部解释。
ii水质 4种硝基酚类化合物的测定液相色谱-三重四极杆质谱法警告：实验中使用的标准物质和有机溶剂为有毒有害物质，试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行；操作时应按要求佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。
1 适用范围本标准规定了测定水中4种硝基酚类化合物的液相色谱-三重四极杆质谱法。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中2,6-二硝基酚、2,4-二硝基酚、4-硝基酚和2,4,6-三硝基酚等4种硝基酚类化合物的测定。
当进样体积为10 μl时，4种硝基酚类化合物的方法检出限为0.4 μg/L～0.6 μg/L，测定下限为1.6 μg/L～2.4 μg/L。
详见附录A。
2 规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范HJ/T 164 地下水环境监测技术规范3 方法原理样品经过滤或净化后直接进样，用液相色谱-三重四极杆质谱分离检测硝基酚类化合物。
根据保留时间和特征离子定性，内标法定量。
4 干扰和消除4.1 当样品中存在基质干扰时，可通过优化色谱条件、稀释样品、减少进样体积以及对样品进行预处理等方式降低或消除。
4.2 当样品中存在同分异构体干扰测定时，可通过改变色谱条件提高分离度或选择不同的二级质谱子离子消除干扰。
4.3 当样品中共存有机物干扰测定时，可用正己烷-二氯甲烷混合溶液萃取去除部分干扰，取水相进行分析。
15 试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的不含目标化合物的纯水。
5.1 甲醇（CH3OH）：液相色谱纯。
5.2 二氯甲烷（CH2Cl2）：液相色谱纯。
5.3 正己烷（C6H14）：液相色谱纯。
5.4 甲酸（HCOOH）：液相色谱纯。
5.5 甲酸铵（HCOONH4）：液相色谱纯。
5.6 氨水：ρ（NH3·H2O）=0.91 g/ml，优级纯。
5.7 甲酸铵-甲酸缓冲液：c（HCOONH4）=0.01 mol/L，pH=4。
准确称取0.315 g甲酸铵（5.5）溶于适量水中，溶解后转移至500 ml容量瓶中，用水稀释定容至标线，混匀，再加约70 μl甲酸（5.4）调节其pH至4。
5.8 正己烷-二氯甲烷混合溶液：1+2。
用正己烷（5.3）和二氯甲烷（5.2）按1：2的体积比混合。
5.9 硝基酚类化合物标准贮备液：ρ=100 mg/L。
可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%，用甲醇（5.1）溶解，在-10℃以下冷冻、避光保存。
也可直接购买有证标准溶液，参照制造商的产品说明书保存。
5.10 硝基酚类化合物混合标准使用液：ρ=5.00 mg/L（参考浓度）。
移取适量硝基酚类化合物标准贮备液（5.9），用甲醇（5.1）稀释，在-10℃以下冷冻、避光保存，可保存3个月。
5.11 内标贮备液：ρ=5000 mg/L。
内标物为2,4-二硝基苯酚-d3，可用标准物质制备，标准物质纯度大于98.0%，用甲醇（5.1）溶解，在-10℃以下冷冻、避光保存。
也可直接购买有证标准溶液。
5.12 内标使用液：ρ=200 μg/L（参考浓度）。
将内标贮备液（5.11）按需要用甲醇（5.1）稀释，在-10℃以下冷冻、避光保存，可保存3个月。
5.13 滤膜：0.22 μm聚四氟乙烯滤膜。
5.14 氮气：纯度≥99.99%。
6 仪器和设备6.1 液相色谱-三重四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI），具备梯度洗脱和多反应监测功能。
6.2 色谱柱：填料粒径为2.2 μm，柱长75 mm，内径3.0 mm的C18反相液相色谱柱或其他性能相近的色谱柱。
6.3 离心机：最高转速不低于4000 r/min。
6.4 具塞离心管：10 ml。
6.5 样品瓶：250 ml磨口具塞棕色玻璃瓶。
26.6 微量注射器或移液器：10 μl、50 μl、100 μl、500 μl、1.0 ml。
6.7 一般实验室常用仪器和设备。
7 样品7.1 样品采集和保存按照HJ/T 91和HJ/T 164的相关规定进行样品的采集。
样品采集时应充满样品瓶（6.5），不留空隙。
若采集后样品pH不在7～9之间，用氨水（5.6）或甲酸（5.4）调节其pH至7～9，在4℃以下冷藏、避光保存，7 d内完成分析。
7.2 试样的制备清洁样品可过滤后直接进样分析。
样品（7.1）经滤膜（5.13）过滤，弃去至少1 ml初滤液后，移取1.0 ml过滤后的样品于棕色进样瓶中，加入10.0 μl内标使用液（5.12），混匀待测。
基体复杂的样品经净化后直接进样分析。
取5.0 ml样品（7.1）置于具塞离心管（6.4）中，加入1 ml正己烷-二氯甲烷混合溶液（5.8），振荡5 min，以4000 r/min的转速离心5 min。
吸取3 ml上层水相溶液，用滤膜（5.13）过滤，然后移取1.0 ml滤液于棕色进样瓶中，加入10.0 μl内标使用液（5.12），混匀待测。
7.3 空白试样的制备用实验用水代替样品，按照与试样的制备（7.2）相同的步骤进行实验室空白试样的制备。
8 分析步骤8.1 仪器参考条件8.1.1 液相色谱参考条件流动相A：甲酸铵-甲酸缓冲液（5.7），流动相B：甲醇（5.1），梯度洗脱程序见表1；流速：0.2 ml/min；柱温：30℃；进样体积：10 μl。
3表1 液相色谱流动相梯度洗脱程序8.1.2 质谱参考条件离子源：电喷雾离子源（ESI），负离子模式。
监测方式：多反应监测（MRM）。
其余条件参见附录B。
8.1.3 仪器调谐不同厂家的仪器调谐参数存在一定差异，应按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对质谱仪进行仪器质量数和分辨率的校正，以确保仪器处于最佳测试状态。
8.2 校准8.2.1 标准曲线的建立移取适量的硝基酚类化合物混合标准使用液（5.10），用水稀释，配制至少5个浓度点的标准系列溶液，标准溶液中硝基酚类化合物的质量浓度分别为 2.00μg/L、5.00 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L（此为参考浓度），移取1.0 ml标准系列溶液于棕色进样瓶中，加入10.0 μl内标使用液（5.12），混匀待测。
按照仪器参考条件（8.1），由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进行测定。
以目标化合物的质量浓度（μg/L）为横坐标，以其对应的响应值与内标物的响应值的比值和内标物浓度的乘积为纵坐标，建立标准曲线。
8.2.2 标准参考谱图在本标准推荐的仪器参考条件下，目标化合物的总离子流色谱图见图1（4种硝基酚类化合物的质量浓度为10.0 μg/L）。
451—2,6-二硝基酚；2—2,4-二硝基酚-d 3（内标物）；3—2,4-二硝基酚；4—4-硝基酚；5—2,4,6-三硝基酚。
图1 4种硝基酚类化合物和内标物的总离子流色谱图8.3 试样测定按照与标准曲线的建立（8.2.1）相同的仪器条件进行试样（7.2）的测定。
8.4 空白试验按照与试样测定（8.3）相同的仪器条件进行空白试样（7.3）的测定。
9 结果计算与表示9.1 定性分析选择1个母离子和2个子离子对目标化合物进行监测。
在相同的实验条件下，试样中目标化合物的保留时间与标准样品中该目标化合物的保留时间的相对偏差的绝对值应小于2.5%；且对试样中目标化合物定性子离子的相对丰度（K sam ）与浓度接近的标准溶液中对应的定性子离子的相对丰度（K std ）进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的目标化合物。
%10012⨯=A A K sam （1） 式中：K sam ——样品中目标化合物定性子离子的相对丰度，%；A 2——样品中目标化合物二级质谱定性子离子的响应值；A 1——样品中目标化合物二级质谱定量子离子的响应值。
%10012⨯=std std std A A K （2） 式中：K std ——标准样品中目标化合物定性子离子的相对丰度，%；6A std2——标准样品中目标化合物二级质谱定性子离子的响应值；A std1——标准样品中目标化合物二级质谱定量子离子的响应值。
表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差9.2 结果计算样品中硝基酚类化合物的质量浓度（μg/L ），按照公式（3）进行计算：D i i ⨯=1ρρ （3）式中：i ρ——样品中第i 种硝基酚类化合物的质量浓度，μg/L ；i 1ρ——由标准曲线得到的试样中第i 种硝基酚类化合物的质量浓度，μg/L ；D ——稀释倍数。