植物膜蛋白提取方法的研究(2D电泳用)
植物膜蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法说实话植物膜蛋白提取这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过超声破碎法来提取。
就像敲鸡蛋，想把里头的东西弄出来那种感觉。
把植物组织放在缓冲液里，然后用超声仪来破碎细胞。
可是我发现这种法子很容易把膜也给弄破喽，得到的膜蛋白纯度不咋高，好多其他乱七八糟的东西都混进去了。
这就好比炒菜的时候把不该放的调料都倒进去了，最后味道全乱套了。
后来呢，我又尝试了差速离心法。
这就像挑豆子，把大的小的分开那样。
先把植物组织破碎后，通过不同的离心速度把细胞器啊什么的和膜蛋白分离开。
开始的时候我老是掌握不好离心速度和时间，要么离心速度不够，那些东西分不开，要么就是离心太久了，把想要的膜蛋白都给弄丢了一部分。
经过好多次的尝试，我才慢慢摸准了一点规律。
比如说，先低速度短时间离心去掉那些大的残渣，然后再逐步提高离心速度和延长时间来纯化膜蛋白。
我有段时间还听别人说密度梯度离心法好使。
这方法有点像从水里分层捞东西。
就是用不同浓度的溶液形成一个密度梯度，然后离心，让膜蛋白在适合它密度的那个层面停下来，这样和其他物质分离开。
但是这个方法操作起来比较麻烦，各种溶液的配制就要很精确，我就老在这上面出错，溶液配不对后续根本得不到像样的结果。
还有就是用化学试剂来提取。
比如说表面活性剂。
这就跟用清洁剂去油污有点像，表面活性剂能把膜蛋白从细胞膜上给“扒拉”下来。
不过这化学试剂的种类和浓度可得选好了，选错了就像洗衣粉放太多把衣服都洗坏了似的，膜蛋白的活性啥的就全没了。
我就在选择表面活性剂的种类和浓度上栽过跟头，试了好多种，结果都不理想，不是蛋白没有提取出来就是提取出来的蛋白变性了失去活性了。
如果是新手上路的话，我觉得差速离心法可以先试试，毕竟相对来说比较直白一点，虽然可能会碰到不少问题，但是在调整离心速度和时间的过程中可以慢慢学习。
可千万别像我刚开始的时候，只知道按照书上的数值来，实际情况和书上可能有差别，要多做尝试才行。
在操作的全过程里，实验设备的清洁也很重要。
水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析
水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析水稻是我国最主要的农作物之一，它拥有丰富的营养元素和优良的加工性能，它正直接影响着人们的健康。
水稻叶片质膜是水稻细胞中微量物质汇集的地方，包括脂肪酸、糖类、氨基酸、蛋白质等，而这些物质的研究有助于更好地理解水稻叶片的生理功能和生物学过程。
因此，研究水稻叶片质膜的纯化和质膜蛋白的双向电泳分析技术变得越来越重要。
水稻叶片质膜的纯化是指将其中成分保持完整的过程，包括离子溶液分离等技术。
该方法首先利用早期三维结构解析，抽取水稻叶片质膜蛋白质，然后经过离子溶液分离，去除杂质，最后得到纯化的水稻叶片质膜蛋白质。
此外，还可以利用高效液相色谱（HPLC）和聚焦色谱（FPLC）技术对水稻叶片质膜分子进行纯化。
水稻叶片质膜的蛋白质双向电泳分析技术是将质膜蛋白分离并分析其特征结构的一种方法。
该技术首先将蛋白质溶液经过衰减级联电泳（SDS-PAGE）分离，然后将蛋白质溶液再次分离，最后通过检测可见光，得出可读的结果。
其中，聚苯乙烯电泳（PVDF）、聚丙烯电泳（PVDF）以及凝胶电泳（GE）等电泳技术可用于水稻叶片质膜蛋白质双向电泳分析，可以得出准确的结果。
在水稻叶片质膜的研究中，该技术发挥着重要作用。
首先，该技术可以提供更为准确的信息，可以帮助研究人员更好地了解水稻叶片的特征结构。
其次，它可以用于检测水稻叶片中不同蛋白质的数量，从而帮助研究人员更好地了解水稻叶片的生物学功能。
最后，该技术有助于研究者们更好地理解水稻叶片中脂肪酸、糖类和氨基酸等成分的分布情况。
综上所述，水稻叶片质膜的纯化和质膜蛋白的双向电泳分析技术是研究水稻叶片的生理功能和生物学过程的重要工具。
该技术可以为我们提供准确的数据，帮助我们更全面地了解水稻叶片的组成，从而为人们提供更好的营养和健康。
细菌蛋白提取方法(双向电泳用)
产品组成：
产品组成 规格
细菌蛋白提取液 A（2D） 细菌蛋白提取液 B
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3182-1 50 assays
25ml 250ul 100ul
பைடு நூலகம்
BB-3182-2 100 assays
50ml 500ul 200ul
储存条件： 蛋白提取液 A 室温保存； 蛋白提取液 B 和蛋白酶抑制剂-20℃保存。
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124
细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒
BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE 上样 Buffer
有效期： 一年。
产品简介： 贝博细菌总蛋白提取试剂盒（双向电泳用）可以从各种原核细菌样本中提取总蛋白，
提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提 取高质量的蛋白提供了保证。
提取的蛋白用于双向电泳。如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE 电泳检测、Western blotting、
BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒，请联系本公司选购其他货号的试剂盒。
使用方法： 裂解液的准备：根据所需要提取的样本量，每 500ul 蛋白提取液中 A 加入 5ul 试剂 B 和 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。 在 4℃ 12000RPM 条件下将菌液离心 5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体， 用 PBS 洗菌体 2 次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。 按每 20mg 湿重菌体样本加入 500ul 裂解液，吹打混匀，冰上放置 30 分钟，间隔一 段时间振荡。（选做步骤：300w，10s 超声/10s 间隔条件下冰浴超声至菌液变清。 若不做，请延长裂解液作用时间至 2 小时。） 在 4℃ 12000RPM 条件下将提取液离心 5 分钟。 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细菌总蛋白。 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
一步法植物活性蛋白质提取试剂盒OneStepPlantActive
一步法植物活性蛋白质提取试剂盒 One Step Plant Active Protein Extraction Kit产品编号：C510004 包装规格：20 Assays 产品简介该试剂盒可以在10 min 内从植物组织中提取可溶性活性蛋白质，提取的蛋白质可以用SDS-PAGE ，2D 电泳，Western blotting 和免疫共沉淀，Pull Down ，EMSA 等蛋白活性分析以及亲和纯化等。
试剂盒含有三种试剂：有机溶剂裂解植物组织，水溶性试剂溶解蛋白质，DTT 稳定蛋白质。
该方法已经用拟南芥、番茄、菠菜、豌豆、大豆等植物的叶、根、花和种子实验过，方法快速有效，可以从20 × 40mg 新鲜或冻存的植物组织，或者20× 10 mg 的干燥的植物组织中提取所需要的蛋白质，可以使用20次，由溶液A, B, DTT 和蛋白酶抑制试剂组成。
产品特点 1. 方法快速有效，可以在10 min 内完成整个实验过程2. 可以从20 × 40 mg 新鲜或冻存的植物组织，或者20 × 10 mg 的干燥的植物组织中提取所需要的蛋白质3. 可以从各种植物的叶，根，花和种子等植物组织中提取所需要的蛋白质4.提取的蛋白质可以最大程度的保持蛋白质的活性运输和保存条件常温下运输,收到后将蛋白酶抑制剂，DTT -20℃保存，溶液A 和溶液B 在常温下保存。
同时溶液B 还需要避光保存，有效期两年。
产品组成 成分 C510004 Buffer A 20 mL Buffer B 20 mL DTT0.1 mL 蛋白酶抑制剂 25 μL实验前准备 1. 在每mL 的溶液A 中加入1 μL 的蛋白酶抑制剂混匀待用。
2. 如果植物中含有较多的氧化酶和醌，请加入终浓度为0.05-0.1%的焦亚硫酸，Sodium Diethyldithiocarbamate trihydrate （DDTC 铜试剂）等抗氧化试剂到溶液A 中。
植物蛋白提取方法研究进展
植物蛋白提取方法研究进展研究简介：本方法介绍了植物样本常见的几种蛋白的提取方法。
使用方法：一、BBproExtra植物总蛋白提取1.组织样本：1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg鲜嫩植物组织样本剪碎，采用以下一种方法处理：i.加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。
ii.置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液A。
iii.加入500ul提取液A直接置冰上研磨。
3、研磨后吸入一个预冷的干净离心管中在冰上或4℃冰箱静置1小时。
4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
2.细胞样本：1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、细胞用PBS洗涤2次。
3、加入细胞体积5-10倍体积的蛋白提取液，振荡1小时。
4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
3.冻存样本：1、冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。
2、冻存细胞样本中直接加入5-10倍体积的蛋白提取液，振荡30分钟。
3、在4℃，12000rpm以上条件下离心15分钟。
4、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
二、BBproExtra植物膜蛋白提取1、每500ul抽提液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎，置于研钵中用液氮研磨。
（没有液氮也可直接置冰上研磨即可）3、研磨后加入500ul提取液，混匀后于一个预冷的干净离心管中在冰上静置2-3小时。
植物蛋白质组研究技术
植物蛋白质组研究技术（内部使用）一、蛋白质提取方法：直接研磨法：将植物材料剪碎于加有一定量的样品缓冲液（材料g：缓冲液ml＝1:4）的预冷的研钵中，冰上进行研磨至匀浆。
4o C下15000 rpm离心15 min，上清夜即为蛋白质抽提液。
电泳前将该提取液在相同条件下再离心一次即可。
该方法适用于极幼嫩的植物组织或幼苗以及白化、黄化苗等。
TCA/丙酮沉淀法：A）植物组织在液氮中研磨成精细的粉末后加入10％TCA（丙酮为溶剂）在－20o C下沉淀1 h以上（可以过夜）。
溶液在4o C下15000 rpm离心15 min。
沉淀用丙酮清洗三次（至丙酮为无色止），相同条件下离心后，沉淀真空干燥（约5 min 即可）。
真空干燥后所得的干粉按每30 mg加1ml样品缓冲液进行溶解（室温下1 h以上）。
可以进行振荡或超声波助溶。
溶解后的样品4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液即为蛋白质提取液。
B）植物组织在匀浆缓冲液中4o C下研磨至匀浆【样品于缓冲液之比（g/ml）随样品的不同而有所不同，一般幼嫩或含水量比较丰富的组织为1：3－4，而生理年龄较老的组织约为1：8－10】。
匀浆液4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液，往上清中加入50％TCA（水为溶剂）至TCA浓度为10％，冰上沉淀30 min，相同条件下离心，沉淀用丙酮清洗3次，离心后真空干燥即可得蛋白干粉。
将蛋白干粉按所需的比例溶于样品缓冲液中（振荡助溶1 h）即可。
酚抽提法：植物组织在匀浆缓冲液中4o C下研磨至匀浆【样品于缓冲液之比（g/ml）随样品的不同而有所不同，一般幼嫩或含水量比较丰富的组织为1：3－4，而生理年龄较老的组织约为1：8－10】。
匀浆液4o C下15000 rpm离心15 min后取上清液，往上清夜中加入相同体积的Tris饱和酚（pH 8.0）上下倒置充分混匀后15000 rpm离心5－10 min。
膜蛋白提取方法(双向电泳)
膜蛋白提取试剂盒（双向电泳用）产品组成：产品组成 BB-3188-1 BB-3188-2规格 50T 100T试剂A 10ml 20ml试剂B 20ml 40ml试剂C 10ml 20ml蛋白酶抑制剂混合物 250μl 500μl储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液A和B 2-8℃保存；试剂C室温保存。
有效期：一年。
产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。
去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
贝博双向电泳膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织提取双向电泳用膜蛋白样品。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
提取的蛋白可直接用于双向电泳蛋白研究。
使用方法：A．细胞蛋白提取1.取5-10×106个以上细胞①，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.细胞样品中加入200μl冷的试剂A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。
4.再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，13000×g条件下离心5分钟。
5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g力离心3分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白部分约为20μl。
6.移除上层溶液和界面层，收集下层膜蛋白样品。
一般可直接跳过步骤7和步骤8直接进行步骤9，如果对膜蛋白样品纯度要求极高，可以进行步骤7或者步骤7和8，此时膜蛋白回收率会稍有降低。
7.用150-200μl冰冷的试剂B稀释下层膜蛋白样品，混匀后冰浴2min，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g力离心3分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白部分约为20μl。
植物膜蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法今天咱们来聊聊植物膜蛋白提取这个超有趣的事儿，就像是在植物的微观小宇宙里搞一场“寻宝大冒险”呢。
植物膜蛋白啊，那可是一群超级神秘的小家伙。
它们就像躲在城堡（细胞膜）里的小魔法师，外面有着层层的防护。
要把它们提取出来，就如同要闯进一个戒备森严的魔法城堡。
我们首先得想办法打破这个“城堡”的防御。
传统的方法就像是拿着大锤子去敲城堡的墙，用一些化学试剂去破坏细胞膜。
这时候就像一场激烈的攻城战，试剂们像一群勇猛的小战士，冲向细胞膜这个坚固的堡垒。
但是呢，这个过程可不能太鲁莽。
因为膜蛋白很脆弱，就像娇贵的小花朵。
要是用力过猛，那这些小魔法师可就被“砸晕”或者直接被破坏掉了，就像不小心把珍贵的瓷器给摔碎了一样，那可就前功尽弃啦。
在提取过程中，离心这个步骤就像是一场神奇的“大筛选”。
高速旋转的离心机就像一个巨大的旋转木马，把那些不属于膜蛋白的杂质都甩出去，只留下我们的“小宝贝”膜蛋白。
这就好比在一堆沙子里挑出闪闪发光的金子，那可是相当考验技术的。
还有一种方法是用去污剂来提取膜蛋白。
去污剂就像是一群超级狡猾的小狐狸，它们悄悄地钻进细胞膜这个“狐狸窝”，把膜蛋白给哄骗出来。
不过，这些小狐狸有时候也会调皮捣蛋，如果控制不好量，就会把整个局面搞得一团糟，就像一群调皮的孩子在屋子里乱跑，把东西弄得乱七八糟。
有时候，为了更精准地提取膜蛋白，我们还得像侦探一样小心翼翼。
观察各种反应，调整各种条件，就像侦探在寻找破案的关键线索。
一点点温度的变化，一点点试剂浓度的改变，都可能影响到我们是否能成功抓到这些“小魔法师”。
当我们终于提取到了膜蛋白，那感觉就像是找到了传说中的宝藏一样兴奋。
这些膜蛋白在我们的实验管里，就像一群被收服的小精灵，等待着我们去进一步研究它们的神奇魔法，去探索它们在植物生命活动中到底扮演着怎样神秘而又重要的角色。
整个植物膜蛋白提取过程，就像是一场充满惊喜、刺激又带着点小危险的奇妙旅程。
每一次尝试都是一次新的冒险，每一次成功提取都是一次值得欢呼的胜利。
膜蛋白的分离方法
膜蛋白的分离方法
膜蛋白是一类位于细胞膜上的蛋白质，它们在细胞的代谢、信号传递、物质运输等方面起着重要作用。
以下是一些常见的膜蛋白分离方法：
1.超速离心法：利用超速离心机产生的强大离心力，将细胞膜和膜蛋白分离开来。
这种方法常用于制备纯净的细胞膜和膜蛋白。
2.电泳法：通过电泳技术，可以根据膜蛋白的电荷性质和分子量大小，将其分离开来。
电泳法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等。
3.层析法：层析法是一种基于膜蛋白物理化学性质差异的分离方法。
常用的层析技术包括凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
4.浮选分离法：利用浮力密度的差异，通过离心使不同密度的膜蛋白在溶液中分层，从而实现分离。
5.免疫沉淀法：基于抗体与抗原的特异性结合，使用特异性抗体将目标膜蛋白从混合物中沉淀出来。
6.密度梯度离心法：根据膜蛋白的密度差异，将其在密
度梯度介质中进行离心分离。
7.膜蛋白提取试剂盒：市面上有一些商业化的膜蛋白提取试剂盒，它们通常结合了多种分离技术，简化了膜蛋白的提取过程。
需要根据具体的实验需求和膜蛋白的特性选择合适的分离方法。
在膜蛋白分离过程中，需要注意保持膜蛋白的活性和稳定性，避免蛋白质的变性和降解。
膜蛋白的提取方法-全攻略
膜蛋白的提取方法-全攻略一、膜蛋白简介膜蛋白在细胞中扮演着重要的角色：例如被熟知的识别、信号转导、运输等功能，也是用药的理想的靶点，虽动物细胞主要有9种膜脂，而膜蛋白的种类繁多，多数膜蛋白分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。
根据膜蛋白分离的难易及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可分为两大类型：外在膜蛋白、内在膜蛋白。
(1) 外在膜蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。
(2) 内在膜蛋白与膜结合非常紧密，一般只有用去垢剂(detergent)使其膜解后才可分离出来。
附注：使用分级抽提方法获得的“膜蛋白”中只有很少一部分是具备多跨膜区的整合膜蛋白。
二、膜蛋白的提取方法谈及蛋白分离，我们想到：超速离心，盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法……有时这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化。
由于蛋白质种类繁多，不同的蛋白质由于结构和组成的差异，其溶解度也各不相同.根据蛋白质的溶解特性，同时可选择不同的溶剂提取，分为水溶液提取和有机溶剂提取.但是与胞质蛋白，核蛋白提取不同之处在于膜蛋白是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同的离心速度去掉胞质蛋白等，然后用去污剂把蛋白从膜中释放出来。
膜蛋白分离纯化的重要步骤是选择适当的增溶用表面活性剂，一般常用的有胆酸盐，CHAPS(一种离子去污剂），Emulgen和Lubrol等表面活性剂。
1）先分离膜，然后提取；如选用冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法使得细胞破碎，然后通过梯度离心得到含有膜蛋白的粗组分。
（例如：用液氮研磨组织，加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂，然后差速离心、蔗糖密度梯度离心。
收集37%与41%间的成分，即为质膜部分。
裂解即可收集膜蛋白）2）用特殊的去污剂选择性的分离。
植物膜蛋白质组学研究进展
植物膜蛋白质组学研究进展摘要：植物膜蛋白质组学的研究是蛋白质组学研究者关注的焦点之一，但由于膜蛋白具有低丰度、疏水性等特点，因此膜蛋白的富集提取、分离鉴定存在很大的难度。
从膜蛋白的富集提取、分离鉴定入手，阐述其研究进程，对质膜蛋白、叶绿体膜蛋白、线粒体膜蛋白和液泡膜蛋白等方面的研究进展进行了综述，并对膜蛋白的研究前景进行展望。
关键词：植物；膜蛋白；膜蛋白质组学：研究技术生物膜具有的主要功能可归纳为：能量转换、物质运送、信息识别与传递等，这些功能在很大程度上决定于膜内所含的蛋白质——膜蛋白。
膜蛋白是一类具有独特结构的蛋白质，镶嵌于膜脂的特性使这一类蛋白处于细胞与外界的交界部位，介导细胞与外界之间的信号传导，并执行很多基本的和重要的细胞生物学功能。
1 膜蛋白质组学研究技术的发展膜蛋白的研究面临的挑战是膜蛋白(主要是低丰度蛋白、疏水蛋白)的提取鉴定、膜蛋白的定位和功能等方面。
现在一些新技术的利用如增溶剂(尿素、硫脲)。
新的去垢剂(CHAPS和ASB-14)，以及有机溶剂(CHCl3)等极大地改善了膜蛋白质的溶解性能；同时一些新的双向电泳技术(如：自由流电泳)的利用扩大了膜蛋白的常规分离范围：另外质谱技术的发展使得膜蛋白的鉴定在最近几年取得了较大的发展，这些技术都在一定程度上使膜蛋白具有低丰度、难溶解、等电点时易沉淀、不易酶解等难题得到一定程度的解决。
1.1 膜成分的制备纯化获得高度纯化的膜成分是进行膜蛋白研究的基础。
制备纯化膜成分的方法很多，在植物材料中以蔗糖密度梯度离心法、两相分配法和自由流电泳(FFE，free flow electrophoresis)等方法为主。
有的学者利用亲和两相法提纯了质膜，WGA(麦胚凝集素，wheat-germ agglutinin)能识别质膜表面的糖链，结合糖蛋白质和糖脂，并能与质膜外表面的唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖相结合，将WGA共轭结合到葡聚糖上，可将质膜从其他生物膜中纯化出来。
一种植物蛋白的提取方法[发明专利]
![一种植物蛋白的提取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ccecedde0b4c2e3f562763de.png)
专利名称：一种植物蛋白的提取方法
专利类型：发明专利
发明人：王亚娟,仇丹,杨人元,李淳雄,李亚,姚利辉,王灵辉申请号：CN202010953348.8
申请日：20200911
公开号：CN111995656A
公开日：
20201127
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种植物蛋白的提取方法，其特征在于包括有以下步骤：(1)将植物原料粉碎成粉体；(2)将步骤(1)得到的粉体与有机溶剂混合，搅拌均匀后离心，收集得到不溶物，然后将不溶物风干后得到脱脂粉体；(3)将步骤(2)得到的脱脂粉体与去离子水混合，使用碱液将pH调节至8.5～11.0后离心，留取上清液；(4)将步骤(3)得到的上清液置于电场强度为0.42～3.75V/cm的电场中，收集电极板上的絮凝物，最后对絮凝物冻干，得到所需的植物蛋白。
与现有技术相比，本发明的制备方法能够快速、高效且能获得高纯度、高完整性的植物蛋白。
申请人：宁波工程学院
地址：315211 浙江省宁波市江北区风华路201号
国籍：CN
代理机构：宁波诚源专利事务所有限公司
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植物激活蛋白的分离_纯化及等电点的的测定
第24卷 第4期《新疆师范大学学报》(自然科学版)V ol.24,N o.4 2005年12月Jour nal o f Xinjiang N or mal U niver sity Dec.2005(N atural Sciences Edition)植物激活蛋白的分离、纯化及等电点的的测定仲新华1, 邱德文2, 王纯利1, 刘 铮2(1.新疆农业大学,新疆乌鲁木齐830052;2.中国农业科学院环境与可持续发展研究所,北京,100081)摘要:文章主要介绍首次从真菌中提取的植物激活蛋白是一种高效、多功能、广谱性、能诱导植物对病虫害产生免疫抗性的新型植物诱导物质,通过分离纯化该蛋白,可以为下一步的活性检测,序列测定及基因克隆打下良好的基础。
关键词:植物激活蛋白;离子交换层析;分子筛;等电点中图分类号: O629.3 文献标识码: A 文章编号: 1008-9659-(2005)-04-0065-04植物激活蛋白主要通过激活植物体内分子免疫系统,提高植物自身免疫力,通过激发植物体内的一系列代谢调控,促进植物根茎叶生长和提高叶绿素含量,从而达到提高作物产量的目的。
中国农科院环境与发展研究所蛋白质药物工程实验室对其作用机理进行了初步研究,推测其机理可能为:来源于真菌的42-62K D 的一类信号传导分子,可通过不同的代谢途径实现信号传导,引起基因表达,激活植物自身防御系统和生长系统,提高植物自身免疫力,通过调节植物生长代谢系统,促进植物生长,提高作物产量和产品品质。
本实验在分离纯化植物激活蛋白的基础上,采用等电点聚焦电泳测定了该蛋白质的等电点,为进一步得到结晶及研究该蛋白的结构建立了坚实的基础,并对于下一步的活性检测,序列测定及基因克隆具有重要意义。
1 实验材料1.1 A lternaria ap p菌株系中国农业科学院环境与可持续发展研究所蛋白质药物工程实验室保存并提供;1.2 蛋白纯化仪型号A K T A exp lor er10,离子柱是H itrap TM Q FF1ml,H itrap T M DE AE FF1ml,脱盐柱是H itrap TM26/10Desalting5ml,分子筛是Sep hacry lS-100,均为瑞典A mer sham公司产品;等电聚焦仪R oto-f or cell及S DS-聚丙烯酰胺凝胶电泳均为Bid-red公司产品;A micon Ultra10K D超滤管为北京华美公司产品;1.3 低分子量标准蛋白由北京江晨公司提供,其余试剂均为分析纯。
杨树胞外蛋白的提取分离及2-D电泳体系的建立
杨树胞外蛋白的提取分离及2-D电泳体系的建立陈颖;乐利;罗永亚;杨华;汪南阳;林芳芝;王俊霖【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2015(35)1【摘要】该研究以美洲黑杨杂种优良无性系NL895杨(Populusdeltoides×Populus euramericana cv,)组培苗叶片和茎段为研究对象,对NL895杨叶片细胞壁蛋白(cell wall proteins,CWPs)和茎段质外体蛋白(apoplastic proteins,APPs)的提取、分离和双向电泳等技术进行了系统研究.结果表明:10 g以上叶片、超声波破碎10 min、CaCl2法提取的细胞壁蛋白效果较好,经G-6-PDH 酶活性检测,提取的细胞壁蛋白胞质污染率较低;真空渗透法提取的茎段质外体蛋白胞质污染率较前者高,但在允许范围之内.TCA/丙酮沉淀法纯化提取的细胞壁蛋白、pH 4～7的24cm胶条、上样量为500 μg的双向电泳体系,其蛋白电泳图谱中的斑点多而清晰,斑点数达550多个,是叶片细胞壁蛋白电泳分析较适合的体系;pH 3～10胶条对茎段质外体蛋白的电泳分离效果较好.该研究初步建立了杨树胞外蛋白的提取、分离及2-DE电泳体系,为木本植物胞外蛋白的研究奠定了基础.【总页数】8页(P199-206)【作者】陈颖;乐利;罗永亚;杨华;汪南阳;林芳芝;王俊霖【作者单位】南京林业大学南方现代林业协同创新中心,生物与环境学院,南京210037;南京林业大学南方现代林业协同创新中心,生物与环境学院,南京210037;南京林业大学南方现代林业协同创新中心,生物与环境学院,南京210037;南京林业大学南方现代林业协同创新中心,生物与环境学院,南京210037;南京林业大学南方现代林业协同创新中心,生物与环境学院,南京210037;南京林业大学南方现代林业协同创新中心,生物与环境学院,南京210037;南京林业大学南方现代林业协同创新中心,生物与环境学院,南京210037【正文语种】中文【中图分类】Q503【相关文献】1.大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系的建立 [J], 张春燕;刘寒;杨烨;陈燕;邬丽莎;赵春玲2.建立人肾小管上皮细胞蛋白质组双向电泳的分离体系 [J], 张春燕;刘友平;杨烨;龚舒;李洪3.乳杆菌胞外蛋白提取鉴定与双向电泳图谱建立 [J], 赵伟;郭慧媛;任发政;陈尚武4.茶树雌蕊总蛋白质双向电泳分离体系的建立 [J], 任燕;陈暄;房婉萍;李垚;黎星辉5.油茶雌蕊蛋白双向电泳分离体系的建立 [J], 邱智敏;郑碧娟;陈辉;何艺凡;陈世品因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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植物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）
货号：BB-31841 V2.16
试剂盒组成：
产品组成 BB-31841-1 BB-31841-2 组份编号
规格 50T 100T
试剂A：植物膜蛋白提取液A 25ml 50ml 31841A
试剂B：植物膜蛋白提取液B 250ul 500ul 31841B
试剂C：膜蛋白溶解液C 10ml 20ml 31841C
试剂D：蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul 31841D
使用说明书 1 1
知识产权： 贝博TM BBproExtra TM试剂盒及其使用方法包含专有技术。
产品简介：
膜蛋白承担各种生物功能，扮演重要角色。
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。
去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
贝博TM BBproExtra TM植物膜蛋白提取试剂盒（二维电泳用）是一种基于化学方法的高产膜蛋白提取试剂盒。
植物膜蛋白提取试剂盒可以从各种植物中提取膜蛋白，可用于纯化膜蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。
提取过程简单方便。
该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白用于双向电泳。
如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE电泳检测、Western blotting、凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒，请联系贝博，选用其它产品号的产品。
使用方法：
1、试剂准备：
每500ul膜提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加
入500ul提取液A，用组织匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3、匀浆或研磨后加入500ul提取液A，混匀后于一个干净离心管中在2-8℃振荡1小时。
4、将提取液在2-8℃条件下12000g离心5分钟，取上清。
5、在上清中加入5ul提取液B，充分混匀。
6、在37℃水浴10分钟。
7、在37℃ 1000g离心3分钟。
8、此时液体分为2层，小心移除上层部分，吸取下层管底部大约50ul液体。
9、用50-150μl冷的膜蛋白溶解液C溶解下层溶液，即得膜蛋白样品。
10、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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