拟南芥培养
拟南芥的栽培
拟南芥的栽培拟南芥生长周期短，6∽8周即可完成从种子到种子的整个生活周期。
1.播种腐殖质土：珍珠岩或赭石=2 : 1，播种前土壤混合物进行高压灭菌30 min，以杀死可能混有的害虫。
通常使用培养皿点播拟南芥种子，点播时使用琼脂糖浓度为0.8 %的1/2 MS培养基进行点播种子（因为该琼脂糖浓度有利于在不伤根的情况下取出培养基中的小苗，移植至土壤中）。
直接土壤播种后，将播有种子的容器移至低温条件下（2∽4 ℃）2∽4 d，以破除种子休眠（对新鲜收获的种子尤为重要），在种子发芽期间必须保持土壤高湿度，故容器需要用塑料膜覆盖1周左右揭去。
2.生长发育条件控制光：光强度为120∽150 umol/(m2•s)，光周期为16 h光照，8 h黑暗。
长日照促进拟南芥提前开花，使叶数量减少且降低种子生成，较短日照有利于营养生长。
温度：拟南芥最适生长温度为25 ℃左右（对于迟开花拟南芥生态型来说，幼苗期要给以4 ℃左右几周的春化处理，以破除休眠）。
水分：拟南芥两片真叶开始伸展之前必须避免干旱，但供水过量会引起土表藻类和真菌的生长；当真叶长出后，灌水频率可相应减少（如每周一或两次），至长角果充实阶段必须保证水分供应，以利于种子形成，但当长角果进入成熟阶段时，较低湿度（< 50 %）是有利的。
营养：营养贫瘠的植株叶呈微淡绿色，植株矮、提早开花，且种子着生少；营养充足的健壮植株呈暗绿色。
防止杂交：防止昆虫进入导致杂交，各品系种植之间的距离>20 cm，从而防止不同品系的花相互接触。
3.拟南芥的花浸法注意事项：当拟南芥花序枝刚伸出时，摘除初生花序枝，促进其长出更多的花序枝，并移至长日照（16∽24 h光照/d）下生长，约一周后进行转化。
正常的生长条件下，转化约3周后收获种子以供鉴定。
确认再生植株为转基因植株的方法有：Southern印迹，报告基因的活性测定和组织化学等鉴定。
在取得一系列突变体后，可用功能互补的转化法来鉴定一个基因，即：用某种途径取得的DNA片段去转化一个功能缺失的突变体，如果转化后能够补偿基因功能突变表型的话，那么这个片段即为含目的基因片段。
[转载]拟南芥培养
![[转载]拟南芥培养](https://img.taocdn.com/s3/m/d965915f68eae009581b6bd97f1922791688bed3.png)
[转载]拟南芥培养一、拟南芥播种种子装入dorf管内，20μl种子加1ml 75% 乙醇消毒1分钟；吸去乙醇，加入1ml 50%次氯酸钠：50%无菌水：0.05%吐温（or 5%漂白粉），震荡洗涤15-20分钟；稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠或漂白粉，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）；将种子用接种环均匀铺于MS培养基上，用封口膜封口，放入4℃冰箱内冷处理2-3天（春化）。
MS培养基的用量：直径为9cm的培养皿用25ml，直径为6cm 的培养皿用12.5ml。
加培养基时先将凝固的培养基用微波炉高温5分钟左右至全部解冻，然后慢慢冷却至不太烫手时倒板，如要加潮霉素等抗生素也是在此次加，加入后摇匀然后倒板。
倒板后至自然冷却即可铺种，如水分较多或板不够硬，亦可于倒板后将培养皿盖打开晾10分钟左右（此时超净台要关闭）。
种子的杀菌、清洗、铺板等过程在超净工作台上无菌操作，操作者进入超净工作台要用酒精棉球擦拭手、器具、超净台，防止感染细菌、真菌。
二、MS固体培养基制备1．培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ，20×) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ，200×) mg／LKI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ，200×) mg／LFeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ，200×) mg／LⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
拟南芥培养攻略
拟南芥培养全攻略拟南芥又名阿拉伯芥,属十字花科,为二年生草本植物;具有植株形态小,平铺直径5cm,高30cm ；生长区域小,易于培养；基因组小,只有5条染色体,15700万个碱基对,27000个基因；生长速度快,周期短,一个世代大约只需要6周的时间；可自花授粉,也可以在不同种质系间杂交,种子多,每株每世代可产数千粒种子等特点;因此,拟南芥是植物科学,包括遗传学和植物发育研究中的模式植物之一图1;在2000年,拟南芥成为了第一个基因组被完整测序的植物;尽管拟南芥生长周期短,且易于培养,但根据不同的实验需求,在培养过程中,对光照、水分及湿度等各种条件的控制有所差别,利用PERCIVAL AR 系列拟南芥培养箱可设置不同的生长环境,满足不同的实验需求;一、正常培养简单的拟南芥培养,可用于基因表达、器官发育、基因突变等研究;1、 首先把拟南芥种子放到滤纸上,用70%酒精进行消毒处理,再用无水酒精进行处理也可选择20%漂白剂以及% Triton X-100 非离子表面活性剂做杀菌处理20分钟;用无菌水冲洗5遍,然后将种子点到MS 培养基上,,另加%琼脂以及2%蔗糖;2、 把种子放到4℃黑暗条件下进行春化48h-72h 左右,在长日照或短日照条件下催芽,然后转到PERCIVAL AR 系列培养箱中图2;利用Intellus 控制器,编辑简单的昼夜模式,设定光照时间16小时黑暗8小时或者光照14小时黑暗10小时；选配Q22连AR 系列培养箱 图 1续光强调节装置,设定光照强度为100-150umol/;设定箱体内温度为光照条件下20-22℃,黑暗条件下18-20℃；选配湿度控制系统,设定箱体内相对湿度70%;3、 出苗大约7~10天,然后移入土中培养,采用底部灌溉方式浇水利用土壤的毛细作用;在第一次浇水前,可使土壤完全干燥,以后每隔7~10天浇一次水;4、 土壤可用营养土、蛭石以及珍珠岩比例10:1:1的比例配置,也可直接用堆肥、蛭石以及草炭等进行混合;在生长过程中,可用普通的花肥施肥一次或者不施肥;5、 当植株长到一定高度时,可剪断茎杆,以产生更多的花序,可用于转化研究或者获得更多的种子图3;二、特殊培养为了加快拟南芥生长速度,在移入土壤培养后,可设定长日照,利用Intellus 控制器,编辑程序设定24h 光照,光强100-250umol/,温度持续22-23℃;拟南芥根系处理培养,可减少光照时间为8-12h,提高光照强度为100-350umol/,温度为光照条件下22-23℃,黑暗条件下18-20℃,其余培养条件同正常培养; 图2图3。
拟南芥生活史实验报告
拟南芥生活史实验报告
实验目的：
本实验旨在探究拟南芥(Arabidopsisthaliana)的生长和发育过程，包括种子萌发、幼苗生长、开花结实等。
实验材料：
1.拟南芥种子；
2.培养皿；
3.水；
4.营养液；
5.显微镜。
实验步骤：
1.将拟南芥种子放入培养皿中，加入适量的水，使种子完全浸泡在水中。
2.每天更换一次水，并将培养皿放在光照充足的地方。
3.在第三天左右，观察到一些小根从种子底部长出来，说明拟南芥已经开始了萌发过程。
4.继续观察，当幼苗长到一定高度时，可以将其转移到营养液中进行生长。
5.在营养液中，幼苗会继续生长，直到出现第一对真叶。
6.当幼苗长到一定高度时，可以开始观察其开花结实过程。
7.记录下每个阶段的时间和生长情况，并使用显微镜观察细胞结构和组织发育情况。
实验结果：
通过观察拟南芥的生活史过程，我们发现：
1.拟南芥的种子需要在水中浸泡一段时间后才能萌发。
2.幼苗在营养液中生长，需要不断补充养分和水分。
3.南芥的生长过程中会出现各种形态的叶子和花朵，这些变化与植物激素的作用有关。
4.拟南芥的花粉可以通过风或昆虫传播，实现繁殖。
5.南芥的生长发育受到环境因素的影响，如光照、温度、湿度等。
实验结论：
通过对拟南芥生活史的实验研究，我们了解到了该植物的生长发育过程和影响因素，有助于深入理解植物的生命活动和适应环境的能力。
同时，也为进一步研究植物生长发育机制提供了基础数据和参考依据。
拟南芥培养基配置
1．1 播种和发芽拟南芥可在非无菌条件下，生长在土壤或人工配制的各种培养基中。
作为栽植的容器，可根据各自条件置于花盆或格状分离的多穴塑料盘中。
常用的混合物有泥炭藓、营养土、蛭石和珍珠岩等，例如珍珠岩∶蛭石∶泥炭藓=1∶1∶1的混合物，表土、堆肥或腐殖质土∶珍珠岩或蛭石=1∶1，1∶2或2∶1的混合物。
如果用于营养研究则可以蛭石类惰性物质作培养介质，施以配有营养物质的水溶液。
栽培拟南芥的介质均要求有良好的排水性，因此一般混合砂子、蛭石等惰性介质，保持良好的排水，防止过湿引起真菌和昆虫幼虫滋生。
播种前土壤混合物进行高压灭菌处理 30min，以杀死可能存在于混合物中的任何害虫。
在把土壤混合物置于花盆或其他容器中后，将整个容器置于水或营养液中，靠毛细管作用浸湿介质，然后将处理洗净来的种子，用尖头烧融后的移液管小心移至土表，均匀播下。
如果播种量较大，可用浓度为0．1g/100mL琼脂或砂子事先均匀混合后播种。
种子发芽期间必须保持高湿度，故容器可用塑料膜复盖，保持一周左右方可揭去。
[1]将播有种子的容器移至低温或相应低温条件下，在 2～4℃下放置 2～4d，从而于吸胀条件下破除种子休眠，这对新鲜收获的拟南芥种子尤为必要。
对大多数拟南芥品系来说其种子是中度休眠的，收获已久的这类生态型的拟南芥种子可免于低温处理，而有些生态型甚至需长达7d的低温处理。
干种子的低温处理往往是无效的。
低温处理后，将盆移至温室或生长室，在22℃ 左右发芽，夜温可比日温低2℃，用 2000lx的荧光灯给予光照，光周期为18h光 /6h暗（也可24h光照[2]），在 5d左右可见拟南芥发芽。
拟南芥发芽需光，故防止种子被土覆盖。
1．2 生长发育条件的控制[3]拟南芥一般是冬性一年生植物，自然条件下种子在秋天发芽，幼年期度过冬天，花分生组织在春季分化，种子在夏季成熟脱落。
大多数实验室栽植的拟南芥品种在发芽后 4周开花，而在 4～6周后采集种子。
拟南芥植物组织培养
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。
方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。
二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。
（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。
如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。
）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。
（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。
MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
（如不行，可适当添加琼脂）。
四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
拟南芥培养Protocol
拟南芥培养Protocol拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2(6支36W日光灯下35cm处测得)。
幼苗期不耐高光强,可适当遮荫.光质也较重要,应选用植物生长专用的日光灯(如荷兰产TLD型Philip豪华直管荧光灯).拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳1.准备发苗培养基:1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿.2.种子消毒:种子放在1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸).3.播种:用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了,密封盖子,4℃暗处理两天后,移到光照培养箱(22℃,光周期12h),若种子较密,则在光照培养箱中生长1周后即可移苗,否则根长太长后易缠在一起,但太小的苗移栽后,需适当遮荫.最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗.4.移苗:将蛭石与珍珠岩按(3:1)的比例混好,装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根拉出小苗,把根平放在蛭石表面,用镊子把根轻轻压下.移苗结束后,用保鲜膜覆盖3-4天后揭膜.从苗期直至开花,可在塑料周转框中始终保持1-3cm的水层,在开始收籽期,不再需要过多的水分,可保持塑料周转框干燥,此时每隔2-3天浇一次水即可.整个生长期可浇3-4次拟南芥营养液.5.收籽:在种荚变黄,变干时可以收籽.将种子抖落在纸上,用金属滤网过一下以除去杂质,将种子装入写了标记的小纸袋中,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后,封存于1.5ml试管中.附拟南芥营养液配方nutrient solution containing:5mM KNO3, 2.5mM KH2PO4, 2mM MgSO4, 2mM Ca(NO3)2, 50µM Fe-EDTA, 70µM H3BO4,14µM MnCl2, 0.5µM CuSO4, 1µM ZnSO4, 0.2µM Na2MoO4, 10µM NaCl, 0.01µM CoCl2, adjusted to PH 5.7具体配法（药品刚好50L水培液用）:1)大量元素（包括25.25gKNO3，24.65gMgSO4·7H2O ,）：溶解，加水至500ml,配制成100倍母液Ⅰ。
拟南芥种植方法
培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。
1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。
1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。
土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。
2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。
（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。
4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。
浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。
当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。
开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。
拟南芥
拟南芥培养方法的进展研究拟南芥( Arabidopsis thaliana) 是十字花科拟南芥属植物, 虽然没有经济价值, 但具有生育期短, 植株个体小及基因组小等特点, 因而长期以来一直被用来作为分子生物学和传统遗传学研究的模式实验材料, 作为高等植物中具有最少基因组的物种,在科学研究中的地位也是极为重要得。
为了与国际接轨, 近年来国内已引入了拟南芥作为实验材料。
室内培养不仅可以得到试验所需的材料,也可以打破自然条件的限制对拟南芥进行各种诱导,为拟南芥新品种的培养和种性的改良提供便利条件,掌握拟南芥室内培养技术对顺利开展植物发育生物学的研究具有重要的意义。
但是, 拟南芥属于较难培养的植物,许多因素制约着它的正常生长和发育，比如，拟南芥种子特别小, 幼苗很弱, 易夭折, 给它的培养带来一定的困难。
目前,国内很少有实验室具备国外人工气候室培养拟南芥的全方位调控条件, 在拟南芥培养方面存在成活率低、培养周期长等问题。
因此, 掌握拟南芥的培养技术非常重要。
拟南芥室内培养方法研究拟南芥室内培养一般从种子春化开始,经历消毒、育苗、移栽、后期管理、种子收集及保存等阶段。
通常采用水培和土培两种方法。
1种子的春化春化作用(verna lization)是某些高等植物具备成花能力所必需的,即通过适当长度和强度的冷处理诱导开花抑制蛋白基因沉默,从而使植物具备开花能力.近年来的研究已经表明春化过程中特定抑制蛋白表达沉默的原因部分是由于染色体上特定位点的组氨酸的共价修饰. 种子播前需在湿润条件下置4℃冰箱内低温处理3~4 d，对于已在冰箱内保存一个月以上的种子可不必低温处理。
2种子的消毒拟南芥种子的消毒主要是用次氯酸钠溶液和酒精，不同浓度的溶液对种子上的病毒和细菌有不同的杀灭作用，结合文献资料，在本人第二课堂的实验中（《拟南芥三种培养方法的比较》），对比了三种不同的消毒方法，探索消毒方法旨在寻找出一种对拟南芥种子伤害最小，并且最有效的消毒方法。
拟南芥栽培方法
拟南芥栽培方法
1．装土：泥炭（tref型号705#）和蛭石的配比为2：1，混匀装在盆里压实，用1倍的MS 大量浸盆，基质一定要完全湿润。
2．泡种子：取适量拟南芥种子装在2 ml的离心管中，加入1 ml 水放在4度冰箱3 d，打破种子休眠。
3．播种：播种前，土面喷水至湿润。
将种子到在滤纸上，用牙签或竹签挑起种子放在土面上，建议一个花盆中播5颗。
播种完毕盖上透明盖子，放在培养箱中，一般2d就可以发芽。
4．待长至20 d左右，即可揭盖，再浇一次MS大量。
生长期间应每隔2-3 d观察一次生长状况，补充水分。
5．主要虫害是蚜虫和一种小飞蝇（幼虫在土壤中以拟南芥的根为食），一般用吡呀酮，灭蝇胺防治。
种拟南芥的步骤
种拟南芥的步骤
1、紫外线照实验台15-20分钟。
准备：1/2MS培养基；平皿；枪；灭菌水；
0.1%Agar溶液（高温高压灭菌）；灭菌枪头（黄枪头要剪）；marker笔；无
水乙醇；95%乙醇；封口膜。
2、数种子于1.5ml的EP管中，做好标记。
3、微波炉化1/2MS培养基，倒板。
需要加抗生素的要加抗生素（潮霉素：每
100ml培养基加56ul；卡纳：每100ml培养基加100ul），无菌操作。
4、洗种子：
A、向盛种子的EP管中加1ml 75%的乙醇（250ul的无菌水加750ul的无水
乙醇，现配现用，且要先加无菌水），剧烈晃动8分钟。
【或者洗两次，每次4分钟】
B、将上述酒精倒出后，加入95%的乙醇冲洗5遍。
【3遍也可以】
C、用无菌水清洗2遍，倒掉水。
【1遍也可以】
5、将种子悬起。
加入100—200ul的0.1%的Agar溶液，将种子用枪吹起。
【Agar
的量要视情况而定】
6、点种子。
用200ul的枪和剪过的黄枪头吸取种子，在培养基上依次点种，尽
量分散均匀，晾干。
7、封皿，并做好标记。
8、层化。
放于4度的冰箱处理3天。
9、将层化的种子置于光照培养箱中育苗一周，培养皿要倾斜放置。
10、移栽于土中。
拟南芥培育方法
拟南芥培育方法—通用指南一、原理拟南芥作为高等植物的模式生物被全世界的植物生物学实验室广泛研究。
然而，照顾好这种小植物可能不是那么容易。
这里介绍一个马里兰大学帕克学院的HevenSze实验室的通用指南。
Sze实验室及其他实验室的成员为建立这个在实验室培育拟南芥的通用指南做出了许多努力。
二、步骤1. 准备种植用土我们使用Miracle-Gro混合土（2立方英尺一袋）与Miracle-Gro珍珠岩（8夸脱一袋）来培养拟南芥，在一个可以放下2袋混合土的大容器中和土，1袋混合土（2立方英尺）混入半袋珍珠岩（4夸脱）。
注意：Sze实验室在装土之前经常将土灭菌！（方法如下）（1）将干土放入灭菌容器中，直至与顶部相差一英寸，将土拍实。
（2）用铝箔纸将容器封住，在每一个容器上放一张灭菌用胶带，缠好。
确保容器外没有土，放入灭菌锅。
（3）用常规/秒速/快速模式灭菌30~50 min，灭菌模式及时间取决于灭菌的容器数量。
（4）当温度降至室温，将土放入花盆，轻轻压实。
记住将灭菌土保存好，避免种子或菌类污染。
灭过菌的土至少可以使用两星期，如无需要请不要多次灭菌。
（5）将花盆用去离子水浸没（不要超过土表面）用humidomes覆盖，使其吸水3-6小时或过夜。
吸水后应该还保存约1英寸高的水，如果没有请添水。
（6）此时的土可以用于种植拟南芥。
2. 种子消毒方法A（1）取适量种子（野生型、突变体或互补株系）置于一个EP管中，加1 ml 消毒溶液。
消毒溶液：20%Chlorox消毒液0.05%Tween-20用新灭过菌的无菌水配制。
（2）用振荡器以最大速度震荡20-30秒。
（3）放置7-10 min，偶尔震荡一下。
（4）8 000 rpm 离心5秒。
（5）仔细将水倒出。
（6）加1 ml 无菌水，震荡重旋种子。
（7）8 000 rpm 离心5秒，倒去上清。
（8）重复步骤6-7，重复四次。
（9）将灭菌的种子移到底部铺有无菌滤纸的小Fisher盘（100×15 mm）中。
拟南芥植物培养的原理
拟南芥植物培养的原理
拟南芥是一种常见的模式植物，广泛应用于基础生物学和遗传学研究中。
其培养方法相对简单，通常采用无菌培养的方式进行。
拟南芥的培养基主要包括两类，即无机盐基础培养基和有机物添加剂培养基。
无机盐基础培养基主要由氮、磷、钾、钙等元素组成，提供植物基本的营养物质，而有机物添加剂则可以为其提供必要的碳源和能量。
通常情况下，拟南芥的培养基中还需要添加适量的激素和维生素等生长因子，以促进其正常的生长和发育。
同时，还需对培养基进行适当的酸碱度调节和温度控制，以确保植物能够在良好的环境条件下生长。
在培养过程中，还需要采用无菌技术，确保培养环境的无菌状态。
同时，需要定期更换培养基和对植物进行移栽操作，以维持其正常的生长和发育。
总之，拟南芥植物培养需要掌握一定的基础知识和技术，才能够获得健康的植株并进行相关的实验研究。
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自制培养箱探究拟南芥种植培养条件
自制培养箱探究拟南芥种植培养条件摘要：拟南芥是生物学研究的模式之物之一，培养拟南芥可以为学习孟德尔杂交实验奠定基础。
在新疆干燥，偏见气候，无光照培养箱条件下，探索拟南芥种植培养方法。
关键词：拟南芥种植培养一、拟南芥培养的意义拟南芥（Arabidopsis thaliana），又称鼠耳芥，分布广泛，一年生草本，高20-35厘米，十字花科，总状花序顶生，花朵直径约3mm，花瓣4片，白色，匙形。
长角果线形，长0.5～2厘米，每个含20～30粒种子。
拟南芥的特点是植株小，生命周期短，易培养，春型拟南芥萌发后3周左右就可开花，能在6周内完成一个世代，严格自花传粉，基因高度纯合，染色体有5对，每个染色体组有7000万个碱基对，拟南芥基因组测序已完成。
因其以上优点，成为遗传学研究的好材料，被称为植物中的果蝇，是目前公认的五大模式生物之一。
在高中生物教材中，孟德尔豌豆杂交实验是开启遗传学学习的首要也是重要篇章，孟德尔两大遗传学定律的提出，是以豌豆杂交实验为基础展开。
在普通高中生物学课程标准（2017年版）中提出，为帮助学生打成对概念3“遗传信息控制生物性状，并代代相传”的理解，促进学生生物学学科核心素养的提升，应展开模拟植物或动物性状分离的杂交实验[1]。
该实验可在一定程度上帮助学生理解性状分离比形成的核心原因，为促进学生将理论与实际相结合，同时体验科学家的探索历程，笔者想利用与豌豆生殖方式类似的拟南芥模拟重复孟德尔豌豆杂交实验，而这一实验的基础是在现有条件下培养拟南芥，为学生模拟孟德尔实验奠定基础。
二、拟南芥培养条件初步探索拟南芥在世界各地分布广泛，生活适应能力强，实验室培养一般采用无菌种植，即，在无菌条件下，种子经过75%酒精消毒，晾干后播种于MS或1/2MS固体培养基，春化48h，春化结束后，转入光照培养箱培养10天以上。
条件为16小时光照（8000LX），8小时黑暗交替，待长出真叶后移苗至以蛭石，草炭土按照1:3比例混合，提前3-6小时吸水的土壤中，并用保鲜膜覆盖1-2天。
拟南芥培养及遗传转化
拟南芥待转化植株培养及遗传转化一实验目的：获得待转化拟南芥植株并进行花序浸润转化植株。
二实验材料：拟南芥种子（拟南芥的生态型最好是Col-0或者Ws-O，Nd-O，No-O），25cm3花盆，15ml离心管，10ml吸管，Agar，乙醇，次氯酸钠，利福平，Silwet L-77，营养液配方所需试剂，营养土，蛭石，塑料薄膜，托盘等。
三实验步骤：1 待转化植株培养⑴种子消毒：20μl种子装入1.5ml离心管内，加1ml 75% 乙醇消毒1分钟；吸去乙醇，加入1ml 1%次氯酸钠，震荡洗涤15-20分钟；稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）；均匀撒播于MS培养基平板上，注意每次洗脱用V ortxe充分混匀。
⑵春化作用：将MS培养基放到4℃冰箱中放置2天。
⑶将MS培养基放置在23 0 C/20 0 C光照培养箱16h/8h培养，在有3~5片成熟叶片后，移栽生长良好的拟南芥幼苗至用营养液浇灌过的营养土和蛭石（4:6）中生长，营养土和蛭石分装在25cm3的小培养皿中，保湿7天左右，湿度为60%~80%。
在生长期间适当浇灌营养液，按需要没3-4周一次（或者时间更长）。
⑷为了在每个植株上得到较多的花芽，当大多数植株第一个花序形成后剪去第一个花序，解除顶端优势，促使多个次生花序的同步出现。
当大多数花序约1~10cm高（剪主序后4~8d）时准备浸润。
表1 MS培养基注意事项：①溶化琼脂：用粗天平分别称取琼脂5.5g、蔗糖20 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入750 mL蒸馏水，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。
然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1000 mL，搅拌均匀。
②调节PH至5.7~5.8。
表2 营养液配方（无需调节PH）成分含量（mol/L）Ca(NO3)2·4H2O 1.01×10-3NH4H2PO4 1.30×10-4KNO3 5.10×10-3MgSO4·7H2O 4.98×10-4NaOH 3.13×10-5Fe-EDTA 2.24×10-5H3BO39.68×10-6Mncl2·4H2O 2.03×10-6CuSO4·5H2O 2.1×10-7MoO3 1.39×10-7Co（NO3）2·6H2O 8.59×10-8NH4NO3 2.93×10-52 农杆菌的培养取出保种的农杆菌菌液活化后，挑取农杆菌单菌落接入10mL无菌LB液体培养基中（一般含75mg/ L利福平、100mg/ L链霉素和100mg/ L卡那霉素），28℃恒温下250r/ min 振摇过夜培养。
拟南芥培养攻略
拟南芥培养攻略The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020拟南芥培养全攻略拟南芥又名阿拉伯芥，属十字花科，为二年生草本植物。
具有植株形态小，平铺直径5cm，高30cm；生长区域小，易于培养；基因组小，只有5条染色体，15700万个碱基对，27000个基因；生长速度快，周期短，一个世代大约只需要6周的时间；可自花授粉，也可以在不同种质系间杂交，种子多，每株每世代可产数千粒种子等特点。
因此，拟南芥是植物科学，包括遗传学和植物发育研究中的模式植物之一（图1）。
在2000年，拟南芥成为了第一个基因组被完整测序的植物。
尽管拟南芥生长周期短，且易于培养，但根据不同的实验需求，在培养过程中，对光照、水分及湿度等各种条件的控制有所差别，利用PERCIVAL AR 系列拟南芥培养箱可设置不同的生长环境，满足不同的实验需求。
一、正常培养简单的拟南芥培养，可用于基因表达、器官发育、基因突变等研究。
1、首先把拟南芥种子放到滤纸上，用70%酒精进行消毒处理，再用无水酒精进行处理（也可选择20%漂白剂以及% Triton X-100 非离子表面活性剂做杀菌处理20分钟）。
用无菌水冲洗5遍，然后将种子点到MS培养基上，,另加%琼脂以及2%蔗糖。
2、把种子放到4℃黑暗条件下进行春化48h-72h左右，AR系列培养箱图在长日照或短日照条件下催芽，然后转到PERCIVAL AR 系列培养箱中（图2）。
利用Intellus 控制器，编辑简单的昼夜模式，设定光照时间16小时（黑暗8小时）或者光照14小时（黑暗10小时）；选配Q22连续光强调节装置，设定光照强度为100-150umol/;设定箱体内温度为光照条件下20-22℃，黑暗条件下18-20℃；选配湿度控制系统，设定箱体内相对湿度70%。
3、 出苗大约7~10天，然后移入土中培养，采用底部灌溉方式浇水（利用土壤的毛细作用）。
拟南芥培养条件
拟南芥培养条件
1. 嘿，你知道拟南芥培养需要啥条件不？就像咱养个小宠物似的，得给它合适的环境呢！比如温度，可不能太高也不能太低，不然它可不乐意长哟！想想看，要是在大冬天把你扔到外面，你能舒服不？
2. 哎呀呀，拟南芥培养的光照条件很重要呀！它就像我们需要阳光一样，没有足够的光，它怎么能茁壮成长呢？这就好比我们没了阳光就没精打采的，对吧？
3. 哇塞，拟南芥培养对湿度也有要求呢！太干了不行，太湿了也不行，这可真得好好把握呀！就好像我们喝水，喝多喝少都不舒服呢，是不是？
4. 嘿，你想过没，拟南芥培养的土壤得选好呀！要是土壤不好，它能长得好吗？这就跟咱睡觉要找个舒服的床一样重要呀！
5. 哇哦，拟南芥培养的时候营养可不能少哇！就像我们得吃有营养的东西才能身体棒棒呀！没有足够的营养，它怎么能有力气长大呢？
6. 哎呀，培养拟南芥得注意通风呀！不然它会闷坏的呢！这跟我们待在不通风的房间里会难受一个道理呀！
7. 嘿，你知道吗，拟南芥培养还得防病虫害呢！就像我们要预防生病一样，要是不注意，它可就遭殃啦！你说是不是得好好保护它呀？
8. 哇，拟南芥培养的容器也有讲究哟！不能太大也不能太小，这就好像给它找个合适的家一样，对吧？
9. 呀，拟南芥培养真的有好多要注意的呢！这每一点都关系到它能不能长得好好的，咱可不能马虎呀！就像对咱自己重要的事一样得认真对待呢！
10. 哼，别小看了拟南芥培养的这些条件，要是哪一点没做好，它可能就长不好啦！这可不是开玩笑的哟！。
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实验目的：拟南芥无菌培养。
实验仪器：光照培养箱,盆.培养皿,超净台,灭菌锅.
实验试剂：营养土,蛭石,MS培养基
实验步骤：
1、配制MS培养基（一般装在三角瓶里，最好只装最大体积的70％以内），高温灭菌（115
度15分钟）在未固化情况下，（固化的话可以在微波炉里融化再使用）在超净台里倒入培养皿（一般一个培养皿内装25ml左右培养基，培养皿也是要灭菌的，一般用报纸或者牛皮纸包一排，十几个吧），待充分凝固之后平放密封保存（倒好之后最好静置15－20分钟，然后放在塑料袋里，保存在4度）
2、将拟南芥种子用10％消毒水（洗洁精体积分数）浸泡15分钟左右（要保证每粒种子都
浸透），无菌水冲洗3遍，加入适量0.12%的琼脂溶液（要灭菌的）用蓝枪头播在之前准备的灭菌MS固体培养基上(要在超净台中操作)，点种子大概的确有点难以想象，下次你来拿种子和苗的时候我可以给你演示一下；
3、４℃春化2天后转到光照培养间，温度２２℃／１８℃（日／夜），1６ｈ／８ｈ光周期，
白炽灯光照培养，光照强度五千Lx。
（也不用这么严格的，一般22－25度，5000－7000lx，差不多就行了）
4、大约7－10天后，拟南芥根须和芽均已长出，长到3至4片叶后可以移入土中培养（平
板里长太久的话似乎会影响植物以后的生长）。
5、用营养土和蛭石以1：1的比例混合拌匀配制，以保证营养及透气性。
用高温杀菌以杀
死土中的害虫。
（我们现在种得多，土都不灭菌的，注意拔拔杂草就行了）
6、用镊子小心夹住培养皿中的拟南芥茎处，取出放在土上，卷起根须塞入土中。
避免将叶
片带入土里。
放在光照培养间，条件和长平板一样就行了
7、在托盘中浇水，通过毛细作用由底部的孔吸收上去，保证土壤湿润。
刚移植的前两天可
以用基本上透明的盖子盖住盆顶。
MS培养基的配方是对的
单位mg/L
大量元素：NH4NO3 1 650
KNO3 1 900
CaCl２·2H2O 440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4 700
微量元素：KI 0.83
H3BO3 6.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MnO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
FeSO4·7H2O（27.8）+Na2-EDTA·2H2O（37.3）
有机成分：肌醇100
烟酸0.5
盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5
盐酸硫胺素（维生素B1）0.5
甘氨酸2
注意：肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液，因为它比较难溶，一般配成100倍，而除去肌醇后的有机，还是可以配成1000倍的。
要加1.2%的琼脂，才能凝固。