小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察-实验报告
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察-实验报告姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
【实验材料与用品】1. 试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Ringer试剂2. 器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等3. 材料：小鼠【实验原理】I.线粒体线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。
线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。
姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察II.超活染色实验原理超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。
应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。
活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
实验目的：1、掌握线粒体活体染色技术
2、观察和了解活细胞内线粒体的形态、结构与分布特点
实验材料：小鼠、解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯、双凹片、载玻片、盖玻片、胶头滴管、詹纳斯绿B溶液、Ringer溶液
实验原理：詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。
这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
持氧化状态（即有色状态——蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，
这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）
实验步骤：1、断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝组织。
选取边缘较薄的肝组织0.5cm³，放入小烧杯中，用Ringer溶液冲洗
去血污
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再
将肝组织块移入染液中，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上
面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易
被染色。
当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20~30min）
3、吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加
Ringer溶液0.5ml，用剪刀充分剪碎制悬液。
4、去上述细胞悬液滴片加盖玻片，高倍镜下观察
实验结果：肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色
分析与讨论：视野中除肝细胞外还有很多红细胞，红细胞比肝细胞小，且没被染上蓝绿色。
实验二 线粒体超活染色技术及观察
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【实验用品】 实验用品】 材料： 材料： 人口腔上皮细胞、 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞 器材： 器材： 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、牙 吸水纸、 签、吸水纸、洋葱 试剂： ２、试剂： （1）Ringer溶液 ） 溶液 0.85 g 氯化钠 氯化钾 0.25 g 0.03 g 氯化钙 詹纳斯绿Ｂ （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液： ） 詹纳斯绿 溶液： 称取0.5g詹纳斯绿Ｂ溶于 詹纳斯绿Ｂ 溶液中， 称取 詹纳斯绿 溶于5ml Ringer溶液中，稍加热 溶液中 稍加热(3040℃)溶解，用滤纸过滤后，即为 原液。 溶解， 原液。 ℃ 溶解 用滤纸过滤后，即为1%原液 原液加入49mlRinger溶液，即得 溶液， 工作液， 取1ml1%原液加入 原液加入 溶液 即得1/5000工作液， 工作液 将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用， 将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用，以保持充分的氧 化能力。 化能力。
Байду номын сангаас
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【实验方法】 实验方法】 １、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于 ℃恒温水浴： ）取载玻片于37℃恒温水浴： 詹纳斯绿Ｂ （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 ） 詹纳斯绿 滴 （3）人口腔上皮细胞黏液 ） 牙签刮取 （4）染色 ～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， ）染色10～ ，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。 显微镜下观察。 个细胞中线粒体数目， （5）计数 个细胞中线粒体数目，得出平均值。 ）计数50个细胞中线粒体数目 得出平均值。 ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于 ℃恒温水浴： ）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 ） 詹纳斯绿Ｂ 滴 詹纳斯绿 （3）洋葱鳞茎内表皮 ） 镊子撕取 溶液１ （4）染色 ～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ ）染色10～ ，吸去染液， 溶液 盖上盖玻片，显微镜下观察． 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察． 个细胞中线粒体数目， （5）计数 个细胞中线粒体数目，得出平均值 ）计数50个细胞中线粒体数目 得出平均值。
实验二 线粒体超活染色技术及观察
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【实验方法】 １、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 （3）人口腔上皮细胞黏液 牙签刮取 （4）染色10～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。 （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。 ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 （3）洋葱鳞茎内表皮 镊子撕取 （4）染色10～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察． （5）计数50个细胞中线粒体数目，得出平均值。
• 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同, 活体染 色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以 胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的 . 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其 “电化学”特性与被染部分相互吸引被选择固定在 活细胞的某种结构中而显色。 • 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应 选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质) 并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿Ｂ是活体染色 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ可 专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内 的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化 状态(即有色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞 质中,这些染料被还原为无色的色基。
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【注意事项】 1、显微镜的使用 2、掌握好詹纳斯绿Ｂ染色时间 3、实验结束后，注意清理实验用具 【作业】 1、绘出人口腔上皮细胞和洋葱鳞茎内表皮 细胞示线粒体的形态与分布 • 2、分析染色时间对结果影响。
线粒体的超活染色与观察
【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。
【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿 B（ Janus green B）和中性红（ neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer 溶液： NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl 2 0.03g + 蒸馏水 100ml；1%、1/5000 詹纳斯绿 B 溶液：称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml Ringer 溶液中， 30-40 ℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为 1%原液。
小鼠肝细胞实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解小鼠肝细胞的基本形态结构；2. 掌握肝细胞分离、培养及观察的基本方法；3. 通过观察肝细胞在不同条件下的变化，探讨肝细胞的功能特性。
二、实验原理小鼠肝细胞是研究肝脏生理和病理的重要模型。
通过分离、培养和观察肝细胞，可以了解肝细胞的基本形态结构，以及在不同条件下的生理和病理变化。
本实验采用差速离心法分离小鼠肝细胞，并进行体外培养。
三、实验材料1. 小鼠：体重20-25克，雌雄不限；2. 培养基：DMEM培养基；3. 胎牛血清；4. 胰蛋白酶；5. 离心管；6. 离心机；7. 显微镜；8. 其他实验器材。
四、实验方法1. 分离肝细胞：（1）处死小鼠，取出肝脏；（2）将肝脏剪成小块，加入胰蛋白酶，消化肝细胞；（3）将消化后的肝细胞悬液过滤，收集滤液；（4）将滤液以1000 rpm离心5分钟，弃去沉淀；（5）将上清液以2000 rpm离心10分钟，收集沉淀，即为肝细胞。
2. 肝细胞培养：（1）将肝细胞用DMEM培养基洗涤，制成细胞悬液；（2）将细胞悬液以1×10^5个细胞/毫升的密度接种于培养瓶中；（3）置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
3. 肝细胞观察：（1）在显微镜下观察肝细胞的基本形态结构；（2）观察肝细胞在不同条件下的变化，如细胞形态、细胞器分布等。
五、实验结果1. 肝细胞形态：（1）肝细胞呈多边形，细胞核位于细胞中央，细胞质丰富，含有丰富的细胞器；（2）细胞间连接紧密，形成单层细胞。
2. 肝细胞在不同条件下的变化：（1）正常培养条件下，肝细胞生长良好，细胞形态稳定；（2）在缺氧条件下，肝细胞出现肿胀、空泡化等变化；（3）在肝损伤因子作用下，肝细胞出现变性、坏死等变化。
六、实验讨论1. 本实验成功分离和培养小鼠肝细胞，为后续研究肝细胞的功能特性提供了良好的实验材料。
2. 肝细胞在正常培养条件下生长良好，表明肝细胞具有较强的生存能力。
3. 肝细胞在不同条件下的变化表明，肝细胞具有调节自身生理和病理状态的能力。
细胞生物学线粒体的超活染色与观察
细胞生物学实验线粒体的超活染色与观察一、实验目的1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。
因此活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
三、实验用品（一）材料肝细胞、人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞（二）器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
（三）试剂1．Ringer 溶液氯化钠 0.85g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2. 1%詹纳斯绿B 溶液（原液）称取50mg 詹纳斯绿B 溶于5ml Ringer，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
3. 詹纳斯绿B 溶液（应用液）取1%原液1ml 加入49ml Ringer 溶液, 混匀即可。
现用现配。
四、实验操作1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察(1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2 滴詹纳斯绿B 应用染液。
(2) 实验者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
线粒体的超活染色与观察
线粒体的超活染⾊与观察【实验⽬的】掌握动物细胞活体染⾊的原理与相关的技术。
【实验原理】活体染⾊就是指对⽣活有机体的细胞或组织能着⾊但⼜⽆毒害的⼀种染⾊⽅法。
它的⽬的就是显⽰⽣活细胞内的某些结构,⽽不影响细胞的⽣命活动与产⽣任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可⽤来研究⽣活状态下的细胞形态结构与⽣理、病理状态。
根据所⽤染⾊剂的性质与染⾊⽅法的不同,通常把活体染⾊分为体内活染与体外活染两类。
体内活染就是以胶体状的染料溶液注⼊动、植物体内,染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构⾥,达到易于识别的⽬的。
体外活染⼜称超活染⾊,它就是由活的动、植物分离出部分细胞或组织⼩块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上⽽显⾊。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位,主要就是染料的“电化学”特性起重要作⽤。
碱性染料的胶粒表⾯带阳离⼦,酸性染料的胶粒表⾯带阴离⼦,⽽被染的部分本⾝也就是具有阴离⼦或阳离⼦的,这样,它们彼此之间就发⽣了吸引作⽤。
但不就是任何染料皆可以作为活体染⾊剂之⽤,应选择那些对细胞⽆毒性或毒性极⼩的染料,⽽且总就是要配成稀淡的溶液来使⽤。
⼀般就是以碱性染料最为适⽤,可能因为它们具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Januｓgｒeｅn Ｂ)与中性红(neutrａl ｒed)两种碱性染料就是活体染⾊剂中最重要的染料,对于线粒体与液泡系的染⾊各有专⼀性。
线粒体就是细胞进⾏呼吸作⽤的场所,其形态与数量随不同物种、不同组织器官与不同的⽣理状态⽽发⽣变化。
詹纳斯绿B就是毒性较⼩的碱性染料,可专⼀性地对线粒体进⾏超活染⾊,这就是由于线粒体内的细胞⾊素氧化酶系的作⽤,使染料始终保持氧化状态(即有⾊状态),呈蓝绿⾊;⽽线粒体周围的细胞质中,这些染料被还原为⽆⾊的⾊基(即⽆⾊状态)。
【实验⽤品】1、材料:⼩⽩⿏肝脏、睾丸２、试剂:Ringer溶液:NaCl 0、８5g + ＫCl0.2５ｇ+ CaCl2 0、0３g+ 蒸馏⽔100ｍl;１%、1／50０0詹纳斯绿B溶液:称取５0mg詹纳斯绿B溶于５ml Ｒingeｒ溶液中,30－４0℃加热,使之溶解,⽤滤纸过滤后,即为1％原液。
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察
实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告精编
小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告精编实验目的：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的形态、数量和功能，以进一步了解线粒体在细胞代谢中的作用。
实验材料：实验步骤：1.提取小白鼠肝细胞：a.将小白鼠宰杀，取出肝脏。
b.肝脏放入含有适量预冷PBS的离心管中，进行冲洗，去除血液。
c.肝脏切成细胞块，加入适量的胰蛋白酶，37℃消化2小时。
d.消化结束后，加入适量的DMEM培养基，通过滤网过筛，得到小白鼠肝细胞悬液。
2.超活染色：a.取适量的小白鼠肝细胞悬液，离心收集细胞沉淀。
b.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除细胞培养基。
c.加入超活染色试剂盒中的线粒体荧光探针，荧光增强剂混合液，混匀，孵育30分钟。
d.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除多余试剂。
3.观察实验：a.将上述细胞沉淀均匀涂抹在显微镜载片上。
b.覆盖显微镜盖玻片，用封口胶固定。
c.将载片放入显微镜镜台上，使用适当放大倍数的镜头观察。
实验结果：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的结果如下：1.形态观察：线粒体呈现椭圆形或长圆形，大小约为1-2微米，分布于细胞质中。
2.数量观察：通过观察细胞中的线粒体数量，可以初步了解细胞的代谢活跃程度。
代谢活跃的细胞通常线粒体数量较多，而代谢不活跃的细胞线粒体数量较少。
3.功能观察：通过观察线粒体荧光的亮度和分布情况，可以初步判断线粒体的功能状态。
荧光亮度较高且均匀分布的细胞表明线粒体功能正常，而荧光亮度较低或不均匀分布的细胞则可能存在线粒体功能缺陷。
实验结论：通过上述实验可以初步了解小白鼠肝细胞中线粒体的形态、数量和功能。
进一步的研究可通过比较不同疾病模型下线粒体的状态来探究线粒体在疾病发生发展中的作用，为研究疾病的治疗和预防提供理论基础。
此外，超活染色技术的应用也有助于深入了解线粒体在细胞代谢中的具体机制。
线粒体的活体染色
不同细胞中线粒体的形态和数目不同; 在电子显微镜下 ;线粒体的外形多样;如圆形 椭圆形 哑铃形和杆状; 线粒体 的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关;线粒体多聚集 在细胞生理功能旺盛的区域;
线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的; 一般与线粒 体长轴垂直排列;但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊; 脊的横切面呈囊状或管状; 脊的数量与细胞呼吸机能的强 度有很大关系;
2 在干净的平皿中;滴加1/5000詹纳斯绿B溶液;再将肝组织 块移入染液;注意不可将组织块完全淹没;要使组织块上面 部分半露在染液外;这样细胞内的线粒体酶系可充分得到 氧化;易被染色; 当组织块边缘被染成蓝绿色即成一般需染 20～30min;
3 吸去染液;滴加Ringer 溶液;用眼科剪将组织块着色部分 剪碎;使细胞或细胞群散出; 然后;用吸管吸取分离出的细 胞悬液;滴一滴在载玻片上;盖上盖玻片进行观察;
二 线粒体的活体染色与观察
1 人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上;滴两滴
1/5000詹纳斯绿B染液;
2实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮 细胞;将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中;染色 10—15分钟注意不可使染液干燥;必要时可再加滴染液; 盖上盖玻片;用吸水纸吸去四周溢出的染液;置显微镜下 观察;
实验二 线粒体的活体染色
一 实验目的：
1 观察动物活细胞内线粒体的形态 数量与分 布;
2 掌握线粒体的活体染色原理及方法; 3 小鼠肝脏细胞线粒体染色及观察;
二 实验原理：
线粒体是细胞内一种重要细胞器;是细胞进行呼吸作用 的场所; 细胞的各项活动所需要的能量;主要是通过线粒体 呼吸作用来提供的; 活体染色是应用无毒或毒性较小的染 色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命 活动的一种染色方法; 詹纳斯绿 BJanus green B是线粒体 的专一性活体染色剂; 线粒体中细胞色素氧化酶系使染料 保持氧化状态呈蓝绿色;而在周围的细胞质中染料被还原; 成为无色状态;
线粒体的活体染色
精选ppt课件
4
三、实验用品
1. 器材： 显微镜、手术器械、载玻片、盖玻片、吸管、牙
签、吸水纸、小平皿。 2. 试剂：
Ringer液、1/5000詹纳斯绿B、1%甲苯胺兰。 3. 材料：人口腔上皮细胞、小白鼠肝细胞。
精选ppt课件
5
四、实验方法
（一）人口腔上皮细胞的制备与观察
• 用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上(不可反复涂沫)，滴一 滴甲苯胺兰染液，染色5分钟，盖上盖片，吸去多余染液。显微镜下 观察可见覆盖口腔表面的上皮细胞为扁平椭圆形，中央有椭圆形核 ，染成蓝色。
实验二、线粒体的活体染色
精选ppt课件
1
一、实验目的：
1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与 分布。
2、掌握线粒体的活体染色原理及方法。 3、小鼠肝脏细胞线粒体染色及观察。
精选ppt课件
2
二、实验原理：
线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作 用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线 粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小 的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞 生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B（Janus green B ）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化 酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中 染料被还原，成为无色状态。
精选ppt课件
14
2) 在干净的平皿中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝 组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织 块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充 分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成 (一般需染20～30min)。
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线粒体荧光染实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解线粒体在细胞中的分布和形态；2. 掌握线粒体荧光染色的原理和方法；3. 观察线粒体在细胞中的动态变化。
二、实验原理线粒体是细胞内的能量工厂，其主要功能是通过氧化磷酸化产生能量。
线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。
三、实验材料1. 细胞样本：小鼠成纤维细胞；2. 荧光染料：线粒体荧光染料（例如，MitoTracker Green FM、Mitochondria Red FM等）；3. 实验器材：荧光显微镜、离心管、移液器、吸管、培养皿、细胞培养箱等。
四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养至对数生长期。
2. 线粒体荧光染色：取对数生长期的细胞，用磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）洗涤2次，弃去上清液。
3. 加入线粒体荧光染料：向细胞中加入适量的线粒体荧光染料，轻轻振荡均匀，使染料充分与细胞结合。
4. 遮光处理：将细胞置于避光环境中，静置30分钟，使染料与线粒体充分结合。
5. 洗涤：用PBS洗涤细胞2次，弃去上清液。
6. 荧光显微镜观察：将细胞置于荧光显微镜下，使用适当波长的激发光和发射光，观察线粒体的荧光。
7. 数据采集：使用图像采集系统采集线粒体的荧光图像，并进行统计分析。
1. 在荧光显微镜下，观察到细胞内的线粒体呈绿色荧光，表明线粒体已被成功染色。
2. 通过图像采集系统，得到线粒体的荧光图像，可以进行线粒体形态、分布、数量的统计分析。
3. 观察线粒体在细胞中的动态变化，发现线粒体在细胞内不断运动，具有一定的流动性。
六、实验讨论1. 线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。
2. 本实验中，使用线粒体荧光染料对小鼠成纤维细胞进行染色，成功观察到细胞内的线粒体。
线粒体的活体染色
2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察 、 1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔， 取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管 吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。 Ringer 2) 在干净的平皿中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝 组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没 注意不可将组织块完全淹没，要使组织 注意不可将组织块完全淹没 块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充 分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成 (一般需染20～30min)。
3) 吸去染液，滴加Ringer 溶液，用眼科剪将组织块着色部 分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出 的细胞悬液，滴一滴在载玻片上，盖上盖玻片进行观察。
4) 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜下观察，可 见具有l～2 个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的 线粒体，注意其形态和分布状况。
五、作业： 作业：
1、绘口腔上皮细胞形态结构。Biblioteka 口腔上皮细胞 的线粒体分布
洋葱内表皮细胞的线粒体分布
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜 下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。 线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体 多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线 粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的 脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能 的强度有很大关系。
（二）、线粒体的活体染色与观察 ）、线粒体的活体染色与观察 1、人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴两 滴1/5000詹纳斯绿B染液。
2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中， 染色10—15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再 加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的 染液，置显微镜下观察。 3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进 行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布 着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是 线粒体。
线粒体染色实验报告詹纳斯绿B[教育]
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细胞生物学实验报告小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。
这种染色方法常用的是化学染料。
目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。
应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。
（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。
体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。
一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。
（3）选择活体染料的原则：①性质：有电化学特性②低毒、无毒③低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。
4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，取出肝脏。
线粒体的超活染色与观察
一、实验目的
观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分 布。 学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色
但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致
引起细胞的死亡的一种染色方法。因此活染技术通常可用 来研究生活状态下的细胞形
1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 2. 小白鼠肝细胞线粒体的超活染色观察 3. 洋葱鳞茎表皮细胞线粒中的超活染色观察
1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
(1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴 詹纳斯绿B应用染液。
(2) 实验者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细
胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10～
15min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上 盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观 察。
1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
(3) 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或 油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分 布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线 粒体。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染
色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的
染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细
二、实验原理
胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称 超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小 块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构 上而显色。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进 行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作 用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而 线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无 色状态)。
细胞生物学线粒体的超活染色与观察
细胞生物学实验线粒体的超活染色与观察一、实验目的1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。
因此活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
三、实验用品（一）材料肝细胞、人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞（二）器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
（三）试剂1．Ringer 溶液氯化钠 0.85g氯化钾 0.25g氯化钙 0.03g蒸馏水 100ml2. 1%詹纳斯绿B 溶液（原液）称取50mg 詹纳斯绿B 溶于5ml Ringer，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。
3. 詹纳斯绿B 溶液（应用液）取1%原液1ml 加入49ml Ringer 溶液, 混匀即可。
现用现配。
四、实验操作1. 人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察(1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2 滴詹纳斯绿B 应用染液。
(2) 实验者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。
05 小鼠肝细胞及精子线粒体的超活染色及观察
山东大学实验报告2018年4月16日________________________________________ _________________________姓名：丁志康系年级：2016级组别：周一下午科目：细胞生物学实验题目：小鼠肝细胞及精子线粒体的超活染色及观察学号：201600140055一、目的要求1. 掌握线粒体的超活染色原理及方法2. 观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量和分布3. 观察小鼠精子的形态并尝试寻找畸形精子4. 观察小鼠精子中线粒体的分布二、实验原理1、线粒体线粒体(mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，被称为“power house”。
其直径在0.5到1.0微米左右。
除了溶组织内阿米巴、篮氏贾第鞭毛虫以及几种微孢子虫外，大多数真核细胞或多或少都拥有线粒体，但它们各自拥有的线粒体在大小、数量及外观等方面上都有所不同。
线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。
除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。
不同生物的不同组织中线粒体数量的差异是巨大的。
有许多细胞拥有多达数千个的线粒体（如肝脏细胞中有1000-2000个线粒体），而一些细胞则只有一个线粒体（如酵母菌细胞的大型分支线粒体）。
大多数哺乳动物的成熟红细胞不具有线粒体。
一般来说，细胞中线粒体数量取决于该细胞的代谢水平，代谢活动越旺盛的细胞线粒体越多。
线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基部；在精子中分布在鞭毛中区。
在卵母细胞体外培养中，随着细胞逐渐成熟，线粒体会由在细胞周边分布发展成均匀分布。
线粒体在细胞质中能以微管为导轨、由马达蛋白提供动力向功能旺盛的区域迁移。
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细胞生物学实验报告
题目：小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
姓名：刘恋学号：201000140049 系年级：10级生科2班
一、【实验目的】
1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。
2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。
二、【实验原理】
1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。
细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。
詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。
线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。
在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。
线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。
线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。
2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。
活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。
碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。
但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。
一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。
其中詹钠斯绿和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最常用的染料，分别对线粒体和液泡系有特异性的染色。
詹纳斯绿B这种碱性染料是活体染色中重要的材料，对线粒体的染色有专一性，可专一性地对线粒体进行活染，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原成无色的色基。
三、【实验材料】
1.器材：
小白鼠，解剖盘，镊子，剪刀，载玻片，盖玻片，滴管，双凹片，小烧杯，显微镜；
2.试剂
1/500詹纳绿B染液；Ringer试剂
四、【操作步骤】
1．用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，取出肝脏，选取边缘较薄的肝组织0.5cm3，放入小烧杯中，用Ringer
液冲洗去血污。
2．滴加1/500詹纳绿B溶液于双凹片的凹
穴中，再将上述洗净的肝组织移入染液中，
染色20—30min。
以组织块边缘被染成蓝绿
色为准。
3．吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴
加Ringer溶液0.5ml，用剪刀将组织充分剪
碎制成悬液。
4．取上述细胞悬液滴片，加上盖玻片，在
高倍镜下观察。
五、【注意事项】
1．在从小鼠体内取肝组织块时要尽量快，从而能够保证它更高的活性。
2．染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可完全淹没，以便使线粒体酶系得到氧化。
3．在选取肝组织片时要在处于边缘，且为由薄到厚的地方选取。
4．染色结束后，加入的Ringer液的量不能太多，只需要刚盖过肝组织块即可。
如果量太多，则在剪组织块的时候会造成其上浮，从而不易剪碎。
5．观察前要将肝组织充分剪碎，制片时要吸取上悬液，使游离的细胞或细胞群留在载玻片上，而要避免吸取稍大的组织块。
六、【试验结果及绘图】
结果：小鼠肝细胞质中的线粒体被染成蓝绿色（理想状态下），且分布均匀。
绘图：
线粒体
红细胞
图一小鼠肝细胞线粒体的超活染色（10x40）
七、【结果分析与讨论】
1．在理想状态下，小鼠肝细胞质中的线粒体应该被染成蓝绿色，但是在实际观察中，线粒体呈浅绿色甚至无色。
可能原因有：○1.染色时间不够，使染色不够充分。
○2.肝组织块剪得太大太厚了，使得染料透过速度太慢，最终使得大部分的细胞未染上色。
○3.根据实验原理要求，染色剂的浓度要求极稀。
这本身就让染色过程具有了一定难度。
2．在显微镜下观察时，可以看到红细胞数量远远多于线粒体的数量。
出现这种情况可能是由于：1.在处死小鼠时，放血不够充分，导致大量血液淤留在了肝脏中，使最终视野中红细胞过多。
2.取出肝组织块后，用Ringer液未将血污冲洗干净，使其部分残留在肝组织块表面，并最终混在了细胞悬液内。
讨论：
使用肝细胞的缘由：1.线粒体含量较多，每个肝细胞有1000-2000个线粒体；2.长度适合观察，约5μm；3.肝脏较软，易于破碎，并且适于快速提取，因而利于保持线粒体活性； 4.但就以上某一条而言，均有其他部位可以替代肝脏，但若全面比较三个条件，则肝脏为最佳。