定性测定的性能验证--李金明

重复性评价

分析物浓度：接近临界值。不宜用阴性或强阳 性样本。 定性实验中临界点比较恰当的定义为：同样一 份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获 得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。

如何获得试剂或系统的临界点

检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的 临界浓度。 如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一 系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能 够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度。 这一稀释度的分析物浓度正在临界点。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
定义

筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血 清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比 诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查 试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。 尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但 是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性 结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传 播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。
差值超出4s控制限。 四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势



化。 十个连续的质控测定值同时处于均值（）的同一侧。
Levey-Jennings质控图方法
也称Shewhart质控图，是由美国的 Shewhart于1924年首先提出，并用于工 业产品的质量控制。 二十世纪五十年代初，Levey-Jennings 将其引入临床检验的质量控制 。经 Henry和Segalove的改良，即为目前常 用的Levey-Jennings质控图。

定 义

阳性结果的可靠性（‘预示值’）：即测定为 阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100% 阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的 样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%

‚预示值‛对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的 试剂检测结果的影响（100,000人）

‚批（RUN）‛的概念

在相同的条件下（地点、仪器、试剂、人员、 时间）所进行的一组测定。
定性免疫测定质控物浓度的选择


可选择S/CO值减去精密度测定中得到的三倍 批间CV（通常的ELISA测定批间变异（CV%） 在15%左右）与该S/CO值的乘积（意即三倍 SD）仍大于1的质控血清作监测重复性的室内 质控用 计算公式：S/CO（1-3CV%）=S/CO-3SD S/CO比值可在1.5~4之间。 同时选择S/CO处于1.0~1.5左右的质控血清以 判断每次测定时试剂盒测定下限的有效性。
方法学比较
比较用方法结果
阳性 阳性 A C A+C 阴性 B D B+D 总数 A+B C+D A+B+C+D
待评价方 法结果
阴性 总数
敏感性=[A/（A+C）]×100%
特异性=[D/（D+B）]×100%
符合率=[（A+D）/（A+B+C+D）] ]×100%
性能验证的其他方面

批内和批间变异（ELISA批内CV ＜ 10%，批间＜15%或20%）
重复性评价

质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批 次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重 复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每 一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计 也提供20次重复结果。 如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第 二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实 验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不 应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所 在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确 定原因并采取纠正措施。

与临床的‚对话‛。这也是一个新的
试剂或方法或系统替代旧的试剂或方 法或系统成功应用于临床的前提。
室内质控的问题？

概念不清


不知道具体怎么做
不会写室内质控的SOP


不知道如何选择室内质控物
不会分析室内质控的结果

不愿意多‚思考‛，完成工作任务即可
定性测定的室内质控方法

非统计学方法
统计学方法
定义

诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 因临床上对治疗的及时的要求，诊断试验应具 有很好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还 进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可 以稍微降低。
定义

确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗 体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就 是一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。
基于日常检验的阳性率比值(呈正态
分布)
直接概率计算方法（不呈正态分布）
室内质量控制的评价



IQC是一个集体活动，不光是对实验室一次测 定的有效性的判断，也反应了实验室测定趋势 的变化。 IQC的失控不能做为处罚的依据，应建设性的 找出失控的原因，针对其采取措施加以改进。 对IQC应定期进行评价。
结 果 10%感染率 检出 (+) 未检出 (－) 1%感染率 检出 (+) 未检出(－)
+
－ 敏感性 (TP/[TP+FN]) 特异性 (TN/[TN+FP]) 阳性预示值 TP/[TP+FP] 阳性预示值 TN/[TN+FN]
9,500
4,500 95% 95%
500
85,500
950
4,950 95% 95%
每块板质控物的数量及位置
2~3份弱阳性质控 2~3份阴性质控 随机放置于血液标 本中间

常用质控规则的符号及定义
符号

定
义

12S 13S 22S R4S 的 41S 7T 变
10
一个质控测定值超出±2s控制限。 一个质控测定值超出±3s控制限。 两个连续的质控测定值同时超出+2s或－2s控制限。 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间


定 义

临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中， 其检测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现阳性结果和确定患者患病）；注：该 临床疾病必须由不依赖于被评价试验的标准确 定。 临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中， 其检测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。

定 义

阳性测定能力指数（DI（＋））：可定义为一 实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力 （通常称为‚敏感性‛）； DI（＋）=[真阳性 /（真阳性+假阴性）]×100% 阴性测定能力指数（DI（－））：则为对阴性 样本测定给出阴性结果的能力（通常称为‚特 异性‛）； DI（－）= [真阴性/（真阴性+假 阳性）]×100%

使用新的检测试剂或系统时
更换检测试剂或系统时

临床实验室为什么更新检测试剂或 系统
新的试剂或系统

更易于操作 更高的检测性能 更经济

更能满足实验室测定要求
性能验证前的准备




应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试 剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合 理的解释以及系统的质量控制等。 制定质量保证计划 确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） 确定比较的方法
Grayzone
5% Lower 95% Interval Cutoff
5% Upper 95% Interval
结论

临界浓度如果准确，样品重复检测应获得50%的阳性和50%的阴性结 果。 如果+20%的样本获得阳性结果的次数≥95%，并且-20%的样本获得 阴性结果的次数≥95%，那么这个范围位于或超出这种方法的95%区 间。因而，距离临界浓度≥20%的样本可用此种方法获得一致的结果。

（测定下限）

如果+20%的样本获得阳性结果的次数＜95%，并且/或-20%的样本获 得阴性结果的次数＜95%，那么这个范围在这种方法的95%区间内。 因而，距离临界浓度20%的样本用此种方法不会获得一致的结果，并 且此种方法的95%区间距离临界浓度＞20%。 在一种方法的95%区间距离临界浓度＞20%的情况下，需要做另一个 或一系列实验以确定真正的95%区间。

方法比较



比较用的方法：另一种定性方法（如使用者目 前正在使用的方法）、‚金标准‛方法、某种 定量方法或临床诊断。 评价用样本的要求：量要足够大；稳定；两种 方法同时进行检测。 样本数量：取决于评价者的目的。作为最低要 求，检测要持续到至少用比较方法获得50个阳 性样品。并且至少用比较方法获得50例阴性样 品以确定此种检测方法的特异性。
定 义

重复性：同一被测对象在多次处于不同情况下的 检测中结果的一致性；注：a)不同的情况包括： 检测的原理或方法、结果观察者、测试仪器、地 点、仪器使用状态和时间；b）重现性也用来描述 定量实验中结果的离散特征。
测定下限（Detectability）：是指超过零剂量精密度的 最低抗原浓度，可通过 t 分布（一边拖尾，因为此时 曲线只有上升趋势）计算在测定下限时的吸光度值的 均值差。 分析敏感性（Sensitivity): 是指一实验的测定反应对待 测物质浓度变化的改变，即dR/dC。
方法比较



持续时间：10~20天。 不一致结果的处理：如果比较方法不是100% 准确，可以用‚金标准‛‚参考方法‛来检测 在检测和比较方法间产生差异的样本。 参考血清盘：曾经被检测过的、或者被成熟方 法检测的，或临床诊断中有意义的临床样品对 于评价定性方法来说很有价值。阳性样本浓度 高低不等。阴性样本可含有干扰物质。

非统计学方法

在检测临床标本的同时，检测一定数量（与临 床样本的数量相适应）的已知阳性（或存在靶 微生物或靶细胞）和阴性的质控样本 检测有效的质控判断方法：阳性检测为阳性， 阴性检测为阴性。

统计质控方法
质控物浓度的选择 每次（批）测定质控物的数量及放置 质控规则 Levey-Jennings质控图方法 ‚即刻法‛质控方法 ‚假阳性‛的统计质控方法

质控图
Levey-Jennings质控图 基本的统计学含义

稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1 个结果超过2SD（95.5%可信限）限度；在 1000个测定结果中超过3SD（99.7%可信限） 的结果不多于3个。 如以±3s为失控限，假失控的概率为0.3%。

‚假阳性‛的统计学室内质控方 法
定性测定的性能评价及 室内质控
李金明 卫生部临床检验中心
重庆 2010.4.23
临床检验定性测定

免疫测定：感染性疾病抗原、抗体 核酸和基因检测 微生物检验 细胞学检验

寄生虫检验
临床定性检验的报告方式
ห้องสมุดไป่ตู้
有反应、无反应、阳性、阴性 检出、未检出 是、不是（或有、没有）


什么时候进行性能验证
50
94,050
9500/[9500+4500]=67.9% 85500/[85500+500]=99.4%
950/[950+4950]=16% 94050/[94050+50]=99.9%
样本的准备

质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和 阳性。

样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必 须保证一致性。

分析物浓度接近临界点时的重复性实验


目的：是为正在评价的检测试剂或系统建立分 析物的临界浓度，并且确保临界浓度±20%的 范围处于95%区间内。 操作步骤：（1）制备足够20次重复检测的同 一份样品，分别为处于临界浓度、高于临界浓 度20%和低于临界浓度20%的样品。(2)重复检 测样品20次，确定每一份样品结果为阳性和阴 性的百分比。(3)评价临界浓度是否准确？评 价+20至-20%的浓度范围是否包含于、位于或 者超出这种方法的95%区间？