药物半数致死量的测定
普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
普鲁卡因产生毒性作用的原理: • 普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生
全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制， 初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经 错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。
• 患者可因呼吸衰竭而死亡。
LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、 加权机率单位法(Bliss法)、寇氏法、序贯法等。 •Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无 严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目 前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现 多采用计算机程序计算。 •改良寇试法简便而计算较为精确。
• 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50 和95%可信限。
抓好后将小鼠保持头低位
• 改良寇试法 • Bliss法
• 基本要求 • 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。 • 3.各组动物数相等或相近。 • 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最 好再80%~120%范围内。
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程 度。
• 实验动物：小白鼠50只，体重18～２２g，♀♂各 半。 • 实验器材：计算机、电子秤、注射器、小鼠笼。 • 实验药品：1%普鲁卡因，苦味酸溶液（标记）
• 1.体重相近（20±2g）。 • 2.健康，雌雄各半。 • 3.怀孕雌鼠剔除不用。
分组方式：
组号
1* 2*
鼠号
12
51
45
34
23
……
3* 4* 5*
345
23 4
123
51
2
45
1
半数致死量的测定
4、精确配制一号药液
应取原液的量：
40＊5％＝x＊25％ x＝8ml
取原液8ml加入32ml水（一号药液） 从中取出每组药液量供一组使用， 在加入等量生理盐水，从中取出每 组药液量供二组使用，依此类推。
四、试验
［方法］ 一、预试
快速找出0%和100%估计致死量（Dn，Dm）
首先用原液尼克刹米（25%）10倍稀释
液的一系列药液以不同容量各试4鼠，进而 2ml / 10g ＝6ml。
动物：小鼠，体重18－22g ，雌雄各半 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致死量。
半数致死量的测定
半数致死量（LD50）测定 [Bliss法]
(综合性实验)
[目的]
1.掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤 2.掌握用Bliss法计算药物的半数致死量。
[原理]
将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔 注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致 死量。
[材料]
动物：小鼠，体重18－22g ，雌雄各半 药物：25%尼克刹米、生理盐水 器材：注射器、量筒、烧杯、鼠笼、 电子天平
则可逐渐递增或递减剂量，找到4/4和0/4剂 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致死量。
＝每组药液量／（1－K） 器材：注射器、量筒、烧杯、鼠笼、 电子天平
量即（Dm，Dn）。（0.2X0.7=0.14ml， ＝10＊30g＊ 0.
快速找出0%和100%估计致死量（Dn，Dm）
1、每组均取10只小鼠，腹腔注射尼克刹米按照不况。（40分）
药物半数致死量(LD50)的测定
2
0.25
LD50= lg-1 [Xm-i(Σp-0.5)] =lg-1[2.3522-0.0457(3.375-0.5)]
序贯法
取10只小鼠编号、称重 从最大剂量开始给药(尼可刹米0.1ml/10g) ，
观察10min. 若死亡，则下一只小白鼠降低一级 剂量，若没死亡，则用高一级剂量，依次类推， 直至10只小白鼠全死. 记录结果 计算X·R、∑（X·R） 按公式计算尼可刹米的半数致死量
LD50(median lethal dose)：
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI)：
LD50和ED50的比值，药物安全性指标。
安全范围(margin of safety)：
LD5/ED95的值或 LD5 ~ ED95之间的距离。
LD50 、ED50的意义
-⑧
0 1 1 2.535
LD50=lg-1( C/n ) = lg-1(30.675/11)
= (mg/kg)
注意事项
要对实验动物进行随机化分组 各组药物浓度不能搞错，给药剂量要准
确 注意选择正确的给药部位（腹腔注射），
进针的深浅要一致
实验后处理
列表显示实验数据 统计全班实验结果，计算出普鲁卡因和
实验设计书格式
题目（居中） 设计者（居中） 专业、班别（居中） 指导老师（居中） 1．实验目的 2．立题依据（包括参考文献） 3．实验方案
(1)实验材料 (2)实验分组 (3)观察指标 (4)实验方法与步骤 4．创新点 5．实验结果预测
实验设计书评分标准
1.设计内容为学生原创，有创新性 2.设计依据充分，阐述相关理论知
列表统计P值 按公式计算普鲁卡因的半数致死量 LD50＝lg-1 [Xm-i(Σp-0.5)]
半数致死量的测定..
也可以直接按照前面的校正公式计算
计算步骤
2、求lgLD50的反对数LD50 3、求lgLD50的标准误SlgLD50 Pi(1 Pi) SlgLD50=d ni 4、求lgLD50的95%的置信区间 Ig-1（lgLD50 ± 1.96SlgLD50）
测定结果
某试剂的LD50值测定结果
对数剂量
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
+ + + + + + + + + -
20
21
22 23
1.95 1.90 1.85 1.80 1.75
+ + + x
整理与计算
对数剂量x 1.95 1.90 1.85 1.80 1.75 死亡 1 2 6 3 0 存活 0 1 2 5 3 合计n 1 3 8 8 3
寇氏法在实际工作中较常用，计算简便，结果 较准确。
【条件】 1.剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。 2.各组动物数应相等。 3.“反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率 （Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为 100%；如果Pn<20%或Pm>80%用校正公式计算； 如Pn>20%或Pm<80% 用此法计算结果不太准确。 3 Pm Pn 校正公式：lg LD50＝XK－d ( P 4 )
特别注意
后一动物剂量上升或下降由由前一动物的死 亡或存活决定，从第一只改变算起到最后一 只止，最后的终止号也作为一次实验结果。 若最后一只动物死亡，下降一格画“x”， 以存活计数；若最后用一只动物存活，上升 一格画“x”，以死亡计数。
实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
【注意事项】
1.动物应随机分组
2.各小组的动物标记要统一
3.剂量由小到大，注射量要准。
DJY
9
思考题
1.什么是LD50?
2.测定LD50的根据和意义何在?
DJY
10
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
盐酸普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项， 再进入半数有效量选项。
一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关 数据。
单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
【注意事项】
给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物 毒性大小的指标?
C母 D 等容注射量
药液配制的具体步骤：
预试中Dm=344mg/kg， Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的平均体 重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kg
C母
D 等容注射量
C1=344mg/kg / 10ml/kg=34.4mg/ml
每组药液量=每组动物总重×用药量=200g×0.1ml/10g=2ml
【实验材料】
实验动物：小白鼠，体重18～２２g，♀♂各半，
实验前禁食12h,不禁水。
实验器材：计算机（BL-410机能实验系统）、电 子秤、注射器、小鼠笼。
实验药品：盐酸普鲁卡因 （Procaine hydrochloride）
【实验步骤】
预备实验
1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂
(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理:
盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产
生全身性毒性反应，主要表现为枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
药理学-半数致死量LD50测定
床应用的参考，是新药报批的必要要求。 3 为长期毒性实验选定靶器官提供
依据。
2020/7/28
半数致死量(Lethal Dose 50)
? 定义：某一药物使实验动物总体死亡一半所 需的药物剂量。
? 目的：是药物急性毒性试验的一部分，衡量 某一药物急性毒性的大小，用于计算药物的 治 疗指数，以初步评估药物的安全性。 治疗指数 =LD50/ED50 目前用于临床的药物，其治疗指数的值多 在10 以上。
半数致死量(LD50)的测定
药理教研室
药物毒性试验
? 定义：给予一定剂量的药物后，观察动物的 中毒症状与死亡率。
? 分类： 1 急性（一般72h） 2 亚急性（1-3月） 3 慢性（﹥3月） 4 特殊毒性（如遗传毒性，生殖毒性）
试验。
2020/7/28
药物毒性试验
? 目的： 1 揭示药物的毒性强度、选择性、
2020/7/28
半数致死量(LD50)
? 特点：1、是药物的剂量反应曲线上最敏感的 一点。
死亡率
50%
剂量
LD50
2、 测量简单，准确性高，误差小，易重复。
2020/7/28
实验目的
? 测定药物的 LD50 ? 了解常用的测定和计算方法
2020/7/28
实验方法
? 改良寇氏法 可直接用实验动物的死亡率进行计算，方法简 单，计算简便。
2 一组小鼠编号 1-25，另一组小鼠编号 26-50。 标签上排写编号，下排写体重，体重取整数。
3 根据Excell软件取随机数字 ,排序随机数字。 4 按随机数字取小鼠于另一鼠笼中，将标签牢
固贴于鼠尾 ,依次放入不锈钢鼠笼中。
药理学-半数致死量(LD50)测定
半数致死量(LD50)
特点：1、是药物的剂量反应曲线上最敏感的 一点。
死亡率
50%
剂量
LD50
2、 测量简单，准确性高，误差小，易重复。
2020/7/28
实验目的
测定药物的LD50 了解常用的测定和计算方法
2020/7/28
实验方法
改良寇氏法 可直接用实验动物的死亡率进行计算，方法简 单，计算简便。
2 一组小鼠编号1-25，另一组小鼠编号26-50。 标签上排写编号，下排写体重，体重取整数。
3 根据Excell软件取随机数字,排序随机数字。 4 按随机数字取小鼠于另一鼠笼20/7/28
实验结果
解磷定LD50的实验结果
组别
1# 2# 3# 4# 5#
小白鼠 浓度
(只) （mg/ml）
10
1.5％
10
1.2％
10
0.96％
10
0.77％
10
0.61％
剂量 (mg/kg)
300 240 192 154 123
对数剂量
2.48 2.38 2.28 2.18 2.08
动物死亡数 死亡率
(只)
(％)
注：动物死亡数只统计给药后2小时内的死亡数
2020/7/28
3
1.5％
300
3
2#
3
0.75％
150
1
3#
3
0.375％
75
0
4#
3
0.188％ 35.5
0
2020/7/28
实验步骤
小鼠50只，称重，随即分为5组
1＃组10只
腹腔注射 1.5%的解 磷定溶液
药物半数致死量(LD50)的测定
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实验 药物半数致死量（LD50） 的测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法；
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
4. 实验结mg/kg C＝∑（R·logD）
R＝剂量组的动物只数
logD＝剂量D的对数值；
N＝实验动物总数＝∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组； 2.各组药物浓度不能混淆； 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致；
1. 实验动物： 小白鼠（18-22g），雌雄各半 2.实验器材：
仪器：注射器、鼠笼、函数型计算器 药品：2％普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量，相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只，雌雄各半，称重后用 苦味酸标记；
浓度
剂量D （mg/kg）
r＝ 0.046
2.22 ％
2％
1.8 ％
1.62 ％
1.45 ％
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
LogD
实验结果
R
R·log D
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
2.347
2.301
2.255
2.209
2.163
3. 先取小鼠1只，腹腔注射第一个剂量即2.2％普鲁 卡因0.1ml/10g，若第一只小鼠用药后未出现死亡， 下一只动物则用高一剂量，如出现死亡，下一只 动物应用低一剂量。在表中记录时，动物死亡用 “＋”表示，未死亡用“－”表示。若在同一剂量中 连续出现“－”两次，则下一次实验结束，最后一 只动物不做实验，但在表格中占一个，用E表示。
药物半数致死量(有效量)测定_图文
均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄 、体重等）均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动 物分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲 劳程度等）得到随机安排。
作业：
实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上 述例子LD50有关数据求出：
治疗指数 TI ＝ LD50/ED50 ＝ 安全指数 SI ＝ LD5/ED95 ＝
40
LD50 /ED50
20
0
ED50
LD50
质反应的量效曲线
剂量
Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.
质反应量效关系曲线
分工合作，统一计算
分组及给药
取小鼠50只（ 18～22克 ）， 雌雄各半， 不同性别动物按体重随机分成五组。每组 各动物称重，标记后分别按设计的容积和 浓度腹腔注射给药。ＬＤ50（或ＥＤ50 ）测 定时是否要设对照组，应视药物性质等情 况而定。
必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓 度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后 续实验有重要提示作用。思考！
正式实验：在此剂量范围内安排５～６个对数剂 量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。
每个同学做4～5个连续的浓度，每浓度一只小鼠 。
实施：规范操作，观察计时；
【实验要求】
1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量 测定的基本方法。
丁卡因的半数致死量测定
丁卡因的半数致死量测定【实验目的】了解动物毒性试验的概念，了解药物毒性的概念，掌握药物的半数致死量（LD50）的测定步骤与方法。
【实验材料】一：动物 小鼠，体重21-28g,雌雄各半。
二：药品 丁卡因三：器材 电子天平，注射器（1ml ）,针头（5号），棉签，托盘，标记液。
【相关知识】1.半数致死量LD50是在某一药物的作用下，实验动物总体死亡一半所需的药物剂量，是药物急性毒性实验的一部分，用以衡量某一药物急性毒性的大小，进而评估药物的安全性。
2.丁卡因是一种局部麻醉药物，通过抑制神经细胞膜Na+的内流，阻止神经动作电位的产生和冲动的传导，从而发挥麻醉作用，随着用药剂量的增大，药物发挥毒性作用，动物出现一系列症状（如：抽搐，嘴唇紫绀），直至最终死亡。
【实验方法】1.预备试验：初步摸出0和100%死亡率的剂量范围，并求出公比。
取小鼠9只，分成3组，各组间剂量按等比级数排列，（2:1或3:1），使最小剂量（a ）死亡率为0，最大剂量（b ）死亡率100%，然后按下公式求出公比r(r 应小于1.40，一般在1.11与1.33之间)r=)1(/ n a b (n 为正式试验中动物组数)按预备试验中算出的公比r ，则可计算出各组的给药剂量分别为a ,ar ,ar^2 ,ar^3...2正式试验：（改良寇氏法计算LD50）本实验要求各组间剂量按等比级数排列，并要求最小剂量的反应率0%，最大剂量反应率为100%或接近0%或100%（但尽量避免重复出现0%或100%，本次实验各组剂量老师已经提前备好）A.根据动物的体重，雌雄，随机分出6个剂量组，每组2只，使各组动物的性别，体重构成比相同，每组为一个剂量组。
B.各只小鼠逐只称重，标记，按0.1ml/10g 腹腔给药C.观察给药后动物表现，死亡时间，观察时间以2h 为限。
记录各组动物死亡 数，分别计算出各组死亡率，并记录到表一中D.汇总全班实验结果，列表，寇氏法求IL50及其95%可信区间。
药物半数致死量LD50的测定jy
2．计算给药：由腹腔注射给药。
3．观察记录：记录小鼠给药后反应，死亡时间，统计死亡数，列 下表：
结果记录表 组别
1 2 3 4 5
剂量 （ml/10g）
0.12 0.11 0.10 0.091 0.082
动物数 （只）
10 10 10 10 10
死亡数 （只）
死亡率 （%）
小鼠的腹腔注射方法
抓好后将小鼠保持头低位
C母 D 等容注射量
C1=344mg/kg / 10ml/kg=34.4mg/ml
每组药液量=每组动物总重×用药量=200g×0.1ml/10g=2ml
1号液 2号液 3号液 4号液 5号液
2ml
1号
2ml
2号
2ml
3号
2ml
4号
2ml
5号
【实验步骤】
• 正式实验
1．分组编号:取小鼠50只，随机分成5组，每组10只，♀♂各半。
给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物 毒性大小的指标?
实验结束
各组将实验台和实验器材刷洗干净
【实验步骤】
• 预备实验
1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂
量及0%死亡的最大剂量。此即上下限剂量（Dm，Dn）。
2．确定组数、计算各组剂量： • 组数（n）：5组 r=1.25
Dm r n 1 Dn • 按公比求各组剂量：D1，D2，…,Dn，其中D1= Dn=最小剂量、
实验部分
【实验目的】
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度。
常见的药物半数致死量(LD50)的测定
常见的药物半数致死量(LD50)的测定1. 阿司匹林阿司匹林作为一种常见的解热镇痛药，其LD50值为每千克体重250500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明，口服阿司匹林的LD50值约为每千克体重200400毫克。
2. 青霉素青霉素是一种广泛应用的抗生素，但其对某些动物（如小鼠、大鼠）的LD50值较高，约为每千克体重500010000单位。
需要注意的是，青霉素的毒性因物种而异，对人类的毒性较低。
3. 地高辛地高辛是一种用于治疗心脏病的药物，其LD50值为每千克体重13毫克。
在犬体内的实验显示，地高辛的LD50值约为每千克体重0.52毫克。
4. 吗啡吗啡是一种强效镇痛药，其LD50值为每千克体重300500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明，口服吗啡的LD50值约为每千克体重400600毫克。
5. 苯巴比妥苯巴比妥是一种镇静催眠药，其LD50值为每千克体重200500毫克。
在小鼠体内进行的实验显示，苯巴比妥的LD50值约为每千克体重300400毫克。
需要注意的是，LD50值并非绝对固定，它受实验条件、给药途径、动物种类等多种因素影响。
因此，在评估药物安全性时，应以实际实验结果为准，并结合其他毒性指标进行综合分析。
同时，我们还需关注药物在人体内的实际毒性，以确保用药安全。
当然，让我们继续探讨药物半数致死量(LD50)的测定，并补充一些额外的信息。
6. 氯霉素氯霉素是一种广谱抗生素，其对小鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
然而，氯霉素的毒性在不同物种间存在差异，例如在猫体内的LD50值较低，约为每千克体重50毫克，这表明猫对氯霉素更为敏感。
7. 哌甲酯（利他林）哌甲酯是一种用于治疗注意力缺陷多动障碍（ADHD）的药物，其LD50值为每千克体重190毫克（大鼠口服）。
需要注意的是，哌甲酯的毒性作用可能与其药理作用相似，因此在用药时需严格控制剂量。
8. 硫酸亚铁硫酸亚铁是一种常用的补铁药物，其对大鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
药物半数致死量的测定实验报告
药物半数致死量的测定实验报告摘要：
本实验通过对小白鼠进行药物半数致死量的测定，得出该药物
的LD50值为Xmg/kg，进而评估该药物的毒性和安全使用范围。
实验结果表明，本药物可达到治疗效果且安全使用。
引言：
药物毒性评价是新药开发的重要环节。
药物的毒性评价能够帮
助我们了解药物的毒性情况并确定安全使用范围，为药物的进一
步发展提供支持和保证。
LD50值是表明药物毒性的重要指标之一，是用来测量半数小白鼠死亡剂量的药物浓度，本实验旨在通过测
定药物的LD50值来评估药物的毒性。
材料与方法：
本实验使用小白鼠进行实验。
将小白鼠随机分成多次实验的不
同浓度组（mg/kg），每组分别注射药物。
注射完药物后，每组实
验小白鼠的死亡数和存活数记入实验记录表格中。
根据实验结果
绘制药物剂量-死亡率图，并计算出药物的LD50值。
结果：
在本实验中，我们测定出该药物的LD50值为Xmg/kg。
根据药物剂量-死亡率图可得出，当药物浓度为Xmg/kg时，小白鼠的死亡率达到50%。
讨论：
本实验结果表明，该药物的LD50值为Xmg/kg，表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
这也为该药物的临床应用提供了科学依据。
同时，我们也需要意识到药物的毒性评价是一项复杂的工作，在实际应用中还需要综合考虑其他因素，以确保药物的安全有效使用。
结论：
通过本次实验测定，我们得出该药物的LD50值为Xmg/kg，表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
该药物可达到治疗效果且安全使用。
ld50半数致死量(小鼠)
2
3
4
5
【注意】
1、预试验要摸准药物引起0和100%死亡率剂量的所在范围。
2、正式试验时各剂量按等比级数分组，应避免最大剂量组的死亡小于80%，最小剂量组死亡率大于20%，否则改用其他方法计算。
3、室温：20℃为宜。
4、认真观察中毒症状情况。
LD50=lg-1[Xm-i（∑P-0.5）] (公式1)
Xm：最大剂量组剂量对数值
i：相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数(相邻两组对数剂量的差值)
P：各组动物死亡率，用小数表示（如果死亡率为80%应写成0.80）
∑P：各组动物死亡率之总和
n：每组动物数
Sx50= i×(公式2)
Sx50：logLD50的标准误
第一部分药理学实验
实验十三药物半数致死量（LD50））的测定
【目的】
掌握LD50测定方法及计算过程。
【原理】将一定浓度和一定体积的药物，按一定比例灌胃给予小鼠，观察7日，记录不同剂量小鼠的死亡情况，计算半数致死量，以确定药物急性毒性。
【器材】鼠笼、烧杯、1ml注射器等。
【药品】普鲁卡因溶液（5个剂量）
【动物】小鼠
【方法】
1.预试验模实验剂量范围，找出引起0～100%的估计致死量。
2.正式试验
（1）取小鼠50只，体重20±2g，♀♂各半，随机分为5组，10只/组。
（2）剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6～0.9，设4～5个剂量组。
（3）给药普鲁卡因溶液，ip。5个剂量组。
（4）统计按改良寇氏法公式进行计算。
X50=logLD50
LD50的95%可信限=log-1（X50±1.96Sx50）(公式3)
药物急性毒性实验
药物急性毒性实验实验⼀药物急性半数致死量（LD50）的测定【⽬的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定⽅法和计算过程。
【原理】LD50是指在⼀群动物中能使半数动物死亡的剂量。
由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值⼤多在50％质反应的上下呈正态分布。
在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，⽽在50％质反应处曲线斜率最⼤，因此这⾥的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能⽐较准确地反映药物毒性的⼤⼩。
【实验材料】1、动物：⼩⽩⿏，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁⾷12⼩时，不禁⽔。
2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。
3、器械：⼩⿏笼，天平，注射器（1mL），电⼦计算器。
【⽅法和步骤】（⼀）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（D m及D n）。
⽅法是先取出⼩⿏9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或⽂献资料定出）给药，如3只⼩⿏全死则降低剂量⼀半，如全不死则增加剂量⼀倍，如部分死亡，则按2：1的⽐例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。
2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，⼀般分5-8个剂量组。
计算各组剂量：要求各组剂量按等⽐级数排列，在找出D m及D n和确定组数后，可按下列公式求出公⽐r：r再按公⽐计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……D m，其中D1=D n=最⼩剂量，D2=D1?r; D3=D2?r; D4=D3?r; D5=D4?r; ……D G=D G-1?r。
r值⼀般以1.7~1.15之间为宜。
计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。
先代⼊公式求r=1.25，再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg,D2=76.8?1.25=96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及D G(D5)分别为120，150，187.5 mg/kg。
半数致死量的测定实验
半数致死量的测定实验
半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。
它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50 需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物对不同实验对象的LD50 值不同。
实验材料：白鼠
试剂：药物
仪器和耗材：动物天平、注射器、电子计算器
实验步骤
1. 预备实验
①摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个动物也不死亡的最大剂量(Dn)。
方法是据经验或文献定出一个估计量，观察2～3 只动物的死亡情况。
如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出Pm = 100% 和Pn = 0% 的剂量，此两量分别为上下限。
②确定组数，组距及各组剂量
组数：一般5-8 组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定5 组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。
有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。
LD50测定
Injection volume (ml)
9
10
0.2ml/10g
16
注意事项
捉持小鼠动作坚决，防止咬伤。 小鼠称重及给药剂量力求准确。
18
Please hand in your reports before Friday to 3328. Put the mice to death and clean the cages The group on duty should clean the classroom
药物半数致死量（LD50）的测定 P164
药理教研室
1
实验目的
掌握LD50测定的意义 掌握LD50测定的方法、步骤和计算方法
2
急性毒性试验
指机体一次或短时间内（24 h）多次接 受大剂量某种药物后所产生的快速而剧 烈的中毒反应，包括死亡效应，是药物 安全性评价的第1道关卡。
3
What is LD50?
19Βιβλιοθήκη 82.剂量分组本次实验 剂量组已设置好，每组一个剂量 每组随机取10只小鼠给药
9
3.给药途径
新药报批要求2个，其中1个与临床给药 途径一致 本次实验：ip 0.2ml/10g
10
3. 皮下注射（ ip）
捉拿 给药 处死
11
4. 观察时间
正式实验：7~14d 本次实验：20min
50%
LD50
dose
5
LD50测定的意义
是药物筛选的第一步，药物安全性评价 的第1道关卡。 初步估计该药的安全性
TI=LD50/ED50 TI值越大，就越安全
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普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
【实验目的】
测定的意义、方法、计算过程。
了解药物LD
50
【实验原理】
量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；
药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。
此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。
而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应 (ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是LD
50
评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。
由于生物间存在个体差异常需要一批相当数量的实验动物才能测得。
最大耐受量
性，因此LD
50
的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、LD
50
孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。
由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】
小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。
实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】
计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】
1．剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2．各组动物数应相等。
3．反应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大
剂量组的死亡率（Pm）应为100%。
如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用
校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】
(一)预备实验
1．探索剂量范围根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。
对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。
方法是，每组取4～10只小白鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出Dm，Dn。
2．确定组数、计算各组剂量
(1)组数(G)：5-8组。
(2)各组剂量：各组剂量要按等比级数排列，按下列公式求出公比r：
r=(G-1)√Dm/Dn
按公比求各组剂量：D
1，D
2
，D
3
，D
4
，D
5
，……，D
m。
其中D
1=Dn=最小剂量，D
2
=D
1
.r，D
3
=D
2
.r，……D
m
=D
n-1
.r
3．配制等比稀释溶液要求各小白鼠给药容积一样，为0.1～0.25ml/kg，按下列公式计算浓度：
C
母=D
m
/等容注射量
(二)正式实验
1．分组编号随机将小白鼠分为五组，每组10只，♂♀各半。
2．给药分别将配制好的等比稀释液按0.25ml/10g由ip给药。
3.观察记录观察并记录给药后动物反应(中毒症状、外观、行为、呼吸、腺体分泌、大小便等情况)，记录动物死亡时间及死亡数。
4. 汇集全班结果，求LD
50。
普鲁卡因（1.25%，1%，0.8%，0.64%，0.51%，0.41%）
结果记录表
组别剂量(D)
(mg/kg) 动物数(n)
(只)
死亡数(F)
(只)
死亡率%(P)
(F/n)
1 2 3 4 5 6 312.5
250
200
160
127.5
102.5
10
10
10
10
10
10
10
3
10
4
100%
30%
100%
40%
计算LD
50
及95％可信限：
LD
50=lg-1[X
m
-I(∑P-0.5)] 161.34 mg/kg
式中，X
m
=最大剂量的对数值；I=相邻两组比值的对数(lgr)；P=各组死亡率；∑P=各组死亡率总和。
LD
50的95％平均可信限=LD
50
±4.5LD
50
.S
X50
其中S
X50为LD
50
的标准误
S
X50
=2.3I.√∑P(1-P)/n
其中，n=各组动物数
(1)启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项，再进入半数致死量选项。
(2)一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。
(3)单击“计算”按钮计算LD50等参数。
【注意事项】
1.药物称量、配制及给药的准确程度是本实验成功与否的关键。
实验过程
中给药剂量一定要准确。
2.注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间。
3．各组实验条件 (温度、湿度、饲养条件、给药速度等)均应相同。
一般以不等浓度的等容量给药。
【思考题】
1．什么是LD50？测定LD50的根据和意义何在?
2．测定LD50为什么还要观察中毒症状及时间过程？。