药物半数致死量的测定

普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定

【实验目的】

测定的意义、方法、计算过程。

了解药物LD

50

【实验原理】

量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。

药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；

药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。

故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应 (ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。

是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是LD

50

评价药物毒性的重要参数。

可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。由于生物间存在个体差异常需要一批相当数量的实验动物才能测得。最大耐受量

性，因此LD

50

的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、LD

50

孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。

【实验对象】

小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。实验前禁食12h，不禁水。

【实验器材和药品】

计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。

【实验条件】

1．剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。

2．各组动物数应相等。

3．反应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大

剂量组的死亡率（Pm）应为100%。如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用

校正公式计算。

【实验步骤和观察项目】

(一)预备实验

1．探索剂量范围根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。方法是，每组取4～10只小白鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出Dm，Dn。

2．确定组数、计算各组剂量

(1)组数(G)：5-8组。

(2)各组剂量：各组剂量要按等比级数排列，按下列公式求出公比r：

r=(G-1)√Dm/Dn

按公比求各组剂量：D

1，D

2

，D

3

，D

4

，D

5

，……，D

m。

。

其中D

1=Dn=最小剂量，D

2

=D

1

.r，D

3

=D

2

.r，……D

m

=D

n-1

.r

3．配制等比稀释溶液要求各小白鼠给药容积一样，为0.1～0.25ml/kg，按下列公式计算浓度：

C

母=D

m

/等容注射量

(二)正式实验

1．分组编号随机将小白鼠分为五组，每组10只，♂♀各半。

2．给药分别将配制好的等比稀释液按0.25ml/10g由ip给药。

3.观察记录观察并记录给药后动物反应(中毒症状、外观、行为、呼吸、腺体分泌、大小便等情况)，记录动物死亡时间及死亡数。

4. 汇集全班结果，求LD

50

。

普鲁卡因（1.25%，1%，0.8%，0.64%，0.51%，0.41%）

结果记录表

组别剂量(D)

(mg/kg) 动物数(n)

(只)

死亡数(F)

(只)

死亡率%(P)

(F/n)

1 2 3 4 5 6 312.5

250

200

160

127.5

102.5

10

10

10

10

10

10

10

3

10

4

100%

30%

100%

40%

计算LD

50

及95％可信限：

LD

50=lg-1[X

m

-I(∑P-0.5)] 161.34 mg/kg

式中，X

m

=最大剂量的对数值；I=相邻两组比值的对数(lgr)；P=各组死亡率；∑P=各组死亡率总和。

LD

50的95％平均可信限=LD

50

±4.5LD

50

.S

X50

其中S

X50为LD

50

的标准误

S

X50

=2.3I.√∑P(1-P)/n

其中，n=各组动物数

(1)启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项，再进入半数致死量选项。

(2)一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。

(3)单击“计算”按钮计算LD50等参数。

【注意事项】

1.药物称量、配制及给药的准确程度是本实验成功与否的关键。实验过程

中给药剂量一定要准确。

2.注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间。

3．各组实验条件 (温度、湿度、饲养条件、给药速度等)均应相同。一般以不等浓度的等容量给药。

【思考题】

1．什么是LD50？测定LD50的根据和意义何在?

2．测定LD50为什么还要观察中毒症状及时间过程？