实验1 显微镜的使用和简单染色
实验一显微镜的使用及微生物形态的观察
contents
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果 • 实验总结
01 实验目的
掌握显微镜的使用方法
掌握显微镜的基本操作
包括调整焦距、照明调节、移动载玻片等。
了解显微镜的保养和清洁
定期清洁显微镜，保持其良好的工作状态。
熟悉不同倍率下的观察效果
04
原生动物属于真核生物，根据形态和运动方式可分为鞭毛虫、变形虫、 纤毛虫等。
微生物在自然界中的作用和意义
分解有机物
微生物在自然界中起到分解有机物的作用，将动 植物残体和排泄物等有机物分解成简单的无机物 ，如二氧化碳和水，为其他生物提供营养。
促进植物生长
一些微生物能够促进植物的生长和发育，如根瘤 菌能够与豆科植物共生形成根瘤，为植物提供氮 素营养；菌根真菌能够与植物根系形成共生关系 ，为植物提供磷素营养等。
03 实验步骤
显微镜的准备
01
02
03
清洁显微镜
使用柔软的湿布擦拭显微 镜的表面，确保显微镜干 净无尘。
检查显微镜部件
确保显微镜的目镜、物镜、 载物台等部件完好无损， 没有损坏或松动。
调整光源
打开显微镜的光源，确保 光源亮度适中，没有闪烁。
样本的制备
选择样本
选择要观察的微生物样本，如细菌、藻类、原生 动物等。
详细地观察。
观察和记录微生物形态
观察记录
在观察过程中，注意记录不同微生物的形态特征，并 绘制简单的显微镜图像或使用相机拍摄记录。
分析结果
根据观察记录，分析微生物的种类、数量和分布情况， 并得出实验结论。
整理器材
实验结束后，清洁并整理好显微镜和相关器材，以便 下次使用。
实验1显微镜的使用细菌的简单染色
很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。
㈢ 细菌的简单染色
利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。
细菌个体微小，无色透明，不经过染色，常常不容易观 察。经过染色后，菌体与背景颜色形成鲜明的颜色对比，便 于在显微镜下观察细菌的形态、大小和排列方式。
利用同焦现象，在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作 距离短的物镜时，仅用微动螺旋即可对物像清晰聚焦，从而避 免由于使用粗动螺旋时可能的错误操作而损坏镜头。
4 油镜观察 注意不要因为在下降物镜镜头时用力过猛或者调焦时误
将粗动螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片。 不可以将高倍镜转动经过加油镜油的区域。
调节目镜间距和屈光度。
瞳距调节
屈光度调节：可以适应双眼视力有差异的观察者。
2 低倍镜观察
养成良好的调焦习惯，先从侧面注视，小心调节物镜靠近 标本，然后用目镜观察，以防操作失误而损坏镜头。
3 高倍镜观察
一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦后，转动转换 器将其它物镜转到工作位置，物像保持基本准焦状态，称为物 镜的同焦(parfocal)。
㈠ 普通光学显微镜
微生物个体微小，必须借助显微镜才能观察到，显微镜 是微生物学者不可缺少的基本工具。
普通光学显微镜利用目镜、物镜两组透镜系统来放大成 像，常称为复式显微镜，由机械装置和光学系统两大部分组 成。
1 机械装置 镜座和镜臂：镜座支持整个显微镜，镜臂支持镜筒部分。
镜筒：上接目镜，下接转换器，分为单筒和双筒两种。
目镜：安装在镜筒上端，由两块透镜组成，将物镜成的像 再次放大，但是不增加分辨力，目镜放大倍数过大，反而影响 观察效果。
显微镜的使用及细胞的革兰氏染色
微生物学实验报告题目：显微镜的使用及细胞的革兰氏染色姓名：学号：年级班级：组别：同组者：时间：【实验器材】1．菌种大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草芽孢/胞杆菌16h牛肉膏蛋白胨斜面培养物。
2．溶液和试剂革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式（Lugol）碘液，95%乙醇，番红复染液，香柏油，二甲醇等。
3．仪器和其他用品普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶，接种环，试管架，镊子，滴管。
【目的要求】1．显微镜的构造及使用。
2．学习油镜的使用、涂片、染色技术。
3．初步认识细菌形态。
4．掌握革兰氏染色法。
【实验原理】现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在普通光学显微镜通常配置的集中物镜中油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要，与其他物镜相比，油镜的使用方法比较特殊，需要在载玻片和镜头之间滴加香柏油。
简单染色法是利用单一染料使细菌着色以显示其形态的染色方法。
常用于染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
碱性染料电离时，其分子染色部分带正电荷，能和带负电荷的物质结合。
由于细菌生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料使其着色。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。
中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。
作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G－）两大类。
G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。
实验1显微镜的使用和简单染色
实验一显微镜的使用和简单染色一、实验目的：1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理：细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学显微镜难以看清它们的形态结构。
所以，先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为碱性染料电离后带有正电荷，很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料：1.菌种：枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphyloccusaureus等培养好的细菌斜面；2.染料和试剂：美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤：1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。
4.染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色1min左右。
5.水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲洗在涂菌处，直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。
7.镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。
五、注意事项1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜。
2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。
然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。
然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。
接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。
显微镜的使用和细菌简单染色
（二）光学显微镜的油镜原理
显微镜的分辨率D：是指显微镜能辨别两点之间 的最小距离的能力，即最小分辨距离。D越小，分 辨率越高。
D=λ/2NA λ为光源光波波长， NA为物镜的数值孔径值
数值孔径值 NA= η sinθ θ为物镜镜口角的半数， η为香柏油的折射率（1.52）
比如：水的折射率1.33， 空气的折射率为1.0 NA香柏油=1.2-1.4， D油镜=0.2μm＞细菌直径0.5μm
光学显微镜的结构示意图
三、实验器材
1、菌种：蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 2、染色液和试剂：美蓝染液、复红染液 3、器材：载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜
四、方法和步骤
1.涂片：在载玻片中央滴一滴蒸馏水，无菌接种环 挑取少量菌体与水滴混合均匀，涂成薄的 菌膜。
6. 干燥：自然干燥或用吸水纸盖在涂片处吸取多余 水分。
7. 观察：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的 视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏 油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观 察细菌的形态。
五、结果观察
蜡状芽孢杆菌的简单染色
五、结果观察
蜡状芽孢杆菌的简单染色
六、实验完毕后的处理
1.将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净， a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。
显微镜的使用和 细菌的简单染色
一、实验目的
1.熟悉光学显微镜使用方法 2.掌握细菌的涂片和简单染色法的 基本方法和步骤
二、基本原理
（一）简单染色基本原理 通常采用碱性染料进行简单染色: 这是因
为细菌在中性、碱性和弱酸性环境中通常带负 电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部 分带正电荷，因此碱性染料（美蓝，结晶紫， 碱性复红等）很容易与细菌结合使其着色。
光学显微镜的使用及革兰氏染色法 山东大学
姓名** 班级******* 学号********** 同组者：**************************科目微生物学实验题目光学显微镜的使用及革兰氏染色法组别****光学显微镜的使用及革兰氏染色法【实验目的】1.学习显微镜（油镜）的使用方法；2.学习微生物涂片及染色技术；3.认识细菌的形态特征；4.了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色法。
【实验原理】A、普通显微镜的基本原理1、基本原理普通光学显微镜包括机械部分和光学部分两部分。
机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本夹等。
光学部分包括接目镜、接物镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜（集光器）等。
显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
2、油镜微生物学使用的显微镜的物镜通常有低倍镜（10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×），油镜是三者中放大倍数最大的，油镜的焦距和工作距离最短，油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之间隔的不是一层空气（干燥系），而是一层油脂，称为“油浸系”。
由于香柏油与玻璃的折光率相似（香柏油为1.515，玻璃为1.52）。
镜检时，滴加香柏油的作用是使光源尽可能多的进入物镜中，避免光线通过折光率低的空气（折光率为1.0）而散失，因而能提高物镜的分辨率，使物像明亮清晰（见下图）图1 介质为空气（A）与介质为香柏油（B）时光线通过的比较姓名** 班级******* 学号********** 同组者：**************************科目微生物学实验题目光学显微镜的使用及革兰氏染色法组别****B、简单染色的原理细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
细菌的简单染色实验报告
细菌的简单染色实验报告
《细菌的简单染色实验报告》
在生物学实验室中，我们进行了一项关于细菌的简单染色实验。
通过这个实验，我们希望能够观察和了解细菌的形态特征，为进一步的研究和分析奠定基础。
首先，我们准备了一份细菌样本，并将其涂抹在玻片上。
接着，我们使用了一
种叫做墨汁的染色剂，将其滴在细菌样本上。
墨汁中的颜料分子能够与细菌细
胞壁中的化学物质发生作用，使细菌在显微镜下更加清晰可见。
在染色完成后，我们将玻片放置在显微镜下进行观察。
通过放大镜头，我们可
以清晰地看到细菌的形态和结构。
有些细菌呈现出圆形或椭圆形，而有些则呈
现出长条状或弯曲形态。
这些观察结果为我们提供了宝贵的信息，帮助我们更
好地了解细菌的特征和分类。
通过这个简单的染色实验，我们不仅能够观察到细菌的形态特征，还能够为后
续的细菌研究提供重要的参考。
细菌在自然界中起着重要的作用，它们不仅存
在于我们周围的环境中，还对人类健康和生态平衡产生着重要影响。
因此，对
细菌的研究和了解具有重要意义，而这个简单的染色实验为我们提供了一个很
好的起点。
通过这次实验，我们不仅增加了对细菌的认识，还学会了使用染色技术来观察
微生物。
这将为我们今后的学习和研究打下坚实的基础，也让我们更加深入地
了解微生物世界的奥秘。
希望通过我们的努力，能够为细菌研究领域的发展做
出一些贡献。
实验一显微镜的使用和细菌的简单染色
实验程序——细菌简单染色
每位学生一人一组，取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，各做一块涂片。
蒸 馏 水
涂片
接 种 环
自然干燥
吕 式 美 兰
固定
擦拭
染色 1min
干
水
燥
洗
水洗时不要直接冲菌膜
染色注意事项
• 1.涂片过程中，去生理盐水和细菌不宜过多，
涂菌要均匀，不宜过厚。
• 2.固定时温度不可过高，以载玻片背面不烫
• 普通光学显微镜(NIKON) • 欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜 • 麦克奥林生物显微镜
镜座 载物台
镜臂
机械装置 标本夹和标本移动尺
显 微
粗调螺旋和细调螺旋
镜 的
聚光镜升降螺旋
构 造
接目镜
接物镜及镜头转换器
光学系统 聚光镜
虹彩光圈
反光镜
显微镜的放大倍数和分辨率
• 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接 目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
• 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用 高倍镜或油镜观察？
下周实验
实验二 细菌的革兰氏染色 （书中实验十四）
杆菌
炭疽杆菌
破伤风杆菌
肉毒芽孢杆菌
大肠杆菌
杆菌
变形杆菌 绿脓杆菌
大肠杆菌
螺菌
幽门螺杆菌
霍乱弧菌
钩端螺旋体
Spirulina sp. - Filamentous Cyanobacte
环境微生物实验教案
实验一显微镜使用与细菌染色法一、实验目的1．学习掌握显微镜的结构、功能和使用方法。
2．学习掌握细菌简单染色和革兰氏染色方法。
二、显微镜的结构与功能1．显微镜的结构显微镜有机械装置和光学系统两大部分组成。
机械装置主要作用是使光学系统，紧固在一个光轴直线上，而且可精确地调节各光学系统部件之间的距离，使显微镜产生清晰的物象。
其组成包括：①镜座和镜臂；②镜筒；③物镜转换器；④载物台；⑤调焦装置（粗调节器和细调节器）。
光学系统使显微镜最主要地部分，起分辨和放大目的物地作用。
其组成包括：①目镜；②物镜；③集光器；④反光镜；⑤光源（自然光源和电光源）。
光学显微镜基本结构：1. 照明灯(Lamp)2. 聚光器(Condenser)3. 载物台和切片夹(Mechanical stage and specimenretainer)4. 推进器(Mechanicalstage adjustment knob)5. 物镜(Objectives)6. 粗细螺旋(Course andfine focus knob)7. 目镜(Oculars)8. 照相机等接口(Connection to camera, etc.)2．显微镜的成像原理标本得到足够的照明由标本反射或折射出的光线经物镜进入使光轴与水平面倾斜45 度的棱镜，在目镜的焦平面上，即在目镜的视场光阑处，成放大的侧光实像，该实像在经目镜的接目透镜放大成虚像，所以人们看到的实虚像。
3．分辨力与数值孔径显微镜的光学技术参数包括：数值孔径、分辨率、放大率、焦深、视场宽度、覆盖差、工作距离等等。
这些参数并不都是越高越好，它们之间是相互联系又相互制约的，在使用时，应根据镜检的目的和实际情况来协调参数间的关系，但应以保证分辨率为准。
1．数值孔径数值孔径（又称开口率numerical aperture 简写NA）是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。
简单染色实验报告
简单染色实验报告篇一：细菌简单染色法生物实验简单染色峰峰高中生物组适用微生物染色原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
其它情况分析：常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
使用草酸铵结晶紫染色液，染色迅速，着色深，菌体呈紫色。
一|、步骤1、涂片1. 取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水；2. 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔；3. 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
2、干燥将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。
也可用电吹风低温吹干。
3、固定手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。
原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。
注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。
4、染色将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。
染色时间：吕氏碱性美蓝染色1~2min；石炭酸复红染色约1min；草酸铵结晶紫染色约1min。
5、水洗将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。
注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。
水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。
6、干燥自然干燥：平放于室温，自然干燥；吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干；吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。
显微镜的使用和细菌简单染色
显微镜的使用和细菌简单染色显微镜的使用和细菌简单染色是微生物学中最基础的技术和实验方法之一、显微镜的使用可以让我们观察到肉眼无法看清的微小物体，如细菌和其他微生物；而细菌的染色则能够使细菌更清晰地显示出来，以方便我们进行观察和研究。
首先，让我们先了解显微镜的基本结构和使用方法。
显微镜由以下几个关键部分组成：管柱，目镜，物镜，镜头，台面，光源和调焦机构。
管柱连接了目镜和物镜，它可以通过调节来确定两者之间的间距。
目镜位于管柱的上方，我们通过它来观察样本。
物镜位于目镜下方，它是负责放大被观察物体的主要部分。
镜头是位于物镜下方的几片放大镜片。
台面是放置样本的地方，通常有可移动的台面调节以控制位置。
光源位于显微镜的底部，它提供背景光源以照亮样本。
在使用显微镜之前，我们首先需要将样本准备好。
对于细菌的观察，我们可以通过简单染色方法来使细菌更加明显。
简单染色方法中，最常用的是利用染色剂龙格拉菲染液。
首先，取一片玻片，并在上面滴上一滴菌液。
然后用火钳或针头将玻片加热使其快速干燥。
接下来，将玻片持在火焰中，使其变热然后将龙格拉菲染液倒入滴在样本上。
染液滴在样本上后需静止2-3分钟，然后用水冲洗掉多余的染液即可。
准备好样本后，我们可以开始使用显微镜进行观察。
首先，将制备好的样本放在显微镜的台面上。
然后，将管柱与目镜对其，并逐渐调节管柱的高度，直到能够清晰地看到样本为止。
这一步需要耐心和细致的调节。
接下来，我们可以用目镜来初步观察样本的大致情况和形状。
然后，通过控制物镜的旋钮，使用不同倍率的物镜对样本进行进一步的放大观察。
一般来说，我们从低倍物镜开始，然后逐渐转到高倍物镜，以获得更细致的观察。
在观察的过程中，我们需要不断调节焦距，使样本的清晰度达到最佳状态。
这可以通过旋转调焦机构来实现。
在观察细菌时，我们可以看到细菌的形态、大小、排列以及其他特征，这对我们进一步研究和了解细菌是非常重要的。
细菌简单染色和显微镜的使用是微生物学研究中最基础的技术。
实验一 普通光学显微镜的使用
4、荚膜染色原理
荚膜与染料亲和力低。在用简单染色法时， 可以辨认出来。而通过荚膜染色也可以把它和细 胞区别开来
细菌荚膜
5、鞭毛染色法原理
细菌鞭毛直径为10-12nm，超过了光学显微镜的分辨 能力。所以染色时，不仅要使鞭毛染色，还要使一部分 染料堆积在鞭毛上，加粗鞭毛的直径以便能观察。
染色成功的关键： 一、必须使用新鲜培养、活动活泼的菌体进行染色； 二、是使用绝对无油的干净玻片，以便菌液流过玻片时 能保持自然形态。细菌的运动性，可通过悬滴法制片观 察。注意区分布朗运动和细菌本身的运动。
【思考题】
1.革兰氏染色法涂片要薄而均匀，脱色程度要控 制得当，为什么？
2.为什么要用培养24小时内的菌体进行革兰氏染 色？
3.鞭毛染色为何有那么多要求？ 4.菌体荚膜的成分是什么？为何常用负染色法？ 5.芽孢染色为何要加热或延长时间？
实验3 酵母菌、 放线菌形态的观 察
【实验目的】
1、 观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式， 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
◆ 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一 类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基 表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌 丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝， 并进一步分化产生孢子丝及孢子。孢子的表面光 滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形 态特点都是鉴定放线菌的重要依据。
注意：使用油镜时，在通过目镜观察时，切勿用 粗调上升镜台来调节焦距，以免压碎玻片，损坏 镜头。
【思考题】
1、如何区别显微镜的低倍镜、高倍镜和油 镜？
2、 油镜和高倍镜在使用时应注意哪些问 题？
3、观察完毕后，如何维护显微镜？
实验2 细菌的形态观察
1、简单染色看芽孢
滴水 涂薄 打散菌体
三、操作 （二）镜检观察： 物镜 开启显微镜电源，调 整光源强弱和物镜到 载物台的距离，按10x， 载物台 40x ，100x物镜的顺 序观察菌体和芽孢。
光圈
目镜
细调 螺旋
操作注意： 粗调 光源 1、镜检时，物镜的选 螺旋 择必须遵循先低倍， 后高倍的原则。 2、调节焦距时，应先将载物台与物镜头靠至最近，再旋动调焦螺旋，在 载物台远离物镜头的过程中找准焦距。不能在眼睛看目镜的同时，通过 上升载物台来调焦，以免物镜头压碎载玻片。 3、 100x物镜观察时，先在 40x下找到细菌涂片的合适目标，在目标上滴 一滴香柏油，将100x物镜浸入油滴中，再调焦观察。实验完毕，用擦镜 纸蘸二甲苯拭抹镜头 （不可用卫生纸）
三、作业：绘出100x油镜下 B.t 形态，标明菌体和芽孢。
普通光学显微镜的使用及微生物的简单染色
2、干燥
– 在空气中自然干燥或在
火焰快速通过干燥(与 热固定同步进行).
3、热固定
– 用镊子夹住涂片一端,
在火焰上连续通过几次; 以载玻片在手背上试感 觉不烫为宜.
4、染色
– 在固定的标本上加美兰
（结晶紫）染液1-2滴,染 色1min,轻轻滴加水洗; 吸干, 加半滴水, 盖上盖 玻片, 滴上半滴镜油油镜 检。 (到此实际上即为细菌普 通染色)
®请大家做好预习。
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内容提要：
实验1、观察制备好的装片来自； 实验2、每个同学自己动手单染三张 片子进行观察 ；
一、实验目的：
1.学习普通光学显微镜的构造和功能； 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法； 3.学习微生物的简单染色，观察细菌的 形态。 返回
二、实验材料：
显微镜 双层瓶
载玻片 染色剂
香柏油 滴管
超高压透射 电子显微镜
2、光学系统 （P15图1）
在光学系统中 ，物镜的性能最为关键，分为低、高、油镜头。油 镜的放大倍数最大，在使用时比较特殊，需要在载玻片与镜头之 间加滴镜油——香柏油。 返回
四、油镜的原理：
放大倍数可100倍之大，焦距很短，光强度最大。 油=1.52（香柏油） 介质折射率 水=1.33 空气=1 玻璃=1.55 香柏油对光的折射率与玻璃相似，光线直接通过香柏油进 入物镜而不发生折射，不但增加了照明度，而且使油镜的 数值孔径增加，用NA表示，一般在1.2—1.4。低高倍镜头 等干镜NA都低于1.0。若以可见光的平均波长为0.55μm来 计算，数值孔径通常在0.65的高倍镜只能分辨出距离不小 于 0.4 μm的物体而油镜的分辨率却可达到 0.2 μm左右。可 见显微镜的放大效能是由数值孔径决定的。
实验1显微镜的使用和简单染色
实验一显微镜的使用和简单染色一、实验目的：1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理：细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学显微镜难以看清它们的形态结构。
所以，先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为碱性染料电离后带有正电荷，很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料：1.菌种：枯草杆菌Ba cillu s subtil is、大肠杆菌Es cheri chiacoli、金黄色葡萄球菌Stap hyloccus aureus等培养好的细菌斜面；2.染料和试剂：美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤：1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。
4.染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色1min左右。
5.水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲洗在涂菌处，直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。
7.镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。
（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件（1）镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。
（2）镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。
因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。
（3）物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
（4）载物台载物台中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。
（5）推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。
（6）粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。
微生物实验报告---普通光学显微镜的使用及简单染色、革兰氏染色
普通光学显微镜的使用及简单染色、革兰氏染色郑小煜201100140069生命科学学院生科3班同组者:赵莉、高瑞、刘梦迪2012年10月10日一、实验目的和要求1、学习显微镜的使用方法。
微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌单染色。
2、学习3、初步认识细菌的显微形态特征。
4、学习并掌握细菌革兰氏染色，了解革兰氏染色在细菌分类鉴定中的重要性。
二、实验原理1、细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对他们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而更能清楚的观察到其形态和结构。
2、油镜:油镜的放大倍数可达100倍，焦距很短，直径很小，但所需的光照度却很大。
为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃折射率相仿的镜油(通常用香柏油)。
且油镜分辨率很高，可达0.2微米左右。
3、通常采用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色;当细胞处于碱性条件下所带正电荷增加时，可采用碱性染料染色。
4、革兰氏染色革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性(G?)和革兰氏阴性(G?)两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异所决定的。
首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。
然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。
之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂染色后又变为复染剂颜色。
细菌的涂片染色镜检实验报告
细菌的涂片染色镜检实验报告
细菌的涂片染色镜检实验报告:
一、目的要求
学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。
2.巩固显微镜的使用方法。
二、器材
1、活材料:培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。
2、染色液和试剂:碱性美兰、结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红、蒸馏水、乙醚，乙醇混合液、香柏油。
3、器材:废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。
三、操作步骤
1、简单染色:
涂片:取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按无菌操作法取大肠杆菌涂片，调匀并涂成薄膜，注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀，做成浓菌液，
注意取菌不要太多。
晾干:让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。
固定:手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。
但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。
染色:将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。
水洗:用水洗去涂片上的染色液，直至冲下之水无色时为止。
干燥:将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
镜检:先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。
四、图片呈现：。
实验一-显微镜使用和简单染色1-课件
转换器14 物镜13 镜台12
聚光器11 光圈10 光源9
1目镜 2镜筒
3镜臂 4标本移动器 5粗调限位器 6粗调节器
7细调节器
8底座
普通光学显微镜结构图
(三)简单染色步骤
涂片
干燥
冷却
火焰固定
染色
水洗
干燥
镜检
（四）革兰氏染色的步骤
涂片
干燥
火焰固定
结晶紫染色
水洗
碘液媒染
水洗
95%酒精脱
水洗
番红复染
二、实际动手操作考试题( 单人独立操作，50分) ：考试时间45min。 革兰氏制片染色、显微镜使用与保养：满分35分；考试时间：25min。 菌种移植：满分5分；考试时间10min； 显微镜观察微生物的个体形态：满分5分；考试时间5min；细菌1个、放线 菌1个、霉菌3个。 菌落识别：满分5分；考试时间5min。细菌1个、酵母1个、放线菌1个、霉 菌2个
2. 菌种：细菌标本片；金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌斜面菌 种。
3. 染色液：石炭酸复红溶液、蒸馏水，结晶紫染色液、路戈氏碘液、 95%的 酒 精、番红染 色液、蒸馏水。
四、操作方法
（一）本室显微镜的结构介绍
(二)显微镜的油镜使用 1. 调节光照 2. 低倍镜观察 3. 油镜观察 4. 细菌形态描绘 5. 显微镜的保养
三、平时成绩（ 30分） 包含：实验报告的份数与质量(满分20分)；实验课中操作动手的态度、力 度与到课率(满分10分)。
四、考核时间（3个学时） 最后一次实验课全班同学在实验室分组进行第一题和第二题考试， 由四 位老师监考，当场不进行重考。
三、器材
1. 器材：显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸 ，载玻片，接种 环，酒精灯。
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实验一显微镜的使用和简单染色
一、实验目的：
1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术；
2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理：
细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学显微镜难以看清它们的形态结构。
所以，先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为碱性染料电离后带有正电荷，很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料：
1.菌种：枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphyloccus
aureus等培养好的细菌斜面；
2.染料和试剂：美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油
3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤：
1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌
斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温自然干燥
3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目
的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。
4.染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色1min
左右。
5.水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲洗在涂菌
处，直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。
7.镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再
用油镜观察。
五、注意事项
1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜。
2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏
3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。
4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。
当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
5.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。
6.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。
7. 染色过程中勿使染色液干涸。
用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。
六、实验报告
1. 结果
绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图，注明放大倍数、及观察到的颜色。
2. 思考题（任选两题）
（1）使用油镜时，为什么必须用香柏油？应特别注意哪些问题？
（2）油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？对同一微生物制片，用油镜观察比用低倍镜观察有何优、缺点？
（3）镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？
（4）涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？。