实验1 显微镜的使用和简单染色
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实验一显微镜的使用和简单染色
一、实验目的:
1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术;
2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理:
细菌小且透明,当把细菌悬浮于水滴内,由于菌体和背景没有显著的明暗差,用光学显微镜难以看清它们的形态结构。所以,先将细菌进行染色,借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。常用碱性染料进行简单染色,这是因为碱性染料电离后带有正电荷,很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料:
1.菌种:枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphyloccus
aureus等培养好的细菌斜面;
2.染料和试剂:美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油
3.器材:显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤:
1.涂片:在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水,用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌
斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀并涂成薄膜,涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥:室温自然干燥
3.固定:手执载玻片一端,使涂菌一面向上,通过火焰2~3次。此操作也称热固定,其目
的是使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在玻片上。
4.染色:将涂片置于水平位置,滴加结晶紫染色液(以刚好覆盖涂片薄膜为宜),染色1min
左右。
5.水洗:倾去染液,斜置载片,用自来水的细水流由载片上端流下,不得直接冲洗在涂菌
处,直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥:自然干燥,或用电吹风吹干,也可用滤纸吸干,注意不要檫掉菌体。
7.镜检:待标本片完全干燥后,先用低倍镜和高倍镜观察,将典型部位移至视野中央,再
用油镜观察。
五、注意事项
1.学生使用显微镜固定镜号、位置,填写使用卡,本学期一直使用本台显微镜。
2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏
3.镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度。
4.观察标本时,必须依次用低、高倍镜,最后用油镜。当目视接目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。
5.观察时,两眼睁开,养成两眼能够轮换观察的习惯,以免眼睛疲劳,并且能够在左眼观察时,右眼注视绘图。
6.拿显微镜时,一定要右手拿镜臂,左手托镜座,不可单手拿,更不可倾斜拿。
7. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。
六、实验报告
1. 结果
绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图,注明放大倍数、及观察到的颜色。
2. 思考题(任选两题)
(1)使用油镜时,为什么必须用香柏油?应特别注意哪些问题?
(2)油镜与普通物镜在使用方法上有何不同?对同一微生物制片,用油镜观察比用低倍镜观察有何优、缺点?
(3)镜检标本时,为什么先用低倍镜观察,而不是直接用高倍镜或油镜观察?
(4)涂片在染色前为什么要先进行固定?固定时应注意什么问题?