酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离及培养条件的优化
2. 酵母浸液0.5g (NH4)2SO4 2g 葡萄糖1g (2) 1.酵母浸液0.5g NH4NO3 1g 葡萄糖1g
2. 酵母浸液0.5g NH4NO3 2g 葡萄糖1g
(3) 1.酵母浸液0.5g NaNO3 1g 葡萄糖1g • 2. 酵母浸液0.5g NaNO3 2g 葡萄糖1g • 3.对比试验:酵母浸液0.5g 蛋白胨1g 葡萄糖1g • 4.配置完毕调PH值 PH等于5为准确 • 包三个移液管然后将以上培养基一起拿去灭菌
• 5.3减少进气量，控制罐压在0.02MPa左右后，点 燃接种火圈内的酒精棉球。
• 5.4 拧下进料口螺盖，放入盛有酒精的培养皿中。
• 5.5将接种瓶是瓶口在火焰上烧一下，并在火焰的 保护下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内。
• 5.6旋上进料口螺盖后灭火焰，拧紧螺盖，并用酒 精棉球将进料口擦洗干净。
二、配制
1、配多少培养基 10L罐装料量60%：10X60%=6L 接种量10%：培养基5400ml(实际操作培养基
5000ml)，种子液600ml 2、配方用多少
6L:60g酵母浸粉1%,120gc120g葡萄糖2%； 150ml:1.5g酵母浸粉1%,3g酵母浸粉1%,3g葡 萄糖2%.其中100ml加1g琼脂配成固体培养基用于 倒平板；50g原液用于测OD时做标准液。 3、所需器材包扎灭菌 4个装有9ml蒸馏水的试管，6个空试管，4个涂 布器，4个移液管1ml，6个平板
四 实验内容
1、分离单菌落
（1）实验物品灭菌
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml 蒸馏水的试管、16个平板、
液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖 2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三 角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml 为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌
酵母菌菌体离心实验步骤
酵母菌菌体离心实验步骤以酵母菌菌体离心实验步骤为标题，写一篇文章如下：酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然环境中，被广泛应用于食品发酵、酿造和生物学研究等领域。
离心实验是一种常用的分离和纯化生物物质的方法，下面将介绍以酵母菌菌体离心实验步骤。
实验所需材料和仪器：1. 酵母菌培养液：含有大量酵母菌菌体的培养液。
2. 离心管：用于离心实验的管状容器。
3. 离心机：用于离心实验的设备，能够以高速旋转离心管。
实验步骤如下：步骤一：准备工作1. 将离心管清洗干净，并确保没有任何杂质。
2. 用无菌技术取出适量的酵母菌培养液，注意避免外界的污染。
3. 准备好离心机，确保离心机内部的离心管是干净的。
步骤二：装样品1. 将取出的酵母菌培养液缓慢倒入离心管中，避免产生气泡。
2. 确保离心管中液体的高度不超过离心管的容积的70%。
步骤三：离心实验1. 将装有酵母菌培养液的离心管放入离心机中。
2. 调节离心机的转速和离心时间。
一般来说，酵母菌的离心转速为3000-5000转/分钟，离心时间为5-10分钟。
3. 启动离心机，使其以设定的速度旋转。
步骤四：离心结束1. 离心结束后，停止离心机的运转。
2. 注意离心管内可能产生的沉淀，避免晃动或颠倒离心管。
步骤五：收集上清液1. 将离心机中的离心管取出，并小心地将上清液倒入另一个干净的容器中。
2. 注意避免将沉淀带入上清液中。
通过以上实验步骤，我们可以将酵母菌菌体从培养液中分离出来，得到较为纯净的上清液。
离心实验通过利用离心力将悬浮在液体中的颗粒物分离出来，其原理是根据颗粒物在离心力作用下的不同沉降速度来实现分离。
在酵母菌菌体离心实验中，酵母菌菌体由于其较大的体积和密度，会向离心管底部沉积，形成沉淀，上清液中则是相对较为纯净的液体。
需要注意的是，在进行酵母菌菌体离心实验时，应注意使用无菌技术，以避免外界的污染。
此外，在实验过程中，离心机的转速和离心时间的选择也需要根据具体的实验要求和酵母菌的性质进行调整。
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
酵母分离培养
YPD培养基YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：1 .溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）,20g琼脂粉于900ml水中2 .高压 115度 20min3.加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入) ,注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
酵母的分离与纯化1、接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30℃摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。
2、计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。
3、涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
做平行样。
4、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。
5、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
6、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。
血球计数板使用1.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
2.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌分离方法
纯化酵母菌的分离方法包括以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：使用含有适当营养物质和抑制其他微生物生长的培养基。
常用的选择包括酵母营养琼脂糖培养基和酵母抑制琼脂糖培养基。
2. 样品处理：将酵母菌样品（例如酵母悬液或含有酵母菌的混合物）以适当稀释倍数取出，避免过度稀释或稀释不够。
3. 观察与筛选：将适量的稀释液均匀平铺于琼脂糖培养基上，培养一段时间后观察培养基上的菌落。
通过观察菌落形态、颜色和其他特征，选择单独的菌落。
4. 分离纯化：将所选的菌落用无菌的酵母菌营养琼脂糖培养基进行分割传代，最终得到纯化的酵母菌培养基。
5. 培养与保存：将纯化的酵母菌培养液进行扩大培养，得到足够数量的酵母菌。
然后，可以将其中一部分保存在液氮中，以备日后使用。
需要注意的是，以上方法只能分离到可培养的酵母菌，对于某些酵母菌可能不适用。
另外，为了避免污染，所有实验操作都应在无菌条件下进行。
酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离与纯化酵母菌的分离与纯化小组组员: 一、实验目的1.学习分离纯化酵母菌的技术与方法2.了解培养基的配置与灭菌技术3.增强无菌操作技术的意识二、基本原理从混杂的微生物群体获得只含某一种某一株微生物的过程叫做微生物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。
马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。
此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。
其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。
而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。
三、实验材料及用具1.用品：苹果、葡萄糖、琼脂、水、1%孟加拉红水溶液、马铃薯2.设备与器材：1ml的无菌吸管、无菌培养皿等.四、实验步骤1、马铃薯培养基的配置培养基成分:马铃薯40克、蔗糖（葡萄糖）4克、琼脂4克、水200毫升、 pH 自然。
配置方法:（1）配制20%马铃薯浸汁：取去皮马钓薯40g，切成小块，加水200ml.加热煮游30 min ，用纱布过滤，然后补足失水互所需体积。
121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备用。
（2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加入2g蔗糖，加热煮沸后加入4克琼脂，继续加热融化并补足失水。
（3）分装、加塞，包扎。
（4）高压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min（5）将灭菌培养基放入37C°的温室中培养24-48小时，观察是否有菌落生成，以检查灭菌是否彻底。
2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却至55--50C°时，倒平板，倒三皿3、制备苹果悬液（1）首先将1g苹果在研钵中磨细，放入装有10ml生理盐水和玻璃珠的100ml三角瓶中去。
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化•实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
•基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸•实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果
土壤中酵母菌的分离与纯化实验报告结果实验步骤：
1.实验前准备：准备好所需的培养基、试剂和实验器材。
2.取一定量的土壤样品，加入无菌水中制备土壤悬浮液。
3.对土壤悬浮液进行预处理：将悬浮液通过过滤器过滤，以去除大颗粒杂质。
4.制备培养基：根据酵母菌的生长要求，配制适宜的培养基。
5.接种培养基：将过滤后的土壤悬浮液均匀地接种在培养基表面，避免接种过多的菌落。
6.培养条件：将接种好的培养基培养于适宜的温度和湿度条件下。
7.观察培养结果：在培养一定时间后，观察培养皿上是否出现酵母菌菌落。
8.分离纯化：选择单个菌落，用无菌技术将其移至新的培养基上，重复培养步骤，直到获得纯种的酵母菌培养物。
实验结果：
经过培养和分离纯化的酵母菌培养物显示出单一的菌落形态，颜色为白色或乳白色。
观察下显微镜下，酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
酵母菌菌落在培养基上呈现出光滑、湿润的表面，并具有边缘清晰的特点。
实验结论：
通过土壤中酵母菌的分离与纯化实验，成功地从土壤样品中分离出纯种的酵母菌培养物。
这些酵母菌菌落形态规整、单一，符合酵母菌的特征。
该实验结果为进一步深入研究酵母菌的生理特性和应用提供了基础。
酵母菌的培养与分离纯化
4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌，接 1. 24小时，观察试管内培养液的情况并作记录，每组转 接2支试管。 2. 48小时，观察试管内培养液的情况，镜检培养液内菌 的数量，粗略判断是否为酵母菌并作记录，每人蘸取培 养液进行划线分离，并作记录。 3. 72小时后，观察培养皿内菌的生长的情况，挑取单个 菌落进一步划线分离，直到为纯菌落。
酵母菌的培养与分离纯化
实验目的： 了解鉴别酵母菌实验方法，掌握培养酵母菌常 用 培养基的配制方法，并能设计出简单的实验 对酵母菌进行分离纯化，写出完整的试验报告并 且可以自己操作。
实验原理：
大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5－6，常 见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土 及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离 培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
（二）、实验的准备 1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染 液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂 （15-20克）、蒸馏水（1000ml）。
（三）、实验设计 l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养 液管中，置28-30℃，培养24小时，可见培养液变混浊。
2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马 铃薯葡萄糖培养液中，置28—30℃再培养24小时或48小时(过长则霉 菌长出)。
3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色 液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母 菌的形态和出芽生殖情况。活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着 色，用此方法可判断酵母菌的死活。
实验报告：
24小时，观察试管内培养液的情况并作记录， 每组转接2支试管。 48小时，观察试管内培养液 的情况，镜检培养液内菌的数量，粗略判断是否 为酵母菌并作记录，每人蘸取培养液进行划线分 离，并作记录。72小时后，观察培养皿内菌的生 长的情况，挑取单个菌落进一步划线分离，直到 为纯菌落。
分离观察酵母菌实验报告
1. 学习微生物分离纯化的基本原理和方法。
2. 掌握酵母菌的分离纯化技术。
3. 观察酵母菌的形态和培养特征。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中。
本实验通过平板划线法将混合菌液中的酵母菌分离纯化，并在适宜的培养基上培养，观察其形态和特征。
三、实验材料1. 菌种：啤酒酵母菌2. 培养基：酵母膏葡萄糖琼脂培养基（YGA）3. 工具：接种环、酒精灯、无菌试管、无菌棉签、培养皿、显微镜等四、实验方法1. 菌种活化：将啤酒酵母菌菌种接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 分离纯化：取活化后的酵母菌菌液，用无菌棉签涂布于YGA平板上，用接种环进行平板划线，划线时注意不要划破菌落。
将平板倒置于28℃恒温培养箱中培养24小时。
3. 观察与计数：观察平板上的菌落，记录菌落形态、大小、颜色等特征。
用无菌棉签挑取单个菌落，接种于新的YGA平板上，重复上述操作，直至获得纯化的酵母菌。
4. 酵母菌形态观察：将纯化的酵母菌接种于YGA培养基中，在28℃恒温培养箱中培养24小时，用无菌吸管吸取少量菌液，滴加于载玻片上，用无菌盖玻片覆盖，在显微镜下观察酵母菌的形态。
五、实验结果1. 菌落特征：酵母菌菌落呈圆形，表面光滑，湿润，边缘整齐，颜色为乳白色。
2. 酵母菌形态：酵母菌为单细胞，呈椭圆形或卵圆形，细胞核明显，细胞壁较厚。
1. 通过平板划线法，成功分离纯化了酵母菌，表明该方法适用于微生物的分离纯化。
2. 酵母菌在YGA培养基上生长良好，菌落特征明显，便于观察和识别。
3. 显微镜下观察酵母菌的形态，有助于了解其生物学特性。
七、实验结论1. 本实验成功分离纯化了酵母菌，掌握了酵母菌的分离纯化技术。
2. 通过观察酵母菌的形态和培养特征，了解了酵母菌的基本生物学特性。
3. 平板划线法是一种简单、有效的微生物分离纯化方法，适用于实验室研究。
八、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，防止杂菌污染。
酵母分离纯化实验报告
一、实验目的1. 掌握酵母菌分离纯化的基本原理和方法。
2. 学习使用显微镜观察酵母菌的形态特征。
3. 熟悉微生物实验室的基本操作技能。
二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛分布于自然界。
本实验采用稀释涂布平板法从混合样品中分离纯化酵母菌。
该方法基于菌落形成的原理，通过稀释样品，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酵母菌混合样品- 营养琼脂培养基- 无菌水- 灭菌器械（接种环、酒精灯等）- 显微镜2. 实验仪器：- 研钵- 玻璃棒- 离心机- 培养箱四、实验步骤1. 制备平板：- 将营养琼脂培养基加热融化，冷却至约50℃。
- 将融化后的培养基倒入培养皿中，待凝固后备用。
2. 样品稀释：- 将酵母菌混合样品用无菌水进行10倍稀释，制成不同浓度的稀释液。
3. 涂布平板：- 用无菌吸管吸取适量稀释液，滴加到平板中央。
- 用无菌玻璃棒轻轻涂抹，使样品均匀分布在平板表面。
4. 培养：- 将平板倒置，放入培养箱中培养。
5. 挑取菌落：- 在适宜的温度下培养，观察菌落生长情况。
- 根据菌落特征（如大小、形状、颜色等）挑取单菌落。
6. 纯化：- 将挑取的单菌落接种到新的平板上，重复培养和挑取过程，直至获得纯化后的酵母菌。
7. 观察与鉴定：- 将纯化后的酵母菌制片，用显微镜观察其形态特征。
- 根据酵母菌的形态特征（如细胞大小、形态、芽殖方式等）进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 菌落观察：- 经过培养，平板上形成了不同形状、大小的菌落。
- 通过挑取和纯化，获得了纯化后的酵母菌。
2. 显微镜观察：- 在显微镜下观察，纯化后的酵母菌呈现为球形或椭圆形的单细胞结构，直径约为5-10微米。
3. 鉴定：- 根据酵母菌的形态特征，初步鉴定为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。
六、实验讨论1. 本实验采用稀释涂布平板法成功分离纯化了酵母菌，该方法简单易行，适用于实验室常规操作。
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界各种环境中，包括土壤、水体和植物表面等。
酵母菌的纯培养实验是一种基本的实验手段，用于研究酵母菌的生长、代谢以及其他生物学特性。
本文将探讨酵母菌的纯培养实验的原理和方法。
酵母菌的纯培养实验是指将酵母菌分离出单个纯种，使其在培养基上单独生长。
这样可以避免不同种类的酵母菌相互干扰，从而更好地研究其生物学特性。
纯培养实验的关键是分离出单个酵母菌，实验过程大致分为以下几个步骤。
需要选择适当的培养基。
常用的培养基有酵母抽提物培养基、酵母营养盐琼脂培养基等。
培养基应提供适当的碳源、氮源和其他必需的营养物质，以满足酵母菌的生长需求。
需要从自然环境中分离出酵母菌。
可以通过取样、稀释和涂布等方法，将样品均匀地分布在培养基表面。
然后，将培养皿放置在适当的温度和湿度条件下，等待酵母菌的生长。
接下来，需要进行单菌分离。
当培养皿上出现酵母菌生长的斑点时，可以使用显微镜和接种针等工具，将单个酵母菌菌落转移到新的培养基上。
这个步骤需要非常细心和准确，以确保每个菌落只含有一个酵母菌。
需要进行鉴定和纯化。
通过观察酵母菌的形态特征、生长性状和代谢产物等，可以初步鉴定酵母菌的种类。
然后，可以将纯培养的酵母菌菌落转移到新的培养基上，进行进一步的培养和研究。
酵母菌的纯培养实验不仅可以研究其基本生物学特性，还可以应用于酵母菌的育种和工业生产等领域。
例如，通过培养高产酵母菌株，可以提高酵母菌的发酵产物的产量和质量；通过培养抗逆性强的酵母菌株，可以提高发酵过程的稳定性和效果。
酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，用于研究酵母菌的生物学特性和应用价值。
通过适当的培养基和实验方法，可以成功地分离和纯化酵母菌，并进行进一步的研究和应用。
酵母菌的纯培养实验对于推动酵母菌研究的发展和应用具有重要意义。
实验室培养酵母菌的方法
实验室培养酵母菌的方法
实验室培养酵母菌的方法如下：
1. 样品处理：对种子样品进行表面灭菌处理，并使用无菌研钵进行粉碎，然后将粉末加入到一定量的无菌水中形成原液，一般稀释到10^-6即可。
2. 酵母菌的分离：在无菌条件下，取样品稀释液微升至培养基中，使用无菌涂布器将其接种于培养基中（酵母菌常用培养基包括MEA培养基、PDA培养基、YPD培养基等），每个梯度2-3个平行，28℃培养48-72小时。
3. 纯化培养：在平行平板中选取菌株分布均匀、数量适宜的平板，挑取其中的单菌落将其以平板划线方式接种于新的MEA培养基中，28℃培养48-72小时。
然后挑取单菌落接种至新鲜的MEA斜面上与4℃进行保藏。
以上步骤仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
实验报告三 果酒酵母的分离、纯化及选育
果酒酵母的分离、纯化及选育实验目的 1.学习掌握果酒酵母分离纯化的方法；2.对分离纯化得到的酵母菌进行筛选使其适合果酒酿造。
实验原理要获得优良的酿酒酵母，必须对其进行分离选育。
果酒酵母的筛选应从相应的果品及其种植环境中采样分离，如成熟果实的表皮、自然腐烂发酵的果肉或果汁和果园的土壤等相关场所。
根据实践经验，在果汁和自然发酵的果酒醪液中检出率较高，因为它们的基质环境与酿酒环境很相似。
为使我们需要的酵母易于检出，应对采集的样品进行富集培养，通过设置较高的酒精浓度、添加SO2、调整pH 等手段抑制不需要的微生物的生长，使希望检出的微生物得到增殖。
酵母检出后，应对其的发酵性能进行考察，包括酵母的一系列生理生化特性和风味物质形成的能力等，这些可通过作生理生化实验和三角瓶小型发酵实验分析和测定。
材料试剂苹果、葡萄、固体PDA培养基、液体PDA培养基实验器材三角烧瓶、无菌试管、无菌吸管、无菌滴管、接种环、冰箱、酒精喷灯、玻璃涂棒，恒温培养箱方法步骤1、固体PDA培养基的配置：马铃薯300g，葡萄糖30g，琼脂30g，蒸馏水定容至1500ml.（马铃薯去皮，切成块煮沸后再煮30分钟，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂溶化后定容至1500 ml。
121℃灭菌30分钟。
）液体PDA培养基的配置：：马铃薯100g，葡萄糖10g，蒸馏水定容至500ml.（马铃薯去皮，切成块煮沸后再煮30分钟，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂溶化后定容至1500 ml。
121℃灭菌30分钟。
）2、菌种采样：用无菌剪刀削取苹果果皮，研磨提取汁液，放入烧杯，做好标记。
将葡萄捣碎研磨提取汁液，放入烧杯，做好标记。
3、富集培养：用接种环将苹果分离酵母菌种液、葡萄分离酵母菌种液划线分别接种在PDA培养基上，苹果分离酵母菌种液接种一个培养平板、葡萄分离酵母菌种液接种两个培养平板，28℃恒温培养。
4、菌种纯化：待菌种长出白色小菌落，镜检为酵母菌后。
从葡萄分离酵母菌种液培养平板找出长势良好的酵母菌接种到三个空白的PDA培养平板，从苹果分离酵母菌种液培养平板找出长势良好的酵母菌接种到2个空白的PDA培养平板。
【精品】实验八 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化95
五、实验报告
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 3、为什么要把培养皿备。 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏一号培养基，马丁氏培养基，豆芽汁葡萄糖培养基 3、无菌生理盐水。 4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。
四、实验步骤
1、制备土壤稀释液 2、涂布法进行分离 3、培养 4、菌落计数 5、划线分离
实验八 土壤中细菌、放线菌、 酵母菌及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。
酵母菌及霉菌的分离与纯化 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 3、为什么要把培养皿倒置培养？ 酵母菌及霉菌的分离与纯化 酵母菌及霉菌的分离与纯化 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 微生物四大类菌的分离和培养 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法.二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4。
5-6。
0。
酵母菌生长迅速，容易分离培养.在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化.三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基:马铃薯200g(煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶;试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为5。
5左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等.四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗)或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28—30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0。
1ml 加富培养液到平板中,用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化:用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线,培养后分离得到单个菌落.6、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
制作酵母菌过程
制作酵母菌过程
酵母菌制作过程主要包括以下步骤：
1. 酵母菌种植：从食品厂或研究机构购买酵母菌培养基，选用适合的菌种进行预培养，使其活跃起来。
2. 加入基质：将预培养好的酵母菌加入基质中进行进一步培养。
基质可以选用糖水、面粉、麦芽等材料，也可以直接用酒、酸奶等天然发酵物作为基质。
3. 发酵：将加有酵母菌和基质的发酵罐保持在适宜的温度和湿度下，让其进行发酵。
通常发酵时间为1-2天。
4. 分离纯化：将发酵液离心分离，去除杂质，得到纯化后的酵母菌。
这一步可以使用离心机、过滤器等工具进行操作。
5. 干燥：将纯化后的酵母菌通过喷雾、真空干燥等方法进行干燥处理，制成酵母粉。
6. 包装：将酵母粉包装好，贴上标签，进行存储和销售。
以上就是制作酵母菌的主要步骤。
不同的酵母菌制作过程有所差异，但基本上都是以上几个步骤的组合使用。
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酵母菌的分离与纯化
土壤是微生物生活的大本营，是寻早有重要应用潜力的微生物的主要菌源。
不同图样中各类微生物的含量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。
放线菌一般在较干燥、偏碱性、有机质较多的土壤中较多；霉菌在含有机质丰富、偏酸性、通气性较好的土壤中较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在酒曲、面肥、水果表皮、果园土壤中数量多些。
（一）菌源
1土样用无菌的采样小铲在橘树果园中取土壤表层下1~10cm土壤10g，装入灭菌的牛皮纸袋内。
封好袋口，记录取样地点、环境及日期。
图样采集后应及时分离，饭不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥的条件下，以减少其中菌相的变化。
2面肥
（1）面粉500克，白酒100克，水250，和好静置发酵就可以了。
冬季10个小时。
（2）在温水中兑一点酒，倒入适量面粉拌匀后放入绝缘保温盛器（陶瓷，砂锅）中，用布将整个盛器盖好置于温度较高处，6小时后即成面肥。
*以上方法做出的面肥只能保存几天，不宜放置太久。
3水果果皮
桔子和葡萄等的果皮上含有数量较多的酵母菌，既可单独作为菌源也可以和果园土壤作为混合菌源。
（二）酵母菌的分离
1制备菌悬液
称取菌源1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。
振荡20min，即成10-2的菌源悬液。
再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。
2涂布法分离
取融化并冷却至45~50度左右的豆芽汁葡萄糖培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。
注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。
呆平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的豆芽汁葡萄糖培养基平板上。
每个稀释度做2~3个平行皿。
左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。
注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。
3培养
接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养2~3天，观察结果。
4纯化
用接种环挑取单个单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母扩培方案
一、培养基制备
(一)麦芽汁培养基的配制
1．培养基成分
新鲜麦芽汁一般为10-15波林。
2．配制方法
(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。
(2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直
至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表
示糖化完全)。
(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡
蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。
(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调
pH至6．4。
如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀
释到10-15波林后使用。
(5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
（二)马铃薯葡萄糖培养基的配制
1、培养基成分
马铃薯 20g
葡萄糖 2 g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2．配制方法
(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。
80℃
浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。
100 Pa灭菌20 min。
即成20％
马铃薯浸汁，贮存备用。
（2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，
继续加热融化并补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制
1．培养基成分
黄豆芽 10g
葡萄糖 5g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2．配制方法
(1)称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 m1水，小火煮沸30 min，用
纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。
（2)配制时，按每100 m1 10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2 g琼脂，
继续加热融化，补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(四)察氏(czapck)培养基的配制
1．培养基成分
蔗糖 3g
NaN03 0.3g
K2HP04 0.1g
KCl 0.05g
MgSO4·7H2O 0.05 g
FeS04 0.001 g 琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
自然pH
2．配制方法
(1)称量及溶化量取所需水量约2／3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、
NaNO3 、K2HP04 、KCl、MgSO4。
依次逐一加入水中溶解。
按每100 ml培养基加
入1ml 0.1％的FeS04溶液。
（2）定容候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
（3）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
(4)分装、加塞、包扎。
(5)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
YPD培养基
YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出
粉胨葡萄糖培养基，加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）琼脂培养基
用于酵母菌的培养
配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose
(glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉
配制方法：
1 溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，
如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 121度 20min
3 加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入)
注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学
反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
YPEG：除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外，其他成分同YPD
二、接种操作
【器具】：酒精灯、酒精棉、剪刀、接种针、镊子、定量移液器或吸管等。
【仪器】：超净工作台等。
【方法】
无菌室使用前，使用紫外线灯照射20~30分钟进行杀菌；进入无菌室换无菌工作
服；所有操作采用无菌操作。
〖活化〗
①操作前将冷冻管菌种置于室温下，使之内部培养基达到室温后，振荡均匀；无
菌操作，将冷冻管内的培养液全部转入盛有5mL培养基的试管中，于25±1℃培
养72±2小时。
②将试管中的培养液轻轻振荡均匀，用接种环接取三环加入另一支盛有5mL培养
基的试管中，于25±1℃培养24~36小时。
③将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀，用无菌吸管接0.1mL加入盛有10mL
培养基的试管，振荡均匀后于25±1℃培养24~36小时。
〖扩大〗
①将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀后，全部接入小巴氏瓶（三角瓶），每个小巴氏瓶（三角瓶）接入一支试管的培养液；然后于23±1℃培养24~36小时。
②将培养结束的小巴氏瓶（三角瓶）轻轻振荡均匀后，全部接入大巴氏瓶（大三角瓶），每个大巴氏瓶（大三角瓶）接入一只小巴氏瓶（三角瓶）的培养液；然后于21±1℃培养24~36小时。
③将培养结束的大巴氏瓶（大三角瓶）轻轻振荡均匀后，全部接入卡氏罐，每个卡氏罐接入两只大巴氏瓶（大三角瓶）的培养液；然后于18±1℃培养24~36小时。
〖注〗：除卡氏罐外，其它液体培养基在接种后每12小时应振摇一次，以去除二氧化碳，保证酵母耗氧需求。
三、菌种保藏
〖固体斜面〗
①保藏：酵母菌种以固体斜面形式0~4℃冷藏保藏，定期活化；
②活化：每三个月活化一次。
接一环斜面菌种于5mL麦汁液体培养基中，于25±1℃培养24~36小时；待酵母起发后，将培养液振荡均匀，用接种环涂划固体斜面，于25±1℃培养60~72小时；然后于0~4℃冷藏保藏。
③固体斜面菌种每年更换一次。