灭菌方法与生物指示剂优秀课件
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消毒、灭菌PPT演示课件
无菌物品管理
对手术室内使用的无菌物品进 行严格管理，确保在有效期内 使用，避免过期或污染。
手术器械处理
对手术器械进行严格的清洗、 消毒和灭菌处理，确保手术过 程中无菌操作。
医疗废弃物处理要求
分类收集 对医疗废弃物进行分类收集，包 括感染性废弃物、损伤性废弃物 、药物性废弃物和化学性废弃物 等。
环保要求 在处理医疗废弃物时，应符合环 保要求，避免对环境造成污染。
专用容器 使用专用的医疗废弃物容器进行 收集，容器应防渗漏、防破裂、 易于清洗和消毒。
安全处理 对收集的医疗废弃物进行安全处 理，包括高温焚烧、化学处理、 微波消毒等方法，确保废弃物中 的病原体被彻底杀灭。
THANKS
感谢观看
辐射灭菌法
原理
应用
利用放射性核素60Co发射的γ射线或电子 加速器产生的高能电子束（阴极射线）穿 透物品，杀死其中的微生物。
适用于不耐高温和不能用其他方法灭菌的 物品，如一次性使用的医疗器械和用品、 药品、食品等。
优点
缺点
灭菌效果可靠，不损伤物品，无残留毒性 。
设备费用高，操作技术要求高，需要专门 的安全防护措施。
消毒目的
消毒的目的是切断传播途径，防 止和控制传染病的传播和流行。
灭菌定义及目的
灭菌定义
灭菌是指用物理或化学方法杀灭外环 境中所有的微生物，包括细菌芽孢和 非芽孢菌、病毒、真菌等的过程。
灭菌目的
灭菌的目的是彻底消除外环境中的一 切微生物，以达到无菌状态，保证医 疗、科研等活动的安全进行。
消毒与灭菌关系
05
消毒与灭菌效果评价
消毒效果评价方法及标准
细菌学指标
消毒前后细菌数量对比，计算杀菌率。
化学指标
实验室常用灭菌法详细版.ppt
效均一
最新.
10
灭菌容器操作注意
• 使用前认真检查设备的完好性
• 灭菌时须先将灭菌器中冷空气排出，以保
证最佳灭菌效果
• 灭菌时间应从待灭菌物品到达预定温度时
算起
• 灭菌完毕后停止加热，待压力表降至0，放
汽、开启灭菌器，物品温度降至80℃ 以下 时才能将灭菌器门全部开启
最新.
11
影响湿热灭菌的因素
• 辐射灭菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为5×107～
5×108个/片 )
• 气体灭菌：
环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为 5×105～5×106菌孢子（ATCC7953等，活孢子 数为1×106～5×106个/片 )
不挥发，不易燃
无色醚样臭味气体，沸点 10.8 扩散穿透能力强，属广谱杀菌
环氧乙烷
℃，沸点以下为无色透明液 剂；用于对热敏感的药物等的
体，比重 0.882，溶于水。 灭菌；时间长，费用贵。
苯酚（石炭酸）
3～5%
地面、墙壁喷撒
甲酚皂溶液（来苏尔）
5～100%
• 效果可靠、操作简便 • 应用广泛：容器、培养基、无菌衣、胶塞等 • 包括
– 热压灭菌 – 流通蒸汽灭菌 – 煮沸灭菌 – 低温间歇灭菌
最新.
9
湿热灭菌条件
• 121℃× 15min、 121℃× 30min 、116 ×
40min 或其他可以保证灭菌效果的程序条 件。
×
• 过度杀灭法 • 灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有
• 微生物种类和数量
• 灭菌物品特性
• 蒸汽的性质
饱和蒸汽 热含量高 潜热大 穿透力强
湿饱和蒸汽
最新.
10
灭菌容器操作注意
• 使用前认真检查设备的完好性
• 灭菌时须先将灭菌器中冷空气排出，以保
证最佳灭菌效果
• 灭菌时间应从待灭菌物品到达预定温度时
算起
• 灭菌完毕后停止加热，待压力表降至0，放
汽、开启灭菌器，物品温度降至80℃ 以下 时才能将灭菌器门全部开启
最新.
11
影响湿热灭菌的因素
• 辐射灭菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为5×107～
5×108个/片 )
• 气体灭菌：
环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为 5×105～5×106菌孢子（ATCC7953等，活孢子 数为1×106～5×106个/片 )
不挥发，不易燃
无色醚样臭味气体，沸点 10.8 扩散穿透能力强，属广谱杀菌
环氧乙烷
℃，沸点以下为无色透明液 剂；用于对热敏感的药物等的
体，比重 0.882，溶于水。 灭菌；时间长，费用贵。
苯酚（石炭酸）
3～5%
地面、墙壁喷撒
甲酚皂溶液（来苏尔）
5～100%
• 效果可靠、操作简便 • 应用广泛：容器、培养基、无菌衣、胶塞等 • 包括
– 热压灭菌 – 流通蒸汽灭菌 – 煮沸灭菌 – 低温间歇灭菌
最新.
9
湿热灭菌条件
• 121℃× 15min、 121℃× 30min 、116 ×
40min 或其他可以保证灭菌效果的程序条 件。
×
• 过度杀灭法 • 灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有
• 微生物种类和数量
• 灭菌物品特性
• 蒸汽的性质
饱和蒸汽 热含量高 潜热大 穿透力强
湿饱和蒸汽
高压蒸汽灭菌生物监测指示剂
高压蒸汽灭菌生物监测指示剂摘要：一、高压蒸汽灭菌的原理和方法二、生物监测指示剂的概念和作用三、高压蒸汽灭菌中生物监测指示剂的使用方法四、生物监测指示剂在高压蒸汽灭菌中的应用案例五、生物监测指示剂对高压蒸汽灭菌效果的影响正文：一、高压蒸汽灭菌的原理和方法高压蒸汽灭菌是一种利用高温高压的蒸汽来杀灭微生物的方法，其原理是通过加热使灭菌锅内的水沸腾产生蒸汽，随着蒸汽压力的增加，锅内的温度也会逐渐上升。
当温度达到一定程度时，蒸汽中的潜热能够快速提高被灭菌物体的温度，从而使菌体蛋白质凝固变性，达到灭菌的目的。
在高压蒸汽灭菌过程中，为了保证灭菌效果，需要对不同的物品采用不同的灭菌温度和时间。
例如，培养基通常使用105kg/cm2 的压力，121.3℃的温度，灭菌时间为30 分钟。
而对于含糖培养基，则需要先将其他成分进行121.3℃，20 分钟的灭菌，然后再加入糖溶液。
二、生物监测指示剂的概念和作用生物监测指示剂是一种用于检测高压蒸汽灭菌效果的物质，通常为一种耐热的生物指示剂，如枯草杆菌黑色变种芽孢。
生物监测指示剂在高压蒸汽灭菌过程中，会随着蒸汽一起进入灭菌锅内，当蒸汽温度达到一定程度时，生物指示剂的芽孢会受到破坏，从而失去活性。
三、高压蒸汽灭菌中生物监测指示剂的使用方法在使用生物监测指示剂进行高压蒸汽灭菌时，需要先将指示剂放入灭菌锅内，然后按照常规的高压蒸汽灭菌方法进行灭菌。
灭菌完成后，需要将指示剂取出，观察其颜色或形状是否发生了变化，以判断灭菌效果。
四、生物监测指示剂在高压蒸汽灭菌中的应用案例例如，对于培养基的灭菌，可以先将培养基放入灭菌锅内，然后加入生物监测指示剂，然后按照标准的高压蒸汽灭菌方法进行灭菌。
灭菌完成后，取出生物监测指示剂，观察其颜色或形状是否发生了变化，如果指示剂的颜色或形状没有发生变化，则说明灭菌效果良好，否则需要重新进行灭菌。
五、生物监测指示剂对高压蒸汽灭菌效果的影响生物监测指示剂对高压蒸汽灭菌效果的影响主要体现在以下几个方面：1.生物监测指示剂可以作为一种检测手段，帮助判断高压蒸汽灭菌效果。
消毒与灭菌技术PPT课件
煮沸消毒法（boiling sterilization）
要求 适用 方法 注意
❖殖❖配可强防❖物❖橡▪▪▪▪经应 有 空 物煮将 的体成提杀锈取 将适如❖浸沸❖❖第品胶轴将腔品消间从间后轴碗应 置5前将消如出，1高菌。▪， ， 当碳用金没二根玻橡～节物导不类及冷为放节、毒用 于%物毒中海 水 延水据璃胶达沸作酸的管品宜于属在次消水入1或盆1时等无 无～0器制物拔 长0器须刷放的品时途毒或，盖不到点用氢～的耐、水水间菌 菌分2皿品品械洗先置高时温时沸打能1刷间加沸消达，钠煮%湿搪；中沸器 容5应用性钟或在干过间水间开重的点m点洗从入毒还1海加时的用纱质、瓷械 器，后带腔净多中为叠再i可地n受0也纱布决干水物拔内盖，将 内效可入浓放5，放耐 、5然重区杀气～低布 包定℃灌的大每入要入物净沸品果去水度高玻后新气1压灭包 好放水容小，，保水，增0品，后，。污中时温璃m压加计裹 ，入影煮器相繁需消证中高增及i全计则n好 待水、低，，应同响的和热时毒物后适时后 水的部算在时煮， 沸时
特点：紫外线穿透力较弱
紫外线可杀灭多种微生物，包括杆菌、 病毒、真菌、细菌繁殖体等。杀灭繁殖 体需3~5s；杀灭芽孢需10min以上。
杀菌机制
使菌体DNA失去转换能力而死亡； 破坏菌体蛋白质中的氨基酸，使菌体蛋白光解 变性； 降低菌体内氧化酶的活性，使氧化能力丧失； 使空气中的氧电离产生具有极强杀菌作用的臭 氧。
第三章 清洁、消毒与灭菌技术
一、基本概念 二、物品清洁法 三、物理方法 四、化学方法
一 基本概念
洁清消 毒灭菌防 腐
是切清 上清上污抑 与清除 的除的迹制 繁除或 一脂物病,微 殖如或杀 切品等原生尘杀灭 微上微物埃灭物生的生的,物品物油一物生品, 长 以杀灭芽孢为准
灭菌方法与生物指示剂
生物指示剂 系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设 备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果 的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是 细菌的孢子。
harmony
生物指示剂的形式
一定数量的孢子附着在惰性载体上， 如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等
孢子悬浮液密封于安瓿中
harmony
无菌保证水平
ATCC 14756
用于滤膜孔径为0.22μm 的滤器
用于滤膜孔径为0.45μm harmony 的滤器
湿热灭菌法
指将物品臵于灭菌柜内利用高压饱和蒸 汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋 白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。
• 须保证物品灭菌后的SAL≤10-6
• 对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，
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常用的灭菌方法
湿热灭菌法 干热灭菌法 气体灭菌法 辐射灭菌法 过滤除菌法
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不同灭菌方式不同的菌种种类的选择
灭菌方法
湿热灭菌法
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus 生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
harmony
制药工业常用的灭菌方法
原料药： 化学合成药——较高熔点药物常用于干热灭菌法，对较低 熔点的则用湿热灭菌法 ，对不耐热药物，如是晶体，可 溶解后过滤除菌 ；
植物提取物——若是用常规或高温提取的单一成分的流浸 膏，常用压力蒸汽法、流通蒸汽法消毒灭菌；若是低温提 取物，则优先考虑过滤除菌； 生化药物——化学消毒灭菌剂，如低温乙醇法、低温间歇 法和过滤法等。
harmony
适用范围
不耐热药物的灭菌，医疗器械、容器、高分 子材料、包装材料、生产辅助用品、不受辐射破 坏的原料药及成品等均可用本法灭菌。
灭菌技术入门知识PPT课件
适于消毒及不耐高热的物பைடு நூலகம்的灭 菌，但不能保证杀灭芽孢
用于注射器等的灭菌，必要 时加入抑菌剂
低温间歇灭菌法
适于不耐热、热敏 物料的灭菌
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干热灭菌法
❖ 干热灭菌法:是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌 的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。 —原理：高热使蛋白质凝固变性；水分缺失使微生物原浆电解 质浓缩死亡。 —火焰灭菌法是指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅 速、可靠、简便，适合于耐火焰材料（如金属、玻璃及瓷器等） 物品与用具的灭菌 —干热空气灭菌法是指用高温干热空气灭菌的方法。该法适用 于耐高温的玻璃和金属制品的灭菌，不适合橡胶、塑料及的灭 菌。 —在干热状态下，由于热穿透力较差，微生物的耐热性较强， 必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的。因此。干热空 气灭菌法采用的温度一般比湿热灭菌法高。为了保证灭菌效果， 一般规定：135-140℃灭菌3-5h；160-170 ℃灭菌2-4h；180200 ℃灭菌0.5-1h。
—蒸气性质 —灭菌器物的性质和灭菌时间 —温度，压力
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❖ 必须用饱和蒸气
保证灭菌效率 应注意的事项
❖ 必须排尽灭菌柜内的空气
❖ 全部器物的温度达到所要求的温度时开始计时
❖ 灭菌结束后必须先停止加热
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煮沸灭菌法◆流动蒸汽灭菌法◆低温间歇灭菌法
❖ 煮沸灭菌法是指将待灭菌物置于沸水中灭菌的 方法。煮沸时间通常为30-60分钟。。
①对肥皂 碘 高锰酸钾等阴离子表面活性剂 有拮抗作用 ②有吸附作用，会降低药效， 所以溶液内不可投入纱布、棉花等物品。
③对铝制品有破坏作用，故不能用铝制品 盛装
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小知识
❖ 最早使用的消毒药液—漂白粉（Ca(ClO)2 ） ❖ 芽孢—有些细菌（多为杆菌）在一定条件下，
灭菌与灭菌技术PPT课件(模板)
此法在较高温下可以杀死细菌繁殖体但不能杀死芽胞，所以在较低温度下杀死细菌繁殖体的同时让芽胞发育变为繁殖体，这样下一次 加热时可以将其杀死，反复操作至芽胞全部灭绝 饱和蒸汽：即蒸汽的温度与水的沸点相当，当蒸汽的压力达到平衡时，蒸汽中不含有微细的水滴。 热力灭菌或直接用钴-60辐射灭菌 氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶
▪ 热力灭菌法分为干热灭菌法和湿热灭菌法。在同 一温度下，湿热灭菌的效力比干热灭菌大
▪ 细菌在湿热下，菌体吸收水分，蛋白质较 易凝固。这点可以从鸡蛋白含水量与凝固 温度之间的关系看出来，凝固蛋白质所需 要的温度与蛋白质的含水量有关
▪ 湿热的穿透力比干热大
▪ 湿热灭菌时，水蒸气与物品接触而凝结成 水，因而发出潜热（汽化热），加速细菌 的死亡
无菌操作法（Aseptic technique）：是指在整个 操作过程中利用和控制一定条件，尽量使产品 避免微生物污染的一种操作方法
细菌的耐受性
➢ 致死温度：是指在一定的时间内，杀死 某种细菌所需要的最低温度
➢ 致死时间：是指在某一温度下，杀死某 种细菌所需要的最短时间，又称热死时 间
灭菌和除菌对制剂的影响
▪ 其叫中 染N菌t为度灭概菌率后，预一期般达取到N的t为微10生-6 物残存数，又 ▪ 生杀物 死F容0值器可中认全为部是微以生相物当所于需1要21的℃时热间压灭菌时
➢ 例如，将含有200个嗜热脂肪芽胞杆菌的5％葡 萄糖水溶液以121℃热压灭菌时，其D值为2.4 分，则F0=2.4×（lg200-lg10-6）=19.92min
(一)干热灭菌法
火焰灭菌法
▪ 灼烧是最迅速、可靠、简便、紧急的灭菌方法 ▪ 金属品如铂丝、铁或镍制。不锈钢制的刮刀、镊
子等，瓷制品如研钵等，玻璃制器皿如玻棒、载 玻片、试管等的灭菌都可用此 ▪ 采用该法灭菌时，最少须在火焰中加热20秒，通 常是要将灭菌的物品迅速通过火焰3～4次。对研 钵的简便灭菌方法是在其中加入少量乙醇点火燃 烧；对于玻璃、瓷制品，操作前应充分干燥，以 免烧灼时炸裂损坏
▪ 热力灭菌法分为干热灭菌法和湿热灭菌法。在同 一温度下，湿热灭菌的效力比干热灭菌大
▪ 细菌在湿热下，菌体吸收水分，蛋白质较 易凝固。这点可以从鸡蛋白含水量与凝固 温度之间的关系看出来，凝固蛋白质所需 要的温度与蛋白质的含水量有关
▪ 湿热的穿透力比干热大
▪ 湿热灭菌时，水蒸气与物品接触而凝结成 水，因而发出潜热（汽化热），加速细菌 的死亡
无菌操作法（Aseptic technique）：是指在整个 操作过程中利用和控制一定条件，尽量使产品 避免微生物污染的一种操作方法
细菌的耐受性
➢ 致死温度：是指在一定的时间内，杀死 某种细菌所需要的最低温度
➢ 致死时间：是指在某一温度下，杀死某 种细菌所需要的最短时间，又称热死时 间
灭菌和除菌对制剂的影响
▪ 其叫中 染N菌t为度灭概菌率后，预一期般达取到N的t为微10生-6 物残存数，又 ▪ 生杀物 死F容0值器可中认全为部是微以生相物当所于需1要21的℃时热间压灭菌时
➢ 例如，将含有200个嗜热脂肪芽胞杆菌的5％葡 萄糖水溶液以121℃热压灭菌时，其D值为2.4 分，则F0=2.4×（lg200-lg10-6）=19.92min
(一)干热灭菌法
火焰灭菌法
▪ 灼烧是最迅速、可靠、简便、紧急的灭菌方法 ▪ 金属品如铂丝、铁或镍制。不锈钢制的刮刀、镊
子等，瓷制品如研钵等，玻璃制器皿如玻棒、载 玻片、试管等的灭菌都可用此 ▪ 采用该法灭菌时，最少须在火焰中加热20秒，通 常是要将灭菌的物品迅速通过火焰3～4次。对研 钵的简便灭菌方法是在其中加入少量乙醇点火燃 烧；对于玻璃、瓷制品，操作前应充分干燥，以 免烧灼时炸裂损坏
微生物学消毒与灭菌ppt课件
2021精选ppt
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（二）电离辐射：包括x射线和γ射线，有较高的能
量与穿透力。用于食品、一次性医用塑料制品的消毒。
（三）微波：可穿透玻璃、塑料薄膜和陶瓷等介质，
但不能穿透金属。常用于非金属器械消毒，实验室用 品、食品餐具、药杯等消毒。
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三、过滤除菌法
是用物理阻留的方法除去液体和气体的微生物。 主要适合于不耐高温的血清、抗生素、抗毒素、药
第九章 消毒与灭菌
Disinfection and Sterilization
采用多种物理、化学或生物学的方 法来抑制或杀死病原微生物。
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
2021精选ppt
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基本概念:
消毒（ disinfection）杀死物体上病原微生物的方法，并不 一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。 灭菌（sterilization） 杀死物体上所有微生物（包括病原菌 和非病原菌及其芽胞）的方法。 抑菌 （bacteriostasis）抑制细菌生长繁殖的方法 防腐（antisepsis） 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。 无菌（asepsis） 不存在活菌的意思。 无菌技术是指在进行外科手术或分离、转种及培养时防止 其他微生物污染实验材料的操作方法。
❖流动蒸汽消毒法 100 ℃蒸汽15~30min 芽孢不能全部杀灭。
❖间歇蒸汽消毒法 100 ℃蒸汽15~30min,37 ℃过夜,100 ℃蒸汽 15~30min，如此连续三次以上.适于不耐高热的含糖、牛奶等培养基。
❖高压蒸汽消毒法 103.4kPa蒸汽压,121.3 ℃,15~20min，适于培养基、 生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿热物品的灭菌。
干扰细菌的酶系统和代谢 某些氧化剂、重金属盐类等
生物指示剂
第三页，课件共有19页
生物指示剂的优点
生物指示剂是一群特定的微生物和载体 结合而制成，对相应的灭菌模式有高度抵抗， 指示微生物的死亡真实可靠地反映灭菌状况. 能正确反映灭菌过程中有关时间、温度和湿 度的关系。
第四页，课件共有19页
生物指示剂的组成形式
目前，常用于灭菌工艺验证的生物指示剂主 要有三种形式，它们都是用对特定灭菌工艺具有 一定耐受性并已知其种类的微生物芽孢制备而成。 有些生物指示剂可能含有两种不同类微生物，并 且两种微生物的含量也不相同。 1 .芽孢条（spore strip) 2.芽孢悬浮液（spore suspension) 3.自含型生物指示剂（self-contained indicator)
生物指示剂相关知识目录?生物指示剂的定义?生指指的的组成形物示剂式?生物指示剂的制备?生物指示剂的选择和使用生物指示剂的定义生物指示剂简称为bibiologicalindicator是对特定灭菌工艺具有一定耐受性并且能够定量测定效力的微生物制剂是对特定灭菌工艺具有一定耐受性并且能够定量测定效力的微生物制剂适用于制备生物指示剂的微生物多为芽孢类细菌这是因为除辐射灭菌外芽孢类细菌比常规的生长态微生物对灭菌工艺具有更强的耐受性
第十八页，课件共有19页
生物指示剂的选择和使用
五.液态过氧化氢灭菌用生物指示剂 在液态过氧化氢灭菌工艺中，常采用嗜热
脂肪芽孢杆菌芽孢，但也可用梭状芽孢杆菌 芽孢或枯草芽孢杆菌芽孢，还可选用其他类 的微生物芽孢，只要证明其对过氧化氢的耐 受性不低于上述3种芽孢的耐受性即可。
第十九页，课件共有19页
芽孢悬浮液
芽孢悬浮液可被接种于代表性的待灭菌 产品溶液或模拟产品溶液中。可用此芽孢悬 浮液直接接种于产品内或产品外表面，这样 能更加直观的考察产品的实际灭菌效果。
生物指示剂的优点
生物指示剂是一群特定的微生物和载体 结合而制成，对相应的灭菌模式有高度抵抗， 指示微生物的死亡真实可靠地反映灭菌状况. 能正确反映灭菌过程中有关时间、温度和湿 度的关系。
第四页，课件共有19页
生物指示剂的组成形式
目前，常用于灭菌工艺验证的生物指示剂主 要有三种形式，它们都是用对特定灭菌工艺具有 一定耐受性并已知其种类的微生物芽孢制备而成。 有些生物指示剂可能含有两种不同类微生物，并 且两种微生物的含量也不相同。 1 .芽孢条（spore strip) 2.芽孢悬浮液（spore suspension) 3.自含型生物指示剂（self-contained indicator)
生物指示剂相关知识目录?生物指示剂的定义?生指指的的组成形物示剂式?生物指示剂的制备?生物指示剂的选择和使用生物指示剂的定义生物指示剂简称为bibiologicalindicator是对特定灭菌工艺具有一定耐受性并且能够定量测定效力的微生物制剂是对特定灭菌工艺具有一定耐受性并且能够定量测定效力的微生物制剂适用于制备生物指示剂的微生物多为芽孢类细菌这是因为除辐射灭菌外芽孢类细菌比常规的生长态微生物对灭菌工艺具有更强的耐受性
第十八页，课件共有19页
生物指示剂的选择和使用
五.液态过氧化氢灭菌用生物指示剂 在液态过氧化氢灭菌工艺中，常采用嗜热
脂肪芽孢杆菌芽孢，但也可用梭状芽孢杆菌 芽孢或枯草芽孢杆菌芽孢，还可选用其他类 的微生物芽孢，只要证明其对过氧化氢的耐 受性不低于上述3种芽孢的耐受性即可。
第十九页，课件共有19页
芽孢悬浮液
芽孢悬浮液可被接种于代表性的待灭菌 产品溶液或模拟产品溶液中。可用此芽孢悬 浮液直接接种于产品内或产品外表面，这样 能更加直观的考察产品的实际灭菌效果。
无菌医疗器械的灭菌ppt课件
❖回风口应均匀分布在洁净室的下部，高度应低于工 作台面。
❖洁净室内有局部排风装置时，其位置应设在工作室 气流的下风侧，以免气流短路。
洁净级别的设置
无菌医疗器械生产洁净室的洁净度等级，按洁
洁净净度室级空别气中尘的埃含最大尘允浓许数度，和个含/m菌3 量，微分生为物最四大个允等许数
级3100：00级100000级级、≥。3051.0500m000≥级50.、01m 000C沉F0U降10/菌皿级、
• 准备测试样品 • 建立灭菌相关参数 • 确定半周期 • 建立全周期灭菌参数
医疗器械的灭菌 — 环氧乙烷灭菌—灭菌确认
满载（2） 生物指示剂 1. 菌种：ATCC9372 2. 产品最难灭菌的位置（ISO11138-1） 3. 生物指示剂的数量： • 可用体积≤5m3，至少20个 • 可用体积大于5m3，小于10m3，每增加1m3，增加 2个BI • 可用体积大于10m3，每增加2m3，增加2个BI • Ⅰ号灭菌柜放置60个，Ⅱ号灭菌柜放置30个 4. 生物指示剂的接种量：≥106 5. 生物指示剂的D值： ≥2.5分钟 6. 测试结果可接受标准：所有BI培养均无生长
❖ 通过调整，使不同级别洁净室室内的空气静压差大于5 帕，与室外大气大于10帕，防止外界污染或交叉污染 从门或各种缝隙部位侵入洁净室内
空气过滤和送风系统
❖ 空气净化调节系统向洁净室输送洁净空气，以 控制和调节洁净室内的温度、湿度、新空气量、 静压差、尘埃数、菌落数等环境参数。
❖ 个级别洁净度的空气净化处理一般应采取初效、 中效、高效过滤器三级过滤。独立的洁净车间 应采取集中式中央净化空气调节系统。
测试方法：兔法/鲎试剂法
医疗器械的灭菌
灭菌方法的选择
EO灭菌 注射器
❖洁净室内有局部排风装置时，其位置应设在工作室 气流的下风侧，以免气流短路。
洁净级别的设置
无菌医疗器械生产洁净室的洁净度等级，按洁
洁净净度室级空别气中尘的埃含最大尘允浓许数度，和个含/m菌3 量，微分生为物最四大个允等许数
级3100：00级100000级级、≥。3051.0500m000≥级50.、01m 000C沉F0U降10/菌皿级、
• 准备测试样品 • 建立灭菌相关参数 • 确定半周期 • 建立全周期灭菌参数
医疗器械的灭菌 — 环氧乙烷灭菌—灭菌确认
满载（2） 生物指示剂 1. 菌种：ATCC9372 2. 产品最难灭菌的位置（ISO11138-1） 3. 生物指示剂的数量： • 可用体积≤5m3，至少20个 • 可用体积大于5m3，小于10m3，每增加1m3，增加 2个BI • 可用体积大于10m3，每增加2m3，增加2个BI • Ⅰ号灭菌柜放置60个，Ⅱ号灭菌柜放置30个 4. 生物指示剂的接种量：≥106 5. 生物指示剂的D值： ≥2.5分钟 6. 测试结果可接受标准：所有BI培养均无生长
❖ 通过调整，使不同级别洁净室室内的空气静压差大于5 帕，与室外大气大于10帕，防止外界污染或交叉污染 从门或各种缝隙部位侵入洁净室内
空气过滤和送风系统
❖ 空气净化调节系统向洁净室输送洁净空气，以 控制和调节洁净室内的温度、湿度、新空气量、 静压差、尘埃数、菌落数等环境参数。
❖ 个级别洁净度的空气净化处理一般应采取初效、 中效、高效过滤器三级过滤。独立的洁净车间 应采取集中式中央净化空气调节系统。
测试方法：兔法/鲎试剂法
医疗器械的灭菌
灭菌方法的选择
EO灭菌 注射器
灭菌方法与生物指示剂45页PPT
重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
灭菌方法与生物指示剂
•
26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
•
27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
•
28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
•
29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
•
30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
灭菌方法与生物指示剂
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26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
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28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
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29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
消毒灭菌效果监测方法(部分)ppt课件
内窥镜消毒灭菌效果的生物监测
采样时间
消毒灭菌后 使用前
采样方法
监测部位为内镜的内腔面 用无菌注射器抽取10ml含有相应中和剂的洗脱液 从待检内镜的活检口注入内镜（使用蠕动泵）用无 菌试管从活检出口收集注入的液体2h内送检
合格标准
消毒内镜 细菌总数 ≤ 20 cfu/件
灭菌内镜 无任何细菌检出
遵循WS/T 313 中华人民共和国卫生部行业标准 《医务人员手卫生规范》
采样时间
手卫生后 接触病人或诊疗操作之前
采样方法
棉拭子法: 1、被检人员将双手伸出，五指并拢。 2、检查者取2支无菌棉试纸，并浸沾于含相应中和剂的无 菌洗脱液中。 3、取一支棉拭子在一只手手指屈面，从指根到指端往返 涂擦2次（一只手的涂擦面积约30cm2 ），并随之转动 采样棉拭子；按同样方法用另一支棉拭子涂擦另一只手。 4、剪去操作者手接触的部位，将2支棉拭子投入10ml含 相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。
化验单书写：科室、采样地点、被采人、采样人，采样时 间。
采样步骤
用棉拭子蘸取相应中和剂
双手的屈指面，从指跟到指端； 往返涂擦2次，同时转动棉签.（一只手一支棉试纸）
将手接触的部分折断，投入10ml含相应中和剂的试管中
合格标准
卫生手消毒： 外科手消毒：
细菌菌落总数≤10cfu/cm2 细菌菌落总数≤5cfu/cm2
医院感染监测内容
♦ 医院空气微生物学监测 ♦ 物体表面微生物学监测 ♦ 消毒剂微生物学监测 ♦ 医务人员手微生物学监测 ♦ 灭菌效果生物监测 ♦ 医疗器械消毒效果监测 ♦ 医疗用水的微生物学检测
医院空气微生物学监测
采样时间
消毒后 操作前
1、采用洁净技术净化空气的房间（Ⅰ） 洁净系统自净后 、操作前
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去热原验证时加大肠杆 菌内毒素(Escherichia coli endoxin)
短小芽孢杆菌孢子可用 于监控灭菌过程，但不 能用于灭菌辐射剂量的 建立
环氧乙烷灭菌
气态过氧化氢灭菌
用于滤膜孔径为0.22μm 的滤器
用于滤膜孔径为0.45μm
湿热灭菌法
指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、 过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、 核酸发生变性而杀灭微生物的方法。
我国及欧美药典都把SAL不得大于百万分之一 作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即 SAL≤10－6
灭菌工艺验证
❖ 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求, 通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。
❖ 物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据, 来估测一 个灭菌程序对微生物的致死性。
❖ 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是 否经过灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作 为物品是否达到灭菌的参考标志。
生物指示剂的选择
气体灭菌法
指用化学消毒剂形成的气体杀灭微生物 的方法。在充有灭菌气体的高压腔室内进行。
常用气体：环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等
环氧乙烷法
灭菌原理：强氧化，其分子作用于菌体后，能与 菌体蛋白、核酸和酶中的—COOH、—NH2、— SH、—OH等基团起反应，而使菌体死亡。
具有杀菌谱广，灭菌能力强的 特点，对微生物的繁殖体、芽 孢有较强的杀灭效果。
❖ 生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种 在产品溶液或相似溶液中进行验证, 是评判灭菌工艺杀灭 效果最直观有效的方法, 也是灭菌工艺验证必不可少的试 验。
常用的灭菌方法
➢ 湿热灭菌法 ➢ 干热灭菌法 ➢ 气体灭菌法 ➢ 辐射灭菌法 ➢ 过滤除菌法
不同灭菌方式不同的菌种种类的选择
灭菌方法
• 须保证物品灭菌后的SAL≤10-6 • 对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，
其SAL应≤10-12
适用范围
药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以 及其它遇高温和潮湿不发生变化或损坏的 物品
常用的生物指示剂
➢ 嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，NCTC 10 007、NCIMB 8157、 ATCC 7953 ) D值为1.5～3.0min
➢ 生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes， NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955 ） D值为0.4～0.8min
生物指示剂的选择
干热灭菌法
指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中， 利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的 方法。
NCTC 8594 NCIMB 8053 ATCC 7955
NCIMB 8058 ATCC 9372
短小芽孢杆菌 Bacillus pumilus
NCTC 10327 NCIMB 10692 ATCC 27142
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
NCTC 10073 ATCC 9372
气态过氧化氢法
❖ 是利用过氧化氢在低浓度的气体状态下比液体状 态更具杀孢子能力的优点，经生成游离的-OH， 用于进攻细胞成分，包括脂类、蛋白质和DNA， 达到完全灭菌的要求的一种技术。
应用：
隔离器的验证 新设备或灌装线的调整和认证 大型或组装设备的评估 未知气体分布动力学研究 含有多个装载配置的设备认证 设备中最难灭菌位置的日常检测
湿热灭菌法
干热灭菌法 辐射灭菌法 气体灭菌法
过滤除菌法
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus
生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
保藏号
NCTC 10007 NCIMB 8157 ATCC 7953
• 保证灭菌后的产品其 SAL≤10-6 • 干热过度杀灭后产品的 SAL应≤10-12
适用范围
耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品的 灭菌，如玻璃器具、金属制容器、纤维制品、 固体试药、液状石蜡等
常用的生物指示剂
枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis， NCIMB 8058、ATCC 9372 ) D值大于1.5min
生物指示剂 系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备
的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的 监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细 菌的孢子。
生物指示剂的形式
一定数量的孢子附着在惰性载体上， 如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等
孢子悬浮液密封于安瓿中
无菌保证水平
无菌保证水平 一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微 生物的概率低至某个可接受水平来表述，即SAL （sterility assurance level）。
概要
❖ 灭菌法和生物指示剂 ❖ 生物指示剂的形式 ❖ 无菌保证水平 ❖ 灭菌工艺验证 ❖ 常用灭菌方法 ❖ 制药工业常用的灭菌方法 ❖ 生物指示剂的使用 ❖ 孢子数测定
灭菌法和生物指示剂
灭菌法 系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物
杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下 降至预期的无菌保证水平的方法。
生物指示剂：嗜热脂肪芽胞杆菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，NCTC 10007、
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus st0007 NCIMB 8157 ATCC 7953 12980
缺陷假单胞菌
ATCC 19146
Pseudomonas diminuta
黏质沙雷菌
ATCC 14756
D值
备注
1.5-3.0min
0.4-0.8min
>1.5min 3kGy >2.5min
适用范围
• 塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固体药 料及医疗器械类固体器具等不能采用高温灭 菌的物品的灭菌
• 含氯的物品及能吸附环氧乙烷的物品则不宜 使用
常用生物指示剂
枯草芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus subtilis， NCTC 10073、NCIMB 8058、ATCC 9372 ) D值大于2.5min