实验1-显微镜的使用

实验一 油镜的使用

一、显微镜的结构 镜臂粗调旋扭

镜台调节旋扭光源调节旋扭

(开关)场光阑杆光源彩虹光阑瞳孔间距调节

目镜

物镜转换器

台下聚光器载物台

目镜

镜体

细调旋扭

镜简

二、显微镜的光通路与成象

光通路

虚象

三、油镜的原理

微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜(16mm ，10⨯)高倍物镜(4mm ，40-45⨯)和油镜

(1.8mm ，95-100⨯)三种。油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最大的。

使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n ＝1.52，与玻璃基本相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显

然减少，这样视野的照明度就减低了。

利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增大数值口径。因为显微镜的放大效能由其数值孔径决定的。所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)一半的正弦值，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：

NA=

2sin

α∙n 式中 NA=数值孔径

介质折射率=n

最大入射角，即镜口

=α 数值孔径的大小又是衡量一台显微镜分辨率强弱的依

据；分辨率是指显微镜能辨别物体两点间最小距离( D )的能

力，D 值越小分辨率越高。

分辨率（D ）=

NA 2λ=2

/sin 2αλn （NA=2sin α∙n ）

式中：λ=光波波长

由上述可知若n 值和α角越大则N·A 越大或光波波长越短，则显微镜的分辨力越大(图Ⅰ-2)。

一些物质的折射率（n ）：

水 1.33； 玻璃 1.52； 空气 1.0； 香柏油 1.515。

四、实验器材

1、仪器 显微镜；

2、材料 大肠杆菌、酿成酵母等标本片，香柏油，二甲苯，擦镜纸。

五、显微镜使用操作步骤

1、取镜

显微镜是光学精密仪器，使用时应特别小心。使用前检查各部零件是否完全合用，镜身有无尘土，镜头是否清洁。做好必要的清洁和调整工作。

2、调节光源

1) 将低倍物镜旋到镜筒下方，旋转粗调旋扭，使镜头和载物台距离约为0.5厘米左右。

2) 上升聚光器，使之与载物台表面相距1毫米左右。

3) 打开电源，调节光线强弱，直至视野内得到最均匀最适宜的照明为止。

一般染色标本油镜检查对，光度宜强，可将光圈开大，聚光器上升到最高；未染色标本，在低倍镜或高倍镜观察时，应适当地缩小光圈，下降聚光器，调整光源旋扭降低光亮度，否则光线过强不易观察。

3、低倍镜观察

低倍物镜(8⨯或10⨯)视野面广，焦点较深，易于发现目标、确定检查位置，故应先用低倍镜进行观察。操作步骤：

1) 先将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)，并将标本部位处于物镜的正下方、转动粗调旋扭，上升载物台使物镜至距标本约0.5厘米处。

2) 眼看目镜，慢慢旋转粗调节旋扭使载物台缓慢上升，至视野内出现物象后，改用细调节旋扭，上下微微转动，仔细调节焦距和照明，直至视野内获得清晰的物象，确定需进一步观察的部位。

3) 移动推动器。将所要观察的部位置于视野中心，准备换高倍镜观察。

4、高倍镜观察

将高倍物镜(40⨯)转至镜筒下方，转换物镜时从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞)。转动光源旋扭使亮度适中后，调细调旋扭获得清晰物象，再移动推动器选择最满意的镜检部位，将染色标本移至视野中央待油镜观察。

5、油镜观察

1) 用粗调旋扭降低载物台，将油镜转至镜筒正下方。在标本镜检部位滴上一滴香柏油。右手顺时针方向慢慢转动粗调旋扭，上升载物台，并及时从侧面注视使油浸物镜浸入油中，直到几乎与标本接触时为止(注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。

2) 左眼看目镜，右手反时针方向微微转动粗调旋扭，降下载物台(注意：此时只准下降载物台，不能向上调动)，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调旋扭，并移动标本直至标本物象清晰为止。

3) 如果向上转动粗调旋扭已使镜头离开油滴又尚未发现标本时，可重新按上述步骤操作直到看清物象为止。

4) 观察完毕，下降载物台，取下标本片。先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸沾少量二甲苯擦去镜头上油迹，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯。切忌用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头，可用绸布擦净显微镜的金属部件。

5) 将各部分还原，罩上镜套，然后放回原处。

6、注意事项

1、显微镜镜头的保护和保养

2、使用显微镜时应据不同的物镜而调节光线

六、实验报告

1、如何正确使用显微镜？

2、油镜使用为何需加油？

3、微生物细胞的显微观察与动植物细胞的显微观察有何区别？

4、微生物显微观察如何区分目标物体与非目标物体？

5、本次实验中有何收获、启发与教训？