第4章 抗体制药(三)PPT课件
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第六节 抗体诊断试剂
抗体诊断的理论基础是抗体与抗原之间 的特异性反应。 在体内可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬 和中和毒素等作用。 在血清学检验中，表现为凝聚。
免疫学的迅速发展使诊断技术不断更新，抗体用于 诊断，体现在三类诊断药物中： ① 血清学诊断中使用的抗体制剂 (体外诊断) ② 免疫标记用的抗体制剂 (体外诊断) ③ 体内导向诊断的抗体药物 (体内诊断)
优点：特异性高；缺点：每种抗原须单独制 备相应的荧光抗体。 （2）简接法：用荧光标记抗球蛋白抗体（荧光 第二抗体）来检测未知抗原。只需制备一种 荧光标记的抗体，即可用以检测多种抗原抗 体系统，敏感度比直接法高5～10倍。
免疫荧光（神经元） 免疫荧光显像系统
（二）免疫酶抗体诊断试剂
用酶标记来检测抗原，分为免疫酶染色（组比法） 和酶免疫测定两种类型。
放射免疫显像定位技术通过放射自显影，可以对病 原细胞 (如肿瘤)进行组织定位、显示肿瘤细胞转移 形成的病灶、观察抗体在血液中的功能半衰期、确 定肌体对抗体做出的不良反应等。
酶联免疫反应示意 酶标仪
间接法：用于检测血清中抗体 载体抗原＋ 抗体（待检血清）＋酶标抗抗体＋底物-→显色反应
夹心法：检测标本中抗原 载体抗体 ＋抗原（待检标本）＋ 酶标抗体（特异性）＋底物-→显色反应
ELASA（竞争法）
生物素-酶标抗生素蛋白系统抗体诊断试剂 （BAS-ELISA）
➢ 生物素-抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物 可作为一种指示剂，组成一个新的生物放 大系统。
（1）诊断试剂的制备：用HBsAg免疫豚鼠，获得抗 HBs血清，实质是含HBsAg抗体（HBsAb）的血清； 甲醛处理红细胞，与抗HBs血清混合，红细胞大量 吸附血清中的包括HBsAb在内的蛋白。待测样品 中有HBsAg时，发生凝聚。
（2）RPHA法测定HBsAg通常在V型血凝板上进行， 操作时应附有阴性、阳性和空白对照。
免疫荧光技术：
用异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC)、罗丹明 (Rhodamine)或藻红素等荧光色 素标记抗体，直接向组织切片或细胞悬液滴 染，在荧光显微镜下或用流式分光光度计 （流式细胞仪）观察。
1. 荧光抗体的制备
2. 免疫荧光测定方法 （1）直接法：采用荧光抗体直接与抗原反应。
免疫酶染色法用酶标记抗体，称为酶标抗体。测定 时酶标抗体与抗原发生特异性结合，发生组化反应， 产生有色物质，可在光学显微镜下直接观察。
常用辣根过氧化物酶 (horseradish peiroxidase， HRP)标记抗体，加入酶底物－二氨基联苯胺 (diaminobenzidine, DAB)。如果抗体与抗原结合， 底物将被分解，呈现棕褐色。
第六节 抗体诊断试剂
二、免疫标记用的抗体试剂
为了提高诊断的灵敏度，用放射性同位素、荧光 素或酶对抗体做标记，放大抗体—抗原反应的表象， 是免疫标记诊断的实质内容。
结合显微镜或电子显微镜技术，还能对抗原物质 作出组织内或细胞内的定位测定，除了诊断外，还 能为探讨发病机制提供有力的研究手段。
（一）荧光抗体诊断试剂
（1）用胶乳试剂测定HGG：①间接凝集法（不发生凝 集为阳性结果）；②直接凝集法（发生凝集为阳性 结果）
（2）胶乳的致敏方法：①物理吸附法；②化学交联法。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
4. 抗ABO血型系统血清
血型有多个系统，其中最重要的是ABO血型系统， 按人红细胞表面带有的A或B种凝集原来分型。
放射免疫（竞争法）
结合态的标记抗原（B）与游离态的标记抗原（F）
第六节 抗体诊断试剂
三、导向诊断药物
在体内直接诊断病原的抗体试剂被称为导向诊断药 物。
放射免疫显像定位技术是把特异性与病原细胞表面 抗原结合的抗体预先同重金属络合剂—二乙基三胺 五乙酸 (DTPA)耦联成Ab-DTPA，注入体内，“自动 寻的”与病原细胞结合；再注入In-113M（放射性核 素，铟），使其与DTPA络合。
酶免疫测定（ELA）是一种在液相内微量 待检抗原物质的定量测定方法。
➢ 酶联免疫吸附技术：ELISA 酶免疫测定在方法上的一个重大改进，
使抗原或抗体吸附在聚苯乙烯塑料等表面 上进行反应，大大简化了抗原抗体结合物 的分离过程。
用途广泛，敏感度高，既可定性也可 定量。
酶联免疫吸附试验――ELISA
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
血清学鉴定是指用已知抗体来鉴定未 知的抗原型，主要用于疾病的病原菌 诊断和血型鉴定。
常用的方法是凝集。 优点：简单快速，应用广泛，普及至
基层。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
1. 鉴定病原菌的抗体试剂（诊断血清）
（1）常用诊断血清的品种和用途 诊断病原菌或相关抗原的试剂包括各种 诊断血清、分群血清、分型血清、因子 血清等。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
3. 妊娠诊断试剂
孕期三个月的妇女血液和尿液中的人绒毛膜促性腺激 素(human chorionic gonadotrophin, HCG)处于高峰值。
测定体液中HGG的方法常用生物试验法、胶乳间接凝 集试验法、酶联免疫吸附测定法和放射免疫测定法等。
➢ 该法特异性强、结合稳定，在与抗体、酶、 荧光素等结合后不影响后者的生物活性， 可用于检测多种抗原抗体系统。
➢ 灵敏度：扩散试验 < 电泳试验 < 凝集试 验 < ELISA < BAS-ELISA、放射免疫分析 试验。
（三）放射免疫用抗体诊断试剂
放射免疫技术：
灵敏度最高的检测手段。诊断试剂设计中考虑的 是用放射性同位素131I和125I标记抗体，放射自显影 检测。 把同位素分析的高灵敏性与抗原抗体反应的特异性 两大特点结合起来。 在医学实践中可用放射性自显影法检测微量抗原物 质。
（2）诊断血清的制备：用病菌抗原免疫 动物，采血、离心分离得到血清。
（3）诊断方法：直接凝集反应，常用玻 片做定性试验，简便快速。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
2. 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的 反向被动血凝诊断试剂
用纯化的Hale Waihona Puke Baidu体致敏醛化血细胞测定相应抗原，称 为反向被动血凝试验(RPHA)。
抗体诊断的理论基础是抗体与抗原之间 的特异性反应。 在体内可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬 和中和毒素等作用。 在血清学检验中，表现为凝聚。
免疫学的迅速发展使诊断技术不断更新，抗体用于 诊断，体现在三类诊断药物中： ① 血清学诊断中使用的抗体制剂 (体外诊断) ② 免疫标记用的抗体制剂 (体外诊断) ③ 体内导向诊断的抗体药物 (体内诊断)
优点：特异性高；缺点：每种抗原须单独制 备相应的荧光抗体。 （2）简接法：用荧光标记抗球蛋白抗体（荧光 第二抗体）来检测未知抗原。只需制备一种 荧光标记的抗体，即可用以检测多种抗原抗 体系统，敏感度比直接法高5～10倍。
免疫荧光（神经元） 免疫荧光显像系统
（二）免疫酶抗体诊断试剂
用酶标记来检测抗原，分为免疫酶染色（组比法） 和酶免疫测定两种类型。
放射免疫显像定位技术通过放射自显影，可以对病 原细胞 (如肿瘤)进行组织定位、显示肿瘤细胞转移 形成的病灶、观察抗体在血液中的功能半衰期、确 定肌体对抗体做出的不良反应等。
酶联免疫反应示意 酶标仪
间接法：用于检测血清中抗体 载体抗原＋ 抗体（待检血清）＋酶标抗抗体＋底物-→显色反应
夹心法：检测标本中抗原 载体抗体 ＋抗原（待检标本）＋ 酶标抗体（特异性）＋底物-→显色反应
ELASA（竞争法）
生物素-酶标抗生素蛋白系统抗体诊断试剂 （BAS-ELISA）
➢ 生物素-抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物 可作为一种指示剂，组成一个新的生物放 大系统。
（1）诊断试剂的制备：用HBsAg免疫豚鼠，获得抗 HBs血清，实质是含HBsAg抗体（HBsAb）的血清； 甲醛处理红细胞，与抗HBs血清混合，红细胞大量 吸附血清中的包括HBsAb在内的蛋白。待测样品 中有HBsAg时，发生凝聚。
（2）RPHA法测定HBsAg通常在V型血凝板上进行， 操作时应附有阴性、阳性和空白对照。
免疫荧光技术：
用异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC)、罗丹明 (Rhodamine)或藻红素等荧光色 素标记抗体，直接向组织切片或细胞悬液滴 染，在荧光显微镜下或用流式分光光度计 （流式细胞仪）观察。
1. 荧光抗体的制备
2. 免疫荧光测定方法 （1）直接法：采用荧光抗体直接与抗原反应。
免疫酶染色法用酶标记抗体，称为酶标抗体。测定 时酶标抗体与抗原发生特异性结合，发生组化反应， 产生有色物质，可在光学显微镜下直接观察。
常用辣根过氧化物酶 (horseradish peiroxidase， HRP)标记抗体，加入酶底物－二氨基联苯胺 (diaminobenzidine, DAB)。如果抗体与抗原结合， 底物将被分解，呈现棕褐色。
第六节 抗体诊断试剂
二、免疫标记用的抗体试剂
为了提高诊断的灵敏度，用放射性同位素、荧光 素或酶对抗体做标记，放大抗体—抗原反应的表象， 是免疫标记诊断的实质内容。
结合显微镜或电子显微镜技术，还能对抗原物质 作出组织内或细胞内的定位测定，除了诊断外，还 能为探讨发病机制提供有力的研究手段。
（一）荧光抗体诊断试剂
（1）用胶乳试剂测定HGG：①间接凝集法（不发生凝 集为阳性结果）；②直接凝集法（发生凝集为阳性 结果）
（2）胶乳的致敏方法：①物理吸附法；②化学交联法。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
4. 抗ABO血型系统血清
血型有多个系统，其中最重要的是ABO血型系统， 按人红细胞表面带有的A或B种凝集原来分型。
放射免疫（竞争法）
结合态的标记抗原（B）与游离态的标记抗原（F）
第六节 抗体诊断试剂
三、导向诊断药物
在体内直接诊断病原的抗体试剂被称为导向诊断药 物。
放射免疫显像定位技术是把特异性与病原细胞表面 抗原结合的抗体预先同重金属络合剂—二乙基三胺 五乙酸 (DTPA)耦联成Ab-DTPA，注入体内，“自动 寻的”与病原细胞结合；再注入In-113M（放射性核 素，铟），使其与DTPA络合。
酶免疫测定（ELA）是一种在液相内微量 待检抗原物质的定量测定方法。
➢ 酶联免疫吸附技术：ELISA 酶免疫测定在方法上的一个重大改进，
使抗原或抗体吸附在聚苯乙烯塑料等表面 上进行反应，大大简化了抗原抗体结合物 的分离过程。
用途广泛，敏感度高，既可定性也可 定量。
酶联免疫吸附试验――ELISA
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
血清学鉴定是指用已知抗体来鉴定未 知的抗原型，主要用于疾病的病原菌 诊断和血型鉴定。
常用的方法是凝集。 优点：简单快速，应用广泛，普及至
基层。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
1. 鉴定病原菌的抗体试剂（诊断血清）
（1）常用诊断血清的品种和用途 诊断病原菌或相关抗原的试剂包括各种 诊断血清、分群血清、分型血清、因子 血清等。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
3. 妊娠诊断试剂
孕期三个月的妇女血液和尿液中的人绒毛膜促性腺激 素(human chorionic gonadotrophin, HCG)处于高峰值。
测定体液中HGG的方法常用生物试验法、胶乳间接凝 集试验法、酶联免疫吸附测定法和放射免疫测定法等。
➢ 该法特异性强、结合稳定，在与抗体、酶、 荧光素等结合后不影响后者的生物活性， 可用于检测多种抗原抗体系统。
➢ 灵敏度：扩散试验 < 电泳试验 < 凝集试 验 < ELISA < BAS-ELISA、放射免疫分析 试验。
（三）放射免疫用抗体诊断试剂
放射免疫技术：
灵敏度最高的检测手段。诊断试剂设计中考虑的 是用放射性同位素131I和125I标记抗体，放射自显影 检测。 把同位素分析的高灵敏性与抗原抗体反应的特异性 两大特点结合起来。 在医学实践中可用放射性自显影法检测微量抗原物 质。
（2）诊断血清的制备：用病菌抗原免疫 动物，采血、离心分离得到血清。
（3）诊断方法：直接凝集反应，常用玻 片做定性试验，简便快速。
第六节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体试剂
2. 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的 反向被动血凝诊断试剂
用纯化的Hale Waihona Puke Baidu体致敏醛化血细胞测定相应抗原，称 为反向被动血凝试验(RPHA)。