无菌培养基灌装验证方案

验证方案

1、目的：对生产部制剂车间的灌装机进行培养基无菌灌装试验,通过灌装后的产

品污染程度检测灌装工艺能否保证产品的无菌。

2、范围：生产部制剂车间的灌装生产线。

3、责任：

3.1验证小组

3.1.1设计、组织和协调验证试验。

3.1.2准备、检查和批准验证方案。

3.1.3准备验证报告并且流转批准。

3.1.4评估所有的测试结果。

3.1.5完成此文件规定的验证报告。

3.1.6验证小组成员名单

3.2生产部

3.2.1对灌装车间进行清扫、消毒，保证环境清洁。

3.2.2操作灌装机。

3.2.3按照规定的程序进行培养基灌装。

3.2.4进行日常清洗、维护。

3.3QA

3.3.1取样。

3.3.2进行目检。

3.3.3进行环境监测。

3.3.4检查和批准验证方案和报告。

4、描述

制剂车间使用x公司的灌装流水线，包括：洗瓶机、隧道烘箱、灌装机、轧盖机，y公司的冻干机进行冻干。

5、程序

5.1使用的设备及材料

5.1.1洗瓶机

5.1.2隧道烘箱

5.1.3灌装机

5.1.4冻干机

5.1.5灌装材料

5.1.5.1瓶子

5.1.5.2胶塞

5.1.5.3铝盖

5.1.6培养基

5.1.7菌种

5.1.7.1枯草杆菌(Bacillus Subtilis) ATCC 6633 5.1.7.2白色念珠菌(Candida alblcans) ATCC 10231 5.1.7.3厂房环境分离菌

5.2培养基准备

5.2.1在10L血清瓶中加入2L的热注射用水，再加入240g胰蛋白胨大豆肉汤

充分搅拌，等溶解后再加入6L的热注射用水，整个培养基量为8L。5.2.2将配制好的培养基放到高压蒸汽灭菌柜中121℃灭菌30分钟，灭菌后取

出血清瓶，从瓶中取4瓶（50ml/瓶）作为阴性对照，其中2瓶于32±2℃

培养14天，另外2瓶于23±2℃培养14天。观察有无微生物污染。5.3培养基无菌灌装

5.3.1准备无菌的灌装器具(针、硅管、等等)，联接到灌装机上。硅管一头放

入灭菌培养基中。

5.3.2用的瓶子，胶塞和铝盖按标准操作规程（P-SOP-048,P-SOP-049）进行洗

涤，灭菌。

5.3.3按标准操作规程（P-SOP-051）进行液量调节，按标准操作规程

（P-SOP-050）进行灌装，每瓶灌装2ml灭菌培养基。

5.3.4使用2个针头进行灌装，每瓶2ml。灌装的速度为70瓶／分钟。

5.3.5灌装的总瓶数为3000瓶以上，全部为半压塞。

5.3.6灌装时将瓶子按顺序放箱中，给箱编上号，以便能够追查出受污染的瓶

子灌装时状态。

5.3.7灌装结束后，将半压塞的培养基转移至冻干机中，在机内压塞。

5.3.8加塞结束后将瓶子转移至轧盖间进行轧盖。

5.3.9将灌装好的瓶子倒置于32±2℃培养7天，然后在23±2℃培养7天。

5.4环境检查

5.4.1 按照100级和10,000级洁净级别检查项目实施，下面为实施项目：5.4.1.1浮游菌测定

5.4.1.1.1在灌装过程中的关键操作点采样。

5.4.1.1.2使用仪器 : FKC-1型浮游空气尘菌采样器()。

5.4.1.1.3参照SOP(QA-SOP-112)《浮游菌测定标准操作规程》进行检测。

5.4.1.2尘埃粒子测定

5.4.1.2.1在灌装过程中的关键操作点采样。

5.4.1.2.2仪器：光散射尘埃粒子计数器（）

5.4.1.2.3参照SOP(QA-SOP-106)《尘埃粒子测定标准操作规程》检测。

5.4.1.3表面菌测定

5.4.1.3.1表面菌采用RODAC培养皿进行测定

5.4.1.3.2在灌装中对各测试点进行取样，特别是在离灌装针头30cm以内的区

域。

5.4.1.3.3 对无菌服的袖子和胸部以及操作人员的手套取样。

5.4.1.3.4 参照SOP(QA-SOP-108)《表面菌测定标准操作规程》进行检测。

5.4.1.4 沉降菌

5.4.1.4.1培养皿：营养肉汤琼脂培养平板（φ90）。

5.4.1.4.2参照SOP(QA-SOP-107)《沉降菌测试标准操作规程》进行检测。

5.5灌装培养基灵敏度试验

5.5.1从灌装的培养基中每1000瓶抽取20瓶，从每箱中均匀取样，20瓶接种

0.1ml(含约100CFU)枯草杆菌(Bacillus Subtilis) ATCC 6633，20瓶接

种(0.1ml约含100CFU)白色念珠菌(Candida alblcans) ATCC 10231。

5.5.2剩下的20瓶用于接种0.1ml(含约100CFU)厂房检查分离菌。

5.5.3将接种枯草杆菌及厂房环境分离菌的瓶子放置到32±2℃的恒温箱培养

7天，将接种白色念珠菌的瓶子放置到23±2℃的恒温箱培养7天，观察

菌的生长情况。

6、灌装培养基的培养及计算污染度(%)

6.1 培养基倒置到32±2℃的恒温箱内培养7天。然后在23±2℃的培养箱中培

养7天。

6.2 进行周期性的检查(7天一次)，检查受污染的瓶子数在其箱上编上号并记

录。

6.3 假如受污染的瓶子有破损，在计算污染度时应将其排除在外。

6.4 未受到损伤的瓶子培养共14天。

6.5 污染度计算式

染菌的瓶数（因瓶子破损染菌的除外）

污染度（%）= ----------------------------------×100%

灌装总瓶数－破损的瓶数

7、合格标准

7.1 灭过菌的培养基的阴性对照结果合格（无菌生长）。

7.2 培养基灵敏度试验中至少有50%的瓶中有明显的微生物生长。

7.3 环境检测符合以下基准：