饲料中蛋白质含量测定方法的比较
饲料中真蛋白检测
蛋白质的检测方法多于17种。
目前主流、常用的蛋白质检测方法有三种：凯氏定氮法、杜马斯燃烧法等，这些方法均有不同标准予以支撑。
然而2008年，三聚氰胺事件的爆发，使现行的蛋白质检测方法多被诟病。
主要原因是凯氏定氮法和杜马斯燃烧法主要是检测氮元素的含量，然后乘以一定的系数，测算蛋白质的含量。
这种方法计算结果是粗蛋白的含量，不能排除非蛋白氮物质的影响，造成蛋白质含量虚高。
然而由于其低成本，以及检测方法成熟等特点，仍在被广泛使用。
GB/T6432-1994饲料中粗蛋白测定方法
原理：样品消解转化成氨气被吸收，然后滴定测定出总氮元素含量，最后转化成蛋白质含量。
GB/T24318-2009杜马斯燃烧法
原理：样品经完全燃烧后转变为氮气，后经测定出总氮含量后转化为蛋白质含量。
GB/T18868-2002近红外测定法
原理：利用样品中蛋白质组分的特征红外吸收强度来测定蛋白质含量。
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饲料中粗蛋白含量不同检测方法的比较
饲料中粗蛋白含量不同检测方法的比较作者：邢磊王仁华来源：《江西饲料》 2015年第3期邢磊1王仁华2*（1.江西省兽药饲料监察所南昌 330029；2.江西农业大学动物科学技术学院南昌330045）摘要：饲料中粗蛋白的测定方法很多，本文用常量蒸馏测定法和半微量蒸馏测定法同时对饲料中粗蛋白进行测定，并且对实验结果进行分析比较，比较结果表明，两种方法并无明显差异，因此在饲料粗蛋白检测工作中，两种方法可相互替代。
关键词：粗蛋白；常量蒸馏测定法；半微量蒸馏测定法中图分类号：S816.17文献标识码：A文章编号：1008-6137（2015）03-0001-02引言国标法测定粗蛋白用仪器介绍了两种饲料消化的方法，一个是常量法，一个是半微量法，其实常量法和半微量法是测定物质含量常用的两种方法，但是两者相比，都有各自的优缺点。
常量法操作简单，但是耗费的试剂多，而半微量法较大程度减少试剂的用量，有利于保护实验人员的安全。
目前这两种检测方法的比较还少见报到，本实验将就这个问题进行探究。
1材料和方法1.1 试剂硫酸（化学纯）、氢氧化钠（化学纯）、硼酸（化学纯）、混合指示剂、高效凯式定氮催化片、盐酸标准溶液（0.2mol/L）、硫酸铵（分析纯）、硼酸吸收液。
1.2 仪器设备样品粉碎机、分样筛（孔径0.45mm）、电子分析天平、消化炉、通风柜、酸式滴定管、凯式烧瓶、凯式蒸馏装置、锥形瓶（100mL）、容量瓶（100mL）、消煮管（250mL）。
1.3 实验样品中猪配合料，乳猪配合料，酒糟粉，鱼粉，草粉。
2 试验原理2.1 半微量蒸馏凯式定氮法饲料样品和浓硫酸在催化剂作用下加热消化，蛋白质被分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水而逸出，有机氮转化为氨，结合硫酸成为硫酸铵。
取15%的消化液，加碱蒸馏以让氨蒸出，硼酸吸收后再滴定，根据标准酸的消耗量计算蛋白质含量。
其中包括消化、蒸馏、吸收和滴定四个步骤。
2.2 常量蒸馏凯式定氮法饲料样品和浓硫酸在催化剂作用下加热消化，蛋白质被分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水而逸出，有机氮转化为氨，结合硫酸成为硫酸铵。
饲料中粗蛋白的测定
根据蛋白质的物理、化学性质直接测定蛋白质含量。
双缩脲法 Folin—酚试剂法（Lowry法） 紫外吸收法（最常见的280nm） 考马斯亮兰法（Bradford法）－染料结合法
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一、蛋白质的测定方法
2．间接法
通过测定样品中总含氮量推算蛋白质含量（根据：每种蛋白质的含 氮量是恒定的，N×6.25）。
（2）CuSO4的作用 ① 催化剂，加速氧化分解；
2CuSO4=CuSO4+SO2↑+O2 C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+O2↑ Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2↑ 此反应不断进行，待有机物被消化完后，不再有硫酸亚铜（褐色）生成，溶 液呈现清澈的蓝绿色。 ② 可以指示消化终点的到达； ③ 下一步蒸馏时作为碱性反应（加入碱量）的指示剂。
最后关闭电源，绝不能先关闭电源，否则吸收液 将发生倒吸！
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二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
3. 测定步骤 第二步 氨的蒸馏
注意事项：
凯氏定氮蒸馏过程中，要求整套装置呈密闭状态，蒸馏前应检查定氮仪各导 管间的连接处是否密闭，以免产生泄露；
测定样品前应清洗蒸馏装置，即用蒸馏水空蒸一次或数次；
蒸馏后立即清洗蒸馏器。蒸馏完毕后，移取热源，夹紧蒸汽发生器和收集器 间的橡皮管，此时由于收集器温度突然下降，即可将反应室残液吸至收集器。
蒸馏时，火力稳定，蒸汽发生要均匀充足，蒸馏中途不得停火断汽，否则发 生倒吸。加碱要足量（反应室液体呈深蓝色或褐色）并且碱液不能污染冷凝 管及接收瓶。
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K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3
蛋白质含量测定方法及优缺点
蛋白质含量测定方法及优缺点嘿，咱先说说凯氏定氮法吧！这方法就是把蛋白质里的氮给测出来，然后再换算成蛋白质含量。
步骤呢，先把样品消解，让蛋白质里的氮变成铵盐，再用碱把铵盐变成氨气，用硼酸吸收氨气，最后用酸滴定硼酸里的氨。
哇塞，听起来是不是超厉害？注意事项嘛，消解的时候一定要小心，别让样品溅出来烫伤自己。
这方法安全不？只要操作得当，还是挺安全的。
稳定性也不错，只要仪器状态好，结果就比较准。
那它应用场景可多了去了，像食品检测、饲料分析啥的都能用。
优势就是比较经典，大家都认可。
比如说检测牛奶的蛋白质含量，用凯氏定氮法就很靠谱，结果准确得很呢！再讲讲双缩脲法。
这方法是利用蛋白质和双缩脲试剂反应产生颜色变化来测含量。
步骤就是把样品和双缩脲试剂混合，然后看颜色深浅。
简单吧？注意不能有干扰物质哦，不然颜色就不准了。
安全性那是杠杠的，没啥危险。
稳定性也还行，只要试剂没问题。
应用场景呢，像生物制品检测就常用。
优势就是快速方便呀！想象一下，这就像你一下子找到了宝藏，又快又准。
比如检测蛋白质溶液，双缩脲法几分钟就能出结果，多爽！最后说说考马斯亮蓝法。
这个是靠蛋白质和考马斯亮蓝结合变色来测。
把样品加进考马斯亮蓝溶液里，颜色一变就知道含量了。
注意溶液的浓度要合适哦。
安全得很，没啥风险。
稳定性也不错。
应用在生物化学实验里很多。
优势就是特别灵敏。
这就好比你有一双超级厉害的眼睛，啥都能看得清清楚楚。
比如检测蛋白质提取物，考马斯亮蓝法能检测出微量的蛋白质，厉害吧！总之，不同的蛋白质含量测定方法都有自己的特点和优势，咱得根据实际情况选择合适的方法，这样才能准确又高效地测出蛋白质含量。
两种定氮仪测定饲料粗蛋白含量的比较
以 ｇ表 示 的 氮 的 质 量 ；． ５ 氮 换 算 成 蛋 白质 的 平 均 系 数 。 ６２ ：
（） 复性 ： 个试样取两个平行样进 行测定 ， ２重 每 以其 算 术 平 均
１ ２ 实 验 方 法 ．
《 海 畜 牧 兽 医 通 讯 》 ２ １ 年 第 ３期 上 ０２
值 为结 果 ， 当粗 蛋 白含 量 在 ２ 以上 时 ， 许相 对 偏 差 １ ； ５ 允 当粗 蛋 白含 量 在 １ ～ ２ 之 间 时 ， 许 相 对 偏 差 ２ ； Ｏ ５ 允 当 粗 蛋 白 含 量 在 １ 以 下 时 ， 许 相 对 偏 差 ３ 。 ０ 允 １ ２ ７ 蒸 馏 步 骤 正 确 性 的 检 验 ： ０ ２ｇ硫 酸 铵 代 替 试 样 。 ．． 用 ．
１ Ｏ目筛 ， 入 密 封 袋 妥 善 保 存 备 用 。 装
１ ２ ３ 试 样 的 消 煮 ： 确 称 取 ０ ５ １ ｇ样 品 ， 确 至 ． ． 准 ． ～ 准 ０ ０ ０ ， 于 凯 氏烧 瓶 中 ， 入 ６ ４ ｇ混 合 催 化 剂 ， 试 样 ． ０ ２ｇ 置 加 ． 与 混 合 均 匀后 加入 １ 浓 硫 酸 和 ２粒 玻 璃 珠 ， 于 相 应 的 消 ２ｍｌ 置 化炉中加热 ， 样品焦化完全 、 沫 消失 ， 大火力烧 至瓶 中 待 泡 加 液 体 变 成 清 亮 、 明的 蓝 绿 色 之 后 继 续 消 化 ２ ｈ 透 。 １ ２ ４ 蒸 馏 与 滴 定 ： １ ＫＤ 一 ０ Ｆ 自动 定 氮 仪 ： 试 样 消 ．． （） Ｎ １３ 将 煮 液 冷 却 ， 带 消 化 液 的管 子 插 在 蒸 馏 装 置 上 ， 意 密 封 ， 将 注 以
一
二
一 ×
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×１ ０ ０％
半微量蒸馏法测定饲料中粗蛋白质含量要点
半微量蒸馏法测定饲料中粗蛋白质含量要点半微量蒸馏法是一种用于测定饲料中粗蛋白质含量的常用方法。
以下是该方法的要点：
1.准备试样：将饲料样品粉碎，并筛出细粉末。
2.加入试剂：将约0.5克的样品加入蒸馏瓶中，再加入20毫升硫酸钾钠溶液，搅拌均匀。
3.蒸馏测定：将蒸馏管插入瓶口，加20毫升蒸馏水，加热至沸腾，直至水量减少至5毫升左右。
然后，将蒸馏管取出，再加入20毫升蒸馏水，重复以上步骤，直到蒸馏合计150毫升左右。
最后，将蒸馏瓶中的溶液转移到达克罗氏瓶中。
4.酸对比滴定：将聚丙烯腈过滤膜过滤液转移到试管中，用试剂滴定到颜色转变为浅红色为止，并记录滴定所用的试剂体积。
5.计算粗蛋白质含量：根据试剂所含氮的浓度以及试剂滴定所用的体积，计算样品中粗蛋白质的含量。
需要注意的是，半微量蒸馏法测定的是饲料中总氮含量，因此需要将结果乘以约6.25才能得出粗蛋白质含量。
同时，该方法只适用于燕麦、玉米等谷类饲料，对于高粱、豆类饲料等不适用。
饲料分析与检测实验：饲料中粗蛋白质的测定
实验三、饲料中粗蛋白质的测定【学习目标】掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并能用此方法测定饲料中粗蛋白质的含量。
一、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都转变为 (NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据氮含量再乘以系数(通常为 6.25)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：催化剂1.2CH3CHNH2COOH+13H2SO (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O加热2.(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3↑+2H2O+Na2SO43.4H3BO3+NH3 NH4HB4O7+5H2O4.NH4HB4O7+5H2O+HCL NH4CL+4H3BO3系数6.25是根据饲料蛋白质平均含氮量为16.0%而来的，而实际上，各种样本的蛋白质种类不同，含氮量有差异，变动为14.7～19.5%之间，故一般饲料换算系数用6.25，已确定的最好用实际系数。
为方便使用，将已知几种饲料的系数介绍如下：肉类6.25，玉米6.00，小麦、燕麦、黑麦、大豆、箭舌豌豆、蚕豆5.70，牛奶及制品6.28，坚果及油饼类5.30。
二、仪器设备1.样品粉碎机 40目分样筛；2.分析天平感量0.0001g；3.电子天平感量0.0001g；4.工业天平感量0.01g；5.六联电炉 6×800-1000W；6.半微量凯氏定氮仪或改良式半微量凯氏定氮仪(图1、图2)；7.酸式滴定管 25.0ml或50.0ml；8.凯氏烧瓶 100.0ml；9.烧杯 250.0ml；10.三角瓶 150.0ml；11.容量瓶 100.0ml；12.移液管 10.0ml；13.量筒 10.0ml、25.0ml。
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法玉米是世界上重要的粮食作物之一，富含蛋白质、淀粉和脂肪等营养成分。
测定玉米中蛋白质含量的技术方法对于粮食质量评价、饲料配方和食品加工等领域具有重要意义。
以下将介绍几种常用的测定玉米蛋白质含量的技术方法。
一、凯氏法凯氏法是测定玉米中蛋白质含量的传统方法，其原理是利用氢氧化钠与蛋白质中的氨基酸反应生成氨。
首先将玉米样品加入氢氧化钠溶液中，通过加热，使蛋白质分解并释放出氨。
然后用酸滴定剂滴定生成的氨，根据滴定所需的酸滴定剂的体积，计算出蛋白质含量。
二、真皮法真皮法是一种利用纳米技术测定蛋白质含量的方法。
它利用尼尔菲洛蓝与蛋白质形成蓝色络合物，并通过比色法测定蛋白质的含量。
首先将玉米样品与尼尔菲洛蓝溶液混合后，反应一定时间，然后通过紫外可见光谱仪测定其吸光度值，根据标准曲线计算出蛋白质含量。
三、光谱法光谱法是一种非破坏性的测定蛋白质含量的方法。
它利用近红外光谱技术，通过测定与蛋白质含量相关的特征光谱，来推测样品中的蛋白质含量。
首先采集一系列样品的近红外光谱，然后建立蛋白质含量与光谱之间的定量关系模型。
最后使用该模型预测其他样品的蛋白质含量。
四、气相色谱法气相色谱法是一种测定玉米中蛋白质含量的分析方法。
它利用气相色谱仪将样品中蛋白质分解为氨基酸，并通过气相色谱柱进行分离。
分离后，通过检测各氨基酸的峰面积或峰高，可以计算出样品中蛋白质的含量。
测定玉米中蛋白质含量的技术方法有很多种，包括传统的凯氏法、尼尔菲洛蓝法，以及新兴的光谱法和气相色谱法等。
根据实际需求和条件选择合适的方法，能够为玉米的生产和加工提供科学依据。
饲料中粗蛋白测定的方法
算成蛋 白质的平均系数。滴定使用 的盐酸标准溶液
浓硫酸 ，加入 ６滴 ６ ０ ％高氯酸 ，以电阻丝消煮 ２ 分 钟， 冷却后再加入 ４ 滴６ ０ ％高氯酸 ， 反复消煮 ５次 ， 后３ 次高氯酸加入量依次为 ３ 滴、 ２ 滴、 １ 滴。溶液颜 色逐渐变浅 ， 直至无色透明。定容至 １ ０ ０毫升 。向 Ｂ
剂法 这两 种 常用 方法 ， 供 参考 。
塞 ，再 加 １ ０毫 升浓 度 为 ４ ０ ％的氢 氧 化钠 水 溶液 ， 小
心提起玻璃塞使之流人反应室 ， 将玻璃塞塞好 ， 且在
人口 处加水密封 ， 防止漏气。蒸馏 ４ 分钟降下锥形瓶 使冷凝管末端离开吸收液面 ， 再蒸馏 １ 分钟 ， 用蒸馏 水冲洗冷凝管末端 ， 洗液均流入锥形瓶内， 然后停止 蒸馏 。对两组样品及空 白分别重复此操作。 蒸馏步骤的检验 。精确称取 ０ ． ２ 克硫酸铵 ， 代替
测定 饲料 中粗蛋 白含量一般使用凯 氏定氮法 ， 其原理是 在催化剂作用下 ， 用硫酸破坏有机物 ， 使 含 氮物转化 成硫酸铵 ， 再加入强碱进行蒸馏使氨逸出 ， 用硼酸 吸收后 ， 再用酸滴定 ， 测出氮含量 ， 从而计算 出粗蛋 白含量 。通 过对 ２ ０ １ ２年产 的一 份 玉米样 品的 检验 ，来 比较分析高氯酸 一 硫酸消化法和混合催 化
试 样 ，按 蒸馏 步 骤进 行 操 作 ，测 得 硫酸 铵 含 氮量 为 ２ １ ． １ ９±０ ． ２ ％， 否 则应 检查 加 碱 、 蒸 馏 和滴 定各 步骤 是 否 正确 。蒸馏 后 的 吸收 液 立 即用 ０ ． ０ ｌ 摩尔 ／ 升盐 酸 标 准溶 液滴 定 ， 溶 液 由蓝绿 色 变成灰 红 色为终 点 。
为， Ａ１组 ０ ． ５ ０ ０ ８克 ， Ａ ２组 ０ ． ５ ０ ０ ２克 ， Ａ ３组 ０ ． ５ ０ ０ ６
饲料蛋白质质量的评定方法
饲料蛋白质质量的评定方法蛋白质质量的评定已经历了一百多年的历史，方法较多。
现首先简要介绍几种有代表性的或目前还有一定意义的评定方法，然后重点对目前较流行的可消化（可利用）氨基酸及瘤胃降解与非降解蛋白进行介绍。
( 一 ) 粗蛋白质 (Crude Protein ，缩写 CP) 粗蛋白是使用较早的蛋白质质量评定指标，仅能反应饲料或饲粮总含氮物的多少。
( 二 ) 可消化粗蛋白质 (Digestible Crude Protein ，缩写DCP) 饲料可消化粗蛋白质可由其粗蛋白质含量乘以粗蛋白消化率而得。
同一种动物对不同饲料蛋白质的消化率不同，不同的动物对同一饲料蛋白质的消化率也不完全相同。
饲料可消化蛋白质可粗略地反映饲料蛋白质的质量。
( 三 ) 蛋白质的生物学价值 (Biological Value ，缩写 BV) 生物学价值指动物利用的氮占吸收氮的百分比，即：食入氮 -( 粪氮 + 尿氮 )BV ＝──────────────× 100%食入氮 - 粪氮以上公式所得的 BV 值称表观生物学价值。
从粪氮中扣除来自内源的代谢粪氮 (MFN) ，从尿氮中扣除非饲料来源的内源尿氮 (EUN) ，则可计算出真生物学价值 (TBV) ：食入氮 -(粪氮 -MFN)-(尿氮 -EUN)TBV ＝─────────────────× 100%食入氮 -( 粪氮 -MFN)蛋白质的 BV 值愈高，说明其质量愈好。
饲料蛋白质的 BV 值一般在 50-80 范围内。
( 四 ) 净蛋白利用率 (Net Protein Utilization ，缩写 NPU) 净蛋白利用率是指动物体内沉积的蛋白质或氮占食入的蛋白质或氮的百分比，即：沉积氮 (CP)NPU ＝──────× 100 或 NPU ＝ BV ×氮 (CP) 的消化率食入氮 (CP)最初， NPU 是用食入含氮饲粮 ( 或饲料 ) 时机体的含氮量减去食入无氮饲粮 ( 或饲料 ) 时机体含氮量的差，再除以食入氮而得。
4.7饲料中粗蛋白质含量测定 课件(共23张PPT)《动物营养与饲料》同步教学(中国农业出版社)
饲料中粗蛋白质含量测定
1 检测分析依据 2 检测分析原理 3 检测试剂材料 4 检测仪器设备 5 检测分析步骤 6 检测数据处理 7 检测清场工作
规定了测定饲料中粗蛋白质的凯氏定氮法
GB/T 6432-2018
适用范围
适用于饲料原料及饲料产品中粗蛋白质 的测定
方法广泛应用于粗蛋白质的检测
试样在催化剂的作用下，经硫酸消解，含氮 化合物转化成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼 酸吸收，再用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含 量，乘以6.25，计算出粗蛋白质含量。
硫酸铜的作用
（1）催化作用：加速有机物的氧化分解。 硫酸铜的作用机理如下： C+ 2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+CO2↑ Cu2SO4+2Ｈ2SO4 =2CuSO4 +SO2+2H2O
（2）消化终点指示剂：蓝绿色澄清透明 （3）做蒸馏时碱性指示剂
分析纯试剂 水：符合GB/T6682中规定的三级水
粉碎机
0.42mm孔径分析筛
吸量管 移液管
容量瓶
烧杯
1ml 3支
2ml 1支
5ml 2支
10ml 1支
20ml 1支
10ml 大肚移液管 1支
50ml 8个
100ml 2个
1000ml 2个 （透明棕色各一）
50ml 1个 500ml 4个 2000ml 1个
几种蛋白质含量测定方法的比较
几种蛋白质含量测定方法的比较蛋白质含量测定方法，是生物化学【摘要】：研究中最常用、最基本的分析之一。
目前常用的方法有凯氏定氮法、双缩脲法(Biuret)、紫外吸收法、考马斯亮蓝法（Bradford），Folin—酚试剂法（Lowry）杜马斯燃烧法。
其中Bradford 法灵敏度颇高，比紫外吸收法灵敏10～20 倍,比Biuret法灵敏100 倍以上。
凯氏定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
过去Folin—酚试剂法法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以在本公司订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
测定农产品中全氮的凯氏定氮法在许多国家已被杜马斯然烧定氮法所代替，杜马斯燃烧法是基于在高温下(大约900 ℃），通过控制进氧量、氧化消解样品的原理而进行氮测定的。
这6种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，每种方法都有其优缺点，在选择方法时应考虑：⑴实验对测定所要求的灵敏度和精确度；⑵蛋白质的性质；⑶溶液中存在的干扰物质；⑷测定所要花费的时间【关键词】：凯氏定氮法双缩脲法紫外吸收法考马斯亮蓝法Folin—酚试剂法杜马斯燃烧法一、凯氏定氮法原理凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定4 个过程。
其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。
然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。
特点凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被国际国内作为法定的标准检验方法。
凯氏定氮法样品的最佳消化条件为硫酸铜2.50 g, 硫酸钾0.10 g,浓硫酸mL；硫酸铜的用量为影响消化时间的主要因素,硫酸钾和浓硫酸用量为第二和第三主要因素；用此最佳条件做实验, 消化时间仅为12 min；与其他硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸用量方法对比,该法所需消化时间最短,试剂用量减少,可降低实验成本,也降低了对环境的污染。
饲料中粗蛋白测定
试剂与溶液：
• 浓硫酸：化学纯
• 混合催化剂：0.4g硫酸铜 （CuSO4·5H2O），6g无水硫酸钾或无 水硫酸钠，磨碎混匀。
• 400g/L氢氧化钠溶液：400g氢氧化钠 （化学纯）溶于1000mL水中。
• c（HCl）=0.02mol/L:1.67mL浓盐酸，
注入1000mL水中（用于半微量定氮法）
• 每个试样取两平行样进行测定，以其算数平均值为结果。结果保留小数点后两 位。
实验步骤：
• 7.重复性
• 当粗蛋白质含量在25%以上，允许相对偏差为1%;当粗蛋白质含量在 10%~25%，允许相对偏差为2%；当粗蛋白质含量在10%以下时，允许 相对偏差为3%。
注意事项：
• 消化时应经常转动凯氏烧瓶，以使消化得以快速而完全。
• NH4H2BO3+HCl=NH4Cl+H3BO3
仪器设备：
• 分析天平：感量0.0001g • 消煮炉或电炉 • 酸式或通用滴定管：25mL，50mL • 消化管或者凯氏烧瓶：250mL • 开始蒸馏装置：常量直接蒸馏或半微量蒸馏式 • 三角瓶：150mL，250mL • 容量瓶：100mL • 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动和全自动蛋白质测
• b) 标准滴定溶液在10℃~30℃下,开封使用过的标准滴定溶液保存时间一般不超过2 个月(倾出溶液后立即盖紧);碘标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液一般不超 过1个月;亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]一般不超过15d;高氯酸标准 滴定溶液开封后当天使用。
实验二 饲料粗蛋白的测定
饲料粗蛋白测定的意义：
• 蛋饲料中含氮物质包括蛋白质和非蛋白质含氮化合物，两者 总称为粗蛋白。
测定饲料粗蛋白质的几种方法对比分析
要】 本 文 从 凯 氏定 氮法 、 自动定 氮仪 法 、 缩脲 法 同 时对 饲 料 中的粗 蛋 白质 进 行 测 定 ， 对 结 果进 行 了分 析 比 较 ， 双 并 结
果表 明 ： 自动 定 氮 仪 同 国标 法 相 比 ． 果 偏 高 ， 对偏 差 较 小 ， 实验 成 本 高 ； 缩 脲 法 测 定 结 果偏 低 ， 差较 大 ， 操 作 简单 ， 结 相 但 双 偏 但
维普资讯
畜 禽 养 殖
Ｘ ｕｑｉ ｎｙａｎｇｚ ｈｉ
测定饲料粗蛋 白质的几种 方法对 比分析
任 菊秋 郭 志福 汤君 生
ｆ． １内蒙 古通 辽 市 科 尔沁 区畜牧 工作 站 ２内蒙 古 通辽 市科 尔沁 区庆 和 镇 兽 医站） ．
【 摘
ｂ 按 照样 品测 定方 法 ． 据 样 品 中蛋 白质 的含 量 ， 离 ． 根 取 心 澄 清 液 ０ 、．、．、．、．、０ ． ２ ４０ ６ ８ １ ． 升 于 １ ０ ０ ０ ０ ０毫 ０毫 升 容 量 瓶 中 ， 别加 水 至 刻 度 ， 吸 光 度 。 以蛋 白质 为 横坐 标 ， 分 测 以上 述 吸光 度 为 纵 坐标 绘 制 标 准 曲线 ， 知 样 品 的蛋 白质 含量 可 由 未 其 吸光 度 值 在标 准 曲线上 查 出 。
吸收 ， 用 硫 酸标 准 溶 液滴 定 。 后
３ 双 缩脲 法 ．
（ ） 性 硫 酸铜 试 剂 的配 制 ： １ 碱 吸取 １ 升 １ｍｏ Ｌ氢 氧 Ｏ毫 ０ ｌ ／ 化钾溶液和 ２ ０毫 升 酒 石 酸 钾 溶 液 加 人 到 ９ ０毫 升 水 中 ， ３ 激 烈 搅 拌 ，防止 出现氢 氧 化 铜沉 淀 ， 同时 加入 ４ ％硫 酸 铜 溶 液 ４ ０毫 升 。 （ ） 验方 法 ２ 试 样 品 的测 定 ： 准确 称 取 ５千 克样 品 ， 移人 ８ ０毫 升离 心 管 中 ． 入 １ 升 四 氯 化 碳 ， 合均 匀 ， 入 ４ 加 毫 混 加 ０毫 升 碱 性 硫 酸 铜． 塞紧 塞 子 激烈 振 荡 １ ０分钟 后 ， 置 １ 时 。 充 分 混合 后 放 小 吸取 １ ５毫 升 试 液 于 ２ ０毫 升离 心 管 中 。离 心 分 离 至 完 全 透
不同测定方法对饲料粗蛋白测定结果影响的研究
不同测定方法对饲料粗蛋白测定结果影响的研究扬州大学动物科学与技术学院/王潍波摘要试验采用国标法、凯氏定氮法、强碱直接蒸馏法、双氧水测定法对鱼粉、玉米蛋白、豆粕三种饲料原料的粗蛋白含量进行分析测定，旨在探讨4种方法的测定误差，以期找到最好的测定方法。
试验结果表明，4种方法的测定结果差异不显著（P>0.05）,均可用于粗蛋白的测定；其中强碱直接蒸馏法测定是最好的，可以节省试剂，减少实验经费，在一般饲料质量检测中可进行推广。
关键词测定方法；饲料；粗蛋白；影响在传统的饲料粗蛋白测定方法即国标法中，由于操作方法和实验仪器的原因，样本经消化、蒸馏、滴定诸道工序，易造成误差，费时费电。
目前生产中常用的方法有国标法、凯氏定氮仪法、强碱直接蒸馏法、双氧水法、双缩脲法等。
现有研究资料表明，后四种方法均优于国标法，但各种方法都各有优缺点，本研究以几种不同的蛋白质测定方法测定了一些有代表性的饲料原料，通过比较，以期找到最好的测定方法。
1 试验材料1.1 检样的采集、制备直接在生产单位采集三种有代表性的原料检样：鱼粉、玉米蛋白粉、豆粕，分别采用四分法将检样缩至500g，粉碎后并全部通过40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分变化或变质。
1.2 主要试剂硫酸：化学纯，含量为98%，无氮；混合催化剂：0.4gCuSO4，6gK2SO4或Na2SO4，均为化学纯，磨碎混匀；NaOH：40%水溶液，化学纯；硼酸：2%水溶液，化学纯；混合指示剂：甲基红、0.1%乙醇溶液、溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两者等体积混合，在阴凉处保存期为3个月；0.1moL/LHCL标准溶液：将8.3mL分析纯HCL注入1000mL蒸馏水中；0.02moL/LHCL标准溶液：将1.67mL分析纯HCL注入1000mL蒸馏水中；蔗糖：分析纯；硫酸铵：分析纯，干燥；硼酸吸收液；双氧水：分析纯，含量为30%；酒石酸钾钠：分析纯；碘化钾：分析纯；蛋白质标准溶液(4g/dL)购自北京中生生物工程高技术公司。
家禽饲料的蛋白质含量分析
家禽饲料的蛋白质含量分析家禽饲料的蛋白质含量一直是养殖业非常关注的一个重要指标。
蛋白质是动物生长和发育所必需的营养物质，对于家禽的生长发育和免疫能力有重要影响。
因此，准确分析和调节家禽饲料中的蛋白质含量对于提高家禽养殖效益具有重要意义。
一、蛋白质的重要性蛋白质是由各种氨基酸组成的一类有机化合物，是构成细胞结构和调节生命活动的基本物质。
家禽饲料中的蛋白质不仅可以提供生长发育所需的能量，还是组成鸡蛋、肌肉等重要组织的重要组成部分。
蛋白质还参与免疫反应、酶和激素的合成等生理功能，对于家禽的健康和免疫能力有着重要影响。
二、蛋白质的含量分析方法1. 总蛋白质测定法总蛋白质测定是分析家禽饲料中蛋白质含量的常用方法之一。
该方法通常使用显色剂与蛋白质反应生成显色产物，通过测定显色产物的吸光度来确定蛋白质的含量。
常用的测定方法有低里氏法、比色法、分光光度法等。
2. 氨基酸分析法氨基酸是蛋白质的组成单元，通过测定饲料中各种氨基酸的含量，可以间接确定蛋白质的含量。
氨基酸分析法通常使用高效液相色谱法或气相色谱法进行检测。
这种方法对于分析特定氨基酸的含量特别有效，可以帮助饲料生产者更精确地调配饲料配方。
三、蛋白质含量的合理调控1. 满足家禽需求根据不同阶段的家禽生长特点和需求，合理调控饲料中蛋白质含量十分重要。
对于育成期的家禽，可以适量增加蛋白质含量以促进生长发育；而对于产蛋期的家禽，则应更关注饲料中赖氨酸、蛋氨酸等必需氨基酸的含量，以提高蛋品质和生产效益。
2. 蛋白质的来源和品质选择合适的蛋白质来源和优质的蛋白质原料也是调控家禽饲料中蛋白质含量的重要方面。
常用的蛋白质源包括植物蛋白、动物蛋白和单细胞蛋白等。
选择具有良好品质和消化利用率高的蛋白质原料，能够提高家禽对饲料中蛋白质的吸收利用效果。
3. 饲料配方的合理设计在饲料配方中，合理搭配不同的蛋白质来源和脂肪、矿物质等营养物质，能够更好地满足家禽的营养需求。
通过科学的饲料配方设计，可以提高饲料的能量价值和蛋白质利用率，达到提高产蛋率和肉质品质的目的。
饲料原料蛋白检测方法
饲料原料蛋白检测方法
饲料原料是动物饲养中不可或缺的重要组成部分。
饲料原料中的蛋白质是提供动物所需营养的主要来源之一。
因此，检测饲料原料中蛋白质含量的准确性对于动物的生长和健康至关重要。
目前，饲料原料蛋白检测方法主要包括以下几种：
1. 紫外分光光度法：利用蛋白质中酪氨酸、苯丙氨酸等芳香基团对紫外光的吸收作用进行测定，具有灵敏、简便、快速等优点。
2. 比色法：根据蛋白质与双硫键形成的复合物的吸收光谱差异，利用比色法进行测定。
该方法具有灵敏、准确的特点。
3. 质谱法：通过质谱技术对蛋白质进行分析，可以确定其分子量、氨基酸组成等信息，具有高精度、高灵敏度等优点。
4. 高效液相色谱法：利用高效液相色谱技术对蛋白质进行分析，可以得到准确的蛋白质含量，具有高灵敏度、高精度等优点。
综上所述，对于饲料原料中蛋白质含量的检测，应根据实际情况选择合适的方法进行，以确保其准确性和可靠性。
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如何准确测定饲料中的粗蛋白质含量
６ 质 控 实验
国家 标 准规 定 称 取 试 样 ０ ． ５ — １ ｇ ，浓 缩 饲 料 可
凯 氏定 氮 的质 控 实 验是 测 定 分 析 纯 硫 酸 铵 的
称取０ ． ５ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，配合饲料可称取 ０ ． ７ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，这样 能 保证 滴定 时消 耗盐 酸标 准 溶液 的体积 较 为一
作 简 单 ，但 过 程 比较 复杂 ，如果 不 注 意 细 节 ，往 往会 导致 结果 准 确度 不高 。
１ 采样 及 制备
盐 酸 标 准 滴 定 溶 液 的浓 度 直 接 影 响 结 果 的准 确 度 ，配 制 和 标 定 一 定 要 严 格 按 照 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ６ ０ １ 的规
国 家标 准 规 定 用 消 煮 炉 或 电 炉 ，建 议 选 择 带
程 序 升 温 的 凯 氏专 用 消 煮 炉 ， 能 保 证 升 温 均 匀 ，
重 复性好 ，准确度高。 国家标准规定使用 五水硫 酸铜 和无水硫酸钾 ，消煮液容易结 晶 ，建议使用 商 品化硫 酸钾 和硒粉 ，产品为 片状 ，使 用方便 ，
试样采集必须 具有代表性 ，这是 准确测定饲
料 粗 蛋 白质 的基 础 。样 品 制备 也 很 关 键 ，粉 碎 后 要 能全 部通 过 ４ ０目分样 筛并 立 即放入 密 封容 器 。
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样 品消化分解 液 的制 备 ， 取 粉碎 过 ４ 称 ０目筛 的
混 匀 样 品 ０８ ０ ９ｇ左 右 （ 确 到 ０ ０ ０２ｇ ， 部 ． ４ ． 精 ． ０ ） 全 投 入 ２ ０ｍｌ 氏烧 瓶 中 ， 浓 硫 酸 １ 摇 匀 ， 在 ５ 凯 加 ０ｍｌ 并
为准 确 ， 缺点 是 价 格 昂 贵 。 目前人 们 对 众 多 蛋 但
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 仪 器 ．
羽 毛粉 、 籽 粕 、 粕 、 粉 、 麸 、 米 、 糠 ； 菜 豆 鱼 麦 玉 米
万 能 样 品 粉 碎 机 ， ０目分 样 筛 ， 析 天 平 （ 度 值 ４ 分 分 ０ ０ ０１ｇ ， 氏烧 瓶 ， 调 温 电炉 ， 氏蒸馏 装 置 ， ． ０ ） 凯 可 凯
２ ， ０１１ №
趋 分 量 测 定 方 法 的 比 较
朱宇旌 ， 兰宇 ， 郑 张 勇 ， 红微 ， 书音 詹 田
（ ． 阳农 业 大 学 畜 牧 兽医 学 院 ，辽 宁 沈 阳 １ ０ ６ ；２ １沈 １ １ １ ．大 连 医科 大 学 实 验 动 物 中心 ， 宁 大 连 １ ６ ４ ） 辽 １ ０ ４
白质 含 量 检 测 方 法 进 行 研 究 时 所 采 用 的 样 品 大 多 为 成 品 料 ， 直 接 以 饲 料 原 料 作 为 检 测 对 象 的 研 究 则 而
瓶 口放 一只玻璃小漏 斗 ， 利于消 化分解过 程 中起 回 有
流作用 ， 以减 少 硫 酸 损 失 。然 后 把 凯 氏烧 瓶 放 在 电 炉
品测定与样 品测定 同参考文 献［ ］ ２ 方法 。
１ ２ ３ 强 碱 直 接 蒸 馏 法 ．． 称 量 ５ ０ ０ ｇ样 品 于 ５ ０ｍｌ 氏 烧 瓶 中 ， ． ０ ０ 凯 加 ５ 蒸 馏 水 （ 加 边 摇 ） 充 分 混 合 。 向 凯 氏 烧 瓶 中 ０ｍｌ 边 ， 加 入 ０ １ｍｇ ｍｌ 化 钡 溶 液 ２ ， 荡 摇 匀 ， 加 ． ／ 氯 ５ｍｌ振 再
较为少 见 。且 生 产 实践 中各 种 测定 方 法 的 准 确性 、
适 用 范 围 尚不 十 分 明 确 ， 需 进 一 步 研 究 ， 要 寻 找 还 需
上进行 消煮 。当看到 瓶 口冒白烟 、 消化液成 为酱 紫色 的时候 ， 滴加 双氧水 （ 每次约 ３ ）直到 消化分解 ～４ｍ１， 液呈清澈浅 黄透 明色 为止 。滴加 时 间约为 １ ｎ 耗 ０ｍｉ，
双 氧 水 大 约 为 １ 左 右 ， 恒 温 １ｍｉ ， 下 冷 却 ， Ｏｍｌ 再 ｎ 取 转 移 到 １０ｍｌ 量 瓶 中 配 成 １０ｍｌ 品 消 化 液 。样 ０ 容 ０ 样
对 于不 同原料 较 为适 合 的方便 快捷 的蛋 白质 含量测
定 方法 。本研 究 就是 采 用 饲 料原 料 作 为 研究 对 象 ， 比较 不 同 蛋 白质 含 量 测 定 方 法 的 优 缺 点 ， 结 出 对 总 于不 同 样 品 较 为 快 捷 、 效 的蛋 白质 含 量 测 定 方 法 。 高
容 量 瓶 ， 式 滴 定 管 ， 形 瓶 ，２ 酸 锥 ７ ２型 可 见 分 光 光 度计 。
１ ２ 方 法 ．
０ ４ｍｇ ｍｌ 氢氧化 钠溶 液 １ ０ｍｌ立 即连 接 蒸馏 ． ／ 的 ２ ，
装 置 进 行 蒸 馏 。把 蒸 馏 装 置 冷 凝 管 的 末 端 浸 入 盛 有 ０ ０ ／ 的 硼 酸 溶 液 ５ 和 ２滴 混 合 指 示 剂 ． ２ｍｇ ｍｌ ０ ｍｌ 的 锥 形 瓶 中 ， 轻 摇 动 凯 氏 烧 瓶 使 溶 液 混 匀 ， 后 加 轻 然
中 图分 类 号 ： ８ ６ １ ￥１．７
文 献标 志码 ： Ｂ
文章 编 号 ： ０ ３ ６ ０ （ Ｏ １ ０ —０ ５ 一Ｏ １ ０ ２ ２ ２ １ ） １ ０ ９ ３
粗 蛋 白质 含 量 是 饲 料 常 规 营 养 分 析 必 定 检 验 的 指 标 ， 评 价 饲 料 质 量 的 一 个 重 要 因 素 ； 定 方 法 是 是 测 否 准 确 影 响 到 饲 料 的 品 质 。 目前 蛋 白 质 的 测 定 方 法
实验 室进行 。 １ ２ １ 凯 氏 定 氮 法 ．．
按 ＧＢ Ｔ ６ ３ — １ ９ ／ ４ ２ ９ ４方 法 操 作 。
１ ２ ２ 双 氧 水 法 ．．
很 多 ， 氏定氮法 被认 为是 最 为准确 的方法 之一 ； 凯 但
该 法 催 化 时 间 较 长 ， 催 化 剂 消 耗 量 较 大 。 若 采 用 对 元 素 分 析 仪 等 仪 器 测 定 饲 料 的 蛋 白 质 含 量 ， 果 较 结
量 的饲 料 原 料 的检 测 ； 双 氧 水 法 的 特 点是 测 定较 为 快速 ， 测 定 结果 与 国标 法差 异 不显 著 ， 精 密度 稍 差 。 而 且 但
关 键 词 ： 料 原 料 ； 白 质 ； 定 方 法 ； 氏 定 氮 法 ； 氧 水 法 ； 碱 直 接 蒸 馏 法 ； 氏 比 色 法 ； 杨 酸 比 色 法 饲 蛋 测 凯 双 强 纳 水
摘 要 ： 羽 毛 粉 、 籽 粕 、 粕 、 粉 、 麸 、 米 、 糠 为 原 料 ， 凯 氏 定 氮 法 、 氧 水 法 、 碱 直 接 蒸 馏 法 、 氏 以 菜 豆 鱼 麦 玉 米 用 双 强 纳
比 色法 、 水杨 酸 比 色法 对 原 料 进 行 蛋 白质 含 量 的 测 定 ， 对 各 个 方 法 的 检 测 结 果 进 行 比较 。 结 果 表 明 ： 氏 定 氮 并 凯
法 精 密 度 和 准 确 性 最 好 ， 于 测 定 各 种 饲 料 原 料 的 蛋 白 质 含 量 ； 碱 直 接 蒸 馏 法 和 比 色 法 较 适 用 于 蛋 白 质 含 量 高 适 强 的 饲 料 原 料 ； 氏 比 色 法 测 麦 麸 等 蛋 白质 含 量 低 的 饲 料 时 其 检 测 结 果 与 国 标 法 相 比 差 异 显 著 ， 适 于 低 蛋 白 质 含 纳 不