福林酚法测蛋白
蛋白质的定量测定—福林-酚试剂法
蛋白质的定量测定—福林-酚试剂法一、实验目的：1、学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。
2、掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量。
3、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理：Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。
甲试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。
蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用,生成蛋白-Cu2+紫红色络合物。
乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸,硫酸,溴等组成。
此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈深蓝色反应，在一定条件下，深蓝色强度与蛋白质浓度成正比。
三、实验步骤：取洁净干试管7支，按下表操作：30分钟后，以空白管对照，于660nm处比色，读取吸光度值。
四、结果与分析：1.吸光度A660值表2.绘制标准曲线以纵座标为吸光度，横座标为蛋白质浓度，绘制标准曲线，如下图：由图可知直线方程为y=5.6741x，待测管吸光度值为0.105，即y=0.105时，x=0.105/5.6741=0.0185g/L样品蛋白浓度（g/L）=0.0185×6.5×500=60.13g/L3.标准管法求浓度2号标准管与待测管吸光度相近，代入公式计算：样品蛋白浓度（g/L）=(0.105/0.087)×0.25×(0.4/1.0)×500=60.34g/L五、讨论1.如果只用乙试剂而不用甲试剂，也可以发生颜色反应，只是所要耗费时间较长。
2.甲试剂在本实验中起提供碱性环境的作用，其中的Cu2+还起到类似于催化剂作用，使反应更快显色。
3.福林-酚试剂法的主要缺点在于此法对蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量有要求，如果没有酪氨酸和色氨酸的话就无法显色。
4.所用试管一定要干净、干燥，否则即便是微量也会对反应体系造成影响，影响颜色变化，最终影响吸光度的测定。
5.加入试剂乙混匀后静置30min，使氧化还原反应充分反应。
folin酚法测定蛋白质含量
folin酚法测定蛋白质含量Folin-酚法是一种测定蛋白质含量的经典方法，其历史可以追溯到1948年。
此方法的基本原理是酚类物质在碱性条件下与蛋白质反应，生成一种深蓝色的复合物，该复合物在760nm处的吸光度与蛋白质浓度成正比，因此可以通过测定吸光度来计算蛋白质浓度。
以下是Folin-酚法测定蛋白质含量的详细步骤：一、实验准备1.实验材料：o待测样品（蛋白质溶液）o Na2CO3o NaHCO3o硫酸铜o酒石酸钾钠o氯仿o无水乙醇o磷酸二氢钾o氢氧化钠2.实验设备：o分光光度计o研钵或电动搅拌器o漏斗和滤纸o玻璃试管和试管架o移液管o搅拌棒二、实验步骤3.准备Folin-酚试剂：将10g的酒石酸钾钠与50g的Na2CO3、NaHCO3混合在研钵中，充分研磨后转移至烧杯中，加入80ml的蒸馏水，搅拌至溶解。
将溶液煮沸并保持1分钟，然后冷却至室温。
将混合物转移至1L容量瓶中，用蒸馏水定容至1L。
4.取1ml待测蛋白质溶液（约0.01-1mg蛋白质）加入到试管中。
5.向试管中加入5ml Folin-酚试剂，混匀。
6.将混合物在室温下保持30分钟，期间不时搅拌。
7.在760nm波长下，用分光光度计测定混合物的吸光度。
为了获得更准确的结果，可以以蒸馏水为空白对照调零。
8.根据标准曲线计算蛋白质浓度。
可以通过绘制已知蛋白质浓度与其对应的吸光度的曲线图来制作标准曲线。
根据待测样品的吸光度，可以在曲线上找到对应的蛋白质浓度。
9.根据需要，可以进一步计算蛋白质的含量（mg/mL或mg/g）。
三、注意事项和局限性1.Folin-酚法对碱性环境非常敏感，如果在试剂准备和混合过程中出现不慎或操作不当，可能会影响到最终的测定结果。
因此，操作者需要熟练和准确的掌握该方法的操作步骤。
2.本方法不适用于测定含有大量酚类物质或还原性物质的样品，这些物质可能会干扰蛋白质与Folin-酚试剂的反应，导致结果偏差。
3.一些蛋白质的氨基酸序列中含有酪氨酸或色氨酸残基，这些残基可以与Folin-酚试剂反应生成蓝色化合物，导致吸光度偏高，最终结果可能偏高也可能偏低。
蛋白质含量测定方法folin—酚试剂法
蛋白质含量测定方法——Folin—酚试剂法Folin—酚试剂法是一种常用的蛋白质定量方法，其原理是蛋白质分子中酪氨酸和半胱氨酸残基在Folin试剂存在下氧化成碘，与酚试剂结合形成一种蓝色复合物。
由于蛋白质的量与Folin 试剂呈正比，因此可以通过比色法测定蛋白质含量。
步骤：1. 准备一系列浓度的标准蛋白质溶液（从低到高），并设置空白对照。
2. 取一定量的Folin试剂和样品混合，充分摇匀后静置2-3分钟。
3. 用酚试剂对样品进行稀释，制备出一系列浓度的标准样品。
4. 对比观察各标准样品的颜色变化，找到蛋白质浓度和颜色的对应关系。
5. 绘制标准曲线，再用于样品蛋白质的测定。
6. 根据样品中剩余的Folin试剂颜色，求出样品中的蛋白质含量。
注意事项：1. 必须严格控制反应温度和时间，以免影响测定的准确度。
2. 在加入Folin试剂后，需要摇动几次以确保充分反应。
3. 如果要测定的样品含有维生素C或其他具有抗氧化性质的物质，需要事先进行去除或中和。
4. 对于浓度过高的样品，建议先进行稀释再进行测定。
在实践中，除了遵循以上步骤，还可以参考以下技巧和经验：* 使用干净的玻璃器具来操作，避免使用塑料器具导致的颜色干扰。
* 在加入Folin试剂后，可以加入少量无水乙醇来稳定颜色反应。
* 在绘制标准曲线时，可以使用不同浓度的标准蛋白质溶液制备一系列梯度样品，这样可以更准确地找到蛋白质浓度和颜色的对应关系。
* 对于未知样品，可以先进行预实验，大致确定蛋白质浓度范围，以便更好地控制实验进程。
总之，Folin—酚试剂法是一种简便、灵敏的蛋白质定量方法，通过遵循正确的步骤和注意事项，可以获得较为准确的测定结果。
福林酚法测定蛋白含量原理
福林酚法测定蛋白含量原理福林酚法测定蛋白含量是一种广泛用于生物化学实验室和医疗检测室中的检测技术，它可以有效地检测蛋白的含量，从而为医疗保健提供重要的相关数据。
该技术的基本原理是，在实验室环境中，将一定量的样品和福林酚荧光指示剂混合，然后测量混合物中蛋白质含量所形成的荧光强度。
该原理也可以应用到生物、化学和工业等领域中，只要用恰当的指示剂，就可以用它来测定少量各种有机物的含量。
福林酚法的基本原理是，利用反应性指示剂和蛋白质反应，当两者结合时会发生一种特定的反应，从而形成一种特定的光谱。
福林酚，也称为福林酚水合物，是一种聚合物。
它由具有强荧光性质的活性官能团和辅助官能团组成。
它具有良好的收缩性、稳定性和反应性，所以可以作为指示剂，其发出的荧光强度与蛋白质含量成正比。
在实验室环境中，蛋白质测定是以福林酚荧光指示剂为检测物的，要满足以下条件：一是将指定的福林酚荧光指示剂与样品混合；二是把混合物中的蛋白质浓度测定荧光强度；三是把测得的福林酚荧光强度转换成蛋白质浓度，然后求出蛋白质的含量。
为了获得准确的结果，必须使用浓度恒定的福林酚溶液，并且在测定之前进行适当的稀释。
福林酚法测定蛋白含量的主要优点在于准确性。
所有的化学反应都是以定量的形式进行的，一般情况下，蛋白质测量的精度可以达到几百万分之1。
此外，它的快速性和简便性也得到了广泛的认可，此外，它也可以用于测定极小量的样品，这也为微量物质的测定提供了可能。
然而，福林酚法测定蛋白含量也有一些不足之处。
根据实验要求，福林酚指示剂和样品必须有一定比例，否则将影响结果。
此外，由于不同蛋白质类型具有不同的结合性，因此可能会影响测定结果。
另外，该法需要消耗大量的样品，因此只适用于少量的样品。
总的来说，福林酚法测定蛋白含量具有准确性高、分析过程快速简便等优点，但也存在一定的局限性，不适用于大量样品的测定。
因此，在使用该法时，应当注意样品的量程和测试要求，以保证测定结果的准确性和可靠性。
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验报告完整版
福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
二、实验仪器1.卵清蛋白片2.7220分光光度计3.试管4.移液管三、实验试剂1.Folin-酚试剂A：碱性铜溶液甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml 中。
临用时按甲：乙=50：1混合使用。
2.Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。
冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。
临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。
3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至1000ml四、实验步骤1.标准曲线的绘制取7支干燥洁净的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图。
2.样品测定准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度。
五、实验结果标准曲线的绘制：蛋白质浓度0.00 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 吸光度0.000 0.079 0.215 0.264 0.346 0.450 0.493则根据y=5.5072x=0.325得x为0.05901，则样液的浓度为0.5901mg/ml.六、实验结果分析及思考1、试说明Folin-酚法的优缺点该方法较双缩脲法反应灵敏，与0.1mg/ml浓度的蛋白质样品亦可得到很好的显色反应，使用很广泛，但花费时间长，其干扰因素较多。
实验二福林酚试剂法测定测定蛋白质的含量
• 3.含有什么氨基酸的蛋白质能与 Folin-酚试剂 呈蓝色反应？ • 4.测定蛋白质含量除Folin-酚试剂显色法以外， 还可以用什么方法
八、分析讨论
强碱性缓冲液； TritonX-100; SDS
最好的方法； 干扰物质少； 颜色稳定； 颜色深浅随不同
• 此法可检测的最低蛋白质量达5g。通常 测定范围是20~250g
二、材料和试剂
• 1、标准蛋白质 250ug/ml 牛血清白蛋白溶 于重蒸水溶液 • 2、Folin—酚试剂甲 A0.2MNaOH+4%NaCO3 等体积混合 当天使用时混合有效A 100ml+B 2ml • 3、 Folin—酚试剂乙 吸取5ml苯酚+5ml水，用0.1MNaOH滴定至酸浓度为1M 配100ml B2%酒石酸钾钠+1%CuSO4.5H2O 等体积混合 配10 ml
2、Folin-酚乙试剂在酸性条件下较稳定，而Folin －酚甲试剂是在碱性条件下与蛋白 质作用生 成碱性的铜－蛋白质溶液。当Folin－酚乙试 剂加入后，应迅速摇匀（加一管摇一管），使 还原反应产生在磷钼酸－磷钨酸试剂被破坏之 前。
3、样品稀释的倍数应使蛋白质含量在标准曲线范 围之内，若超过此范围则需将样品酌情稀释。
• 4、 分光光度计 • 5、恒温水浴锅
• 6、蛋白质样品溶液
A：鸡蛋清白蛋白 100-250ug/ml 的重蒸水
B：土豆
取样品用水冲洗干净，用纱布擦干，立即称取15g鲜样，置研钵中加重蒸水少许及石英沙，研磨成 匀浆，过滤弃去残渣，定容至50 ml,滤液经6000 r/min离心30分钟，取上清液待测。
五、 操作
• 1、标准曲线制作： 各吸取 0、0.2 0.4 0.6 0.8 1.0ml标准蛋白 液于带塞小试管，分别加入不同量的蒸馏水到 1ml ，各加5ml 试剂甲，混匀后室温下（25℃） 放10分钟，加入 0.5ml试剂乙，立即混匀，25℃ 左右反应30分钟，于500nm波长下测定消光值， 以OD500为纵坐标，含量为横坐标，绘出标准曲 线，（浓度低时可用OD750nm）
福林酚法测定蛋白酶活力原理
福林酚法测定蛋白酶活力原理1. 引言：蛋白酶的神秘面纱哎呀，说到蛋白酶，大家可能会觉得这玩意儿离我们有点远。
其实不然，蛋白酶可是咱们身体里忙前忙后、默默奉献的小工人。
它们像一群勤劳的清道夫，帮我们分解食物中的蛋白质，让营养更好地被吸收。
不过，有时候我们得搞清楚这些小工人到底干了多少活儿，这时候就需要用到福林酚法了。
说到这儿，可能有人要问：啥是福林酚法？怎么听起来这么高大上？别急，我这就给大家捋捋这其中的门道。
2. 福林酚法的基本原理2.1 蛋白酶活力的测定首先，福林酚法其实是个很聪明的办法，它可以用来测定蛋白酶的活力。
蛋白酶，顾名思义，就是能把蛋白质搞得七零八落的那种酶。
我们要知道它的活力，就得看看它把蛋白质分解的效率如何。
简单来说，就是用这套方法来测一测它干了多少活儿。
咋测呢？这就需要一点点化学的小窍门了。
2.2 福林酚法的步骤那么，福林酚法到底怎么操作呢？这个过程其实没那么复杂，只要几个步骤就能搞定。
首先，我们需要一种叫做“福林酚试剂”的化学液体。
这个试剂像是福尔摩斯，能准确找出蛋白酶分解蛋白质后剩下的东西。
接下来，我们会把待测的蛋白质样品和福林酚试剂混合，然后放到一个小瓶里。
再往里面加上另一种试剂，这时候，瓶子里的液体就会发生颜色变化。
这种颜色的变化，就告诉我们蛋白酶的活力到底如何。
明白了吧？简单来说，颜色越深，蛋白酶活力越强。
3. 实验操作的细节3.1 样品准备为了让实验结果更准确，我们需要对样品进行准备。
首先，得把蛋白质样品溶解成一定浓度的液体。
这个过程就像是在做一道美味的汤，得控制好原料的比例，才能保证最终的味道。
我们通常会用去离子水来溶解，这样可以避免杂质影响结果。
接着，样品需要经过过滤，确保液体里没有大颗粒的沉淀物。
这样一来，实验才会更靠谱，像是给蛋白酶干活提供了一个干净整洁的环境。
3.2 反应时间与测量接下来，就是关键的反应时间了。
通常，我们会让样品和试剂反应一段时间，这个时间的长短可是有讲究的，太短了可能测不出准确的结果，太长了又可能产生误差。
福林酚法测蛋白质含量 蛋白质含量的测定
福林酚法测蛋白质含量蛋白质含量的测定蛋白质是生命的物质基础，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。
因此，准确测定蛋白质的含量在生物化学、临床医学、食品科学等领域都具有重要的意义。
福林酚法是一种常用的测定蛋白质含量的方法，它具有灵敏度高、准确性好等优点。
接下来，让我们详细了解一下福林酚法测蛋白质含量的原理、操作步骤以及注意事项。
一、福林酚法的原理福林酚法的基本原理是基于蛋白质中的肽键在碱性条件下与铜离子形成络合物，然后此络合物将磷钼酸和磷钨酸还原成蓝色的化合物。
蓝色化合物的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，通过比色法即可测定蛋白质的含量。
具体来说，首先在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜离子反应生成紫色的络合物。
然后，加入福林酚试剂，福林酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸被络合物中的铜离子还原，生成蓝色的混合物。
蓝色的深浅与蛋白质的量成正比，通过分光光度计在一定波长下测定吸光度，就可以计算出蛋白质的含量。
二、实验材料和仪器1、实验材料标准蛋白质溶液：通常使用牛血清白蛋白（BSA）配制一系列不同浓度的标准溶液。
待测蛋白质样品：需要测定含量的蛋白质溶液。
福林酚试剂：由 A 液和 B 液组成，使用前按一定比例混合。
碱性铜溶液：包括碳酸钠、氢氧化钠和硫酸铜等成分。
2、实验仪器分光光度计：用于测定溶液的吸光度。
移液器：准确移取不同体积的溶液。
容量瓶：用于配制标准溶液和待测样品溶液。
离心管：用于离心样品。
恒温水浴锅：控制反应温度。
三、实验操作步骤1、标准曲线的绘制准备一系列不同浓度的标准蛋白质溶液，例如0、20、40、60、80、100 μg/mL 的 BSA 溶液。
分别取不同浓度的标准蛋白质溶液 1 mL 于试管中，加入 5 mL 碱性铜溶液，摇匀，在室温下放置 10 分钟。
然后加入 05 mL 福林酚试剂，立即摇匀，在 30 60 分钟内，以空白管（即只加试剂但不加蛋白质溶液的试管）为对照，在分光光度计上于 650 nm 波长处测定吸光度。
原料中蛋白质含量测定（福林酚法）
蛋白质含量测定（福林酚法）1．原理福林酚试液能够与溶液中的蛋白质发生有色反应，且其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比。
2．碱性酒石酸铜溶液的配制：2.1溶液A：精密称定硫酸铜（CuSO4·5H2O）100mg于10mL容量瓶中，加5mL纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
2.2溶液B：精密称定水合酒石酸钾钠200mg于10mL容量瓶中，加5mL纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
2.3溶液C：称取10.0g的无水碳酸钠及2.0g氢氧化钠于100mL容量瓶中，加50mL 纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
2.4碱性酒石酸铜溶液：分别精密移取1mL溶液A和1mL溶液B混合在干燥洁净的小烧杯中，将此混合液缓缓注入到20mL的溶液C中，摇匀即得。
（注：此溶液需现配现用，不可超过24小时使用）3．Folin-酚溶液：精密移取市售的Folin-酚试液5.0mL于50mL容量瓶中，加纯化水稀释至刻度并摇匀。
4．标准溶液配制：4.1标准贮备液的配制：精密称定10.0mg牛血清白蛋白对照品于50mL容量瓶中，加纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀，冷藏后备用。
4.2系列标准溶液的配制：分别精密移取2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL和10.0mL的标准贮备液至5个10mL容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，标准溶液浓度分别为40µg/mL、80µg/mL、120µg/mL、160µg/mL、200µg/mL。
5．样品溶液的配制：精密称定样品0.50g于50mL容量瓶中，加纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
6．空白溶液为纯化水。
7．检样操作：7.1分别精密移取1.0mL 空白溶液、1.0mL 样品溶液和1.0mL5个系列标准于25mL 干燥洁净的纳氏比色管中；7.2在各个管中加入碱性酒石酸铜溶液1.0mL ，并立即混合均匀，室温放置10分钟后，再按时间先后加入3.0mL Folin-酚溶液，并立即混合均匀。
生化实验报告福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度
生化实验报告福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验三：福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度一、实验目的1．学会制备无蛋白血滤液。
2．掌握Folin－Wu 法测定血糖含量的原理和方法。
3．掌握7200 型可见分光光度计的使用方法。
二,实验原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。
蓝色的深浅不蛋白质的含量成正比，可用比色法测定。
三.实验仪器1．试管2．秱液管3．卵清蛋白片4．7220 分光光度计四. 实验试剂1、碱性硫酸铜溶液 A 液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g 及碳酸氢钠11g 溶于蒸馏水，秲释定容至1000ml. B 液：硫酸铜晶体5g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
临用时，A 液：B 液=9：1 混合（体积比），混合液于冰箱中保存（4℃）。
2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g 葡萄糖，溶于蒸馏水，秲释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml 葡萄糖母液于100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容。
3、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100 毫升。
4、0.33mol/LH2SO4 溶液：于53ml 蒸馏水中加入1ml 的浓硫酸。
五.实验步骤1、无蛋白血滤液的制备：用奥氏吸管吸取全血（已加抗凝剂）1ml,缓缓放入100ml 锥形瓶中，加蒸馏水7ml，摇匀，溶血后（血液变为红色透明）加10%钨酸钠1ml，摇匀.。
再加0.33mol/L H2SO41ml，边加边摇，加毕充分摇匀，放置5～15 分钟，至沉淀变为暗棕色（如丌变色可再加0.33mol/L H2SO41-2 滴）。
用干滤纸过滤。
先倾入少许，待滤纸湿润后在全部倒入，如滤液丌清需重新过滤。
每毫升无蛋白血滤液相当于1/10ml 全血。
2、血糖的定量测定：取25ml 的血糖管3 支，编号。
第一支血糖管中加入2ml 蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml 标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。
实验四福林—酚试剂法测定血清总蛋白
思考题
什么叫标准曲线？
绘制标准曲线有何实用意义？
➢ 实验项目 ➢ 实验原理 ➢ 试剂和器材 ➢ 操作方法（主要步骤） ➢ 结果分析 ➢ 思考题
预习
实验五 酶法测血清葡萄糖
标准管对照法
选一管与待测管吸光度相近的作为标准
管，根据公式计算：
待测血清蛋白含 量=
（g/L）
A待测 ×C标准 × V标准 ×500
A标准
V待测
注： V标准为标准管加入标准蛋白质的体积 V待测为待测管加入的待测血清的体积
实验结果标准管来自待测管管号 OD660nm
1
2
3
4
5
6
7
0 0.121 0.250 0.335 0.440 0.525 0.320
ε：摩尔吸光系数 A：物质的吸光度 l：液层的厚度 c：溶液的浓度
标准曲线法
在分光光度计测定范围内，配制一系列已知不 同浓度的标准溶液，在特定波长条件下分别测出 其吸光度值。以吸光度值为纵坐标，相应的溶液 浓度为横坐标在坐标纸上作出一条吸光度与浓度 成正比，并且通过原点的直线，即标准曲线，也 称C-A曲线
空白 (1)
(2) (3)
(4)
(5)
(6)
待测管 （7）
标准蛋白溶液(250µg/ml) -- 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 —
待测血清 蒸馏水 试剂甲
— — — — — — 1.0
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
--
3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
混匀后室温放置20分钟
人血清中蛋白质的正常范围为60-80g/L
标准曲线法比标准管法精确，可消除 各种原因引起的偏离吸收定律而造成的 误差，但是制作比较费时。
福林酚法测定蛋白酶活力原理
福林酚法测定蛋白酶活力原理福林酚法测定蛋白酶活力的原理，就像是一个魔术师手中的神奇道具，让你在一瞬间就能感受到蛋白质的“生命力”。
这个神奇的工具叫做福林酚试剂，它是由福林酚和氢氧化钠组成的。
当福林酚试剂遇到蛋白质时，就像一位魔法师施展魔法一样，将蛋白质分解成一个个小小的分子，然后释放出一种叫做“生命”的信号。
这个信号就像是一场盛大的派对，吸引了无数观众——也就是我们手上的蛋白酶。
这些观众们兴奋地跳起了舞蹈，释放出了一个个小小的气泡，这就是所谓的“生命之舞”。
而那些能够捕捉到这些信号的蛋白酶，就像是最擅长跳舞的人，他们能够准确地识别出这些信号，并将它们转化为自己的能量。
这个过程就像是一场奇妙的化学反应，蛋白质就像是一个个小精灵，而福林酚试剂就像是一位神秘的魔法师。
当两者相遇时，就像是一部精彩的电影，充满了惊喜和激动人心的时刻。
而那些能够捕捉到这些信号的蛋白酶，就像是最勇敢的探险家，他们勇敢地探索未知的世界，寻找着生命的奥秘。
福林酚法测定蛋白酶活力的原理，就像是一场充满魔力的冒险之旅。
在这个过程中，你不仅能够感受到蛋白质的“生命力”，还能够体验到科学的魅力和趣味。
这就像是一场视觉和听觉的双重盛宴，让你在享受的也能够了解到更多的知识。
所以，当你下次看到福林酚试剂和蛋白酶时，不妨停下脚步，想象一下这场奇妙的化学反应。
或许你会发现，原来生活之中处处都有魔法的存在，而科学就是那把打开魔法世界的钥匙。
生化实验报告 福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度
生化实验报告福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度实验目的：利用福林-酚试剂法测定蛋白质的浓度。
实验原理：福林-酚试剂法是一种常用的蛋白质定量方法。
该方法利用在碱性条件下，蛋白质和福林-酚试剂在高温下反应生成可溶性淡红色复合物，其最大吸收峰位于560 nm。
该复合物的吸光度与蛋白质的浓度呈线性关系，可以通过比较不同浓度蛋白质标准溶液的吸光度来测定待测蛋白质的浓度。
实验步骤：1. 准备蛋白质标准溶液：称取不同浓度的蛋白质标准溶液（如1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL等）分别加入福林-酚试剂，使得最终浓度为0.2 mg/mL，并用称重瓶搅拌均匀。
2. 制备待测蛋白质样品：将待测蛋白质样品溶解在适量的缓冲液中，使其浓度在标准曲线的线性范围内。
3. 加入福林-酚试剂：取相同体积的蛋白质标准溶液和待测蛋白质样品分别加入福林-酚试剂，并用试管架将其放入预热至60°C的水浴中反应15分钟。
4. 冷却：将试管从水浴中取出，放置到冰水中冷却至室温。
5. 测定吸光度：使用分光光度计将各个标准溶液和待测样品的吸光度分别置于560 nm处测量。
6. 建立标准曲线：依次将标准溶液的吸光度值绘制于纵轴，浓度值绘制于横轴，得到标准曲线。
7. 测定样品浓度：根据待测样品的吸光度值和标准曲线，确定其蛋白质浓度。
实验注意事项：1. 确保福林-酚试剂无色，否则应更换新的试剂。
2. 需要在60°C的水浴或恒温器中对试剂进行反应，确保反应温度稳定。
3. 温度过高或过低都会影响测定的准确性，应控制好试管在水浴中的时间。
4. 标准曲线的制备需要使用不同浓度的标准溶液，并且至少应包含一组空白对照组。
5. 测定待测样品时，应确保其在线性范围内，并尽量重复测定。
实验结果：根据实验步骤中的吸光度测定值和标准曲线的关系，可以得到样品中蛋白质的浓度。
实验结论：利用福林-酚试剂法可以测定蛋白质的浓度。
该方法简单、快速、灵敏度高，适用于常规蛋白质浓度的测定。
蛋白含量测定-Folin酚法
ＹＹＳＷＤＢ００９０ 蛋白质含量测定福林酚法
YY-SW-DB-0090 蛋白质福林－酚法
１． 范围 本方法采用蛋白质与福林 本方法适用于各类蛋白质２．０毫克的氮酚试剂ｐｈｅｎｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ铜复合物磷钨酸还原成蓝色复合物蓝色强度与蛋白质量成正比２５０ｍＬ－１但其缺点也很明显
干扰物质多蔗糖巯基化物柠檬酸等标准曲线的直线关系不特别严格
３．试剂 碳酸钠，氢氧化钠，酒石酸钾钠，硫酸铜５Ｈ２ＯＮａ２Ｗ０４，钼酸钠（Ｎａ２Ｍｏ０４
４．仪器 ７２型分光光度计
１ＯｇＮａ
２ＣＯ３或钠盐或钾盐
０．５ｇＣｕＳＯ４每次使用前将两溶液以Ａ：Ｂ此为试剂甲
在１．５升的磨口回流瓶中加入１０Ｏｇ钨酸钠２Ｈ２Ｏ２５ｇ钼酸钠（Ｎａ２Ｍｏ０４
再加５ＯｍＬ ８５ｌ００ｍＬ浓盐酸接上回流冷凝管以小火回流
１０小时５０ｍＬ蒸馏水及数滴液体溴
冷却后溶液呈黄色须再重复滴加液体溴的步骤将溶液稀
稀至１升滤液置棕色瓶中保存以酚酞为指示剂
约加１倍水使最终的酸浓度为１ｍｏｌ ５．３ 标准蛋白质溶液浓度为２５０ｍＬ－１取动物血清
６．操作步骤 ６．１ 按下表顺序加入各试剂 试管编号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ 蛋白质含量ｇｍＬｍＬｍＬ室温下放置１０分钟
试剂乙Ｌ－１
立即混匀
然后利用未知样品的光密度值
８．说明
８．１ 比色测定时的波长可选６５Ｏｎｍ或６６０ｎｍ１００可选用７５Ｏｎｍ
若在１２５
９．参考文献
１ 李如亮 主编． 生物化学实验． 武汉１９９８． ３７－５８
２ 张龙翔等 主编． 生化实验方法和技术． 北京１９９７． １３６－１４４
３ 李建武等 合编． 生物化学实验原理和方法． 北京１９９４． １５０－１７４ 。
福林(Folin)-酚试剂法测定
将参比样品溶液和被测样 品溶液分别倒入比色皿中， 打开样品室盖，将盛有溶 液的比色皿分别插入比色 皿槽中，盖上样品室盖。 一般情况下，参比样品放 在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入 光路中，在T方式下按“0 ％T”键，此时显示器显示 “000.0”
四、实验步骤
1.标准曲线的绘制 取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比 色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标 作图。 2.样品测定 准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下 表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求 出样液的蛋白质浓度。
管号 牛血清蛋白液 (1mg/ml)ml 蒸馏水ml 蒸馏水 Folin-酚试剂 酚试剂A 酚试剂
摇匀，在室温下放置 分钟后在 分钟后在500nm下比色 摇匀，在室温下放置30分钟后在 下比色 OD500
蛋白质含量测定的方法有哪些，各有什么优 缺点？
下次试验：氨基酸纸层析和维生素C 下次试验：氨基酸纸层析和维生素 定量测定-2， ，二氯酚靛酚法。 定量测定 ，6，二氯酚靛酚法。
附：7200型分光光度计的操作程序
比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此， 比色皿的清洁程度 ， 直接影响实验结果 。 因此 ， 特 别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 别要将比色皿清洗干净 。 装样前处理 ： 自来水反复 冲洗→蒸馏水漂洗2次 → 待装溶液漂洗 2次 。用完后 待装溶液漂洗2 冲洗 → 蒸馏水漂洗2 用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿 盒中。 盒中。
福林酚法测定蛋白酶活力原理
福林酚法测定蛋白酶活力原理哎呀，说起咱们日常生活中的“大力士”——蛋白酶，你可得知道，它可是个超级英雄！它们就像是厨房里的超级英雄，能够把那些坏掉的蛋白质变成美味佳肴。
但是，你知道它们是怎么工作的吗？今天就让我来给你揭秘，让你也能成为家里的小厨神！你得知道什么是福林酚法。
这个方法就像是给蛋白酶装上了一双隐形的翅膀，让它们飞得更高、更快、更稳！简单来说，就是通过测量福林酚在反应中的变化，来判断蛋白酶的活性。
想象一下，如果一个英雄没有翅膀，那他能飞得高吗？当然不能！同样地，没有福林酚，蛋白酶就像没有翅膀的小鸟，飞不起来。
那么，福林酚法是怎么工作的呢？就像是一个神奇的魔法棒，轻轻一挥，就能让蛋白酶释放出惊人的力量。
当福林酚和蛋白酶相遇时，会发生一场激烈的化学反应，就像两个好朋友在一起玩耍一样，充满了欢乐和笑声。
在这个过程中，福林酚会变成一种叫做“酚蓝”的东西，而蛋白酶则变成了另一种叫做“酶素”的存在。
你知道吗？福林酚法还有一个特别的地方，那就是它的灵敏度非常高！就像是一个超级侦探，能够发现隐藏在角落里的小秘密一样，福林酚法也能检测出那些微小的、几乎无法察觉的蛋白酶活性变化。
这样一来，你就可以轻松地判断出你的厨艺水平，是不是已经达到了专业级别了呢？不过，虽然福林酚法听起来很神奇，但它也有一些小小的缺点。
比如，它可能会受到一些干扰因素的影响，导致结果不太准确。
这就需要你在实验过程中多加小心，尽量避免这些干扰因素的出现。
还有啊，如果你想要更准确的结果，可能需要使用一些其他的技术手段来辅助福林酚法。
总的来说，福林酚法是一种非常有趣且实用的技术，它能够帮助我们更好地了解蛋白酶的工作机制，并提高我们的烹饪技巧。
只要你用心去探索，你一定能够成为一名真正的厨艺大师！好了，今天的科普就到这里啦！如果你对福林酚法还有什么疑问或者想了解更多的知识，记得关注我哦！我会为你带来更多有趣的科普内容！。
福林(Folin)-酚试剂法测定
光透过窗口 容 量 的 2/3
比色皿的光面要与光源在一条线上。 比色皿的光面要与光源在一条线上。
1 0 0.5 4.0
2 0.05 0.45 4.0
3 0.1 0.4 4.0
4 0.2 0.3 4.0
5 0.3 0.2 4.0
6 0.4 0.1 4.0
7 0.5 0 4.0
样品 0.5（样液） （样液） 0 4.0
摇匀，在室温下放置 分钟 摇匀，在室温下放置10分钟 Folin-酚试剂 酚试剂B 酚试剂 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
摇匀，在室温下放置 分钟后在 分钟后在500nm下比色 摇匀，在室温下放置30分钟后在 下比色 OD500
附：7200型分光光度计的操作程序
连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。 接通电源，使仪器预热20分钟。 用<MODE>键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A）， 已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F） 方式。 用波长选择旋钮设置您所需的分析波长。
拿放比色皿时，应持其“毛面” 不要接触“光面” 拿放比色皿时，应持其“毛面”，不要接触“光面”。
毛面
光面
若比色皿外表面有液体，应用擦镜纸朝同一方向拭干， 若比色皿外表面有液体 ， 应用擦镜纸朝同一方向拭干 ， 以保证吸光度测量不受影响。 以保证吸光度测量不受影响。
比色皿内盛液应为其容量的2/3， 比色皿内盛液应为其容量的 ， 过少会影响实验 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。 结果，过多易在测量过程中外溢，污染仪器。
分光光度计的使用注意项 注意事项: 分光光度计的使用注意事项:
比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此， 比色皿的清洁程度 ， 直接影响实验结果 。 因此 ， 特 别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 别要将比色皿清洗干净 。 装样前处理 ： 自来水反复 冲洗→蒸馏水漂洗2次 → 待装溶液漂洗 2次 。用完后 待装溶液漂洗2 冲洗 → 蒸馏水漂洗2 用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿 盒中。 盒中。
福林酚法测定蛋白酶活力原理
福林酚法测定蛋白酶活力原理1. 什么是福林酚法？福林酚法，这个名字听上去有点复杂，但其实就是一种测定蛋白酶活力的办法。
简单来说，它就像是蛋白酶的“测谎仪”，用来告诉我们这些酶到底有多能干。
要理解这个方法，我们先得知道什么是蛋白酶。
蛋白酶，顾名思义，就是能把蛋白质搞得七零八落的“拆家伙”。
它们在生物体内的作用可大了，像是消化酶，它们的“工作”就是分解我们吃下去的食物中的蛋白质。
2. 福林酚法的工作原理2.1 准备材料好，咱们先说说准备工作。
你得有几个“主角”，分别是蛋白质底物、蛋白酶、福林酚试剂和氢氧化钠。
底物就是我们用来测试的“蛋白质样品”，而福林酚试剂则是测定结果的“显色剂”。
氢氧化钠用来调整酸碱度，确保反应顺利进行。
2.2 反应过程这个过程就像是做菜一样。
首先，把蛋白质底物和蛋白酶混合，放在一定温度下孵育一段时间。
这时候，蛋白酶开始“拆解”蛋白质了。
接下来，加入福林酚试剂，它会和被分解出来的小分子反应，变成有颜色的化合物。
颜色的深浅，就像是菜的颜色一样，直接反映了反应的程度。
然后，我们用光度计来测量这个颜色，颜色越深，说明蛋白酶的活力越强。
3. 数据分析和结果解读3.1 数据分析有了测量数据后，我们得拿出计算器了。
通过比色计测得的光吸收值，可以告诉我们有多少蛋白质被分解了。
这时候，咱们要把这些数据代入标准曲线中，得出最终的结果。
标准曲线就像是我们的“食谱”，按照它来判断蛋白酶的活力高低。
3.2 结果解读结果解读这一步就像是看天气预报一样。
通过分析，我们可以知道蛋白酶的活力究竟如何。
如果蛋白酶的活力高，那说明它的“拆家”能力强；如果低，那可能就是“效率不高”了。
这样，我们就能了解蛋白酶的实际情况，为后续的实验提供依据。
4. 实际应用福林酚法可不仅仅是在实验室里用得上，它在很多领域都有实际应用。
比如，在制药行业，它能帮助我们评估药物的效果；在食品工业，它可以帮助检测食品中的酶活性，确保食品的质量。
福林酚法测蛋白
福林-酚法的原理该方法是双缩脲法的发展，包括两步反应：(1)在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。
(2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原，混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物)，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
此方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为5～100μg蛋白质。
FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。
此方法的缺点是有蛋白质的特异性影响，即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，标准曲线也不是严格的直线形式。
【仪器与用具】试管若干；刻度移液管05Ml 1支，1Ml 1支，10Ml 1支；定量加样器；圆底烧瓶；冷凝管1套(带橡胶管)；微量滴定管；小烧杯；微量进样器50μl 1支；721分光光度计；恒温水浴器；研钵；玻棒；离心机；离心管。
【试剂】NA2WO4·2H2O；NA2MoO4·2H2O；85％H3PO4；浓HCl；LI2SO4·H2O；溴水；酚酞指示剂；NA2CO3；NAOH；CuSO4·5H2O；酒石酸钾钠；牛血清白蛋白。
所用试剂均为化学纯或分析纯。
【方法】1试剂的配制(1)碱性铜试剂(相当于双缩脲试剂)的制备首先配制A液：4％碳酸钠(NA2CO3)溶液与0.2Mol／L氢氧化钠(NAOH)溶液等比例混合(2％NA2CO3，01Mol NAOH)；B液：1％硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶液与2％酒石酸钾钠溶液等比例混合(0.5％CuSO4·5H2O，0.1％酒石酸钾钠)。
在使用前将A液与B液按50∶1的比例混合即成。
此为FolIn—酚试剂甲液，此试剂只能使用1天。
酚试剂(相当于FolIn试剂)的配备：称取钨酸钠(NA2WO4·2H2O)100g、钼酸钠(NA2MoO4·2H2O)25g，加蒸馏水700Ml溶解于1500Ml 的圆底烧瓶中。
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福林-酚法的原理该方法是双缩脲法的发展，包括两步反应：
(1)在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。
(2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原，混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物)，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
此方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为5～100μg蛋白质。
FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。
此方法的缺点是有蛋白质的特异性影响，即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，标准曲线也不是严格的直线形式。
【仪器与用具】
试管若干；刻度移液管05Ml 1支，1Ml 1支，10Ml 1支；定量加样器；圆底烧瓶；冷凝管1套(带橡胶管)；微量滴定管；小烧杯；微量进样器50μl 1支；721分光光度计；恒温水浴器；研钵；玻棒；离心机；离心管。
【试剂】
NA2WO4·2H2O；NA2MoO4·2H2O；85％H3PO4；浓HCl；LI2SO4·H2O；溴水；酚酞指示剂；NA2CO3；NAOH；CuSO4·5H2O；酒石酸钾钠；牛血清白蛋白。
所用试剂均为化学纯或分析纯。
【方法】
1试剂的配制
(1)碱性铜试剂(相当于双缩脲试剂)的制备首先配制A液：4％碳酸钠(NA2CO3)溶液与0.2Mol／L氢氧化钠(NAOH)溶液等比例混合(2％NA2CO3，01Mol NAOH)；B液：1％硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶液与2％酒石酸钾钠溶液等比例混合(0.5％CuSO4·5H2O，0.1％酒
石酸钾钠)。
在使用前将A液与B液按50∶1的比例混合即成。
此为FolIn—酚试剂甲液，此试剂只能使用1天。
酚试剂(相当于FolIn试剂)的配备：称取钨酸钠(NA2WO4·2H2O)100g、钼酸钠(NA2MoO4·2H2O)25g，加蒸馏水700Ml溶解于1500Ml 的圆底烧瓶中。
之后加入85％的H3PO450Ml，浓HCl 100Ml，安上回流装置(使用磨口接头，若用软木塞或橡皮塞时，就必须用锡铂纸包起来)，使其慢慢沸腾10H。
冷却后加入硫酸锂(LI2SO4·H2O)150g，水50Ml，溴水2～3滴，不用回流装置开口煮沸15Min，以释放出过量的溴。
待冷却后稀释至1000Ml，并过滤入棕色瓶中，密闭于冰箱中保存(冷却后溶液呈黄色，倘若仍呈绿色，须再滴加数滴液体溴，继续煮沸15Min)。
使用时用标准NAOH溶液滴定，以酚酞作为指示剂，滴定终点由蓝变灰，滴定后算出酸的浓度。
使用时大约加水1倍，使最终浓度相当于1Mol／L H＋酸，此为FolIn－酚试剂乙液(FolIn试剂)。
在测定时要注意，因为酚试剂仅在酸性条件下稳定，但此实验的反应只在PH值为10的情况下发生，所以当加酚试剂时，必须立即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏前即能发生还原反应，否则会使显色程度减弱。
（2）标准蛋白质溶液的配制称取25mg牛血清白蛋白，溶于100Ml蒸馏水中，使最终浓度为250μg／Ml。
2标准曲线的绘制
（1）取7支试管，编号后，分别加入0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1Ml，使每管含蛋白量分别为0μg、25μg、50μg、100μg、150μg、200μg、250μg(必要时可做重复)。
(2)在每支试管中用定量加样器加入5Ml甲液，混匀，于30℃下放置10Min。
(3)在每支试管中喷射加入0.5Ml乙液，立即振荡混匀，在30℃下保温30Min。
(4)准确到30Min后，以不加标准蛋白试管中的溶液为空白，在500nM下用1CM光径的比色杯对系列标准蛋白溶液进行比色，测定光密度值。
以蛋白浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
3样品的测定
(1)样品的提取：称取鲜样05g，用5Ml蒸馏水或缓冲液研磨提取。
取10Ml(视蛋白质含量适当稀释)样液加入试管中，然后重复步骤2的(2)、(3)、(4)，以标准曲线中的0管为空白，测定吸光值。
(2)根据吸光值查标准曲线，求出比色液中的蛋白质含量。
4结果计算
样品中蛋白的含量(Mg／g)＝C×VTV1×FW×1000(2-1）
式中C:查标准曲线值(μg)；
VT:提取液总体积(Ml)；
FW:样品鲜重(g)；
V1:测定时加样量(Ml)。
【注意】
还原物质，其他酚类物质及柠檬酸对此反应有干扰。