新生儿溶血病检测卡标准操作程序(SOP)
新生儿溶血病检测标准操作规程
新生儿溶血病检测标准操作规程1.检验原理：本试验为将排阻层析和抗人球蛋白试验（Coombs试验）相结合，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应的不完全抗体在抗人球蛋白的作用下发生凝集反应，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应的不完全抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
2.主要组成部分：本品系在聚丙烯塑料透明卡片上的六支微柱型管中填充葡聚糖凝胶和抗人球蛋白（多抗），制成抗人球蛋白检测卡，凝胶微管分为反应腔和凝胶分离柱两部分。
3.样本要求：3.1红细胞样本：采集被检对象静脉血，用EDTA抗凝，配制成红细胞悬液（直接抗人球蛋白试验配制成红细胞生理盐水悬液，间接抗人球蛋白试验配制成红细胞低离子溶液悬液（只适用于交叉配血和不规则抗体筛检）），红细胞最终浓度0.5%-0.8%。
3.2血清样本：采集被检对象静脉血，放入含有兔脑粉或者其他促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或者37℃放置2小时后离心，200rpm10分钟，取上清该上清不得有絮状物或沉淀。
血清标本必须充分去蛋白，否则标本中析出的或红细胞悬液中残余的纤维蛋白可阻碍红细胞沉降，使非凝集细胞离心后在胶表面形成一条红线，呈假阳性反应。
4.检验方法4.1.准备工作1）微柱凝胶检测卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18－25℃），再用专用离心机离心5分钟。
2）标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象脐带血或静脉血，制备成红细胞标本和血浆标本。
3）红细胞悬液的制备：将被检者红细胞标本至少洗涤4次，取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液或生理盐水，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
4）血浆标本的处理：将被检者血浆标本进行离心，采用3000r/min 离心3min 或3500r/min 离心2min（不得有絮状物或沉淀）。
新生儿溶血病产前产后检测操作步骤
产前血型血清学检查标本要求：夫妻双方抗凝血2ml（尽量要求父亲抗凝血2ml，非必要），母亲促凝血3-5ml（血清）。
第一步：取两个试管分别标记 A 和BA管 700 μL生理盐水 B管（从A管取200 μL混合液+100 μL母亲血清混匀再加入200 μL血浆IgM稀释液）混匀 B管封口绑紧37℃温育1小时。
第二步:紧接着做父母ABO血型、RH型和母亲的不规则抗体。
第三步：取六个试管，分别标记123456，每管里面加200 μL盐水（父亲AB型需要同时做IgG抗A效价和IgG抗B,各做1次）。
第四步：等B管温育时间到了，从B管吸200微升到1管，混匀后从1管吸200 μL到2管........从5管吸200 μL到6管，依次添加稀释（倍比稀释）。
第五步：取不规则卡标记好 6 5 4 3 2 16 5 4 3 2 11.所有孔先分别加入50 μL父亲（与父亲同型）的0.8%红细胞悬液。
2.然后每孔再依次加入相对应管号里面的稀释液50 μL（防止交叉污染，从浓度最低往最高依次加）。
第六步：1.放到37℃温箱温育15分钟。
2.离心5分钟，取出判读结果。
注：判读结果往前推一位（例如6号孔是阳性，就报5号管是阳性）。
母亲RhD阴性血型，不用加入血浆IgM稀释液，不用37℃温育1小时。
直接第二步同上。
产后血型血清学鉴定标本要求：新生儿抗凝血2-3ml第一步：1.收到标本之后离心2分钟，取两个空试管，标记红细胞1和血浆2。
红细胞1 血浆22.将离心好的血样中血浆全部吸入空试管2中，剩余的红细胞吸入另一空试管1中。
3.向试管1中加3000μL生理盐水，进行洗涤，洗涤红细胞三次后，取压积红20μL+2480μL盐水加入新的试管中配制成0.8%红细胞。
（剩余的压积红留着做放散液）。
第二步;直抗试验、血型试验取0.8%红细胞50μL分别加入血型卡和不规则抗体卡中（只加一个孔）做好标记，直接离心五分钟看结果。
第三步：游离试验、放散试验1.取试管1中压积红1000μL+盐水1000μL（1:1适量配比）。
新生儿溶血病检测操作SOP
新生儿溶血病检测操作SOP一、产前诊断1.夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh(D)血型定型检测卡）1.1将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；1.2撕开微胶卡的封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1% 待检 RBC 生理盐水悬液各50μl；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入1.0% A1、B、O型试剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50μl，再分别加入待检血浆（血清）50μl；1.3将检测卡室温反应≥10 min,取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min离心；1.4取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。
按下表检验结果判定ABO、RhD血型：2.孕妇抗体效价的测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）2.1孕妇IgG(抗A/抗B)效价2.1.1取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各0.2ml，充分混匀，37℃水浴2小时（以充分破坏血清中的IgM类抗体）。
2.1.2取4支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中和血清和1.6毫升低离子介质（原液为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的64倍）。
2.1.3 第2－4管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。
2.1.4取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入倍比稀释好的灭活血清50微升和1％的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质(LIM)悬液50微升。
2.1.5将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
2.1.6将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30分钟内进行）2.1.7取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG(抗A/抗B)效价≤64。
2.2孕妇IgG(抗D)效价测定2.2.1 确定孕妇为RhD阴性，丈夫为RhD阳性。
新生儿溶血病检测卡标准操作程序(SOP)
新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
(二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。
（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。
（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。
该上清不得有絮状物或沉淀。
（六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。
即放散液。
2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。
参见酸性放散试剂盒使用说明书。
二、实验步骤1、取新生儿的红细胞0.8%－1％悬液50ul分别加入卡1中的1－6孔中。
2、使用专用离心机离心5分钟，900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟。
3、取出，判读结果。
4、第二卡1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号；将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号；将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。
6、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读结果。
结果判定阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。
表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
新生儿溶血病检测作规程
新生儿溶血病检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称：新生儿溶血病检测（包括直接抗人球蛋白试验、游离试验和放散试验三项）2.检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌：美国强生奥索2.代号：BioVue-po1yCassettes3.包装规格：400卡/箱试剂卡（707300）；100卡/箱试剂卡（707350）4.试剂成分:抗人球蛋白（1gG,C3b∕C3d）检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.0IM的EDTA.成分描述第1〜6柱：抗人球蛋白、抗抗一IgG（兔）-IgG.-C3d；多特异性抗一C3b（鼠单克隆）（克隆F7G3）抗一C3d（鼠单克隆）（克隆C4C7）FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期：储存条件：2〜25。
C环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVUe专用离心机；BiOVUe专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2—8。
C保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白（IgG,C3b∕C3d）检测卡为即用型产品。
试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。
试剂卡经过运输颠簸后，需倒置一下，然后重新离心以备用。
新生儿溶血
新生儿溶血试验操作程序标本：1、采集婴儿（出生1~3天）、母亲EDTA抗凝血3－5ml；2、离心3000转/分钟，5分钟，取血浆备用；一、定血型：取婴儿、母亲的红细胞定ABO、Rh血型；二、样品准备：1、取红细胞适量，用生理盐水洗涤三次，去上清液；2、取洗涤后的压积红细胞适量，用生理盐水配制1％红细胞悬液，用来做直接coombs实验；三、ABO系HDN：放散液提取法：1、取红细胞适量，用生理盐水洗涤三次，去上清液；2、取洗涤后的压积红细胞适量，按1/2或等量生理盐水；置56℃水浴，10min，间断摇动；离心，取上清液（即放散液）备用；1、直接Coombs实验：取多特异性卡一张；于第一孔加入1％红细胞悬液40ul；将多特异性卡放入离心机，离心5min；判读结果；2、判读完结果再做：1）游离实验：于上述多特异性卡的第二、三、四孔分别标记A、B、O；各加入1％的A、B、O型标准红细胞悬液40ul；各加入新生儿血浆40ul；2）放散实验：于上述多特异性卡第五、六、孔分别标记A、B；各加入1％的A、B型标准红细胞悬液40ul；各加入红细胞放散液40ul；取第二张多特异性卡于第一孔标记O；加入O细胞悬液40ul和红细胞放散液40ul；3、将多特异性卡放入孵育器37℃孵育10min；4、将多特异性卡放入离心机离心5min；5、判读结果；- 100%的红细胞沉在微管的底部+/- 100%的红细胞沉在微管的下端1/3之内1+ 80%的红细胞沉在微管的下端2/3之内2+ 80%的红细胞沉在微管的上端2/3之内3+ 80%的红细胞沉在微管的上端1/3之内4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部d.p. 双群Hemo. 溶血四、ABO系以外HDN：1、当用“O”型筛选细胞或配组细胞检测或鉴定母亲或患儿血清中有ABO系统以外的抗体，如为阳性。
或当直接Coombs实验阳性强度大于或等于“＋＋”时，可进行以下操作；2、用乙醚放散法制备放散液，方法如下：1）取1体积三洗红细胞加1体积生理盐水（或AB血浆）、2体积分析纯乙醚，颠倒摇匀10分钟，然后以1300转/分钟，离心5分钟；2）离心后即分成三层，最上层是乙醚，中层是红细胞基质，下层是具有抗体的放散液；3）该放散液置37℃水浴中30分钟，除尽乙醚，离心上清即为放散液。
新生儿溶血病检测微柱凝胶法标准操作规程
新生儿溶血病检测微柱凝胶法标准操作规程【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】BYZ型血库血清学多用离心机，2002-2型血库专用离心机,恒温箱，水浴箱【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】新生儿溶血病检测微柱凝胶法的操作。
【原理、方法、用途】本品采用抗人球蛋白微柱凝胶免疫检测技术，用于新生儿溶血病检测。
在微柱凝胶介质中，抗体与相应的红细胞结合后，凝胶中抗人球蛋白形成凝集块，离心后仍滞留在胶上或胶中，而未和抗体结合的红细胞则完全沉于凝胶底部。
该方法使试验更简单，更规范，结果更易判定。
本品系由聚丙烯塑料透明卡片的六支微柱型管中充满葡聚糖凝胶和抗人球蛋白，制成抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡。
【标本采集和处理】1．由临床科室采用真空负压EDTA-K2抗凝管采集2ml-3ml，作好标记，立即送检。
采血时要防止溶血及多量组织液混入（多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时），在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。
3. 检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。
确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号。
并按日期索引进行登记。
4. 将标本置于2002-2型血库专用离心机内，放置保证平衡，以3000转/min 离心5分钟。
保证血浆于血球有效分离。
溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。
【试剂】抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡。
标准0.8%，A,B型红细胞悬液，2--ME【操作步骤】1．取出抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡，应注明病人姓名、科室和床号。
2. 将母体血清（血浆）200ul与试剂2-ME200ul加入试管中。
水浴30—60分钟。
3. 取出六个试管，编号第一管加入1.4ml其他按顺序加入生理盐水50ul。
母体效价SOP
新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
(二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。
（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。
（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。
该上清不得有絮状物或沉淀。
（六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。
即放散液。
2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。
参见酸性放散试剂盒使用说明书。
二、实验步骤1、取新生儿的红细胞0.8%－1％悬液50ul分别加入卡1中的1－6孔中。
2、使用专用离心机离心5分钟，900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟。
3、取出，判读结果。
4、第二卡1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号；将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号；将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。
6、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读结果。
结果判定阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。
表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病是由母婴血型不合引起，可见于ABO、Rh及MN等血型系统。
胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统受到免疫性破坏，出现溶血，表现出相应的症状。
病情严重程度因个体差异、抗体类型、抗体效价等不同而异。
1目的规范新生儿溶血病血清学检查操作；查找新生儿溶血病发生的原因，协助临床进行实验室诊断及治疗；保证临床用血的安全性及有效性。
2适用范围母婴血型不合引起的新生儿溶血病的血标本。
3职责输血科(血库)技术人员负责新生儿溶血病血清学检查。
4原理通过检测新生儿血浆中是否存在来自母体并与新生儿红细胞血型抗原不相容的IgG类红细胞血型抗体，直接抗人球蛋白试验证实新生儿红细胞是否被致敏，放散试验证实新生儿红细胞是否能解离出来自母体的红细胞血型抗体，根据以上三项试验结果综合诊断新生儿溶血病。
5设备与材料5.1材料单克隆抗-A、抗-B、抗-D定型试剂、多特异性抗球蛋白试剂或微柱凝胶抗球蛋白卡、A、B、O型试剂红细胞、筛选细胞、谱细胞、生理盐水、小试管、滴管、小玻棒、新生儿静脉血、产妇及患儿父亲血标本。
5.2设备普通离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱、水浴振荡仪、普通显微镜。
6检测环境室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。
7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1采集患儿父母的血标本采集患儿父母的血标本各3～5ml，分离出血清，配制3%～5%红细胞盐水悬液。
7.1.2采集患儿血标本7.1.2.1采集患儿静脉血3-4ml，EDTA-K2抗凝，离心分离出血浆及红细胞，取压积红细胞30-50μl，加生理盐水1ml配制成3%-5%的红细胞悬液。
7.1.2.2如果患儿血标本为不抗凝血，则在一小玻璃漏斗颈部置一适当大小的棉球，把血块倒在棉球上，一边加生理盐水，一边用玻棒挤压血块，收集漏斗下的红细胞悬液。
7.2患儿血标本7.2.1血型鉴定具体操作执行《ABO和Rh（D）血型鉴定标准操作规程》。
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。
新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
新生儿溶血病标准操作规程
新生儿溶血病标准操作规程新生儿溶血病是一种严重的疾病，可能造成新生儿死亡或长期残疾。
为了保证患儿及时获得正确的诊断和治疗，制定一套完善的标准操作规程是非常重要的。
以下是一份新生儿溶血病标准操作规程，供参考。
一、前期准备1. 确保医护人员熟悉新生儿溶血病相关知识和诊疗流程。
2. 准备必要的设备和工具，包括实验室检测设备、输血设备、药物等。
3. 与新生儿家属进行沟通，解释疾病的诊断和治疗方案，取得家属的理解和同意。
二、病史获取和体格检查1.详细询问孕妇妊娠期间的相关情况，包括母体血型、产妇产程、新生儿出生时体重、颜色是否异常等。
2.进行新生儿的体格检查，包括皮肤黄疸程度、肝脾大小、异常出血点或斑点等。
三、实验室检查1.进行新生儿的血型鉴定，包括ABO血型和Rh(D)血型。
2.进行新生儿全血细胞凝集试验，以确定新生儿红细胞是否具有抗原抗体反应。
四、治疗1.根据新生儿溶血病的程度和临床表现，进行治疗的分类和评估。
2.对于轻度溶血病病例，给予观察和支持治疗，包括补液、护肤和黄疸照射等。
3.对于重度溶血病病例，进行积极治疗，包括输血、免疫抑制剂治疗等。
4.如果新生儿具有高风险因素（如Rh(D)不合并高抗体水平等），则可以考虑进行预防性治疗，包括Rh免疫球蛋白注射等。
五、预后和随访1.对于新生儿溶血病的治疗效果进行评估，包括黄疸程度、血红蛋白水平等指标的变化。
2.对于出院的新生儿患者，需要进行随访，包括定期复查血常规、肝功能、血型等指标，以监测病情的变化。
3.对于需要长期随访的新生儿患者，建议建立相关档案，做好记录和跟踪。
六、病例讨论和学术交流1.新生儿溶血病是一种复杂疾病，建议定期召开学术会议或病例讨论，以总结经验、交流治疗经验，并不断完善标准操作规程。
2.在学术交流中，重点关注新的诊疗技术和方法，以提高治疗水平和效果。
新生儿溶血病是一项复杂的工作，需要医护人员具备丰富的专业知识和临床经验。
以上标准操作规程只是提供了一种参考，实际工作中还需要结合具体情况进行个性化的治疗方案和操作流程。
新生儿检测程序(新)
产后新生儿溶血病检测的操作程序1、样品准备：（一）红细胞悬液：①采集新生儿抗凝血（充分）3-5ml。
②离心3000rpm，3min，取血浆备用。
③取红细胞适量，用生理盐水洗涤三次，去上清液。
④取洗涤后的压积红细胞适量5ul，用DianaSol 1溶液配制500ul 1％红细胞悬液。
（二）红细胞放散液制备：①采集新生儿抗凝血（充分）3-5ml。
②离心3000rpm，3min。
③取红细胞适量（0.5-1ml），用生理盐水充分洗涤三次，去掉上清液。
④取洗涤后的压积红细胞适量，按1：1等量生理盐水混匀。
⑤置56℃水浴，不断摇动10min。
⑥保温离心3000转/2分钟。
⑦速取樱红色上清液（即放散液）备用。
2、ABO/Rh血型鉴定＋直接Coombs实验：①取新生儿血型卡一张。
②分别加入婴儿1%红细胞悬液8孔各50ul。
③将卡放入孵育器孵育15min（37℃）。
④将血型卡放入离心机离心。
⑤判读结果。
3、游离实验和放散实验：①取戴安娜配血卡（Coombs）一张。
②按A、B、O，A、B、O 标记6孔各加入1％的红细胞50ul。
③前3孔各加入新生儿血浆50ul，后3孔各加入放散液各50ul。
④将卡放入孵育器孵育15min（37℃）。
⑤将卡放入离心机离心。
⑥判读结果。
4、ABO血型以外的新生儿溶血病：①当直接Coombs实验阳性强度大于或等于“＋＋”时，考虑。
②用乙醚放散法制备放散液。
③分别对母亲血清和新生儿放散液作抗体鉴定。
5、判断规则：类型直接Coombs实验游离实验放散实验新生儿溶血病1 －－＋是2 当任意两项为＋时是3 ＋＋＋是4 除以上情况外否注：RH血型系统或其他系统放散液制备：试剂：等体积的氯仿和三氯乙烯混合物。
操作步骤：1、生理盐水洗红细胞6次。
2、配1：1盐水红细胞混合液+入1体积氯仿和三氯乙烯混合物。
3、塞住试管口，用力摇动试管10秒，倒置1分钟混合均匀。
4、高速离心3000转/2分钟。
5、取上层的放散液（切忌混入中下层液体）。
新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序
SOP_10-4 新生儿溶血病血型血清学检查标准操程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员。
四、操作步骤：新生儿溶血病包括:①母婴血型不合新生儿溶血病;②红细胞葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷;③球型红细胞增多症。
因为母婴血型不合所致新生儿溶血病为首先发现,所以新生儿溶血病特指为母婴血型不合所致的新生儿溶血,另外两种疾病是以疾病原因命名。
造成新生儿溶血病的抗体有：ABO系统（IgG抗A、IgG抗B、IgG抗AB）；Rh系统（抗D、抗E、抗Ce、抗cE、抗c）；Kidd系统（抗Jka、抗Jkb）；MNSs系统（抗-M、抗N、抗S、抗-s）；Kell系统（抗K、抗-k）；Daff系统（抗Fya、抗Fyb）；Diego系统（抗-Dia、抗-Dib）。
ABO系统新生儿溶血病多见于ABO血型不合的母子。
O型母亲多见(90%以上),多由IgG-AB所致。
A型、B型母亲少见(不足10%),多由IgG抗A或抗B所致。
Rh系统则多见于母子ABO血型相合者(母有输血史除外),以抗D为多见,为抗E,抗cE等。
其它系统为母子其它血型系统不相合。
1.原理：母体内存在与胎儿红细胞不相合的抗体。
抗体的产生是胎儿的红细胞抗原(由父亲而来的恰好是母体红细胞上所缺少)进入母体,刺激母体产生了免疫性抗体。
胎儿红细胞被来自母亲的IgG抗体所包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到免疫必破坏。
另外，母亲有输血史,产生的免疫性抗体恰巧与胎儿红细胞抗原是相应的，也会发生新生儿溶血病。
2.检查方法2.1 ABO新生儿溶血病的检查* 母血清中天然抗体A （B ）用型物质或2-ME 中和后进行试验。
夫妇或母子间ABO 血型关系：妇 夫血型 子血型血型 血清抗体 配合 不配合 配合 不配合O 抗A 、B O A 、B 、AB O A 、BA 抗B A 、O B 、AB A 、O B 、ABB 抗A B 、O A 、AB B 、O A 、ABAB A 、B 、O 、AB A 、B 、AB（1）ABO 定型：新生儿血清中的同种抗体来源于母亲,所以新生儿的ABO 检查完全依靠细胞定型(正定型),如果ABO 定型为O 型,则可排除ABO-HDN 的可能。
新生儿溶血病检测操作
新生儿溶血病检测操作SOP一、产前诊断1.夫妇血型检测（微柱凝胶检测法：ABO、Rh(D)血型定型检测卡）将红细胞稀释至1% 红细胞生理盐水悬液；撕开微胶卡的封膜，于正定管蓝A、黄B、灰D、Control微柱管反应腔中加入1% 待检 RBC 生理盐水悬液各50μl；于反定管白色A、B、O、自身管分别对应加入% A1、B、O型试剂红细胞和待检红细胞生理盐水悬液50μl，再分别加入待检血浆（血清）50μl；将检测卡室温反应≥10 min,取出，置离心机1000r/min 2min，1800r/min 3 min离心；取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）。
2.孕妇抗体效价的测定（微柱凝胶检测法：抗人球蛋白检测卡）孕妇IgG(抗A/抗B)效价取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37℃水浴2小时（以充分破坏血清中的IgM类抗体）。
取4支干净试管排于试管架上；将第一管加入50微升中和血清和毫升低离子介质（原液为1:1稀释，此时稀释倍数为原液的64倍）。
第2－4管中分别加入400微升低离子介质；从第一管中吸出400微升的液体加入第二管，混匀，在从第二管吸出400微升加入第三管混匀，依次倍比稀释。
取抗人球蛋白检测卡，撕去铝箔，在4管中个依次加入倍比稀释好的灭活血清50微升和1％的标准红细胞（或父亲红细胞）低离子介质(LIM)悬液50微升。
将加好样的检测卡入生科孵育器中孵育15分钟。
将孵育好的检测卡放入生科离心机中离心5分钟（1000r/min 2 min，1800r/min 3 min），（离心必须在加样后30分钟内进行）取出，判定结果（凝集强度判断详见结果判定示图）临床参考值：孕妇IgG(抗A/抗B)效价≤64。
孕妇IgG(抗D)效价测定确定孕妇为RhD阴性，丈夫为RhD阳性。
取待检血清和2-Me(二巯基乙醇)应用液各，充分混匀，37℃水浴2小时（孕妇血清与O型RhD阳性红细胞反应盐水法为阳性需要灭活，阴性不需要灭活）。
新生儿溶血操作流程
新生儿溶血操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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使用消毒过的采血针进行穿刺，采集适量的血液。
新生儿溶血卡式游离放散试验及判定表
游离和放散试验操作程序
（微柱凝胶法）
一、被捡者红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞400微升，加入5毫升生理盐水，离心1
分钟，弃去上清液，再入5毫升生理盐水，离心，反复4次，第4次弃去上清液后，再离心然后弃去上清液。
取洗涤后的压积红细胞与350微升生理盐水混匀，即为红细胞悬液。
二、放散液制备：将红细胞悬液置于56℃水温箱，孵育10分钟，期间不断摇动，以离心力1000g，
离心2－3分钟，取上清即红细胞放散液。
三、操作步骤：
（一）反定型红细胞悬液的制备。
取反定型红细胞A、B、O各1滴（约50微升）于标记好的试管中，加生理盐水250微升。
（二）取抗人球蛋白试剂卡，写上姓名，1、2、3孔分别加入50微升新生儿血浆（游离试验），4、5、6孔分别加入50微升红细胞放散液（放散试验）。
（三）在第1、4孔分别加入新配制的A型红细胞悬液各50微升；在第2、5孔分别加入新配制的B型红细胞悬液各50微升；在第3、6孔分别加入新配制的0型红细胞悬液各50微升。
（四）将检测卡置于37℃孵育器孵育15分钟。
（五）使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出检测卡，根据表格判读结果：
阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或悬于胶中，表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或红细胞被致敏。
用”+”表示。
阴性结果：红细胞完全沉降到微柱管尖底部，表明血清中无相应抗原免疫的抗体或红细胞没有被致敏。
用”0”表示。
新生儿溶血病游离放散试验判定表。
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新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）
一、准备工作
（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
(二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）
（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。
（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。
（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。
该上清不得有絮状物或沉淀。
（六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。
即放散液。
2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。
参见
酸性放散试剂盒使用说明书。
二、实验步骤
1、取新生儿的红细胞0.8%－1％悬液50ul分别加入卡1中的1－6孔中。
2、使用专用离心机离心5分钟，900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟。
3、取出，判读结果。
4、第二卡1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号；将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号；
将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。
6、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读结果。
结果判定
阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。
表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱（2+或1+）。
三、注意事项
1、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本实
验。
2、血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红
细胞沉淀，呈假阳性反应。
3、如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致
溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员多报告并讨论。
4、父亲红细胞标本也可用与其同型的A型或B型红细胞代替。
5．洗出尽量多红细胞进行放散；注意放散的温度不可超过56℃，以防溶血；天冷时放散液注意保温；尽可能多得放散液吸出；注意出去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要充分洗涤，至少三次。
6、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。
7、红细胞悬液的浓度控制在0.8%－1％之间。
8、试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离
心一次，以防止干胶或产生气泡。
新生儿溶血病游离、放散试验的判定。