口蹄疫疫苗生产流程

疫苗生产项目简介
(一)灭活疫苗：目前常用的有流行性乙型脑炎疫 苗，狂犬病疫苗（二倍体细胞与地鼠肾细胞可 用于生产狂犬病病毒固定毒灭活疫苗），流感 灭活疫苗。常用甲醛为灭活剂，以灭活病毒核 酸而不影响其抗原性。 (二)减毒活疫苗: 通常采用自然法或人工法，通 过动物传代或细胞传代筛选对人毒力低的变异株 病毒。常用的有脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、流 感温度敏感突变株疫苗、流行性腮腺炎疫苗、风 疹疫苗、黄热病疫苗以及一些联合疫苗（如麻疹 、腮腺炎、风疹联合疫苗）。
•
、多层培养、微载体培养或悬浮搅拌培养等方法, 先大量增殖细胞，然后接种一定量的病毒,继续培 养适当时间时，冻融细胞后，离心收获上清。 以上病毒大量生产后可制作病毒疫苗（死疫苗或 减毒活疫苗），也可用来作干扰素诱生剂或提取 病毒表面抗原成分。
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一. 生产过程举例１：
发酵 纯化Ⅰ 纯化Ⅱ 灭活吸附
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• 注射用水一般用纯化水通过蒸馏法制得，
化学纯度可达99.999%，为保证注射用水的 质量，必须随时监控蒸馏法制备注射用水 的各生产环节，定期清洗与消毒注射用水 制造与输送设备，严防内毒素产生，一般 应在八十摄氏度 以上保温、六十五摄氏度 保温循环或四摄氏度以下的无菌状态下存 放，并在制备后十二小时内使用。
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疫苗，是指为了预防、控制传染病的发生、 流行，用于人体预防接种的疫苗类预防性生 物制品。其原理是将病原微生物（如细菌、 立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过 人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成 的用于预防传染病的自动免疫制剂。
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当我们拿到一个工程项目时，首先要做的就是 明确设计的依据，这个依据应该包括：工艺技 术、设备及公用辅助设施等有关基础资料、生 产规模、生产方式、生产班制, 国家及行业主 要有关规范和规定等，只有有了这些依据，我 们下一步的工作才能做到有的放矢。然后就是 确定工程范围，明确我们要做的工作。
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二、生产过程举例２：
发 酵
安全/抑制有效病原体
收集/灭活
安全/尤其产生不稳定病毒
加 工
去除杂质及所需产物特性相近 的外来物质
在辅助剂帮助下完成对大疫苗颗粒 的灭菌过滤滤
配制和灌装
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• 无论一种疫苗在试验阶段是多么有效，但
如果其最终产品悬液不能稳定地储存和运 输，那么它的商业价值就会受限，面对这 一问题，人们开发了各种剂型，但目前常 用的，也是最有效的方法还是冻干，制药 企业可以将其运用到那些昂贵的、不稳定 的疫苗生物制品的生产中。
（NDV-F）、仙台病毒等，目前尚无敏感细胞， 常采用9～10日胚龄的尿囊腔接种，37℃孵育72 小时收获尿液，用鸡红血球测定血凝效价。Q热 用7日龄鸭胚进行卵黄囊接种收获卵黄囊，马脑 炎病毒常采用10日龄鸡胚体接种，收获全胚体液 等。
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• 3、细胞培养法 • 不同的病毒选用相应的敏感细胞，采用转瓶培养
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•
在洁净空调系统中，室外新风先通过新风过滤去除空气 中较大粒径的杂质，然后通过加热、表冷、加湿段等来 调节送风的温湿度，目前常用的有两种做法，一种是设 置单独的新风空调，达到新风处理的目的，此新风空调 可满足初步洁净度的要求，还可以根据需求对温湿度进 行控制；另一种做法是不设置信封空调，所有的洁净度 和温湿度都靠净化空调来实现，对于空气质量相对较好 ，温湿度负荷不是很大的地区，用第二种方法可以节省 投资和占地面积，而对于空气质量不是很好或者温湿度 负荷较大的地区，则容易导致过滤器短时间内堵掉、机 组过大、不易调节等问题，所以具体选用哪种方式要根 据具体情况来确定。
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• 通过以上简单的介绍，我们知道了疫苗生
产包括原液生产和制剂生产，为了得到真 正的能用于实际的疫苗，我们就需要建设 用于疫苗生产的车间，为疫苗的生产提供 环境和物料方面的支持，那么建设一个疫 苗生产车间需要哪些专业的配合呢，下面 我们分别进行说明。
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• 首先是工艺专业，因为已经确定了工艺平
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• 洁净维护为疫苗的生产提供了一个相对洁净的环
境，可以阻止外部的灰尘的进入，而对于内部空 气的净化与室内产尘的清除，就要靠洁净空调系 统来实现了，目前，疫苗车间常用的空调系统为 FFU与高效口联合送风的方式，FFU的集中布置 在轧盖间和分装间，此部分为整个疫苗生产线的 核心中的核心部位。根据欧盟GMP要求，此部分 必须用A+B的送风方式。即在设备区域必须满足 A级（相当于百级），在设备外侧部位必须满足 B级（相当于静态百级动态万级）来保护A级区 域。其余部位则通过高效送风口来实现洁净度的 要求。
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风管安装实例
保温安装实例
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• 因为现在的集成度较高，好多地方手工控
制都都不能满足要求，所以无论工艺的管 道、设备，还是空调机组和排风装置，都 要加自控装置，对于疫苗生产车间来说， 主要要控制的方面包括工艺管道系统的流 量、温度、TOC、电导率、PH值，暖通空 调方面的尘埃粒子在线监测等，下面分别 作一介绍。
4、可调式地轨+PVC地面；
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5、双层玻璃观察窗；
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6、暗架龙骨吊顶；
C
A
A B B
暗架天花板节点图
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各种型材三维图：
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整体效果：
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由以上图片显示，双圆弧天轨、圆弧转角、 单圆弧收边、可调式地轨+PVC地面、双层玻璃观 察窗、暗架龙骨系统从根本上保证了生物医药厂 房围护结构的平整性能和密封性能，从而最大程 度上保证了生物医药厂房的安全性。
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确定了以上的各项工作后，设计工作就要正式开始了 ，作为市场开发人员，我们要大致了解一下一般设计 的基本原则，这样能方便我们工作的开展： 1、根据生产工艺特点和GMP实施指南要求，全面规 划，精心设计，在满足生产需要的前提下，做好工艺 设备平面布置，使之既符合消防安全又节约能耗、方 便生产。 2、设计中要重视技术进步，认真吸取国内外先进经 验，积极慎重地采用新工艺、新设备以确保产品质量 和提高生产效率。选用运行可靠、质量高的国产设备 及国外设备。
面和设备平面布置，下面的主要工作就是 配管了，工艺管道是物流的通道，是疫苗 生产的血管，它为生产提供原料、水、蒸 汽等。对于一般的疫苗项目来说，用到的 主要的工艺管道包括：注射用水、纯蒸汽 、纯水、压缩空气、氧气、氮气、冷却水 、废水等系统，而对产品质量起到关键作 用的则是注射水、纯水、纯蒸汽系统。
PCS-7工程师站 自控系统组态、控制； 洁净室粒子状态画面； FFU实时状态画面显示； 水系统实时动态控制
分装间药品流程
A
m2
A
m2
A
m2
注射原液稀释后拿到 分装线，灌装加塞， 送入冻干机。从冻干 机拿出来的粉剂运到 扎盖机扎盖后，变成 成品运出车间。
设备布局和药品流程
分装间在线粒子计数采样点布置
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生产工艺确定了，我们要根据工艺流程来进行 工艺平面布置，在这里最重要的一点就是不能 出现交叉污染的风险，这又要简单的了解一下 疫苗的分类。目前使用的绝大部分疫苗，都是 用于预防病毒或细菌的感染的。它们主要分为 三类：减毒活疫苗；灭活的全菌体或全病毒疫 苗；组分疫苗—亚单位疫苗、多糖疫苗或结合 型疫苗、类毒素等。
微载体培养
微载体培养
多层滋养增殖器 转瓶培养
灭活
脊髓灰质 盐疫苗
活
死
灭活 死
VERO细 胞
人二倍 体细胞
人二倍体细胞 豚鼠胚成 纤维细胞
狂犬病 毒疫苗
流行性乙型 脑炎疫苗 单纯疮疹
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(病毒生产制备的方法：
• 1、动物接种，如狂犬病毒、脑炎虫媒病毒采用 鼠、兔脑内接种后收取脑组织制成悬液。 • 2、鸡胚、鸭胚接种：如流感病毒、副流感病毒
Maximum concentration limits (particles/m3 f air) for particles / Airborne Viables (cfu/m)
Room classification 0.5μ A –Operational 3,500 5μ 1(e) Viable cfu/m3 And / φ90 mm settle plate
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• 经过机组处理过的洁净空气通过风管送到各个洁
净区域，再经过高效过滤器送到室内，这与普通 的空调送风没有太大的区别，不同之处在于疫苗 生产车间有消毒杀菌的需求，是生产过程中的重 要一环，所以选择一个好的杀菌方式是相当重要 的，目前常用的就是用外置臭氧发生器消毒，可 以满足一般的消毒杀菌的要求，但对于部分有防 爆要求的全新风房间，怎要根据具体的情况选择 合适的杀菌方式。
连接方式：1台FFU控制器，分路网线连接现场FFU。 工作站在值班室实现控制每组FFU的启/停，无级调速，显示FFU的 运行状态及故障报警
工作状态： 开启全部FFU,使洁净室达到A级工作状态 值班状态： 部分开启FFU或降速运行,使洁净室保持在B级状态。
EU GMP对灭菌生产操作区洁净室的分类（动态）
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(三)亚单位疫苗：用化学试剂裂解病毒，提取包 膜或衣壳上的亚单位，除去其核酸，以此制成 的疫苗称亚单位疫苗。如流感病毒的包膜提取 后制成的血凝素和神经氨酸酶亚单位疫苗。 下面是几种疫苗的培养方法。
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疫苗名称
脊髓灰质 盐疫苗
疫苗株 死∕活
制备细胞 培养方法
猴肾细胞 转瓶培养
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以往工程实例
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• 疫苗的生产需要在一个相对洁净的区域内
生产，这就要靠洁净维护和洁净空调来实 现，下面先说说洁净维护系统： 作为生物医药厂房，它与其它洁净厂房的 区别不是很大，主要在于： 1、生物医药厂房对维护结构（即壁板和 顶板等）的密封性能要求更高； 2、生物医药厂房对维护结构的平整度要 求更高；
疫苗车间自控组成
• 洁净空调自控系统 • 冷冻站自控系统 • 纯水自控系统 • 注射用水自控系统 • 在线粒子检测系统 • FFU控制系统 • 门禁监控系统 • 系统集成
自控框架图
自控网络结构
• INTERNET互联网 • 企业管理网(局域网LAN) • 工业控制网(单环工业以太网) • 现场总线(双DP,RS485 总线等型式)
控制结构
PCS7 工程师/操作 员
+
WEB 服务器
用户通过IE登录WEB服务器进入PCS7自控系统
系统集成
WEB服务器
实现用户远程登录系统页面 ， 支持电子签名，跟踪记录. 数据服务器（OPC） 按用户权限分级登陆。 收集所有子站的实时过程 数据，建立历史数据库， 支持在线数据存储和查询 。 文件报表输出
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• 纯化水为饮用水经蒸馏法、离子交换法、
反渗透法或其它适宜方法制备的水，水中 不含任何附加剂，制备过程中应防止 防止 微生物污染，常用作溶剂或精洗用水，临 用前准备；纯蒸汽作为灭菌消毒的一种介 质，是利用纯化水或注射用水再次加热蒸 发产生的。工艺管道一般全部采用不锈钢 材质。注射水和纯蒸汽为电刨光316L，其 余为机抛。
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3、设计中要把节约和合理利用能源放在重要 位置加以考虑。积极采用节能措施，尽量选用 节能工艺和设备，充分利用地下资源，搞好水 的循环利 用。 4、 设计中要精打细算，把有限的资金用在关 键设备上，使资金使用更加合理化。 5、严格按照国家环保法和有关文件精神搞好 “三废”治理和职业安全卫生设计工作。
点位布置:
理瓶1#；
B
灌装头2# 压塞3#； 冻干机4~5#；
0.5μ+5μ二通道, 28.3L/min,激光在线粒子计数.
采样头的安装方式
空调自控原理图
1.房间温度控制 2.房间湿度控制 3.房间压差监测 4.系统风量控制 5.高效压差报警 6.灭菌器\分装烘 洗线运行状态
FFU控制(群控方式)Baidu Nhomakorabea
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生物医药厂房建筑必须针对生物医药工程存在的气溶胶泄露的 可能发生环节进行全面考虑，在产生安全隐患的地方进行彻底的 密封处理。生物医药厂房的维护结构的密封性能和平整度性能主 要体现在以下几个方面： 1、双圆弧天轨；
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2、圆弧转角；
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3、单圆弧收边；
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