流式细胞术分析及应用PPT课件
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Beads provide an expandable assay platform for use with a flow cytometer
Multiple sizes
Different intensities
授课：XXX
Different colors with
different intensities
授课：XXX
3
现代流式细胞仪包括
液流系统
聚焦细胞以供检测
光学系统
激发和收集光信号
电子系统
将光信号转化为电信号，并使其数字化以供计 算机分析
授课：XXX
4
液流系统
液流系统将样本悬液聚焦在光源的中心处
授课：XXX
5
Sample Flow in Optical Cuvette
Low Sample Flow Rate
授课：XXX
23
CFSE（羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂）
授课：XXX
24
4.细胞凋亡的检测
授课：XXX
25
Annexin V Assay
授课：XXX
28
Annexin V/PI双染
活细胞为（Annexin V-/PI-） 坏死细胞为（Annexin V+/PI+） 凋亡细胞（Annexin V+/PI-）
Sheath fluid
Fluorescence signals
Focused laser beam
授课：XXX
8
流式细胞仪的光学系统
激光 (Laser)是一种相干光源，它能提供单一波长、单一 方向、同步的稳定光照。
激光波长: 台式机为固定波长488nm, 635nm ，大型机波 长谱线宽包括 325， 457.9，488, 514.5，520.8，530.9， 568.3， 633，647 nm
32
Multiplexed Beads
Various analytes
Antibody coupled beads, emitting at distinct FL3 intensities
Antibody coupled PE label, emitting at FL2 intensity proportional to analyte conc.
入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性。
授课：XXX
11
前向角散射光 ——FSC
Laser
FALS Sensor
授课：XXX
12
侧向角散射光——SSC
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
授课：XXX
13
散射光
散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形 态上的差异 - 通常使用“散点图”来看散射光信号 - 散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的 数据
授课：XXX
14
散点图——Dot Plot
lysed 授w课h：oXleXXblood
15
2. 荧光信号
荧光素吸收激光能量 荧光素将吸收能量释放，转换为
振动能和热能 释放较入射光波长更长的光量子
荧光素与特异抗体结合 荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强
授课：XXX
16
Fluorochrome specification
授课：XXX
29
Annexin V Assay----能够区分死亡与凋亡
授课：XXX
30
5、细胞因子测定
Capture antibody Beads
Capture beads
+
+
Antigen (cytokines) Fluorescence Detector
antibody
授课：XXX
31
Beads Provide a Flexible Platform
36
授课：XXX
37
细胞分选
授课：XXX
38
三、流式细胞数的数据处理
授课：XXX
39
授课：XXX
40
授课：XXX
41
授课：XXX
42
授课：XXX
授课：XXX
17
Compensation
授课：XXX
18
二、流式细胞术的应用
细胞表型分析 胞内蛋白的检测 细胞周期分析 细胞因子测定 分选 细胞内钙离子测量 ……
授课：XXX
19
1.细胞表型分析
CD4
CD3
授课：XXX
20
2.胞内蛋白的检测
授课：XXX
21
授课：XXX
22
3. 细胞周期的检测
流式细胞术分析及应用
授课：XXX
1
主要内容
流式细胞术的原理 流式细胞术的应用 流式细胞术的数据处理 流式细胞术的样品制备
授课：XXX
2
一、流式细胞术的原理
流式细胞仪(Flow Cytometer):是集光电子物理，光电测量，计算 机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。
流式细胞术(Flow Cytometry):利用流式细胞仪对处于快速流动 的细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000 个）的定量分析和分选（纯度可达99%以上）的技术。
Shades of a color
授课：XXX
33
Example 6-bead assay
IL-8 IL-1b
IL-6 IL-10 TNF
Detector Antibodies
Wash
Analyze on flow cytometer
IL-12
Lysate or Supernatant
Capture Beads
12 mL/min
Optical Cuvette
Laminar Flow
High Sample Flow Rate
60 mL/min
Laminar Flow
2021/3/9
Sheath
Sheath
Sample
授课：XXX来自百度文库
Sheath
Sheath
Sample
6
样品和鞘液流
授课：XXX
7
Injector Tip
光收集系统是由若干组透镜，滤波片，小孔组成，将产 生的光信号引导至检测器。
授课：XXX
9
流式细胞仪的光信号
散射光信号 荧光信号
授课：XXX
10
1. 散射光信号
•前向角散射光（FSC, Forward Scatter）
入射激光的同向散射光信号 细胞相对大小及其表面积。
•侧向角散射（SSC, Side Scatter）
Sample
授课：XXX
34
CBA Standard curves
授课：XXX
35
6、细胞分选
488 nm laser
- Charged Plates
FALS Sensor Fluorescence detector
+
Single cells sorted into test tubes
授课：XXX
Multiple sizes
Different intensities
授课：XXX
Different colors with
different intensities
授课：XXX
3
现代流式细胞仪包括
液流系统
聚焦细胞以供检测
光学系统
激发和收集光信号
电子系统
将光信号转化为电信号，并使其数字化以供计 算机分析
授课：XXX
4
液流系统
液流系统将样本悬液聚焦在光源的中心处
授课：XXX
5
Sample Flow in Optical Cuvette
Low Sample Flow Rate
授课：XXX
23
CFSE（羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂）
授课：XXX
24
4.细胞凋亡的检测
授课：XXX
25
Annexin V Assay
授课：XXX
28
Annexin V/PI双染
活细胞为（Annexin V-/PI-） 坏死细胞为（Annexin V+/PI+） 凋亡细胞（Annexin V+/PI-）
Sheath fluid
Fluorescence signals
Focused laser beam
授课：XXX
8
流式细胞仪的光学系统
激光 (Laser)是一种相干光源，它能提供单一波长、单一 方向、同步的稳定光照。
激光波长: 台式机为固定波长488nm, 635nm ，大型机波 长谱线宽包括 325， 457.9，488, 514.5，520.8，530.9， 568.3， 633，647 nm
32
Multiplexed Beads
Various analytes
Antibody coupled beads, emitting at distinct FL3 intensities
Antibody coupled PE label, emitting at FL2 intensity proportional to analyte conc.
入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性。
授课：XXX
11
前向角散射光 ——FSC
Laser
FALS Sensor
授课：XXX
12
侧向角散射光——SSC
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
授课：XXX
13
散射光
散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形 态上的差异 - 通常使用“散点图”来看散射光信号 - 散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的 数据
授课：XXX
14
散点图——Dot Plot
lysed 授w课h：oXleXXblood
15
2. 荧光信号
荧光素吸收激光能量 荧光素将吸收能量释放，转换为
振动能和热能 释放较入射光波长更长的光量子
荧光素与特异抗体结合 荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强
授课：XXX
16
Fluorochrome specification
授课：XXX
29
Annexin V Assay----能够区分死亡与凋亡
授课：XXX
30
5、细胞因子测定
Capture antibody Beads
Capture beads
+
+
Antigen (cytokines) Fluorescence Detector
antibody
授课：XXX
31
Beads Provide a Flexible Platform
36
授课：XXX
37
细胞分选
授课：XXX
38
三、流式细胞数的数据处理
授课：XXX
39
授课：XXX
40
授课：XXX
41
授课：XXX
42
授课：XXX
授课：XXX
17
Compensation
授课：XXX
18
二、流式细胞术的应用
细胞表型分析 胞内蛋白的检测 细胞周期分析 细胞因子测定 分选 细胞内钙离子测量 ……
授课：XXX
19
1.细胞表型分析
CD4
CD3
授课：XXX
20
2.胞内蛋白的检测
授课：XXX
21
授课：XXX
22
3. 细胞周期的检测
流式细胞术分析及应用
授课：XXX
1
主要内容
流式细胞术的原理 流式细胞术的应用 流式细胞术的数据处理 流式细胞术的样品制备
授课：XXX
2
一、流式细胞术的原理
流式细胞仪(Flow Cytometer):是集光电子物理，光电测量，计算 机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。
流式细胞术(Flow Cytometry):利用流式细胞仪对处于快速流动 的细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000 个）的定量分析和分选（纯度可达99%以上）的技术。
Shades of a color
授课：XXX
33
Example 6-bead assay
IL-8 IL-1b
IL-6 IL-10 TNF
Detector Antibodies
Wash
Analyze on flow cytometer
IL-12
Lysate or Supernatant
Capture Beads
12 mL/min
Optical Cuvette
Laminar Flow
High Sample Flow Rate
60 mL/min
Laminar Flow
2021/3/9
Sheath
Sheath
Sample
授课：XXX来自百度文库
Sheath
Sheath
Sample
6
样品和鞘液流
授课：XXX
7
Injector Tip
光收集系统是由若干组透镜，滤波片，小孔组成，将产 生的光信号引导至检测器。
授课：XXX
9
流式细胞仪的光信号
散射光信号 荧光信号
授课：XXX
10
1. 散射光信号
•前向角散射光（FSC, Forward Scatter）
入射激光的同向散射光信号 细胞相对大小及其表面积。
•侧向角散射（SSC, Side Scatter）
Sample
授课：XXX
34
CBA Standard curves
授课：XXX
35
6、细胞分选
488 nm laser
- Charged Plates
FALS Sensor Fluorescence detector
+
Single cells sorted into test tubes
授课：XXX