水质总大肠菌群和粪大肠菌群纸片快速法检测方法确认表样本
检测方法证实确认记录 -大肠菌群
135
P1鉴定室
5、试剂和材料
无菌生理盐水、VRBA琼脂、BGLB培养基。
6、检测环境条件
温度：20℃ 湿度：50%
7、检测过程简单描述
平板计数：
选择2-3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每平皿1ml。同时取1ml生理盐水加入无菌平皿做空白对照。将冷却至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约20-25ml倾注于每个平皿中，小心旋转平皿，使培养基和样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3-4mlVRBA覆盖平板表层。将平板翻转，36℃±1℃培养18h-24h从制备样品匀液至接种完毕不得超过15min。
检测方法证实/确认记录
采用/执行标准名称
食品微生物学检验 大肠菌群计数
标准编号
GB 4789.3-2016
方法证实/确认时间
2017.11.29
参加人员
*** ***
1、简述
采用人员比对方式对检验方法予以确认。
2、检测产品
饼干
3、人员情况
***、***两名检验人员经培训机构培训合格，取得相关证书。中心对其检验能力进行了确认，准许其持证上岗。
4、主要设备
仪器设备
设备型号
设备编号
校准/检定有效期
存放位置
电子天平
JM-A20001
136
P1核心区
超净工作台
康杰ST
134
P1核心区
电热恒温培养箱
DHP-9272
13
2017.10.9-2018.10.8
P1培养室
高压灭菌锅
LHQ-C
101
2017.11.8-2018.11.7
P2准备间
菌落计数器
医院废水中总大肠菌群的测定
医院废水中总大肠菌群的测定[适用对象]环境科学专业[实验学时] 4学时一、实验目的通过本实验学会测定医院废水中总大肠菌群的方法，通过本实验把握无菌操作的基本规程，掌握水中总大肠菌群测定的基本原理，利用相关仪器根据既定的步骤测定水中的总大肠菌群。
二、预习与参考参考实验指导书，结合实验特色查阅相关文献资料进行实验设计。
三、实验内容1、原理应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC（红四碳唑）还原状成不可逆的甲臜产生红色色素，即大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落，菌落周围产生苏圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。
2、水样采集用采水器或其他灭菌器采集水样500ml放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的废水，需加1．5％硫代硫酸钠5ml除去余氯。
3、方法和步骤每份预监测水样，接种水样总量为55．5ml，分别接种大纸片五张，小纸片10张。
每张大纸片接种10ml水样，五张小纸片每张接种1ml，另五张小纸片接种1：10稀释的水样lml。
接种水样时要均匀涂布于纸片上，用手轻轻压平，作好标记于铺有湿纱布的搪瓷盘中。
测总大肠菌群37℃±l℃培养18～24h观察结果，测粪大肠菌群44．5℃±l℃培养18～24h，观察结果。
4、判定标准（1）纸片上出现紫红色菌落，周围有黄圈者为阳性或出现片状红晕周围为黄地者亦为强阳性。
（2）纸片为一种颜色而无菌落生长者为阴性。
（3）纸片呈紫红色或紫色，菌落周围无黄圈者为阴性。
（4）酸性水样接种后纸片变黄，经培养无紫红色菌落者为阴性。
（5）纸片变色并呈不典型菌落结果可疑者，应作复发酵进行验证。
5．报告结果根据阳性纸片张数，查MPN值表，报出1L水中大肠菌群或粪大肠菌群数。
四、主要食品设备功能和材料清单灭菌的滤纸、选择性培养基、1．5％硫代硫酸钠、采水器、灭菌瓶。
五、实验要求如水样污染较重可采取适当稀释后接种，乘以稀释倍数，报出结果。
67总大肠菌群 大肠菌群分析原始记录
月日时分
样品编号
稀释倍数
样品接种体积ml
初发酵产酸产气管数
有典型菌落平板数
复发酵阳性管数
MPN（）
备注
总大肠菌群/大肠菌群分析原始记录（续表）
项目编号： 第 页 共 页
样品编号
稀释倍数
样品接种体积ml
初发酵产酸产气管数
有典型菌落平板数
复发酵阳性管数
MPN（）
备注
仪器有效期
年月日
立式压力蒸汽灭菌
YXQ -70A/ BXM -75S QH - YQ - G -114
检定 □校准
年月日
检定 □校准
年月日
初发酵培养时间
月日时分——月ห้องสมุดไป่ตู้时分
培养温度（℃）
分离培养时间
月日时分——月日时分
培养温度（℃）
复发酵培养时间
月日时分——月日时分
培养温度（℃）
温度（℃）
湿度（%）
总大肠菌群/大肠菌群分析原始记录
项目编号： 第 页 共 页
来（采）样日期
年月日
检测日期
年月日
检测项目
分析方法
《生活饮用水标准检验方法微生物指标》GB / T 5750.12-2023/5.1多管发酵法
仪器型号、名称及编号
生化培养箱SPX -150 QH - YQ - G -042
仪器溯源方式
检定 □校准
大肠菌群快检纸片
大肠菌群快检纸片法的结果判定
其结果可有如下5种情况： ①纸片保持青紫色，无论有无红色斑点或红晕均为阴性。 ②纸片上出现红点或红晕且其周围变黄，为典型阳性。 ③整个纸片全变黄色，却无红色斑点或红晕出现，为不典 型阳性，造成此结果的因素很多，见“影响因素” 。 ④纸片中某部分变黄色，或有或无红斑（红晕），为不典 型阳性。 ⑤纸片加样后立即或较短时间内出现黄色或褪色，此情况 应对样品进行中和处理。
组成和性状：每份2张5×5cm纸片，干燥纸片 为灰白色或淡绿色，加中性水湿润后为青紫色。 ±1 使用方法： 将纸片用适量无菌蒸馏水浸湿（无 多余水分），贴于食饮具内侧表面或其他待测 物体表面规定位置，压实，使纸片与物体面充 分接触，30秒后取下，放于无菌袋内，37℃培 养16-18h观察结果。
大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法
大肠菌群快检纸片法的检测原理
众所周知，酶是一种蛋白质，其活性随 温度和pH等变化而改变，在高温和极端 酸性或碱性情况下，可完全丧失活性而 失去脱氢的能力。受氢体的作用也可能 受pH的影响，因此影响酶活性和导致pH 异常的任何因素均可影响检测结果。
大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法
1 餐饮具和待测物体表面用纸片：
大肠菌群和粪大肠菌群的定义
总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自 然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在 自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度 为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如 将培养温度再升高至44．5℃，则不再生长， 而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃ 左右生长，如将培养温度升高至44．5℃仍可 继续生长。
1.0 毫 升 水 样 0.1 毫 升 水 样
质量管理(现场监测)选择题
质量管理持证上岗试题 (现场监测)选择题：1.《环境监测质量管理技术导则》HJ 630-2011要求，样品采集应根据监测方案所确定的采样点位、污染物项目、频次、时间和方法进行采样。
必要时制订采样计划，内容包括： _________ 交通工具以及安全保障等。
( )A. 采样时间和路线B. 采样时间和路线C. 采样人员和分工D. 采样器材正确答案：A、B、C、D2.《地表水和污水监测技术规范》HJ/T 91-2002要求，对流域或水系要设立_______等断面。
( )A. 背景断面B. 控制断面C. 削减断面D. 入海口断面正确答案：A、B、D3.《地表水和污水监测技术规范》HJ/T 91-2002要求，根据水体功能区设置控制监测断面，同一水体功能区至少要设置__ 个监测断面。
( )A.1B.2C.3D.4正确答案：A4. 《地表水和污水监测技术规范》HJ/T 91-2002要求，采样时， ______、DO、BOD5、有机物、余氯等有特殊要求的项目，不能用采样水荡洗采样器与水样容器。
( )A.细菌总数B.大肠菌群C. 油类D.挥发酚正确答案：A、B、C5. 《地表水和污水监测技术规范》HJ/T 91-2002要求，采样时，除一些有特殊要求的项目外，要先用采样水荡洗采样器与水样容器_____次，然后再将水样采入容器中，并按要求立即加入相应的固定剂，贴好标签。
( )A. 1～2B. 2～3C.3～4D. 4～5正确答案：B6.《水污染物排放总量监测技术规范》HJ/T 92-2002要求，废水采样时需采集不少于_______的现场平行样。
( )A. 5％B.10％C. 15％D.20％正确答案：B7.《水污染物排放总量监测技术规范》HJ/T 92-2002要求，测流时段内测得流量应与水量衡算结果误差不得大于_____。
( )A. 10％B.20％C. 30％D. 40％正确答案：A8.《水污染物排放总量监测技术规范》HJ/T 92-2002要求，因工业废水成分复杂，其中的强酸或强碱性物质对流量计或堰板有一定腐蚀作用，______对流量测量也会产生影响，为此必须加强流量计量装置的维护和保养。
水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法 征求意见稿
水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法征求意见稿
为了保证水质安全，控制疫情传播，本文介绍一种快速测定水质中总大肠菌群和粪大肠菌群的纸片快速法。
一、原理
本方法采用四氯化钴染色，将水样中的大肠杆菌转化为深蓝色紫色的水溶液中的杆菌，然后用过滤纸吸取样品中大肠杆菌杆菌的胞外成分，与专门的涂层结合，形成深紫色的杆菌珠，并进行定量比色分析。
二、材料和方法
1. 带有蓝色涂层的滤纸一支
2. 四氯化钴溶液
3. 水样
方法：
1. 取一片纸片，将其放入含有四氯化钴溶液的水样中，搅拌均匀。
等待5分钟。
2. 用净水彻底清洗纸片，并在滤纸周围波动，使大肠菌群在水中更容易分散。
3. 在处理好的样品中取一滴，用滤纸吸取。
4. 将纸片放入合适的容器中(如管子或托盘)，等待5分钟，直到纸片上形成紫色的结晶。
5. 用比色板或显微镜进行分析测量。
三、结果
根据纸片上杆菌珠的形成特征，可以快速测定水样中的大肠杆菌群和粪大肠菌群含量。
四、注意事项
1. 纸片处理过程中要严格保持无菌，避免外源菌污染。
2. 样品选择要具有代表性，尽量选取水流清澈，色泽透明，入口甜润的水源，避免河流污染或废水回流。
3. 纸片使用后应当严格清洗，避免杆菌珠继续生长。
4. 此方法仅适用于快速初步筛查水质安全，不适用于作为严格的水质监测标准。
饮用水大肠菌群检验纸片(五管法)
饮用水大肠菌群检验纸片(五管法)
产品编号： BD114
产品规格： 1份/包
产品用途：饮用水中总大肠菌群的快速检验
产品说明
1、适用范围
本产品适用于出厂成品水或直接饮用的矿泉水和纯净水中总大肠菌群的快速检验。
2、方法原理
将乳糖、显色剂和选择性培养基加载在纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。
执行标准：生活饮用水卫生标准（GB 5749—2006）。
3、操作方法
3.1、用灭菌吸管吸取10mL水样加入装有大纸片的塑料薄膜袋中，均匀涂布，共做5个重复；
3.2、将接种好的纸片放于培养箱中，培养温度为36℃±1℃，培养15～24h 观察结果。
4、结果判读
4.1、若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性，纸片保持紫蓝色不变或在紫蓝色背景上呈现红色斑点但周围没有黄晕均为大肠菌群阴性。
4.2、根据每个稀释度的阳性反应纸片数，查MPN表可得出水样中总大肠菌群的MPN值（见表1）。
如所有纸片均为阴性时，可报告总大肠菌群未检出。
4.3、对于阳性纸片，应进一步检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群。
用接种环在阳性菌斑处沾取少许带菌滤纸，用3mL灭菌生理盐水混匀，接种到大肠埃希氏菌耐热大肠菌群测试片上，进行培养和检验。
表1 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果
组合时的最可能数（MPN）及95%可信限。
医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法
医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法A1 仪器和设备高压蒸汽灭菌器。
干燥灭菌箱。
培养箱：37℃。
恒温水浴箱。
电炉。
天平。
灭菌平皿。
灭菌刻度吸管。
酒精灯A2 培养基和试剂乳糖胆盐培养液A2.1.1成分蛋白胨20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖5g％溴甲酚紫水溶液蒸馏水1000mLA2.1.2 制法将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到，加入指示剂，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。
115℃下灭菌20min。
贮存于冷暗处备用。
三倍浓度乳糖胆盐培养液A2.2.1成分蛋白胨60g猪胆盐（或牛、羊胆盐）15g乳糖15g％溴甲酚紫水溶液蒸馏水1000mLA2.2.2 制法制法同附录A2.1.2。
伊红美兰培养基（EMB培养基）A2.3.1 成分蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂20g2％伊红水溶液20mL％美蓝水溶液13mL蒸馏水1000mLA2.3.2 制法将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使溶解，再加入蒸馏水补足至1000mL，调整pH至～。
趁热用脱脂棉和砂布过滤，再加入乳糖，混匀，定量分装于烧瓶内，115℃灭菌20min。
作为储备培养基贮存于冷暗处备用。
临用时，加热融化储备培养基，待冷至60℃左右，根据烧瓶内培养基的容量，加入一定量的已灭菌的2％伊红水溶液和％美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡）。
倾注平皿备用。
乳糖蛋白胨培养液A2.4.1成分蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g％溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mLA2.4.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到～，加入％溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。
115℃下灭菌20min。
贮存于冷暗处备用。
革兰氏染色液A2.5.1 结晶紫染色液结晶紫1g95％乙醇溶液20mL1％草酸铵水溶液1000mL将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵水溶液混合。
水质总大肠菌群和粪大肠菌群（纸片快速法）检测方法确认表
水质总大肠菌群和粪大肠菌群（纸片快速法）检测方法确认表水质总大肠菌群和粪大肠菌群(纸片快速法)检测方法确认表案场各岗位服务流程销售大厅服务岗：1、销售大厅服务岗岗位职责：1)为来访客户提供全程的休息区域及饮品;2)保持销售区域台面整洁;3)及时补足销售大厅物资,如糖果或杂志等;4)收集客户意见、建议及现场问题点；2、销售大厅服务岗工作及服务流程阶段工作及服务流程班前阶段1）自检仪容仪表以饱满的精神面貌进入工作区域2）检查使用工具及销售大厅物资情况，异常情况及时登记并报告上级。
班中工作程序服务流程行为规范迎接指引递阅资料上饮品（糕点）添加茶水工作要求1）眼神关注客人，当客人距3米距离时，应主动跨出自己的位置迎宾，然后侯客迎询问客户送客户注意事项15度鞠躬微笑问候：“您好！欢迎光临！”2）在客人前方1-2米距离领位，指引请客人向休息区，在客人入座后问客人对座位是否满意：“您好！请问坐这儿可以吗？”得到同意后为客人拉椅入座“好的，请入座！”3）若客人无置业顾问陪同，可询问：请问您有专属的置业顾问吗？，为客人取阅项目资料，并礼貌的告知请客人稍等，置业顾问会很快过来介绍，同时请置业顾问关注该客人；4）问候的起始语应为“先生-小姐-女士早上好，这里是XX销售中心，这边请”5）问候时间段为8:30-11:30 早上好11:30-14:30 中午好 14:30-18:00下午好6）关注客人物品，如物品较多，则主动询问是否需要帮助（如拾到物品须两名人员在场方能打开，提示客人注意贵重物品）；7）在满座位的情况下，须先向客人致歉，在请其到沙盘区进行观摩稍作等待；阶段工作及服务流程班中工作程序工作要求注意事项饮料（糕点服务）1）在所有饮料（糕点）服务中必须使用托盘；2）所有饮料服务均已“对不起，打扰一下，请问您需要什么饮品”为起始；3）服务方向：从客人的右面服务；4）当客人的饮料杯中只剩三分之一时，必须询问客人是否需要再添一杯，在二次服务中特别注意瓶口绝对不可以与客人使用的杯子接触；5）在客人再次需要饮料时必须更换杯子；下班程序1）检查使用的工具及销售案场物资情况，异常情况及时记录并报告上级领导；2）填写物资领用申请表并整理客户意见；3）参加班后总结会；4）积极配合销售人员的接待工作，如果下班时间已经到，必须待客人离开后下班；1.3.3.3吧台服务岗1.3.3.3.1吧台服务岗岗位职责1）为来访的客人提供全程的休息及饮品服务；2）保持吧台区域的整洁；3)饮品使用的器皿必须消毒；4）及时补充吧台物资；5）收集客户意见、建议及问题点；1.3.3.3.2吧台服务岗工作及流程阶段工作及服务流程班前阶段1）自检仪容仪表以饱满的精神面貌进入工作区域2）检查使用工具及销售大厅物资情况，异常情况及时登记并报告上级。
水质总大肠菌群和粪大肠菌群(纸片快速法)检测方法确认表
水质总大肠菌群和粪大肠菌群(纸片快速法)检测方法确认表案场各岗位服务流程销售大厅服务岗：1、销售大厅服务岗岗位职责：1)为来访客户提供全程的休息区域及饮品;2)保持销售区域台面整洁;3)及时补足销售大厅物资,如糖果或杂志等;4)收集客户意见、建议及现场问题点；2、销售大厅服务岗工作及服务流程阶段工作及服务流程班前阶段1）自检仪容仪表以饱满的精神面貌进入工作区域2）检查使用工具及销售大厅物资情况，异常情况及时登记并报告上级。
班中工作程序服务流程行为规范迎接指引递阅资料上饮品（糕点）添加茶水工作要求1）眼神关注客人，当客人距3米距离时，应主动跨出自己的位置迎宾，然后侯客迎询问客户送客户注意事项15度鞠躬微笑问候：“您好！欢迎光临！”2）在客人前方1-2米距离领位，指引请客人向休息区，在客人入座后问客人对座位是否满意：“您好！请问坐这儿可以吗？”得到同意后为客人拉椅入座“好的，请入座！”3）若客人无置业顾问陪同，可询问：请问您有专属的置业顾问吗？，为客人取阅项目资料，并礼貌的告知请客人稍等，置业顾问会很快过来介绍，同时请置业顾问关注该客人；4）问候的起始语应为“先生-小姐-女士早上好，这里是XX销售中心，这边请”5）问候时间段为8:30-11:30 早上好11:30-14:30 中午好 14:30-18:00下午好6）关注客人物品，如物品较多，则主动询问是否需要帮助（如拾到物品须两名人员在场方能打开，提示客人注意贵重物品）；7）在满座位的情况下，须先向客人致歉，在请其到沙盘区进行观摩稍作等待；阶段工作及服务流程班中工作程序工作要求注意事项饮料（糕点服务）1）在所有饮料（糕点）服务中必须使用托盘；2）所有饮料服务均已“对不起，打扰一下，请问您需要什么饮品”为起始；3）服务方向：从客人的右面服务；4）当客人的饮料杯中只剩三分之一时，必须询问客人是否需要再添一杯，在二次服务中特别注意瓶口绝对不可以与客人使用的杯子接触；5）在客人再次需要饮料时必须更换杯子；下班程序1）检查使用的工具及销售案场物资情况，异常情况及时记录并报告上级领导；2）填写物资领用申请表并整理客户意见；3）参加班后总结会；4）积极配合销售人员的接待工作，如果下班时间已经到，必须待客人离开后下班；1.3.3.3吧台服务岗1.3.3.3.1吧台服务岗岗位职责1）为来访的客人提供全程的休息及饮品服务；2）保持吧台区域的整洁；3)饮品使用的器皿必须消毒；4）及时补充吧台物资；5）收集客户意见、建议及问题点；1.3.3.3.2吧台服务岗工作及流程阶段工作及服务流程班前阶段1）自检仪容仪表以饱满的精神面貌进入工作区域2）检查使用工具及销售大厅物资情况，异常情况及时登记并报告上级。
水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料
水质粪大肠菌群检验纸片的详细资料BD105Ⅰ水质（粪）大肠菌群快速检验纸片1份/包适用于湖水、水源水中大肠菌群的快速检测。
BD105Ⅱ水质（粪）大肠菌群快速检验纸片1份/包适用于河水、生活用水、医疗机构处理后排污水、禽畜养殖业等排放废水中大肠菌群的快速检测。
分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ两个型号，请注意选择型号。
1、适用范围水质（粪）大肠菌群的测定纸片快速法本标准适用于地表水、生活污水、医疗机构及禽畜养殖业等其他行业排放的废水中（粪）大肠菌群的快速筛查。
本方法的检出限为20MPN/L。
2、规范性引用文件本标准内容引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
HJ/T91地表水和污水监测技术规范3、术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1总大肠菌群（total coliforms）在37℃培养，24h内能发酵乳糖酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
3.2 粪大肠菌群（fecal coliforms）44.5℃培养，24h内能发酵乳糖产酸气的总大肠菌群，属粪行来源，称为粪大肠菌群。
4、方法原理将一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及营养成分等吸附于一定面积的无菌滤纸上，当细菌生长繁殖时，产酸使PH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色。
同时，产气过程相应的脱氢酶在适宜的PH范围内，催化底物脱氢还原TTC 形成红色的不溶性三苯甲臜（TTF），即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。
通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有（粪）大肠菌群存在，再通过查MPN表就可得出相应（粪）大肠菌群的浓度值。
5、试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。
5.1市售水质总大肠菌群、粪大肠菌群测试片：10ml水样量纸片按附录A的方法进行质量鉴定，达到要求后方可使用。
5.2无菌水用新制备的去离子水或蒸馏水，按无菌操作要求，121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。
水和污水中微生物检验记录
( )水中微生物检验记录样品编号：检验开始时间：年月日样品名称：检验完成时间：年月日检测项目：检测依据：一、菌落总数测定：无菌操作吸取充分混匀的样品10mL加入到装有90mL的灭菌水三角烧瓶中（可放有适量玻璃珠）混匀，做成1∶10稀释液。
取1∶10稀释液1mL加入到9mL灭菌水中混匀，做成1∶100稀释液。
以上法制备10-3、10-4…稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
选择合适的稀释度，吸取1mL加入到无菌平皿中，每一稀释度做2个平皿。
同时另找两个平皿只倾注营养琼脂培养基做空白对照。
加入冷至46±1℃的营养琼脂培养基约15mL，混匀，凝固后，翻转平板倒置于日时分置36 ℃±1℃开始计算及结果：细菌菌落总数（CFU/ mL）：二、□总大肠菌群测定（多管发酵法）：注：○+产酸产气；+产酸不产气或有可疑菌落；-不产酸不产气或无可疑菌落；G-b革兰氏阴性杆菌；G+b革兰氏阳性杆菌；G+c革兰氏阳性球菌。
结果：根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，得 MPN/100mL。
电子天平编号：使用状况试验前：试验后：培养箱编号：使用状况试验前：试验后：检测人：校核人：审核人：□总大肠菌群测定（滤膜法）：用灭菌过的滤膜及滤器过滤水样（待过滤水样量根据所预测的细菌密度而定），水样抽滤完，，再抽5s，关上滤器阀门取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留面细菌面朝上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡。
然后平皿倒置放于37℃恒温培养箱培养24h，后挑取典型菌落染色，镜检。
（凡革兰氏阴性无芽孢杆菌，需于乳糖蛋白胨培养液培养，经37℃，24h培养产酸产气者为总大肠菌群阳性）。
○+产酸产气；+产酸不产气或有可疑菌落；-不产酸不产气或无可疑菌落；G-b革兰氏阴性杆菌；G+b革兰氏阳性杆菌；G+c 革兰氏阳性球菌。
计算结果：总大肠菌群数（个/L）=（滤膜上生长的大肠杆菌菌落数*1000）/过滤水样量（ml）结果：□总大肠菌群测定（快速测定法）：每份预监测水样，接种水样总量为55.5ml，分别接种大纸片5张，小纸片10张。
大肠菌群快检纸片
大肠菌群快检纸片的应用现状
纸片法检测大肠菌群，简便易行，节省成 本，结果准确，工作效率高，是微生物检 验诸多快速方法中比较成熟的方法之一， 已被广大卫生检验者所接受。目前已广泛 应用于食品、餐饮业、卫生、环保、水质 检验等。
大肠菌群快检纸片的应用现状
实际应用效果举例： ①对食饮具的检测结果 ②对冷冻饮品的检测结果 ③对水的检测结果 GB2009年3月1日实施的《食品卫生微生物学
检验大肠菌群计数》，将乳糖胆盐培养基改 为月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，并 不影响纸片法的应用。无论是乳糖胆盐、 LST或是纸片法，都遵循了大肠菌群的基本 概念，其检测原理都是发酵乳糖产酸产气。
大肠菌群快检纸片法的检测原理
1.反应系统：
①大肠菌群细菌在生长繁殖时，分解乳糖产酸
乳糖→ →葡萄糖+半乳糖 葡萄糖→ →丙酮酸→ →乙酸+甲酸
2 采样后样品的正确保存很重要，如保 存不当可使检样中的大肠菌群细菌死亡 或在一定条件下再生长，这些都将影响 检验结果的准确性。检验室接到样品后， 应立即检验。如因故不能检验时，应立 即置于冰箱内并于2小时内检验。
使用大肠菌群快检纸片的注意事项
3 餐饮具或待测物体表面一般用纸片直接采样，
如气温过高（25℃以上）又不能及时送达 实验室可适当缩短培养时间。
③菌量较少（≤240cfu/ml ）纸片可呈青紫色，并 有散在或较密集的红斑点，其周围变黄。
影响检测结果的因素
2 水分：湿润纸片时加水过多，使纸片浸透后有剩余 水分，造成细菌在纸片上漂流培养，可出现与“菌量 较大”类似的反应结果，即整个纸片变黄，却无红色 斑点或红晕。水分不够，纸片偏干，影响细菌采集， 且反应结果不鲜亮。
组成和性状：每份2张5×5cm纸片，干燥纸片
HJ755-2015水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定快速纸片法方法验证报告
方法验证报告项目名称：总大肠菌群和粪大肠菌群的测定方法名称：水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定快速纸片法报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况表1参加验证的人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2使用仪器情况登记表1.3 检测用试剂情况表3使用试剂登记表1.4 环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行监控。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力2.1方法适用范围本方法适用于地表水、废水中总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。
2.2 检测步骤2.2.1. 接种水样的准备当每张纸片接种水样量为10ml或1ml 时，充分混匀水样备用即可。
当每张纸片接种水样量小于1ml时，水样应制成稀释样品后使用。
接种量为0.1ml、0.01ml 时，分别制成1：10稀释样品、1：100稀释样品。
其他接种量的稀释样品依次类推。
1：10稀释样品的稀释方法为：吸取1ml水样，注入盛有9ml无菌水的试管中，混匀，其他稀释度的样品同法制作。
2.2.2水样接种2.2.2.1接种量每个样品按三个10倍递减的不同接种量接种，每个接种量分别接种5张纸片，共接种15张纸片.根据水样的污染程度确定接种量，应尽可能使5个接种量最大的纸片为阳性，5个接种量最小的纸片为阴性，避免出现所有3个不同接种量共15张纸片全部阳性或全部阴性。
清洁水样的参考接种量分别为10ml、1ml、0.1ml。
2.2.2.2接种清洁水样，接种水样总量为55.5ml,10ml水样量纸片5张，每张接种水样10ml，1ml水样量纸片10张，其中5张各接种水样1ml,另5张各接种1：10的稀释水样1ml。
受污染水样，接种3个不同稀释度的1ml稀释水样各5张。
环境监测总大肠菌群测定原始记录表
10mL
1mL
0.1mL
10mL
1mL
0.1mL
分析： 审核：第 页 共 页
总大肠菌群测定原始记录表
任务名称（调令号）：
序号
样品编号
第一次发酵水样
呈阳性数
第二次平板培养呈阳性数第三次发源自水样呈阳性数MPN指数
总大肠菌群数 C(个/升)
备注
10mL
1mL
0.1mL
10mL
1mL
0.1mL
10mL
环境监测总大肠菌群测定原始记录表
任务名称（调令号）：方法依据：收样日期： 测定日期：
培养箱型号:培养箱编号：
第一次酵培养温度： 第二次平板培养温度： 第三次发酵培养温度：
序号
样品编号
第一次发酵水样
呈阳性数
第二次平板培养
呈阳性数
第三次发酵水样
呈阳性数
MPN指数
总大肠菌群数 C(个/升)
备注
10mL
1mL
1mL
0.1mL
分析：审核：第页共页
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1.结果判读：
（1）制片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性。
（2）纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性。
（3）纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性。
（4）纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性。
（5）纸片无变化，为阴性。
2.结果计算：
根据不同接种量的阳性纸片数量，查MPN表得到MPN值，按公式换算并报告1L水样中总大肠菌群或粪大肠菌群数：
水质总大肠菌群和粪大肠菌群纸片快速法检测方法确认表
方法名称
水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定
（纸片快速法）
申请人
项目负责人员
制定原因
验证检测方法符合实验室要求、确保数据准确性与有效性
方法适用范围
适用于地表水、地下水及废水中的总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。
方法来源
HJ 755-《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》
仪器、试剂和环境的要求
1.仪器和设备
1.1高压蒸汽灭菌器
1.2培养箱
1.3冰箱
1.4采样瓶
1.5试管
1.6水质总大肠Βιβλιοθήκη 群和粪大肠菌群测试纸片2.试剂：2.1硫代硫酸钠2.2乙二胺四乙酸二钠
采样和测试过程中，所用到的玻璃器皿需灭菌后方可使用。
方法描述
按MPN法，将一定量的水样以无菌操作的方式接种到吸附有适量指示剂（溴甲酚紫和2,3,5-氯化三苯四氮唑即TTC）以及乳糖等营养成分的无菌滤纸上，在特定的温度（37℃或44.5℃）培养24h，当细菌生长繁殖时，产酸使pH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色，同时，产气过程相当的脱氢酶在适宜的pH范围内，催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲（TTF）。即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。经过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有总大肠菌群或粪大肠菌群存在，再经过查MPN表就可得出相应总大肠菌群或粪大肠菌群的浓度值。
附件说明
表1
运行说明
经验证该方法符合我实验室使用。
审批意见
技术经理：
日期：
总经理：
日期：
表1
C=100*M/Q
式中：
C—水样总大肠菌群或粪大肠菌群浓度（MPN/L）
M—查MPN表得到的MPN值(MPN/100ml)
Q—实际水样最大接种量（ml）
100—为10*10ml，其中，10将MPN值的单位MPN/100ml转换为MPN/L，10ml为MPN表中最大接种量。
3.结果表示：
测定结果保留二位有效数字，大于等于100时以科学计数法表示，结果的单位为MPN/L。平均值以几何平均计算。