125I标记单克隆抗体技术

125I标记单克隆抗体技术

同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。

(一)原理

氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I２氧化为I＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。

(二)方法

在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg／100μl，

再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液

再加入10μl(含1mCi)125I

↓

加入10μl氯胺-T(5mg／ml溶于0.05M

磷酸盐缓冲液)，孵育时间不超过30秒

↓

加入100μl偏重亚硫酸钠(1.2mg／ml溶于

0.05M磷酸缓冲液)

↓

加入200μl KI溶液(少许结晶KI溶于0.05M

磷酸缓冲液＋4％牛血清白蛋白)

↓

用PD10柱(Sephadex G25)除去游离125I

用4％BSA PBS洗脱

↓

分部收集，0.5ml／管

每管取5μl进行γ计数，计算标记抗体的比活性和标记率

结合于McAb１２５I放射性强度(cpm)

标记率(％)＝───────────────────

总放射性强度(cpm)

结合于某一管McAb上的放射性强度

比活性(μCi／μgMcAb)＝────────────────

某一管McAb总量

(三)试剂器材

1.纯化后的McAb

2.0.05M磷酸缓冲液，氯胺桾，偏重亚硫酸钠，KI，BSA

3.125I

4.有通风装置的超净台，γ计数仪

5.PD10柱(Sephadex G25)

(四)注意事项

1.严防同位素污染，工作人员必须穿着工作衣，戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用125I和标记物应妥善保管。

2.如标记细胞因子、激素等，应选用更温和的标记方法，使保持更好的生物学活性。