大肠杆菌检测方法(借鉴材料)
检测大肠杆菌的方法
检测大肠杆菌的方法
检测大肠杆菌的方法包括以下几种：
1. 化学方法：使用化学试剂检测大肠杆菌的生长产物，例如检测β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）或亚硝酸盐的产生。
2. 免疫学方法：使用抗原抗体反应来检测大肠杆菌的存在。
可以通过免疫层析试纸、酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光染色等技术进行检测。
3. 分子生物学方法：使用DNA提取和PCR扩增技术，通过特定基因的检测来确定大肠杆菌的存在。
常用的是检测16S rRNA基因。
4. 血液培养法：将样品接种到含有适合大肠杆菌生长的培养基上，经过一段时间后观察是否有菌落形成。
5. 基于大肠杆菌特定生理和生化特征的传统方法：根据大肠杆菌在营养琼脂培养基上形成金属光泽、产生气泡、使用L-色氨酸作为唯一氮源，以及产生酸和气体等特征来进行初步检验。
这些方法可以单独或结合使用来对大肠杆菌进行检测，并能够提供快速、准确的结果。
大肠杆菌检测实验报告
一、实验目的1. 掌握大肠杆菌检测的基本原理和方法；2. 学会使用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数；3. 提高微生物实验操作技能，为后续相关实验奠定基础。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性菌，广泛存在于人类和动物肠道中，属于条件致病菌。
本实验采用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数，主要利用大肠杆菌在LB培养基上生长繁殖的特性，通过计数菌落数来估算大肠杆菌的浓度。
三、实验器材1. 培养箱；2. 移液管（10只）；3. 锥形瓶（250ml，12只）；4. 大试管（5只）；5. 试管架；6. 平皿（45个）；7. 大烧杯（500ml，1个）；8. 电子天平；9. 纱布；10. 脱脂棉；11. 灭菌锅；12. pH计或pH试纸；13. 电炉；14. 石棉网；15. 铁架台；16. 量筒（100ml，1个）；17. 橡皮手套；18. 超净台。
四、实验药品1. 磷酸盐缓冲液；2. 蒸馏水；3. LB培养基；4. 琼脂；5. 5%NaOH；6. 5%HCl。
五、实验步骤1. 培养基制备（1）称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中；（2）用量筒量取125ml的蒸馏水加入锥形瓶中，制成培养基；（3）用棉花堵住锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢；（4）将培养基放入灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌20min；（5）灭菌后放入超净台中备用。
2. 样本处理（1）取适量样本（如食品、水等）；（2）用无菌生理盐水进行梯度稀释；（3）取适量稀释液加入平皿中，制成平板；（4）将平板放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h。
3. 菌落计数（1）观察平板，找出菌落数在30-300之间的平板；（2）用移液管吸取适量菌液，加入锥形瓶中；（3）在锥形瓶中加入适量的5%NaOH溶液，充分振荡；（4）将锥形瓶放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h；（5）观察锥形瓶中的菌落生长情况，记录菌落数。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告大肠杆菌检测实验报告引言：大肠杆菌是一种常见的细菌，存在于人体和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体无害，但某些菌株可能会引起严重的食物中毒。
因此，对食品和饮用水中的大肠杆菌进行检测至关重要。
本实验旨在通过不同的检测方法，了解大肠杆菌的存在和浓度。
材料与方法：1. 食品和饮用水样本：我们选择了市场上常见的食品和饮用水样本，包括蔬菜、水果、肉类和瓶装水。
2. 大肠杆菌培养基：我们使用了含有大肠杆菌特异性营养物质的培养基。
3. 培养皿和培养试管：用于培养大肠杆菌。
4. 显微镜和染色剂：用于观察和鉴定大肠杆菌。
实验步骤：1. 样本准备：我们将食品和饮用水样本分别取样，并放入培养皿或培养试管中。
2. 培养：将样本放入预先准备好的大肠杆菌培养基中，然后将培养皿或培养试管放入恒温培养箱中，以促进大肠杆菌的生长。
3. 观察：在培养一段时间后，我们使用显微镜观察培养皿或培养试管中的样本。
为了更好地观察大肠杆菌，我们使用染色剂对样本进行染色。
4. 记录：记录观察到的大肠杆菌数量和形态特征。
结果与讨论：通过对不同食品和饮用水样本进行大肠杆菌检测，我们观察到了以下结果：1. 蔬菜和水果样本中的大肠杆菌数量较高。
这可能是因为蔬菜和水果在生长和加工过程中接触到了土壤或污染的水源。
2. 肉类样本中的大肠杆菌数量较低。
这可能是因为肉类在加工过程中经过了高温处理，杀死了大部分的细菌。
3. 瓶装水样本中没有观察到大肠杆菌。
这是因为瓶装水在生产和包装过程中经过了严格的卫生控制。
通过本实验，我们可以得出结论：大肠杆菌在食品和饮用水中的存在是普遍的，但其浓度和数量因样本类型而异。
这提醒我们在选择和处理食品和饮用水时要格外注意卫生和安全。
结论：本实验通过采用大肠杆菌检测方法，对不同食品和饮用水样本进行了分析。
结果表明，大肠杆菌在食品和饮用水中存在普遍，但其浓度和数量因样本类型而异。
这对我们提醒了食品安全和卫生的重要性。
大肠杆菌的检验方法
大肠杆菌的检验方法样品制备：以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。
稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。
从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。
LST和EC初步筛选：对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。
每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。
将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
EMB平板：取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。
检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。
如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。
用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18～24h。
生化试验：将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。
1 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。
2 MR-VP培养基：在36±1℃培养48±2h。
以无菌操作移取培养物1 mL至13mm×100mm试管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌是一种重要的肠道细菌，对于科学家和医生来说具有重要的研究和治疗价值。
分离和鉴定大肠杆菌的方法有许多种，本篇文章将介绍几种比较常见的方法。
1. 感染部位样本的获得
首先需要获得感染部位的样本，可分为分泌物、血液、尿液、粪便等。
获得样本的方
法可以根据不同部位进行取样，比如粪便可以通过肛门插入取样器进行获取。
2. 抗生素筛选
将样本接种于相应的富营养基质，对其中加入多种抗生素。
根据对应的扩散系数，只
有大肠杆菌具有生长优势，因此只有大肠杆菌能够在抗生素的存在下继续生长。
3. 纯化
从上面的富营养基质中挑选具有脐带颜色和形态特征的菌落，将其在富营养基质上进
行纯化。
纯化后的大肠杆菌能在多种富营养基质上进行生长即可分离。
4. 经典分离法
包括肉汤琼脂平板法、 MacConkey琼脂平板法、格拉莫琼脂平板法、 EMB琼脂平板法等一系列基本细菌检测方法。
1. 化学特性法
常用方法有氧化氨酸特性试验、熏蒸酸特性试验、脱氧氮碱试验、醛类试验等。
通过
观察变化与发色的差异，以及其化学反应程度来判断是否为大肠杆菌。
通过观察菌落形态、革兰染色阳性反应、运动情况、气体代谢情况等特性判断是否为
大肠杆菌。
可采用比色相比法、蛋白溶液胶片法、氧测定法、etc。
3. 抗原性鉴定
通过采用血相似抗原、鞭毛抗原、菌体抗原等抗原进行抗血清试验，来确定是否为大
肠杆菌。
水中大肠杆菌的检测实验报告
1. 掌握水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 了解水中大肠杆菌污染的严重性及预防措施。
3. 培养实验操作技能，提高对水质监测的认识。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种条件致病菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在水质监测中，大肠杆菌常作为粪便污染的指示菌。
本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌的检测，通过观察菌落特征，确定水中大肠杆菌的存在。
三、实验材料1. 实验器材：无菌试管、移液器、培养箱、酒精灯、无菌棉签、试管架、培养皿、显微镜等。
2. 实验试剂：伊红美蓝培养基、无菌水、水样、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等。
四、实验步骤1. 水样采集：采集待检测水样，用无菌容器盛装，避免污染。
2. 水样稀释：将水样进行适当的稀释，以便在培养基上形成单菌落。
3. 接种：取适量稀释后的水样，用无菌棉签均匀涂布于伊红美蓝培养基表面。
4. 培养：将接种后的培养基放入培养箱中，在37℃条件下培养24小时。
5. 观察：观察培养基上的菌落特征，如菌落大小、形状、颜色等，判断是否存在大肠杆菌。
6. 鉴定：对疑似大肠杆菌的菌落进行进一步的鉴定，如革兰氏染色、生化试验等。
五、实验结果与分析1. 菌落观察：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌菌落呈深紫色（黑色），边缘整齐，有金属光泽。
2. 鉴定结果：经革兰氏染色和生化试验，证实所观察到的菌落为大肠杆菌。
1. 大肠杆菌是水质监测中的重要指标，其存在表明水质可能受到粪便污染，存在健康风险。
2. 本实验采用伊红美蓝培养基进行大肠杆菌检测，操作简便，结果准确。
3. 在实际水质监测中，还需结合其他指标，如粪大肠菌群、耐热大肠菌群等，全面评估水质状况。
七、实验总结1. 本实验成功检测了水中大肠杆菌，掌握了水中大肠杆菌检测的基本原理和方法。
2. 通过实验，提高了对水质监测的认识，增强了环保意识。
3. 在今后的学习和工作中，将继续关注水质问题，为保护水资源、保障人民群众健康贡献力量。
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性的厌氧菌，常常被用作指示性微生物来评估食品和水源的卫生质量。
以下是常见的大肠杆菌检验方法：
1. 培养基方法：将样品接种在包含大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上，如大肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)和EC培养基等。
大肠杆菌能够利用琼脂中的乳糖发酵产生酸，导致培养基呈现红色或粉红色。
此外，EC 培养基还包含了可以检测大肠杆菌β-葡萄糖苷酶的亚甲基红试剂，如果大肠杆菌存在，则培养基呈现金属光泽。
2. 确认方法：对落有培养基上的鲜艳深色菌落进行进一步确认。
典型的确认方法包括革兰染色、目测观察形态特征、氧化发酵试验和测试产气杆菌酶试验。
3. PCR检测方法：利用聚合酶链反应(PCR)技术，从样品中扩增大肠杆菌特异性基因片段（如16S rRNA基因），然后通过凝胶电泳检测扩增产物。
4. 快速方法：如免疫层析试纸法和光学组织测定法。
免疫层析试纸法利用抗大肠杆菌抗体与大肠杆菌特异性抗原结合生成可视化结果。
光学组织测定法利用大肠杆菌的β-葡萄糖苷酶水解比色底物产生颜色变化。
这些方法都可用于检测大肠杆菌在食品和水源中的存在及其数量。
在进行检验时，应严格遵守相关的操作规程和实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。
大肠杆菌群检测方法
大肠杆菌群检测方法：用平板涂布法将样品稀释后（每个水样做3个浓度）涂布到伊红美蓝培养基后，待长出菌落，观察符合特征的群落，计算菌落数目，从而求出总数目。
{培养基及试剂配制}------伊红美蓝培养基1. 成分：蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 20~30g蒸馏水 1000ml2%伊红水溶液 20ml0.5 %美蓝水溶液 13ml2. 配制方法：先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，冷却备用。
临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
3．调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH 值，直至pH达7.6。
反之，则用1mol/L HCl进行调节。
注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
4．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。
大肠杆菌、菌落总数检测步骤
大肠杆菌及菌落总数检测方法为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。
下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。
一、大肠杆菌：1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例）双料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。
单料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。
B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。
2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。
3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。
4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后与25g样品混合均匀。
（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。
C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。
D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。
E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。
F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。
G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml 吸管取样品液体分别注入双料试管中H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。
I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。
J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。
大肠杆菌检测经验交流材料
大肠杆菌检测经验交流材料大肠杆菌检测经验交流材料一、前言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，广泛存在于土壤、水体和生物体内。
尽管大部分大肠杆菌对人体无害，但某些菌株可引发严重的肠道感染和食物中毒。
因此，对大肠杆菌的检测显得尤为重要。
本文旨在交流大肠杆菌检测的经验，分享检测方法、注意事项和技巧，以期提高检测的准确性和有效性。
二、实验室环境及设备在进行大肠杆菌检测时，需要确保实验室环境的洁净和无菌。
应定期清洗和消毒实验室的工作台、设备和文具，并做好隔离措施。
此外，以下是进行大肠杆菌检测常用的设备和试剂：1. 培养基：大肠杆菌选择性平板培养基（MacConkey培养基等）；2. 培养皿：含有培养基的玻璃培养皿或塑料培养皿；3. 通风箱：用于处理培养皿和样本，避免污染；4. 离心机：用于样本离心；5. 光学显微镜：用于观察细菌的形态和特征；6. 试剂：碳源，如葡萄糖；血红蛋白试剂，如肉汤等。
三、样本采集与处理1. 样品采集大肠杆菌可存在于各种环境和物体中，如肉类、蔬菜、水果、水体等。
因此，样品的采集种类繁多，如食品、环境水样、粪便等。
在采集样品前，应注意消毒双手和相关工具，避免交叉污染。
另外，不同样本的采集方法也有所不同，需要根据具体情况决定。
2. 样品处理样品处理是大肠杆菌检测的重要环节，通常包括样品的预处理和富集培养。
预处理的目的是去除样品中的干扰物，如盐、油脂、异物等。
常用的方法有稀释、搅拌、超声波处理等。
富集培养是指将样品中的大肠杆菌菌种放大到易于检测的水平。
常用的富集培养方法有液体富集培养法、固体富集培养法等。
四、大肠杆菌检测方法1. 培养法培养法是一种常用且经典的大肠杆菌检测方法。
具体操作步骤如下：（1）取少量样品于含有选择性基质的培养皿上，如MacConkey培养基。
（2）将培养皿置于恒温培养箱中，在37℃下培养24-48小时。
（3）观察培养皿上的菌落，大肠杆菌菌落一般为红色粘稠菌落。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告一、实验目的掌握大肠杆菌的检测方法，了解其在水质检验中的重要性。
二、实验原理1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种常见的肠道杆菌，是一类嗜热性、厌氧性以及革兰阴性杆菌。
该菌种常常是肠道菌群的组成部分，同时也是水污染的重要指示菌之一。
（1）标准培养基法经过富营养培养基的生长，大肠杆菌会形成显性和隐性的群体。
这种检测方法适用于水质样本、地球样品以及饮用水。
（2）膜过滤法样品通过过滤器滤过后，将过滤后的膜放入培养基上培养。
这种方法既适合于生物质量较小的样品，也适用于分析浓度高的样品。
（3）MPN法通过使用3组不同浓度的小管，并观察哪个浓度的小管有生长曲线的所有格子都被满足，来计算菌落形成单位的浓度。
可以适用于样品浓度较低的环境。
三、实验操作1. 实验材料大肠杆菌标准菌株、优化阳性对照菌株、培养基、蒸馏水、实验器材、滤纸、吸管、离心机、洗涤液和细胞硬度试剂。
2. 实验步骤（1）制备纯菌液：将大肠杆菌基配合缓冲液跳接种到营养琼脂平板上，并在37℃的恒温培养箱中培养过夜。
将菌落划入脱色水中，通过洗涤和离心的方式，获得纯化的细胞菌悬液。
（2）制备样品：将需要检测的水样分别过滤，过滤膜使用巨孔滤纸。
滤膜被慢慢放在脱色水上U型板中间的孔里，然后浸泡（3）培养过程: 将U型板接入温度为37℃的有氧培养箱内，在24 - 48小时内观察细菌进行生长，并做出相应的计数和检测。
四、实验结果与分析按照实验操作规程进行样品处理和培养后，确认样品中是否存在大肠杆菌。
如果在实验中产生的试样中出现了大肠杆菌生长，且其生长优于阳性对照；或者在某些水样中不能检测出大肠杆菌，说明该水质品质不满足相关规范的要求。
五、实验结论本实验通过不同的大肠杆菌检测方法，较为全面地了解了大肠杆菌的检测方法及其在水质检验中的重要性。
在实验的基础上，我们有理由相信，通过科学准确的操作，人们可以更好地保证饮用水的健全和安全。
中国药典大肠杆菌的检测方法
中国药典大肠杆菌的检测方法中国药典中关于大肠杆菌的检测方法主要包括传统培养方法和分子生物学方法。
下面将分别介绍这两种方法。
一、传统培养方法：1.外源菌培养基法：将待检样品接种于含有选择性培养基的平板上，培养一定时间后观察菌落形态。
通过形态特征、气味、色素等来初步判断是否为大肠杆菌。
常用的选择性培养基有VRB和EMB。
2.确认试验法：通过进行染色试验，如革兰氏染色和断杆试验，来判断菌体形态和结构。
可以进一步采用生化试验，如IMVIC试验（亮甲基绿青试验、分解氯化酪蛋白试验、甲酸氧化试验、酒石酸汞试验）来鉴定大肠杆菌。
3.基于生长特性的检测方法：通过观察大肠杆菌在特定培养条件下的生长特性来确定其存在。
如革兰氏正浓度法、大肠杆菌生长阳性试验法等。
二、分子生物学方法：1. PCR方法：通过引物设计，利用PCR扩增大肠杆菌特异性位点的DNA片段，再通过凝胶电泳检测。
PCR方法准确度高、灵敏度强，能够快速、准确地检测大肠杆菌。
2.实时荧光定量PCR法：利用特定引物和探针，对大肠杆菌特异性序列进行定量扩增，并实时监测荧光信号的增加。
这种方法能够自动化操作，结果可靠。
3.基于32P标记的杂交法：通过将亲和探针与32P标记进行杂交，通过放射性自显影来检测标本中特异结构。
该方法精确度高，但操作复杂。
4.基于质谱技术的检测方法：通过质谱技术检测大肠杆菌的代谢产物，如脂肪酸、糖代谢物等，来判断其存在。
该方法准确度高，且对菌落的生长条件要求不高。
以上是中国药典中常用的大肠杆菌检测方法。
根据实际需要，可选择合适的方法进行检测。
每种方法都有其优缺点，因此在应用时需要综合考虑实验条件、检测要求和经济成本，选择最合适的方法进行检测。
提高大肠杆菌检测的准确度和效率，对于保障药品质量和公共健康具有重要意义。
大肠杆菌检测步骤
餐饮具用大肠菌群测试片
采样:
（1）随机抽取消毒后准备使用的各类食具（碗、盘、杯等），取样量可根据大、中、小不同饮食行业每次采样6件～10件，每件贴纸片两张，每张纸片面积25cm²
（5cmX5cm）。
（2）用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内.
（3）筷子以5只为一件样品，用灭菌1mL吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹试纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。
培养：
将已采样的纸片置于37℃恒温培养箱中培养16h～18h，取出观察结果。
结果判断：
若纸片保持紫蓝色不变，或有红色斑点但斑点周围无黄晕者为大肠菌群阴性；在红色斑点周围有黄晕，或纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。
国家标准规定：在50cm的纸片上（即两片纸片上），大肠菌群不得检出。
大肠杆菌的测定(精)
水中总大肠杆菌的测定来源:加入时间:2010-3-30 12:15:511 原理总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖,产酸产气以及具备革兰氏染色阴性,无芽孢,呈杆状等有关特性,通过三个步骤进行检验,求得水样中的总大肠菌群数,实验结果以最可能数(most probable number,简称 MPN 表示。
2仪器2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱,冰箱。
2.3 生物显微镜,载玻片。
2.4 酒精灯,镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿 (直径 100mm ,试管(5×150mm,小倒管,吸管 (1, 5, 10ml ,烧杯 (200, 500, 2000ml , 锥形瓶 (500, 1000ml ,采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液:将 10g 蛋白胨、 3g 牛肉浸膏、 3g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶于 1000mL 蒸馏水中,调节 pH 为 7.2-7.4, 再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL ,充分混匀,分装于试管(内有倒管中,于 121℃高压灭菌器中灭菌 15min ,贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液:按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外,各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基3.3.1 贮备培养基的制备于 2000mL 烧杯中,先将 20-30g 琼脂加到 900mL 蒸馏水中,加热溶解,然后加入3.5g 磷酸氢二钾及 10g 蛋白胨,混匀,使其溶解,再用蒸馏水补充到 1000mL 调节溶液pH 至 7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加 10g 乳糖,混匀,定量分装于 250或500mL 锥形瓶内,置于高压灭菌器中,在 121℃灭菌 15min , 贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按 1:50比例吸取 5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中;再按 1:200比例称取无水亚硫酸钠,置于另一灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解,再置于沸水浴中煮沸10min (灭菌。
大肠杆菌检测方法步骤
饮用水中大肠杆菌及检测方法一、乳糖发酵实验（初发酵实验）溶液与试剂：乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g，猪胆盐5g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。
（乳糖胆盐培养基取30g，溶于1000mL纯水中即可）操作步骤1：将配制好的培养液，分装于每管10mL，共装9个试管，并各放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
2：水样稀释（1）无菌操作取水样1 mL放于含9mL的灭菌生理盐水中，置于容量瓶中，震荡摇匀为1:10的稀释液。
取上述稀释液1mL，注入9mL灭菌生理盐水，震荡摇匀，为1:100的稀释液。
（2）取水样，1:10稀释液，1：100稀释液各1mL接种到乳糖胆盐发酵管中。
（根据检样的污染程度可以适当调整稀释的比例）每一稀释度接种三管。
3：将试管连同试管架放入培养箱中37℃左右培养24h。
产酸溶液会由紫色变为黄色，产气发酵管中会有气泡。
如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则报告大肠杆菌群阴性，如有产气管，就需要进行分离培养，即进行伊红美蓝培养基鉴别实验。
二、伊红美蓝培养基鉴别实验（接种实验）伊红美蓝琼脂（EMB)成分：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂17g，2%伊红溶液20mL。
0.65%美蓝溶液10mL，蒸馏水1000L，pH7.1.制法：将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min，备用。
临用时加入乳糖，并加热融化琼脂，冷至50~55℃，加入伊红美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
操作步骤1称量：准确称取各成分。
2 溶化：加热熔化，定容。
3 调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4 灭菌：将两个500ml的三角瓶中加上棉塞。
将培养皿用报纸包好，放入灭菌锅内，121℃高压灭菌15min。
5 倒平板（均在无菌台中操作）：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
大肠杆菌检测方法
大肠杆菌检测方法一：进入无菌室步骤1、进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。
5—1小时。
2、关灯后0•5小时后放可进入。
3、进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套。
二：实验步骤1、进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。
（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）。
2、准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3、直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）。
4、再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）。
5、再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）。
6、再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液。
7、更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）8、再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）9、再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀）。
10、把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H ＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）11、梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样。
12、如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。
（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。
所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）。
13、取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14、再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。
（方法见标准）。
大肠杆菌检测方法[整理]
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大肠杆菌检测方法[整理]大肠杆菌是一种常见的肠道菌，在人和动物的肠道内常常存在。
然而，一些大肠杆菌菌株也可以引起人类疾病，如腹泻、细菌性肺炎和尿路感染等。
因此，对于食品、环境以及水源中的大肠杆菌的检测是很重要的。
目前常见的大肠杆菌检测方法包括宏域和微域方法。
下面我们分别介绍一下。
宏域方法：1. MPN法：MPN法（Most Probable Number）是微生物数量统计法中一个比较常用的方法，可以用于测定食品和水中大肠杆菌的数量。
它的原理是根据菌落形成的频率计算出样品中该菌的浓度。
这种方法通常需要更长时间，但其准确性较高。
2. 营养平板计数法：这种方法通过将样品表面原液（如，生牛肉）放置在固体培养基上，让其在37℃下培养24小时，经过染色后可以直接数出菌落，并通过菌落形状和生理生化特征鉴定出大肠杆菌。
这种方法简单，实验室易于操作，但需要更多的时间和更高的技能水平。
3. 膜过滤法：该方法将样品过滤到膜上，紫外线灭菌，然后将膜放置到富含营养成分的固体培养基上进行培养。
这个方法比较适合于检查食品或水样品中的低浓度大肠杆菌，但没有选择感染性的菌株的能力。
1. PCR (聚合酶链式反应)：PCR是一种高效的DNA增幅技术，可用于检测大肠杆菌DNA 的存在。
PCR方法的鉴定出现假阳性的可能性较低，但它不能鉴定出大肠杆菌的活性，仅能检测到细胞核酸。
2. ELISA (酶联免疫吸附法)：ELISA方法是用来检测食品和水中大肠杆菌的方法之一。
试剂盒中含有特定的抗体，它们与大肠杆菌的特定抗原结合。
这种方法速度快，准确率高，但可以只检测某一菌株。
3. 生物传感技术：生物传感技术是利用微生物的活性和生化反应来检测分子的技术。
它的优点是快速，准确，且对细胞造成的伤害较少。
大肠杆菌的测定方法
大肠杆菌的测定方法
致病性大肠杆菌是病原体，它的筛选、鉴定以及测定是病原微生物的重要步骤。
本文将介绍大肠杆菌测定的一般方法，其中包括细菌的培养、鉴定与测定流程。
一、细菌培养
大肠杆菌的培养，首先要选择利于细菌生长的培养基，培养基需要含有必须的养分和活性，具有适宜的pH值，用于维持细菌的生长。
常用的培养基包括牛油硫磺琼脂（MacConkey）、牛油硫磺琼脂（SS agar）、牛油硫磺琼脂棕榈酸（MSA）、牛油硫磺琼脂乳酸（MSL）以及甲氧苄啶琼脂（MMB）等。
培养的大肠杆菌会产生具有细胞膜抗原特性的抗原。
细胞膜抗原可以形成抗原抗体复合物，从而产生免疫反应。
将样本装置在具有合理浓度的抗原抗体复合液中，将有助于调节抗体与抗原的反应，使抗体与抗原之间形成稳定的结合，增强抗体的特异性，同时也可以提高测定的准确性，提高测试的灵敏度。
二、细菌鉴定
通过培养可以初步判断大肠杆菌的类型，但要确定其种类，可以采用血凝试验（血清凝集），该试验可用于识别各种凝集素。
另外，培养过程中产生的生化特性也可以帮助在识别大肠杆菌中发挥作用。
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理大肠杆菌是一种常见的肠道菌群中的细菌，通常是无害的，但某些毒株可以引起食物中毒和其他健康问题。
因此，检测大肠杆菌在食品和水源中的存在非常重要，以确保公众的健康和安全。
大肠杆菌检测通常通过检测这种细菌的DNA或蛋白质来完成。
这些检测方法可以分为质量检测和定量检测两种方法。
1. 质量检测质量检测是检测大肠杆菌是否存在的一种简单方法。
常用的方法有：(1) 培养法培养法是一种直接检测大肠杆菌存在的方法。
在这个方法中，食品或水样本直接加入含有特定营养成分和染色剂的富营养基质中进行培养。
如果存在大肠杆菌，则可以观察到菌落，并且这些菌落通常呈现出淡粉红色或金属绿色。
(2) 葡萄糖发酵试验这是一种利用大肠杆菌对糖的发酵反应来检测其存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被添加到含有葡萄糖和试剂的培养基中，并在一段时间后观察产生的气体或酸度的变化。
大肠杆菌通常能够迅速发酵葡萄糖，所以如果存在大肠杆菌，则会导致培养基的酸度降低和气泡的产生。
(3) 快速测试条这是一种利用特殊的测试条来检测大肠杆菌存在的方法。
在这种测试中，食品或水样本被加入到测试条上，并观察测试条变色。
这种测试条通常采用专有的化学反应，可以针对大肠杆菌的生长特性进行设计。
(1)酶联免疫吸附测定法(ELISA)ELISA是一种高灵敏度、高特异性的定量检测方法。
这种方法是利用特异性抗体与大肠杆菌中的特定蛋白质结合，再结合酶进行检测，检测结果会显示大肠杆菌的数量。
(2)PCR检测法PCR检测法是一种用来扩增DNA段的方法，可以检测大肠杆菌的存在。
PCR检测法利用针对大肠杆菌特定的DNA序列的反应，通过扩增这些特定的DNA段，来检测大肠杆菌在食品和水源样本中的存在。
总的来说，检测大肠杆菌的存在非常重要，因为它可以导致许多健康问题。
以上列举的方法都有自己的优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行检测。
大肠菌群实验报告
大肠菌群实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
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大肠菌群及检验
一、大肠菌群介绍
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工
作中。
二、大肠菌群检验方法：
由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。
两个标准方法在检测程序上略有不同。
（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。
同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。
具体操作参见GB4789.3-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》
（二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。
本方法采用两步法：推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
以BGLB产气为阳性。
查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
具体操作参见SN0169-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》
三、说明：
1．MPN检索表：
MPN 为最大可能数(Most Probable Number)的简称。
这种方法，对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。
MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加
10倍。
注意国家标准和行业标准中所附MPN表所用稀释度是不同的，而且结果报告单位也不相同。
2．初发酵和证实试验：
无论是国家标准的三步法还是行业标准的两步法，都利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验，培养基的配制略有不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。
初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。
有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实试验相差较大。
因此，在实际检测工作中，证实试验是必需的。
3．产气量与倒管：
在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。
实验表明，大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。
如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能有气体产生，而应作进一步试验。
4．挑选菌落：
国家标准中，需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝平板分离，对典型和可疑菌落进行观察和证实试验。
由于大肠菌群是一群细菌的总称，在平板大肠菌群菌落的色泽、形态等方
面较大肠菌更为复杂和多样，而且与大肠菌群的检出率密切相关。
国家标准方法规定伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽时，检出率最高；红色、粉红色菌落检出率较低。
另外，挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系，只挑取一个菌落，由于机率问题，尤其当菌落不典型时，很难避免假阴性的出现。
所以挑菌落一定要挑取典型菌落，如无典型菌落则应多挑几个，以免出现假阴性。
5．抑菌剂：
大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。
抑菌剂的主要作用是抑制其它杂菌，特别是革兰氏阳性菌的生长。
国家标准中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂，行业标准中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。
抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，而有利于大肠菌群细菌的生长和挑选，但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。
有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即可对抑菌作用产生影响，因此抑菌剂的添加应严格按照标准方法进行。