四种天然产物对α-淀粉酶抑制作用
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食品科技
2012年 第 37卷 第 3期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食品开发
四种天然产物对α-淀粉酶 抑制作用研究
莫丽春，陈丽娟，吴月霖，曾凡骏* (四川大学食品工程系，成都 610065)
摘要：研究了苦瓜、绞股蓝、山药、蜂胶提取物4种天然产物对α-淀粉酶抑制作用，结果显示 山药对α-淀粉酶无明显抑制作用，其余3种天然产物对α-淀粉酶均有抑制作用，对α-淀粉酶 半抑制浓度(IC50)分别为30.6、40.7、36.1 mg/mL，且抑制效果可达到现有α-淀粉酶抑制剂拜糖 平的2.25、1.69、1.9倍。 关键词：糖尿病；天然产物；α-淀粉酶；抑制剂 中图分类号： TS 201.2+5 文献标志码： A 文章编号：1005-9989(2012)03-0085-04
收稿日期：2011-08-17 *通讯作者 作者简介：莫丽春(1986—)，女，广西人，硕士研源自文库生，研究方向为保健功能食品的研究。
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食品开发
1 仪器与材料 1.1 仪器与设备
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第 37卷 第 3期
半抑制浓度研究 参照方法2.1，在反应体系中加入不同浓度 的抑制剂溶液1 mL，阳性对照为拜糖平，空白对 照为不加抑制剂溶液的溶剂。背景对照为对应浓 度的抑制剂溶液，不加酶液，其他与抑制剂管操 作相同，其反应体系如表1所示。反应终止后用 蒸馏水稀释定容到25 mL，于波长540 nm处测其 吸光值。
Abstract: This article focuses on the inhibition of α-amylase of the extracts from Momordica Charantia L, Gynostemma, yam, propolis. The results show that except the extracts of yam the rest of three natural products all have obvious effect on inhibiting α-amylase, and the 50% inhibiting concentration(IC50, mg/ mL)of each is 30.6, 40.7, 36.1 mg/mL which is 2.25, 1.69, 1.9 times than acarbose. Key words: diabetes; natural products; α-amylase; inhibitor
目前，糖尿病已成为全球许多国家的常见病 和多发病，其死亡率已居肿瘤、心血管之后的第 三位，故寻找新型的天然降血糖药物已成为现今 研究的热点。现代中医药实验研究表明，许多天 然产物具有降血糖的功效。苦瓜的有效成分之一 是苦瓜皂甙，现代医学研究发现，苦瓜皂甙具有 降血糖、抗氧化、提高免疫能力、降低胆固醇、 抗肿瘤和抗艾滋病毒等生理功能[1]。绞股蓝的主要 药效成分为绞股蓝皂苷(Gypenosides，GP)，研究 表明，绞股蓝具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血 脂、增强免疫、防治糖皮质激素不良反应、保护 心脏和肝脏、镇静止痛及抗溃疡等药理作用[2]。山
表1 α-淀粉酶活性抑制体系表 mL
AR2130电子天平，DHG-9053A型电热恒温 鼓风干燥箱，DSY-1-4型电热恒温水浴锅，UV1100型紫外-可见光分光光度计，容量瓶、烧杯、 比色管。 1.2 材料与试剂 α-淀粉酶：北京奥博星生物技术有限公 司，BR，生化试剂；拜糖平：德国拜耳公司； 苦瓜提取物(苦瓜甙10%)、绞股蓝提取物(绞股蓝 甙98%)、山药提取物(山药多糖60%)、蜂胶(黄酮 10%)：天津天士力公司；甲醇、磷酸氢二钾、磷 酸二氢钾、碳酸钠等均为分析纯。 1.3 试剂的配制 拜糖平溶液：称取一定量的拜糖平用少量重 蒸馏水溶解，配成一定浓度的溶液备用；山药提 取物溶液：称取一定量的山药提取物粉末，加一 定量重蒸水，沸水浴提取6 h，冷却至室温，定容 到一定体积备用；苦瓜、绞股蓝提取物溶液：分 别称取一定量的苦瓜提取物粉末和绞股蓝提取物 粉末，加一定量的甲醇水混合液(甲醇:水=3:5) 溶解，60 ℃超声提取40 min，冷却至室温定容 到一定体积备用；蜂胶溶液：称取一定量蜂胶提 取物粉末，加一定量乙醇，超声提取40 min，冷 却至室温定容至一定体积备用；缓冲液：准确称 取0.945 g磷酸氢二钾，2.233 g磷酸二氢钾，加少 量重蒸馏水溶解，并定容至500 mL，最后用5% NaOH溶液调pH至6.8，备用。酶液：将α-淀粉 酶溶于磷酸钾缓冲液(pH6.8)中，配成1 U/mL溶 液备用。 2 实验方法 2.1 α-淀粉酶活力测定 α-淀粉酶水解淀粉为还原糖，3,5-二硝基 水杨酸与还原糖反应显示出红棕色，540 nm处比 色，定量测定α-淀粉酶的活性。参照DNS(3,5-二 硝基水杨酸)比色法，反应体系：将0.3 mL α-淀 粉酶在37 ℃水浴中孵育5 min后，加入淀粉溶液 (1%，0.4 mL)以启动反应。体系于37 ℃反应5 min 后，加入0.2 mL DNS，于沸水浴中反应5 min，取 出冷却定容至25 mL，最后于540 nm处测定吸光 值。酶抑制试验重复3次，每次3个复管。 2.2 4种天然产物对α-淀粉酶的抑制作用曲线及
α-amylase inhibition of 4 natural products
MO Li-chun, CHEN Li-juan, WU Yue-lin, ZENG Fan-jun*
(Department of Food Science, Sichuan University, Chengdu 610065)
药的主要成分是dioscin，皂甙具有抗炎、降低胆 固醇、降血糖和免疫调节等多方面的生物活性和 药理作用[3]。蜂胶中的一些黄酮类、萜烯类物质具 有促进利用外源性葡萄糖合成肝糖原的作用，而 且这类物质中的梓醇、蝶芪等物质具有明显的降 低血糖的作用[4]。α-淀粉酶抑制剂是一种新型的 有效药物，属于一种糖苷水解酶抑制剂，能够有 效抑制肠道内唾液及胰淀粉酶的活性，从而降低 血糖和血脂含量水平。对α-淀粉酶抑制剂的机理 进行研究，建立了α-淀粉酶抑制剂体外活性评价 方法，研究了苦瓜、绞股蓝、山药、蜂胶提取物 等4种天然产物对α-淀粉酶体外抑制作用。
2012年 第 37卷 第 3期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食品开发
四种天然产物对α-淀粉酶 抑制作用研究
莫丽春，陈丽娟，吴月霖，曾凡骏* (四川大学食品工程系，成都 610065)
摘要：研究了苦瓜、绞股蓝、山药、蜂胶提取物4种天然产物对α-淀粉酶抑制作用，结果显示 山药对α-淀粉酶无明显抑制作用，其余3种天然产物对α-淀粉酶均有抑制作用，对α-淀粉酶 半抑制浓度(IC50)分别为30.6、40.7、36.1 mg/mL，且抑制效果可达到现有α-淀粉酶抑制剂拜糖 平的2.25、1.69、1.9倍。 关键词：糖尿病；天然产物；α-淀粉酶；抑制剂 中图分类号： TS 201.2+5 文献标志码： A 文章编号：1005-9989(2012)03-0085-04
收稿日期：2011-08-17 *通讯作者 作者简介：莫丽春(1986—)，女，广西人，硕士研源自文库生，研究方向为保健功能食品的研究。
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食品开发
1 仪器与材料 1.1 仪器与设备
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第 37卷 第 3期
半抑制浓度研究 参照方法2.1，在反应体系中加入不同浓度 的抑制剂溶液1 mL，阳性对照为拜糖平，空白对 照为不加抑制剂溶液的溶剂。背景对照为对应浓 度的抑制剂溶液，不加酶液，其他与抑制剂管操 作相同，其反应体系如表1所示。反应终止后用 蒸馏水稀释定容到25 mL，于波长540 nm处测其 吸光值。
Abstract: This article focuses on the inhibition of α-amylase of the extracts from Momordica Charantia L, Gynostemma, yam, propolis. The results show that except the extracts of yam the rest of three natural products all have obvious effect on inhibiting α-amylase, and the 50% inhibiting concentration(IC50, mg/ mL)of each is 30.6, 40.7, 36.1 mg/mL which is 2.25, 1.69, 1.9 times than acarbose. Key words: diabetes; natural products; α-amylase; inhibitor
目前，糖尿病已成为全球许多国家的常见病 和多发病，其死亡率已居肿瘤、心血管之后的第 三位，故寻找新型的天然降血糖药物已成为现今 研究的热点。现代中医药实验研究表明，许多天 然产物具有降血糖的功效。苦瓜的有效成分之一 是苦瓜皂甙，现代医学研究发现，苦瓜皂甙具有 降血糖、抗氧化、提高免疫能力、降低胆固醇、 抗肿瘤和抗艾滋病毒等生理功能[1]。绞股蓝的主要 药效成分为绞股蓝皂苷(Gypenosides，GP)，研究 表明，绞股蓝具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血 脂、增强免疫、防治糖皮质激素不良反应、保护 心脏和肝脏、镇静止痛及抗溃疡等药理作用[2]。山
表1 α-淀粉酶活性抑制体系表 mL
AR2130电子天平，DHG-9053A型电热恒温 鼓风干燥箱，DSY-1-4型电热恒温水浴锅，UV1100型紫外-可见光分光光度计，容量瓶、烧杯、 比色管。 1.2 材料与试剂 α-淀粉酶：北京奥博星生物技术有限公 司，BR，生化试剂；拜糖平：德国拜耳公司； 苦瓜提取物(苦瓜甙10%)、绞股蓝提取物(绞股蓝 甙98%)、山药提取物(山药多糖60%)、蜂胶(黄酮 10%)：天津天士力公司；甲醇、磷酸氢二钾、磷 酸二氢钾、碳酸钠等均为分析纯。 1.3 试剂的配制 拜糖平溶液：称取一定量的拜糖平用少量重 蒸馏水溶解，配成一定浓度的溶液备用；山药提 取物溶液：称取一定量的山药提取物粉末，加一 定量重蒸水，沸水浴提取6 h，冷却至室温，定容 到一定体积备用；苦瓜、绞股蓝提取物溶液：分 别称取一定量的苦瓜提取物粉末和绞股蓝提取物 粉末，加一定量的甲醇水混合液(甲醇:水=3:5) 溶解，60 ℃超声提取40 min，冷却至室温定容 到一定体积备用；蜂胶溶液：称取一定量蜂胶提 取物粉末，加一定量乙醇，超声提取40 min，冷 却至室温定容至一定体积备用；缓冲液：准确称 取0.945 g磷酸氢二钾，2.233 g磷酸二氢钾，加少 量重蒸馏水溶解，并定容至500 mL，最后用5% NaOH溶液调pH至6.8，备用。酶液：将α-淀粉 酶溶于磷酸钾缓冲液(pH6.8)中，配成1 U/mL溶 液备用。 2 实验方法 2.1 α-淀粉酶活力测定 α-淀粉酶水解淀粉为还原糖，3,5-二硝基 水杨酸与还原糖反应显示出红棕色，540 nm处比 色，定量测定α-淀粉酶的活性。参照DNS(3,5-二 硝基水杨酸)比色法，反应体系：将0.3 mL α-淀 粉酶在37 ℃水浴中孵育5 min后，加入淀粉溶液 (1%，0.4 mL)以启动反应。体系于37 ℃反应5 min 后，加入0.2 mL DNS，于沸水浴中反应5 min，取 出冷却定容至25 mL，最后于540 nm处测定吸光 值。酶抑制试验重复3次，每次3个复管。 2.2 4种天然产物对α-淀粉酶的抑制作用曲线及
α-amylase inhibition of 4 natural products
MO Li-chun, CHEN Li-juan, WU Yue-lin, ZENG Fan-jun*
(Department of Food Science, Sichuan University, Chengdu 610065)
药的主要成分是dioscin，皂甙具有抗炎、降低胆 固醇、降血糖和免疫调节等多方面的生物活性和 药理作用[3]。蜂胶中的一些黄酮类、萜烯类物质具 有促进利用外源性葡萄糖合成肝糖原的作用，而 且这类物质中的梓醇、蝶芪等物质具有明显的降 低血糖的作用[4]。α-淀粉酶抑制剂是一种新型的 有效药物，属于一种糖苷水解酶抑制剂，能够有 效抑制肠道内唾液及胰淀粉酶的活性，从而降低 血糖和血脂含量水平。对α-淀粉酶抑制剂的机理 进行研究，建立了α-淀粉酶抑制剂体外活性评价 方法，研究了苦瓜、绞股蓝、山药、蜂胶提取物 等4种天然产物对α-淀粉酶体外抑制作用。