分子生物学实验报告
医学分子生物学pcr实验报告
医学分子生物学pcr实验报告医学分子生物学PCR实验报告一、实验目的•理解PCR原理及其在医学分子生物学中的应用•掌握PCR实验操作流程及技巧•学会分析实验结果并撰写实验报告二、实验原理•PCR是聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction) 的缩写•通过使用DNA聚合酶对特定DNA片段进行指数级扩增•用于诊断疾病、基因检测、基因表达分析等领域三、实验材料•被测样本DNA•引物 (Primer) 对•2x Taq Master Mix•无水乙醇•DNase/RNase-free deionized water•加热式PCR仪•凝胶电泳设备及相关试剂四、实验步骤1.设计并合成引物•根据目标序列选择特异性引物•检查引物的特异性和二聚体形成情况2.准备PCR反应混合液•按照实验设计，计算并配置各试剂的浓度和体积•将样本DNA、引物、2x Taq Master Mix和DNase/RNase-free水混合3.PCR扩增•设定PCR仪的温度和循环次数参数•将反应混合液放入PCR仪，开始扩增4.PCR产物检测•准备1%琼脂糖凝胶，加入适量甲醛•将扩增后的PCR产物进行凝胶电泳•观察电泳结果，分析PCR产物的分子量和条带强度5.结果分析及报告撰写•根据实验结果，分析样本中目标基因的存在与否•撰写实验报告，并对实验过程和结果进行讨论五、实验注意事项•避免引物二聚体的产生，以提高实验特异性•掌握PCR扩增的温度、时间和循环次数参数•减少实验中的污染，以提高实验准确性•正确分析实验结果，避免误判六、实验结果分析•经过PCR扩增后，观察到目标基因片段的明显条带•结果符合预期，证明实验成功•对异常结果进行讨论，分析可能的原因及改进措施七、结论•PCR实验在医学分子生物学中具有重要意义•通过本次实验，我们掌握了PCR实验的操作流程和技巧•实验结果可为疾病诊断、基因检测等提供有力依据Hello! How can I help you today? If you have any questions or need assistance, feel free to ask.。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
分子生物学实验报告
生命学院09级分子生物学实验报告目录：实验一质粒DNA 的小量制备（P2-P4）实验二DNA 的含量、纯度与分子量的电泳法测定（P4-P7）实验三感受态细胞的制备及转化（P7-P9）实验一质粒DNA的小量制备一、实验目的1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。
2．了解制备原理及各种试剂的作用。
3. 制取质粒以备大肠杆菌的培养和电泳。
二、实验材料及试剂材料：大肠杆菌E.coli，含pBR322质粒。
试剂：1.LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，用NaOH调pH至7.3左右。
如固体培养基则添加15g/L琼脂。
2.溶液Ⅰ（pH8.0G.E.T缓冲液）：50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/L EDTA。
灭菌后存放。
3.溶液Ⅱ（0.2mol/LNaOH(内含1％SDS)）：预先配制1％SDS母液，临用前一天晚上加入0.2mol/LNaOH，4℃保存。
4.溶液Ⅲ（pH4.8乙酸钾溶液）：5mol/L乙酸钾60mL、冰乙酸11.5mL、双蒸馏水28.5mL。
5.酚/氯仿液(V/V＝1/1)：酚为重蒸酚，配制时，先将氯仿中加入异戊醇，使其体积比为24:1，然后等量的加入重蒸酚，混匀，并用0.1mol/LTris-HCl (pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，于棕色瓶中存放，并在上面覆盖等体积的0.01 mol/LTris-HCl(pH7.6)，4℃保存。
6.无水乙醇7.70％乙醇8.pH8.0 TE缓冲液：10mmol/LTris-HCl、1mmol/LEDTA，其中含RNA酶20μg/mL。
仪器：恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、台式高速离心机、台式小型振荡器、EP管(1.5mL微量离心管)、加样器(20uL～lmL)、吸头。
三、实验步骤从菌落中快速提取制备质粒DNA1．取1.5mL(750uL取两次)菌液置于1.5mL Ep管中，7500rpm离心1min。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告重组质粒的pcr验证（目的基因的pcr扩增）姓名:xxx学号：xxx专业：xxx界别：xxx同组者：xxxx一．实验目的（1）自学掌控pcr反应的基本原理和实验技术。
（2）了解引物设计的基本要求。
1.pcr基本原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)，简称pcr，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增dna，类似dna的细胞内复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链dna变性为单链dna、单链dna能与引物复性（退火）成为引物-dna单链复合物、以及在dntps存在下dna聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链dna（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个pcr循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的dna片段。
pcr技术的基本原理类似dna的天然激活过程，其特异性依赖与靶序列两端优势互补的寡核苷酸引物。
pcr由变性--淬火--延展三个基本反应步骤形成：①模板dna的变性：模板dna经加热至90~95℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板dna与引物的淬火(复性)：模板dna经冷却变性成单链后，温度降到55℃左右，引物与模板dna单链的优势互补序列接合融合；③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的复制链。
经过“变性—淬火—延展”三个过程就可以赢得代莱dna分子，而且这种崭新dna分子又可以沦为下次循环的模板。
因此，变性、淬火和延展循环反复25~30次后，即可从少量的模板dna中扩充出来大量的目的产物。
pcr引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列，因此，引物的优劣直接关系到pcr的特异性与成功与否。
分子生物学实验报告
PCR扩增HBV-S1.实验原理1.1采用PCR扩增出HBV-S基因。
PCR是一种体外由引物介导的特定DNA序列的酶促扩增技术。
其前提是一对人工合成的15-20bp的寡核苷酸引物，其序列与待扩增的DNA两侧的碱基序列互补。
PCR包括下列三个基本步骤：变性、复性、延伸。
经过上述变性、退火、延伸步骤的25-35次循环，导致特异的靶序列的2n指数扩增。
1.2此次扩增的目的基因用于后续的表达，为了保证碱基不发生错配，不采用无矫正功能的Taq酶，而用高保真酶。
1.3为了使目的基因能和载体正确连接，本次实验选择在目的基因末端加尾（A）的方法。
2.实验目的获得HBV-S基因，为后续克隆做准备。
3.实验材料3.1模板3.2 PCR扩增引物3.3二甲基亚砜3.410×PCR 缓冲液（含Tris-HCl 100mmol/L; MgCl2 15mmol/L 、KCl 500mmol/L, pH8.3，0.1%明胶）3.5脱氧核苷三磷酸dNTPs：配成10mM- dATP，dTTP，dGTP，dCTP各10mM，用NaOH溶液调节至pH8.3。
）3.6水：要求不含DNA聚合酶抑制剂，不含离子，一般为去离子二蒸水（ddH2O）, 灭菌以后即可使用。
4.实验仪器4.1PCR仪Thermo Hybaid4.2水平式琼脂糖凝胶电泳槽4.3恒压电泳仪Bio-Rad4.4凝胶成像仪JY04S—3C北京君毅东方4.5垂直流超净工作台上海智域分析仪器制造有限公司4.6微量加样器5.1获得模板5.1.1取100ul血清，加入50ul裂解液，颠倒混匀，100℃金属浴10min；5.1.2 12000rpm的转速下离心5min；取2ul作为模板。
5.2扩增HBV-S基因（PCR）5.2.1PCR体系材料体积5*buffer 2.5mMdNTP Phire模板HBV-S1 HBV-S2 ddH2O总体积4ul 1.6ul 0.4ul 2ul 1 ul 1 ul 10ul 20 ul5.2.2 PCR设置参数1）98℃预变性30s；2）98℃变性5s、60℃复性5s、72℃延伸10s，循环30次；3）72℃终延伸1min.6.琼脂糖凝胶电泳6.1量取100ml5×TBE电泳缓冲液加蒸馏水至1000ml，配置成0.5×TBE电泳缓冲液；6.2称取琼脂糖3g，加入0.5×TBE电泳缓冲液200ml，加热熔化，当凝胶冷却至60℃左右时，加入溴化乙锭溶液5ul，充分混匀；6.3先用透明胶带封固胶托边缘，放好梳子，然后再倒入凝胶（凝胶厚度在5～10mm左右）；6.4在凝胶完全凝固后，小心移去透明胶带，将凝胶放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，再小心取出梳子；6.5取已制备好的DNA样品10ul，加入染料2ul，充分混匀后用移液器将样取加入点样孔，在另一点样孔中，加入maker10ul；6.6盖上电泳槽，打开电源，电泳40～60分钟；（注意：DNA样品从负极向正极泳动）；6.7将凝胶置于紫外仪下观察；将剩余的10ul保存于4℃扩增的HBV-S基因片段长度为750bp框内所标识的条带为本组实验结果（从左置右，前两管的引物体积为1ul，后两管的引物体积为0.5ul）。
分子生物学实训报告
一、实训背景分子生物学是研究生物大分子如蛋白质、核酸的结构与功能的一门学科。
随着生命科学技术的不断发展，分子生物学在医学、农业、环境保护等领域发挥着越来越重要的作用。
为了更好地理解和掌握分子生物学的基本理论和技术，我们开展了为期两周的分子生物学实训课程。
本次实训旨在通过实际操作，加深对分子生物学理论知识的理解，提高实验技能，培养科研素养。
二、实训目的1. 熟悉分子生物学实验室的基本操作规程和安全规范。
2. 掌握DNA提取、PCR扩增、酶切、电泳等分子生物学实验技术。
3. 理解基因克隆、基因表达、蛋白质分析等分子生物学实验原理。
4. 提高团队协作和沟通能力，培养科研素养。
三、实训内容1. 实验室基本操作与安全规范（1）熟悉实验室布局，了解各种仪器的使用方法。
（2）学习实验室安全操作规程，掌握实验室废弃物处理方法。
（3）进行实验前的准备工作，如配制试剂、消毒、无菌操作等。
2. DNA提取（1）了解DNA提取的原理和常用方法。
（2）学习酚-氯仿法提取DNA。
（3）对提取的DNA进行质量检测，如A260/A280比值、琼脂糖凝胶电泳等。
3. PCR扩增（1）了解PCR扩增的原理和步骤。
（2）设计PCR引物，进行PCR反应。
（3）对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
4. 酶切（1）了解酶切原理和酶切反应条件。
（2）学习限制性内切酶的用法。
（3）进行酶切反应，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
5. 电泳（1）了解电泳原理和电泳技术。
（2）学习琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等电泳技术。
（3）对DNA、蛋白质等生物大分子进行电泳分离和检测。
6. 基因克隆、基因表达、蛋白质分析（1）了解基因克隆、基因表达、蛋白质分析的基本原理。
（2）学习相关实验技术，如载体构建、重组表达、蛋白纯化等。
（3）对克隆的基因、表达的蛋白进行检测和分析。
四、实训过程1. 实验前准备（1）查阅相关文献，了解实验原理和操作步骤。
（2）配制实验试剂，确保实验用品齐全。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验目的：探究基因在DNA复制过程中的作用及其表达机制。
实验材料与方法：材料：1. DNA模板：提取自大肠杆菌细胞中的质粒DNA。
2. DNA聚合酶：用于合成新的DNA链。
3. 引物：用于DNA聚合酶的引导和定向合成DNA。
4. dNTPs：脱氧核苷酸三磷酸盐，提供新的核苷酸单位供DNA聚合酶使用。
方法：1. DNA复制反应：将DNA模板、DNA聚合酶、引物和dNTPs混合在一起，加入适量缓冲液和镁离子，并在适温条件下进行DNA复制反应。
2. DNA扩增：通过PCR技术，利用引物的特异性，从DNA模板中扩增目标序列。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离和检测PCR产物，通过电泳迁移率差异判断扩增产物的大小。
实验结果：1. DNA复制反应成功进行，获得了新的DNA链。
2. PCR反应成功扩增目标序列，观察到明显的放大带。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示PCR产物的大小符合预期。
实验分析与讨论：本实验通过模拟DNA的复制过程，成功合成了新的DNA链，并通过PCR技术扩增了目标序列。
这一结果验证了基因在DNA复制过程中的作用。
在DNA复制过程中，DNA聚合酶是关键的酶类。
DNA聚合酶能够识别DNA的模板链，并根据模板链的信息合成新的互补链。
在实验中，添加了引物和dNTPs，引物可以定向和引导DNA聚合酶的合成，dNTPs则提供了能量和碱基单位，支持DNA聚合酶的复制活动。
PCR技术是一种重要的生物分子技术，其通过引物的特异性识别和引导，扩增目标序列。
实验中，选择了适当的引物序列，使其能够与目标序列特异性地结合，并保证扩增反应的特异性和选择性。
PCR反应可以在短时间内扩增大量的目标DNA序列，为后续的分析和研究提供了足够的样品。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过电场驱动DNA分子在凝胶中迁移，根据分子大小的差异来判断扩增产物的大小。
在实验中，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出明显的PCR产物带，与预期的目标序列大小相符，说明PCR扩增反应成功，目标序列得到了扩增。
分子生物学实验报告全解(有图有真相)
分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常用的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。
分子生物学检验实习报告
实习报告一、实习背景及目的随着生物科学和医学技术的快速发展，分子生物学检验在疾病诊断、治疗和科研等领域发挥着越来越重要的作用。
本次实习旨在通过在分子生物学检验实验室的实际操作，掌握分子生物学检验的基本原理、技术方法和实验操作，提高自己的实验能力和专业素养。
二、实习内容及过程1. 实验室基本原理及操作学习在实习初期，我在导师的指导下，学习了分子生物学检验实验室的基本原理和操作方法，包括实验室的安全操作规范、实验仪器的使用和维护、实验试剂的配制和保存等。
同时，我还学习了实验室常用的分子生物学技术，如PCR、DNA提取、电泳、基因克隆等。
2. 实际操作及实验项目在基本原理和操作学习的基础上，我开始参与实验室的实际操作和实验项目。
我参与了一系列分子生物学检验实验，如基因突变检测、基因表达定量分析、病原体检测等。
在实验过程中，我严格遵循实验操作规程，确保实验数据的准确性和可靠性。
3. 实验数据分析和报告撰写实验完成后，我对实验数据进行了分析和处理，并根据实验结果撰写了实验报告。
在报告撰写过程中，我充分展示了实验设计、实验操作和实验结果的分析，并对实验中遇到的问题进行了总结和反思。
三、实习收获及反思1. 实习收获通过本次实习，我掌握了分子生物学检验的基本原理、技术方法和实验操作，提高了自己的实验能力和专业素养。
同时，我也学会了如何分析和处理实验数据，提高了自己的科研能力。
2. 实习反思在实习过程中，我认识到理论知识与实际操作的重要性。
只有扎实的理论基础和丰富的实际操作经验，才能在实验过程中得心应手，确保实验的顺利进行。
此外，我也意识到团队合作和沟通在实验过程中的重要性。
在以后的学习和工作中，我将更加注重团队合作和沟通能力的培养。
四、实习总结本次分子生物学检验实习让我受益匪浅，不仅提高了自己的实验能力和专业素养，也让我对分子生物学检验有了更深的理解和认识。
在今后的学习和工作中，我将继续努力，不断提高自己的综合素质，为医学事业的发展贡献自己的力量。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告实验二从 cDNA 文库中靶片断扩增（ 4h ）一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。
2.掌握移液枪和PCR 仪的基本操作技术。
二、实验原理：PCR 技术，即聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR）。
经典的PCR 过程包括：变性（denaturing step ）、退火（annealing step ）和延伸（extension step ）三个步骤。
变性过程，即在高温94℃ ~98 ℃下，模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之形成两条单链ssDNA 。
随后，模板DNA 与引物的退火（复性）过程中，温度降至55℃左右，特异序列的引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；之后，引物的延伸过程，DNA 模板-引物结合物在耐热的DNA 聚合酶（如：Taq 酶）的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4 分钟，2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR 反应的成分和作用：总体积：一般为25μ l ～100 μl（一）无Mg2+buffer ：由纯水、kcl 、Tris 组成。
Tris 用于调节反应体系pH 值，使Taq 酶在偏碱性环境中反挥活性。
kcl 可降低退火温度，但不能超过50 mmol/L ，否则会抑制DNA 聚合酶活性。
（二）Mg2+: 终浓度为 1.5 ～ 2.0mmol/L ，其对应dNTP 为200 μ mol/L ，注意Mg2+ 与dNTPs 之间的浓度关系，由于dNTP 与Taq 酶竟争Mg2+ ，当dNTP 浓度达到 1 mmol/L 时会抑制Taq 酶的活性。
Mg2+能影响反应的特异性和产率。
分子生物学实验报告试剂
一、实验背景分子生物学是一门研究生物大分子如核酸、蛋白质等结构与功能的科学。
在分子生物学实验中，试剂的选择和使用对实验结果的准确性至关重要。
本实验报告将详细介绍分子生物学实验中常用的试剂及其作用。
二、实验试剂1. 核酸提取试剂（1）酚/氯仿：用于从细胞中提取DNA和RNA，具有强烈的蛋白变性作用。
（2）异丙醇：用于DNA的沉淀，降低DNA的溶解度。
（3）无水乙醇：用于RNA的沉淀，降低RNA的溶解度。
（4）RNA酶抑制剂：防止RNA降解，保证实验结果的准确性。
2. DNA提取试剂（1）Tris-HCl缓冲液：用于DNA的提取，调节pH值，保持酶的活性。
（2）EDTA：抑制金属离子与DNA结合，防止DNA降解。
（3）SDS（十二烷基硫酸钠）：用于蛋白质的变性，使蛋白质与DNA分离。
（4）蛋白酶K：降解蛋白质，去除蛋白质杂质。
3. DNA纯化试剂（1）琼脂糖凝胶：用于DNA的分离和纯化。
（2）DNA纯化试剂盒：用于DNA的纯化和回收。
4. DNA扩增试剂（1）PCR反应缓冲液：提供反应所需的pH值、盐浓度等。
（2）dNTPs（脱氧核苷三磷酸）：作为PCR反应的原料。
（3）引物：用于PCR反应的特异性扩增。
（4）Taq酶：DNA聚合酶，负责DNA的合成。
5. DNA检测试剂（1）溴化乙锭（EB）：用于DNA的染色，便于在紫外光下观察。
（2）琼脂糖凝胶电泳缓冲液：用于DNA的电泳。
（3）DNA标记物：用于DNA的定量分析。
6. 蛋白质提取试剂（1）裂解缓冲液：用于蛋白质的提取，保证蛋白质的完整性。
（2）蛋白酶抑制剂：防止蛋白质降解。
（3）SDS：使蛋白质变性，便于与核酸分离。
7. 蛋白质纯化试剂（1）柱层析：用于蛋白质的纯化。
（2）凝胶过滤：用于蛋白质的纯化。
8. 蛋白质检测试剂（1）考马斯亮蓝G-250：用于蛋白质的定量分析。
（2）BCA法：用于蛋白质的定量分析。
（3）SDS-PAGE凝胶：用于蛋白质的分离和纯化。
分子生物学实验报告
实验报告科目：分子生物学实验姓名：实验组：学号：单位：学院：生命科学学院班级：201205132012年9月至11月实验一从cDNA文库和克隆质粒中扩增靶片段第一部分准备实验一、介绍实验室的规章制度、注意事项二、准备实验1.分组，分发实验服、试验用具2.讲解注意点：戴手套操作3.准备枪头：装盒，灭菌4.各个型号的EP管和PCR管的灭菌5.双蒸水灭菌6.洗净培养皿、摇菌小三角瓶、试剂瓶等第二部分利用PCR技术从特定质粒中扩增靶片段一、实验目的通过本实验学习PCR反应的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。
二、实验原理一）引物的设计：PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。
因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。
我们可以归纳十条PCR引物的设计原则：1.引物的特异性引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。
2.避开产物的二级结构区某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。
3.长度寡核苷酸引物长度为15～30bp，一般为20～27mer。
引物的有效长度：Ln=4（G+C）+2（A+T），Ln值不能大于76，因为>76时，最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74℃)，不能保证产物的特异性。
4.G+C含量G+C含量一般为40%~60%。
其Tm值是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度，有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。
若按公式Tm=4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。
5.碱基础随机分布引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。
尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。
6.引物自身引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构牙引物本身复性。
分子生物学实验报告
分⼦⽣物学实验报告分⼦⽣物学实验报告----绿⾊荧光蛋⽩(GFP)基因的克隆、表达和纯化⼀、实验背景绿⾊荧光蛋⽩（green fluorescent protein，GFP）是⼀类存在于包括⽔母、⽔螅和珊瑚等腔肠动物体内的⽣物发光蛋⽩。
当受到紫外或蓝光激发时，GFP发射绿⾊荧光。
它产⽣荧光⽆需底物或辅因⼦发⾊团是其蛋⽩质⼀级序列固有的。
GFP由3个外显⼦组成，长2.6kb；GFP是由238个氨基酸所组成的单体蛋⽩，相对分⼦质量为27.0 kMr，其蛋⽩性质⼗分稳定，能耐受60℃处理。
1996年GFP的晶体结构被解出，蛋⽩质中央是⼀个圆柱形⽔桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11个围绕中⼼α螺旋的反平⾏β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3个短的垂直⽚段覆盖，底部由⼀个短的垂直⽚段覆盖，对荧光活性很重要的⽣⾊团则位于⼤空腔内。
发⾊团是由其蛋⽩质内部第65-67位的Ser-Tyr-Gly⾃⾝环化和氧化形成。
1996年GFP的晶体结构被解出，蛋⽩质中央是⼀个圆柱形⽔桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11个围绕中⼼α螺旋的反平⾏β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的,桶的顶部由3个短的垂直⽚段覆盖，底部由⼀个短的垂直⽚段覆盖，对荧光活性很重要的⽣⾊团则位于⼤空腔内。
实验使⽤的EGFP蛋⽩取⾃原核-真核穿梭质粒pEGFP-NB3B的蛋⽩质编码序列。
此质粒原本被设计于在原核系统中进⾏扩增，并可在真核哺乳动物细胞中进⾏表达。
本质粒主要包括位于PCMV真核启动⼦与SV40 真核多聚腺苷酸尾部之间的EGFP 编码序列与位于EGFP上游的多克隆位点；⼀个由SV40 早期启动⼦启动的卡那霉素/新霉素抗性基因，以及上游的细菌启动⼦可启动在原核系统中的复制与卡那抗性。
在EGFP编码序列上下游，存在特异的BamH I及Not I限制性内切酶位点，可切下整段EGFP编码序列。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告学院班级：创新生技1802班姓名：闫茜茜学号：2018015239第一部分：Southern杂交一、概述：通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。
该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。
其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。
实验整个过程包括质粒DNA的提取、酶切和扩增，地高辛标记的Southern 杂交（探针的标记、Southern转移、Southern杂交、BCIP/NBT显色检测法）。
二、基本步骤与方法：2.1 待测DNA样品的制备2.1.1质粒DNA的提取利用质粒小提试剂盒（离心柱型）从大肠杆菌DH5α提取质粒，将质粒收集到离心管中，取6μL提取好的质粒与2μLloading buffer均匀混合，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
2.1.2质粒DNA的酶切将 ddH2O（10μL），酶切 Buffer（10×，3μL），质粒（15μL），EcoRI酶液（2μL），加入一个离心管，离心 10000rpm×2min，置于37℃培养箱培养2h以上。
取出后在管中加入 3μL Loading Buffer，与加了3μL Loading Buffer的质粒一对一点样、跑电泳并分析鉴定。
2.1.3 PCR 扩增所采用引物是PBGD片段两边序列的非特异性引物 M13F/R，加入试剂并小心混匀。
PCR反应94℃ 180s，32cycles（94℃ 45s，55℃ 45s，72℃ 45s），72℃ 600s，反应结束后取 20μL PCR 产物进行1％琼脂糖凝胶电泳分析。
2.2 地高辛标记的Southern杂交2.2.1探针标记取PCR 扩增产物于离心管，将DNA置于沸水浴中 5min 热变性，然后迅速插入碎冰3min ，加入4μL DIG Random Labeling Mix（高效），置37℃培养24h。
分子生物实验员实习报告(最新版)
分子生物实验员实习报告一、实习背景作为一名大学生，我非常珍惜每一次实习的机会，以期在实践中不断提高自己的专业能力和综合素质。
此次实习，我来到了海南生物公司分子生物学部，担任实验员一职，主要负责分子生物学相关实验，包括基因克隆、载体构建、DNA及RNA等相关工作，以及分子生物学相关数据整理分析、实验室各项记录的汇总和审查，还有各种表达系统蛋白的纯化及其他蛋白方面的相关实验设计和实施。
二、实习内容1. 分子生物学相关实验在实习期间，我参与了一系列分子生物学实验，如基因克隆、载体构建、DNA及RNA等相关工作。
这些实验让我更深入地理解了分子生物学的基本原理和方法，同时也锻炼了我的动手能力和实验技能。
2. 数据整理分析除了实验操作，我还负责分子生物学相关数据的整理分析。
这包括对实验数据的收集、整理和分析，以及撰写实验报告。
通过这个过程，我提高了自己的数据分析能力，也对分子生物学实验有了更深刻的理解。
3. 实验室记录汇总和审查我还需要负责实验室各项记录的汇总和审查。
这包括对实验记录的整理、归档和审查，以确保实验室工作的规范性和数据的可追溯性。
4. 蛋白纯化及其他蛋白方面实验此外，我还参与了各种表达系统蛋白的纯化及其他蛋白方面的相关实验设计和实施。
这让我对蛋白纯化和蛋白功能有了更深入的了解，同时也提高了我的实验设计能力和实验操作技能。
三、实习感悟通过这段实习经历，我对分子生物学实验有了更深入的理解和掌握，同时也锻炼了自己的动手能力和实验技能。
此外，我还学会了如何整理和分析实验数据，以及如何规范地记录和审查实验室工作。
这些经验对我未来的学习和研究工作都将产生积极的影响。
四、实习总结这次实习让我收获颇丰，不仅提高了我的专业能力，也让我对分子生物学实验有了更深入的理解。
我相信，这次实习将对我的未来学习和研究工作产生积极的影响，我会继续努力，不断提高自己的专业素养。
分子生物学检验室实习报告
实习报告一、前言在过去的三个月里，我有幸在分子生物学检验室进行实习。
在此期间，我不仅学到了分子生物学实验的方法和技术，还深刻体会到了实验室工作的严谨和细致。
本文将对我实习期间的学习和体会进行总结，以期对今后的学习和工作有所启发。
二、实习内容1. 实验技能的学习在实习期间，我参与了分子生物学实验室的日常工作和多个实验项目。
通过实习，我掌握了实验室的基本操作技能，如细胞的培养、DNA的提取、PCR技术的应用等。
同时，我还学会了使用各种分子生物学仪器，如PCR仪、凝胶成像仪、离心机等。
2. 实验项目的参与在实习期间，我参与了多个实验项目，如基因克隆、基因表达、基因突变检测等。
通过实际操作，我深入了解了实验原理和实验步骤，并学会了如何处理实验数据和撰写实验报告。
3. 实验室管理在实习期间，我了解了实验室的日常管理工作，包括实验室安全管理、实验耗材的采购和保管、实验室设备的维护等。
通过参与实验室管理，我认识到实验室工作不仅要注重实验技术的学习，还要关注实验室的运营和管理。
三、实习收获1. 提升了实验技能通过实习，我的分子生物学实验技能得到了很大的提升。
我学会了如何设计实验、如何处理实验数据、如何撰写实验报告。
这些实验技能对我今后的科研工作具有很大的帮助。
2. 增强了团队协作能力在实习期间，我与实验室的其他成员密切合作，共同完成各项实验任务。
通过团队协作，我学会了如何与他人沟通、如何协调工作、如何解决问题。
这些团队协作能力对我今后的职业生涯具有很大的意义。
3. 培养了对科研的兴趣实习期间，我深入了解了分子生物学的研究内容和前沿动态。
我发现自己对分子生物学的研究充满了兴趣，并决心将来继续深造，从事分子生物学方面的研究。
四、实习体会通过这次实习，我深刻体会到了实验室工作的严谨和细致。
在实验过程中，每一个步骤都关系到实验结果的准确性，因此必须严格按照实验规程进行操作。
同时，实验过程中可能会遇到各种问题，如实验失败、数据异常等，这时需要冷静分析问题，积极寻找解决办法。
分子生物学实验技术
《分子生物学实验技术》实验报告实验一碱裂解法小量提取质粒DNA一、实验原理在碱性环境中，细菌膜破裂释放内容物。
染色体DNA变性分开，而质粒DNA虽变性但仍处于缠绕状态。
将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。
通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，最后用酚、氯仿抽提纯化得到质粒DNA。
二、操作步骤主要步骤1.细菌的培养2.细菌的收集和裂解3.质粒DNA的分离和纯化4.质粒的鉴定具体操作如下：1. 取1.5 ml过夜菌液于EP管中，12 000 r/min离心1min，弃去上清液。
2. 加100 μl 溶液Ⅰ，剧烈震荡使菌体悬浮均匀，室温放置5min 。
3. 加200 μl 溶液Ⅱ（现配现用），轻柔颠倒混匀4~6次，室温放置5min 。
4. 加150μl预冷溶液Ⅲ，轻柔颠倒混匀4~6次，冰上放置10分钟。
5. 12 000 r/m离心10 分钟(如果上清液仍然浑浊，可将上清液移出，再次离心5分钟）。
6. 吸出上清液，加2.5倍体积的无水乙醇，混匀，室温放置10分钟，12 000r/min离心10分钟，沉淀DNA 。
7. 弃上清，挥干，所得DNA溶于30μlddH2O中，用于后续试验。
三、实验结果获取极少量白色固体，主要为DNA，也不排除有蛋白质等杂质，但是不影响后续实验的继续进行。
实验二氯化钙法进行质粒转化及筛选一、实验原理细菌处于0 ℃，在CaCl2低渗溶液中，菌体细胞膨胀成球形，DNA则与CaCl2形成抗Dnase的羟基－磷酸钙复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖，重组子的基因在被转化的细菌中得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。
1. 氯化钙（二价钙离子）的作用：提高细胞壁（膜）的通透性。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告姓名：学院：专业班级：学号：一、前期工作及引物设计（一）实验目的：寻找一个合适的基因，并设计出与之相对应的引物，用于后续实验。
（二）实验原理：引物设计的一般原则：①引物长度：15-30bp②GC含量：一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%③退火温度：退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加④避免扩增模板的二级结构区域⑤与靶DNA的错配：当被扩增的靶DNA序列较大的时候，一个引物就有可能与靶DNA的多个地方结合，造成结果中有多个条带出现。
这个时候有必要先使用BLAST 软件进行检测⑥引物末端：引物3’端是延伸开始的地方，因此要防止错配就从这里开始。
3’端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。
⑦引物的二级结构：引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构，这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。
（三）操作方法：1、阅读一些与小麦抗旱基因相关的文章，并最终选出基因TAPK7。
LOCUS AB125308 1583 bp mRNA linear PLN 15-FEB-20082、根据引物设计原则，用相关软件Primer6设计两对引物。
3、在网站NCBI上用BLAST检验所设计的引物，并从中选出较好的一对引物。
（四）实验结果：前引物：5’-CCAACATCATCCGCTTCA-3’（position:396 引物长度：18）后引物：5’-CCTGCTCATCCTCCTCTT -3’（position:1190 引物长度：18）（产物长度795）（五）讨论：虽然我们自己设计出来引物，但是后来做PCR的效果也不好，后来还换了引物。
所以希望老师能在这些我们还未学习到的地方给一些经验指导，或者提供一些资料参考，来保证我们的实验效果。
二、目的基因提取及验证（一）实验目的：根据所设计的引物，用克隆基因组和反转录两种方法，得到目的基因cDNA。
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分子生物学实验院系：生命科学与技术学院专业：生物科学（基地）班级：201101班学号：：分子生物学基础实验分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。
为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。
它的容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR 基因扩增等等。
实验一质粒DNA的小量制备一、实验原理要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。
载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。
作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。
细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。
质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。
质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
它可独立游离在细胞质，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。
质粒在细胞的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。
前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。
每个细胞只含有1个或几个质粒分子。
后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。
通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。
小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。
在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。
本实验分离提纯化的质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。
所有分离质粒DNA的方法都包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。
采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基硫酸钠（SDS）可使细胞壁解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌染色体DNA缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在清液中。
用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。
质粒DNA的相对分子量一般在106－107围，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。
在细胞，共价闭环DNA（covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。
如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的力，这种松弛型的分子叫做开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。
在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。
二、实验目的1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。
2．了解制备原理及各种试剂的作用。
三、实验材料和试剂材料：大肠杆菌E.coli，含pBR322质粒。
试剂：1.LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，用NaOH调pH至7.3左右。
如固体培养基则添加15g/L琼脂。
2.溶液Ⅰ（pH8.0G.E.T缓冲液）：50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/LEDTA。
灭菌后存放。
3.溶液Ⅱ（0.2mol/LNaOH(含1％SDS)）：预先配制1％SDS母液，临用前一天晚上加入0.2mol/LNaOH，4℃保存。
4.溶液Ⅲ（pH4.8乙酸钾溶液）：5mol/L乙酸钾60mL、冰乙酸11.5mL、双蒸馏水28.5mL。
5.酚/氯仿液(V/V＝1/1)：酚为重蒸酚，配制时，先将氯仿中加入异戊醇，使其体积比为24:1，然后等量的加入重蒸酚，混匀，并用0.1mol/LTris-HCl (pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，于棕色瓶中存放，并在上面覆盖等体积的0.01 mol/LTris-HCl(pH7.6)，4℃保存。
6.无水乙醇7.70％乙醇8.pH8.0 TE缓冲液：10mmol/LTris-HCl、1mmol/LEDTA，其中含RNA酶20μg/mL。
仪器：恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、台式高速离心机、台式小型振荡器、EP管(1.5mL微量离心管)、加样器(20uL～lmL)、吸头。
四、操作步骤（一）培养细菌将带有质粒pBR322的大肠杆菌接种在含50μg/mL氨苄青霉素(Amp)的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。
注意：添加Amp时，须待LB培养基冷却到50℃左右方可加入。
（二）从菌落中快速提取制备质粒DNA1．取1.4mL菌液置于1.5mL Ep管中，7500rpm离心1min。
2．弃上清，加入150μL GET缓冲液，在涡旋混合器上充分混匀，在室温下放置10min。
3．加入200μL新配制的0.2mol/L NaOH(含1％SDS)，加盖，颠倒（不要振荡）2～3次，使之混匀，冰上放置4min，最多不能超过5min。
4．加入150μL冰冷的乙酸钾溶液。
加盖后，颠倒数次使之混匀，冰上放置15min。
5．10000rpm离心5min，上清液吸至另一干净的1.5mL Ep中，如上清液浑浊则需重新离心一次。
6．于上清液中加等体积酚/氯仿液，振荡混匀，12000rpm离心2min，小心吸取上清液，转移至另一1.5mL Ep管中，注意勿将两液相中间的白色蛋白薄层吸出。
7．向上清液加入2倍体积无水乙醇，混匀，室温放置３min。
用离心机于10000rpm离心5min。
倒去上清液。
8．用0.5mL 70％乙醇洗涤沉淀一次，10000rpm离心3min，除尽乙醇，室温自然干燥(将离心管倒置于一纸巾上)，备用。
9．用30uL含无DNA酶的胰RNase(20 ug／mL)的TE重新溶解DNA，置于4℃保存，供下午电泳使用。
这里因为要检测质粒是否提取成功以及提取质粒的浓度，故在此要进行一次电泳，下面为琼脂糖凝胶电泳的原理及方法：原理：根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用EB嵌入DNA分子后在紫外下显荧光。
而荧光强度正比于DNA的含量，如将已知浓度的标准样品表2－1作为电泳对照，就可以估计出待测样品的浓度。
电泳后的琼脂凝胶糖直接在紫外灯下拍照，只需要5－10ngDNA，就可以从照片上比较鉴别。
由于电泳时所用的样品量非常少，只要将浓度控制在几十纳克即可，所以在基因工程中经常被用做检测DNA样品。
表2－1 λDNA/ Hind Ⅲ中DNA片断总DNA含量为100%琼脂糖凝胶板的制备1．琼脂糖凝胶的制备称取1.0g琼脂糖，置于锥形瓶中，加入100mL TBE缓冲液，于电炉上加热，注意：防止溢出，由于琼脂糖较难溶解，如果水分损失较大，则补充一定量的蒸馏水，使其终浓度为1％。
2．胶板的制备将有机玻璃槽洗净、晾干。
取胶带纸将有机玻璃槽的两端边缘封好，形成一个边脚模子。
注意：将橡皮膏紧贴在有机玻璃槽两端边上，不能留空隙。
将有机玻璃槽置于水平位置，放好样品槽模板(一般称之为梳子)，将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶，小心地倒在槽上，控制灌胶速度，使胶液缓慢地展开，直到整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
室温下静置1h左右，待凝固完全后，轻轻拔出样品槽模板，撕去胶带纸，胶板上即形成相互隔开的样品槽。
将有机玻璃槽放入电泳槽中，加入0.5×TBE电泳缓冲液，以盖过胶板为宜。
胶板的样品小槽3．加样用移液枪将上述样品分别加入胶板的样品小槽，每次加完一个样品为了避免交叉污染，各样品用不同的枪头，以免造成限制酶被污染。
加样时，枪头不要插入胶板，防止碰坏样品槽周围的凝胶面，每个样品槽的加样量不宜过多，本实验加样为10uL左右。
(每块胶板需点一个Marker，这里即为λDNA/ Hind Ⅲ)4．电泳加完样品后应立即通电，进行恒压电泳。
在低压条件下，线形DNA片段的迁移速度与电压成比例关系，为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不应高于5V/cm。
当溴酚蓝染料（蓝色）移动到距离胶板下沿约1～2cm处，停止电泳。
5．染色将电泳后的凝胶浸入EB染液中，进行染色以观察在琼脂糖凝胶中的DNA带。
染色20min后，用大量水冲洗。
6．观察在波长为254nm的紫外灯下，观察染色后的电泳凝胶。
DNA存在处显示出红色荧光条带。
用凝胶自动成像仪处理代替。
五、注意事项1．收集菌体提质粒前，培养基要去除干净，同时保证菌体在悬浮液中充分悬浮。
2．在添加溶液Ⅱ与溶液Ⅲ后溶液的混合一定要柔和，采用上下颠倒的方法，千万不能在旋转器上剧烈振荡。
其中加入溶液Ⅱ后，溶液变成澄清，并有黏性；加入溶液Ⅲ后，出现絮状沉淀。
3．苯酚具有腐蚀性，能造成皮肤的严重烧伤及衣物损坏，使用时应注意。
如不小心皮肤上碰到苯酚则应用碱性溶液、肥皂及大量的清水冲洗。
4．苯酚可以用于抽提纯化DNA，由于苯酚的氧化产物可以使核酸链发生断裂。
所使用的苯酚在使用前必须经过重蒸，且都必须用0.1mol/LTris-HCl (pH7.6)进行平衡。
所以取酚/氯仿/异戊醇时应取下层溶液，因为上层是Tris-HCl液隔绝空气层。
5．酚/氯仿/异戊醇抽提时，应充分混匀。
经酚/氯仿/异戊醇抽提后，吸取上清液时注意不要把中间的白色层吸入，其中含有蛋白质等杂质。
6．实验中，涉及酚/氯仿溶液的操作要格外小心，而且与之接触的吸头、Ep管，全部弃用，不回收。
7．有些质粒本身可能在某些菌种中稳定存在，但经过多次移接有可能造成质粒丢失。
因此不要频繁转接，每次接种时应挑单菌落。
六、实验结果与分析提取质粒DNA后，经琼脂糖凝胶电泳，图谱如下：图中M为Marker，4号为本人所提取的质粒DNA凝胶电泳的检测图，本人所用的质粒为pEGFP-N3。
由跑胶结果可知，质粒DNA分子条带较为明亮，说明所提取的DNA浓度很高；前面原理部分提到，质粒DNA分子的结构多样，包括超螺旋结构，开环结构以及线性结构等，它们在凝胶中的泳动速度不同，所以在图谱中显示有多条带；胶孔中比较亮的部分表明提取的质粒中有大量蛋白质残留；条带非常宽而且两侧有轻微的拖尾迹象表明点样时样品量加的过多，在质粒检测中可以适当减少加样量，使得条带清晰均匀一点。