Wip1过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定

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ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＷｉｐｌＯｖｅｒ — ｅｘｐｒｅｓｓｅｄＴｒａｎｓｇｅｎｅＭｉｃｅＭｏｄｅｌＧＡＯＱｉａｎ，ＨＵＹａｎ－ｑｉｎｇ，ＴＡＮＧＹｉ－ｔｉｎｇ，ＭＵＹｕ－ｌｉａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓａｉｍｅｄｔｏｂｕｉｌｄＷｉｐｌｏｖｅｒ — ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｔｒａｎｓｇｅｎｅｍｉｃｅ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｐｒｏ— ｖｉｄｅａｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｆｏｒｃｌａｒｉｆｙｉｎｇｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ａｎｄｔｈｅｔｒａｎｓ — ｇｅｎｅｍｉｃｅｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄａｔＲＮＡｌｅｖｅ１．ＭｉｃｅｔｉｓｓｕｅｓｃＤＮＡｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ）
中国畜牧兽医
Biblioteka Baidu
２０１６，４３（１２）：３０９４ — ３１００
ＣｈｉｎａＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
ｄｏｉ－ｌｏ．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１ — ７２３６．２０１６．１２．００２
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ— ＰＣＲ），ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｎｅｘｔＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｍｐｌａｔｅ。
动脉粥样硬化的发生机制提供一种动物模型。通过逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ — ＰＣＲ）获得小鼠组织的ｅＤＮＡ，并以其为模板进行ＰＣＲ扩增，对扩增片段进行胶回收，然后进行扩增片段和空载体的双酶切，将酶切后胶回收得到
Ｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｇｅｌｒｅｃｏｖｅｒｙ．Ｔｈｅｎ，ｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔａｎｄｅｍｐｔｙｖｅｃ — ｔｏｒｗｅｒｅｄｏｕｂｌｅｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｅｄ．Ｆｕｌｌ — ｌｅｎｇｔｈｇｅｎｅｏｆＷｉｐｌ，ｗｈｉｃｈｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｇｅｌｒｅｃｏｖｅｒｙ，
的ｗ声１基因全长与载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）进行连接，获得Ｗｉｐｌ — ｐｅＤＮＡ３．１（＋）过表达载体，最终得到Ｗｉｐｌ过表达
转基因原代小鼠，并利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法和实时荧光定量ＰＣＲ方法对小鼠进行鉴定筛选。试验获得Ｗｉｐｌ
Ｗｉｐｌ过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定
高倩，胡言青，唐懿挺，牟玉莲
（中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京１００１９３）
摘要：本研究旨在构建Ｗｉｐｌ过表达转基因小鼠，并对Ｗｉｐｌ过表达转基因小鼠进行ＲＮＡ水平上的筛选，为研究
过表达转基因原代小鼠３Ｏ只，利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法鉴定出阳性小鼠１１只，阳性率为３６．６７，实时荧光定量
ＰＣＲ筛选Ｗｉｐｌ过表达转基因小鼠阳性率为３２．８４。以上结果表明，试验成功构建了Ｗｉｐｌ — ｐｃＤＮＡ３．１（＋）过表达载体，并且经过Ｗｉｐ１基因在小鼠组织ＤＮＡ和ＲＮＡ水平上的鉴定筛选，成功获得了Ｗｉｐｌ过表达转基因小鼠。关键词：Ｗｉｐｌ；过表达；小鼠模型中图分类号：Ｑ７８文献标识码：Ａ文章编号：１６７１ — ７２３６（２０１６）１２－３０９４ — ０７