泰妙菌素的制备

泰妙菌素的制备

一、目的要求

1. 通过泰妙菌素的合成，了解控制反应温以及纯化产品的方法。

2. 加深对截短侧耳素类药物一般理化性质的认识。

3．掌握薄层色谱法、柱色谱法的基本方法。

二、实验原理

截短侧耳素(Pleuromutilin)是由侧耳菌(Pleurotus mutilus)产生的一类广谱的二萜烯类抗生素，能够有效抑制大部分革兰氏阳性菌以及部分革兰氏阴性菌，是截短侧耳素类半合成衍生物的前体。

通过对甲苯磺酰基对截短侧耳素C14位进行活化得到截短侧耳素对甲苯磺酸酯，接入2-二乙氨基乙硫醇合成得到泰妙菌素。

泰妙菌素属于较新的一种抗生素,为动物专用抗生素,泰妙菌素的抗菌作用为抑制感受性细菌蛋白质的合成,即它作用于细菌体内的核糖体。它对许多革兰氏阳性菌及支原体有特效,是迄今为止对鸡的败血支原体最有效的抗生素,特别是对金黄色葡萄球菌、链球菌、多种霉形体和某些螺旋体具有较强的作用

三、实验方法

（一）泰妙菌素的合成

在装有小磁子的三颈瓶中，加入截短侧耳素对甲苯磺酸酯1g，乙腈7 mL，开动搅拌，待截短侧耳素对甲苯磺酸酯完全溶解后，加入2-二乙胺基乙硫醇0.3g。于水浴上加热至75℃。0.5h后加入0.52g碳酸钾(研钵中磨成细粉)。继续反应1.5h。

（二）薄层色谱法监控反应

加入碳酸钾后蘸取反应液，与截短侧耳素对甲苯磺酸酯标准液、2-二乙胺基乙硫醇标准液和泰妙菌素标准液点板，观察反应液位置。2h后薄层色谱监控反应，确认有泰妙菌素生成方可进行下步反应。

1. 展开剂：

乙酸乙酯：石油醚=5：1。配制6mL装入125mL广口瓶中

2. 点样：

取一块薄层硅胶板，在距下边1cm处用铅笔画一直线作为起始线。用毛细管分别蘸取截短侧耳素对甲苯磺酸酯标准液、2-二乙胺基乙硫醇标准液、泰妙菌素标准液和单颈瓶内反应液，等距点在起始线上。样点直径不超过2mm（轻点1-3下即可）。

3. 展开：

待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的广口瓶中进行展开。点样一端浸入展开剂。盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出。挥干板上液体，放入254nm紫外暗箱观察。记录紫外下样点位置后，放入碘瓶碘熏，观察板上变化。

（三）泰妙菌素的纯化

通过薄层色谱法确认反应完毕后，停止搅拌，将反应液倾入分液漏斗中，依次加入水20 mL、三氯甲烷20 mL，充分振摇后静置分层，下层液体由下口收集至100mL烧杯中，上层液体由上口弃去。将烧杯中液体倒回分液漏斗中，加入15%盐水50 mL，充分振摇后静置分层，下层液体由下口收集至原100mL烧杯中，上层液体由上口弃去。向烧杯中加入无水硫酸钠15g，搅拌至溶液澄清透亮。将液体小心转入旋蒸瓶中，无水硫酸钠留在烧杯中。旋转蒸干瓶中液体。

（四）柱色谱法分离纯化泰妙菌素

1. 粗产物细粉的制备：

向旋蒸瓶中加入乙酸乙酯10mL，振摇使瓶中固体充分溶解，将液体倒入蒸发皿中，加入100-200目硅胶1g，充分混匀，做好标记放入烘箱中烘干。待硅胶粉末完全干燥后，取出蒸发皿，将硅胶粉研磨至细粉。

2. 装柱：

取一色谱柱，关紧活塞，向柱中倒入10mL展开剂(乙酸乙酯：石油醚=3:1)。称约300-400目硅胶20g置于250mL烧杯中，加入适量展开剂用玻璃棒调成糊状，赶走气泡，在搅拌中徐徐倒入柱中。轻轻敲打柱，使填装紧密。打开活塞，使用双联球加压，当展开剂的液面恰好降至硅胶面上端1cm时，关闭活塞，取下双联球。操作时注意不能使液面低于填料面。

3. 上样：

将研磨好的细粉缓慢倒入色谱柱，用玻璃棒抹平细粉层，用胶头滴管滴入少许展开剂洗去沾附在柱壁上的混合物。

4. 洗脱收集：

用1:3石油醚－乙酸乙酯的展开剂洗脱，流出的展开剂用50mL 锥形瓶接收，每瓶接20mL展开剂。每接3瓶与泰妙菌素标准液点板观察，弃去杂质，收集含纯净泰妙菌素的展开剂。

5. 浓缩：

将含纯净泰妙菌素的展开剂转入旋蒸瓶中，55℃下旋转蒸干。向旋蒸瓶中加入二氯甲烷10mL，振摇使充分溶解，倒入平皿中，做好标记，放入烘箱中干燥。

（五）结构确证

1. 红外吸收光谱法、标准物TLC 对照法。

2. 核磁共振光谱法。

注释：

1．碳酸钾有吸潮性，迅速称量、研磨加入三颈瓶

2. 薄层色谱法时注意观察泰妙菌素在板上位置，方便柱色谱时收集纯净泰妙菌素

3. 柱色谱时注意点板观察，收集纯净泰妙菌素，宁缺毋滥

4. 50mL锥形瓶随洗随用

注意事项：

1．各组按篮框上标志领取自己组的实验器材

2．分液漏斗、碘瓶每两组共用一个（在A1、B1、C1、D1组篮框中）

3．实验结束时，器材清洗完成后先放在篮框中，经检查确认合格方可离开，不用放入烘箱中。共用器材由A1、B1、C1、D1组负责清洗，并放回自己篮框

思考题：

1．加碳酸钾的目的是什么？

2．分液时先后加入三氯甲烷30 mL、15%盐水50 mL目的是什么？

3. 柱中若留有空气或填装不均匀，对分离效果有何影响？如何避免

4. 在一定的操作条件下为什么可利用Rf值来分离鉴定化合物？