蜜环菌产漆酶的发酵条件

*通讯作者 收稿日期：2012-01-13 基金项目：河南省科技攻关计划项目(102102310016)；河南省高校青年骨干教师资助计划项目(2010)。 作者简介：秦仁炳(1986—)，男，硕士研究生，主要从事微生物物质分离工程的研究工作。
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食品科技
2012年 第 37卷 第 9期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
Abstract: The optimal fermentation conditions for laccase production by Amillariella mellea were investigated. The composition of fermentation medium was: corn flour 30 g/L, soybean meal 12 g/L, mixed liquid of trace metals 40 mL/L, C/N 2.5, Tween 80 1 g/L, sawdust 0.01 g/L, CuSO4·5H2O 0.05 mmol/L and the optical conditions were the initial pH of medium 5.0, 35 mL medium in 250 mL-flask, 25 ℃ and 180 r/ min for 18 days. Key words: laccase; Amillariella mellea; fermentation condition
热点之一。 蜜环菌(Amillariella mellea)又名榛蘑、蜜环 蕈、苞谷蕈、青冈蕈，是一种药食兼用的真菌。 对蜜环菌的前期发酵研究表明，蜜环菌在次级生 长代谢阶段能合成一定量的胞外漆酶[9]。本文探索 了蜜环菌生产漆酶的最适培养方式和条件，为该 菌株漆酶的工业应用提供了一定的理论依据。 1 பைடு நூலகம்料和方法 1.1 菌种与试剂
日本学者吉田(Yoshida)1883年首次从漆树漆 液中发现漆酶[1]。漆酶是一种多酚氧化酶，在结构 和功能上与抗坏血酸氧化酶和哺乳动物血浆铜蓝 蛋白同源，都属于蓝色多铜氧化酶家族 [2]。它能 催化降解多种芳香族化合物，特别是酚类。漆酶 去除酚类污染物研究已引起了国内外的广泛关注 并取得了较好的降解效果 [3-6] 。漆酶在改善果汁 的色泽、提高饮料的稳定和制取优越食品添加剂 也有一定的研究 [7-8] 。漆酶已经成为生物学、化 学、食品工业和环境科学等领域十分活跃的研究
Fermentation conditions for laccase production from Amillariella mellea
QIN Ren-bing, ZHU Xian-feng*, WU Ke, ZHANG Jing-jing, ZHAO Hai-kang
(College of Life Science and Institute of Bioengineering, Henan University, Kaifeng 475004)
生物工程
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第 37卷 第 9期
蜜环菌产漆酶的发酵条件研究
秦仁炳，朱显峰*，吴 珂，张晶晶，赵海康 (河南大学生命科学学院和生物工程研究所，开封 475004)
摘要：对蜜环菌(Amillariella mellea)产漆酶的发酵条件作了研究。结果表明蜜环菌产漆酶的最佳 培养基成分为：玉米粉30 g/L，豆粕 12 g/L，微量元素混合液40 mL/L，C/N2.5，吐温80 1 g/L，木 屑0.01 g/L，CuSO4·5H2O 0.05 mmol/L。最佳发酵条件为培养基初始pH5.0，培养基装量为250 mL 三角瓶中35 mL培养液，25 ℃条件下振荡培养(180 r/min)18 d。 关键词：漆酶；蜜环菌；发酵条件 中图分类号：TS 201.3 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)09-0002-04
生物工程

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1.2 培养基 固体种子培养基采用综合马铃薯培养基 (CPDA)：葡萄糖20 g，新鲜土豆200 g(煮沸30 min 取滤液)，KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 1.5 g，VB1 10 mg，水1000 mL，pH自然。 基础产酶培养基(质量分数) [10] (有小部分调 整)：葡萄糖2%，蛋白胨0.2%，MgSO 4 ·7H 2 O 0 . 1 5 % ， K H 2P O 4 0 . 3 % ， C a C l 2 0 . 0 0 1 % ， V B1 0.001%，微量元素80 mL。 微 量 元 素 混 合 液 组 成 [11]： 氨 基 乙 酸 7.8×10 -3 mol，MgSO 4 ·7H 2 O 1.2×10 -2 mol， MnSO4·H2O 2.9×10-3 mol，NaCl 1.7×10-2 mol， FeSO 4·7H 2O 3.59×10 mol，CoCl 2 7.75×10 mol，CaCl 2·2H 2O 9.0×10 -4 mol，ZnSO 4·7H 2O 3.48×10 -4 mol，CuSO 4 ·5H 2 O 4×10 -5 mol， KAl(SO4)2·12H2O 2.1×10-5 mol，HBO3 1.6×10-4 mol，NaMnO4 4.1×10-5 mol。 1.3 培养条件 采用50 mL培养液/250 mL三角瓶接种灭菌 后，立即置于25 ℃、180 r/min振荡培养18 d。收 获后滤出培养液待测，菌丝体80 ℃烘干称质量。 试验均设3个重复。 1.4 粗酶液的的制备 取产酶高峰期的发酵液，于4000 r/min常温离 心15 min，上清液即为漆酶粗提液。 1.5 漆酶酶活的测定[12] 以愈创木酚为底物，4 mL 50 mmol/L(含1 mmol/L愈创木酚)琥珀酸钠缓冲液(pH4.5)，加入1 mL酶样液，混合均匀后置于30 ℃水浴保温反应30 min，于465 nm处测光吸收值。定义每分钟氧化1 μmol愈创木酚的酶量为一个酶活力单位。 2 结果与分析 2.1 蜜环菌的生长曲线和产酶曲线 采用基础培养基，测定菌丝干重和漆酶活力 随培养时间的变化(见图1)。蜜环菌到第16天生长 量基本上达到峰值。漆酶是次级阶段泌出，与菌 丝的生长不同步，到第16天测定菌丝干重达最高 而酶活力在第18天出现峰值。 2.2 培养条件对蜜环菌产漆酶的影响 2.2.1 不同碳源对蜜环菌产酶水平的影响 以蛋白