抗氧化实验方法

附录

抗衰老实验

实验一：对超氧阴离子清除作用的测定（邻苯三酚自氧化法）一实验原理：

超氧阴离子自由基产生体系模型:邻苯三酚在弱碱性(Tris-HCl

缓冲液，pH8.2)溶液中自身氧化分解产生超氧阴离子的反应为：

在一定条件下，随着反应的进行，生成的超氧阴离子在体系中会不断积累，导致反应液的吸光度(299nm波长)在反应开始后5min之内随时间变化而线性增大。因此在该时间内，于299nm处测定含被测物反应液的吸光度随时间的变化率, 并与空白液比较便可得出被测物抑制

超氧阴离子积累的作用能力。抑制率可根据下式计算：

式中F O和F X分别表示空白液和被测液的吸光度随时间的变化率

二实验仪器和试剂：

1 主要仪器：

紫外可见分光光度计，恒温水浴锅，10mL试管,分析天平。

2 主要试剂：

待测液，弱碱性(Tris-HCl)缓冲液，邻苯三酚溶液，HCL溶液。三试剂配制：

1、Tris碱溶液：6.05g定容于500mL水中，形成0.1mol/L的Tris

碱溶液。

2、0.1mol/L HCL溶液：1.0mL浓盐酸（36%，11.6mol/L）加入91.4mL

水中。

3、Tris-HCL缓冲液（0.05mlo/L,pH8.2）：50mL的0.1mol/L的Tris

碱溶液与22.9mL的0.1mol/L HCL溶液混合，定容至100mL。

4、25mmol/L 邻苯三酚溶液（焦性没食子酸）：将0.0315g邻苯三

酚定容于10mL水中。现配现用，4h内有效。

四实验方法：

1、取0.05mol/L pH8.2的Tris-HCl缓冲液4.5ml于试管中，置于

25℃水浴中预热20min；

2、分别加入1ml不同浓度的试样和0.4mL,25mmol/L的邻苯三酚溶

液（2.5 mmol/L邻苯三酚(由10 mmol/L HCl配制)0.4 ml），混匀后于25℃水浴中反应5min；

3、加入8mol/L 盐酸1.0ml终止反应，以Tris-HCl缓冲液作参比，

空白组以0.1 ml蒸馏水代替样品试液，在299nm处测定吸光度，计算清除率。空白对照组以1ml试样溶剂代替样品，每个处理均做三个重复。

五数据处理:

超氧阴离子自由基清除率(%)=100%(A1-A2)/A1，

其中A1为空白的平均吸光度，A2为试样的平均吸光度。