叶绿素与初级生产力测定方法实验步骤共35页
叶绿素含量测定方法（精）
叶绿素含量测定方法（精）叶绿素含量测定方法---丙酮法由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。
藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。
叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。
取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。
采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL 容量瓶中。
按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。
定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：叶绿素a含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数叶绿素b含量用以下公式进行计算：Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数叶绿素总含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。
此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。
叶绿素提取方法提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼1987 18（3）295--300.一、直接浸提法：1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min 倒上清；留藻泥。
叶绿素含量的测定
1.96％乙醇（或80％丙酮）。
2.石英砂。
3.碳酸钙粉。
三、实验步骤
1.取新鲜植物叶片（或其它绿色Fra bibliotek织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
2.称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
叶绿素含量的测定
1、原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL
式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
将Ca+Cb相加即得叶绿素总量CT
CT＝Ca十Cb＝20.29A645—8.05 A663(5)
从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a、b浓度另外，由于叶绿素a叶绿素b在652nm的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为30.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）而求出叶绿素a、叶绿素b总量
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比，即A ＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a 、叶绿素b 的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。
已知在波长663nm 下叶绿素a 、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm 处的吸光系数分别为16.75和45.60。
根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2）式（1） （2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。
解方程（1） （2）组得C a =12.72 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—8.05 A 663 (5) 从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为30.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝5.341000652 A (6)有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
植物叶绿素含量的测定
植物叶绿素含量的测定
植物叶绿素含量的测定
一、实验目的
1. 了解叶绿素的含量对植物生长发育的影响。
2. 使用叶绿素测定仪器，熟练掌握叶绿素测定的操作方法。
二、实验原理
叶绿素的含量是植物生长发育的重要参数，它主要受到植物品种、生长环境等因素的影响，叶绿素的测定能了解植物发育及分析植物选择性。
叶绿素测定仪器以叶绿素的吸收波长在670nm处，测定叶绿素的吸收值，从而计算出叶绿素的含量。
三、实验材料
1. 叶绿素测定仪器；
2. 分装标准液；
3. 各种植物叶片；
4. 纸巾；
5. 光学玻璃管（空管，分装标准液管）；
6. 吸管；
7. 水桶；
8. 烧杯；
9. 烧瓶；
四、实验步骤
1. 将叶片裁切为小块，放入烧杯中；
2. 把六个光学玻璃管清洗干净；
3. 用纸巾擦干玻璃管，将空管和标准液管装入叶绿素测定仪中；
4. 在烧杯中加入适量水，把叶片浸泡；
5. 将烧杯中的叶片倒入叶绿素测定仪中，盖上盖子；
6. 按照设备的操作指南，进行实验操作；
7. 记录实验数据；
8. 计算叶绿素含量；
9. 将实验数据做出结果表格。
五、实验结果
植物叶绿素含量（μg/g）
植物 | 叶绿素含量
---- | ----
植物1 | 10.2
植物2 | 15.3
植物3 | 8.1
植物4 | 12.6
植物5 | 13.2
植物6 | 11.4
六、结论
通过实验，可以得出不同植物叶绿素含量的不同，从而了解叶绿素含量对植物生长发育的影响。
叶绿素的提取、分离和测定
Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
解方程式得
(二）步骤
称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到25mL，避光静置5min。用移液管吸取上面的绿色清液1mL置于一大试管中，加入丙酮4ml稀释，摇动试管，作测定用。
测量光密度值 取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于663及645nm下读取光密度值
计算结果代入公式求出各来自绿素的含量（单位mg/L）最后计算时需考虑稀释因子
叶绿素a含量（mg/g鲜重）=CA*5 *25*2/1000 =0.25CA
叶绿素b的含量（mg/g鲜重）=0.25CB
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等
01
95%酒精、石油醚
02
碳酸钙
03
（二）仪器和药品
（三）步骤
用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精5-10mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
取一张色层分析纸或定性滤纸代用，剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径；将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置，稍干后，再重复操作几次；然后取另一滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提取液，不久即可看到分离的各种色素的同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰分别为为663nm和645nm。
叶绿素测定实验方法
叶绿素测定实验方法引言：叶绿素是一种存在于植物和藻类细胞中的绿色色素，它在光合作用中起着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究光合作用的过程和效率具有重要意义。
本文将介绍一种常用的叶绿素测定实验方法，通过该方法可以准确快速地测定叶绿素的含量。
实验材料：1. 叶绿素提取液：含有乙醇和醋酸的混合液；2. 磷酸盐缓冲液：用于稀释样品和调整pH值；3. 丙酮：用于去除样品中的类胡萝卜素；4. 乙醇：用于去除样品中的脂类物质；5. 乙酸镁溶液：用于稀释样品和调整pH值；6. 纯水：用于稀释样品和制备试剂。
实验步骤：1. 取一片新鲜的叶片，用研钵将其研磨成细碎的叶浆。
添加适量的磷酸盐缓冲液，使叶浆与缓冲液的体积比为1:10，并搅拌均匀。
2. 将混合物过滤，收集滤液，滤液即为叶绿素提取液。
3. 将叶绿素提取液分装到两个试管中，分别标记为A和B。
4. 在试管A中加入适量的丙酮，用于去除样品中的类胡萝卜素。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
5. 在试管B中加入适量的乙醇，用于去除样品中的脂类物质。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
6. 分别离心试管A和B，将上清液转移到两个新的试管中。
7. 在试管A中加入适量的乙酸镁溶液，用于稀释样品和调整pH值。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
8. 在试管B中加入适量的纯水，用于稀释样品和制备试剂。
搅拌均匀后，使其静置5分钟。
9. 分别使用分光光度计测量试管A和B中溶液的吸光度。
选择适当的波长（通常为665nm和649nm），分别记录吸光度值为A665和A649。
10. 根据公式A = (A665 - A649) × V / M，计算叶绿素的含量。
其中，V为取样体积，M为叶绿素的摩尔吸光系数。
结果分析：通过测量试管A和B中溶液的吸光度，可以计算出叶绿素的含量。
试管A中的溶液经过丙酮处理，去除了类胡萝卜素的干扰；试管B 中的溶液经过乙醇处理，去除了脂类物质的干扰。
因此，通过计算两个试管中溶液的吸光度差，可以准确测定叶绿素的含量。
叶绿素含量的测定
海洋生物学实验浮游植物叶绿素含量的测定一、实验目的：１、通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a（Chla）含量的测定，了解浮游植物数量和生物量的表示方法，并对不同粒径浮游植物加以比较。
２、学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法，掌握叶绿素ａ的测定方法。
二、原理：见《海洋生态学》P192-194生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。
浮游植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a 含量存在密切关系，因而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量。
海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有密切关系。
不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、功能特征。
三、仪器与设备：１、分光光度计3、采水瓶4、抽滤器5、微孔滤膜6、冰箱7、离心机四、药品与试剂：丙硐、甲醛、MgCO3等。
五、实验步骤：1、采样：选择完站位后，以500mL、或1000mL采水瓶采取一定水层（也可几个水层比较）的水样。
2、水样处理：将所取水样分别以0.45μm微孔滤膜（叶绿素a 总量）、2μm核孔滤膜（＞2μm孔径叶绿素a含量）以及先经20μm孔径筛绢过滤后再以2μm核孔滤膜（2-20μm孔径叶绿素a含量）过滤，以90%丙酮溶解滤膜后冰冻过夜。
3、数据测定：滤膜冰冻24小时后取出离心，取上清液于分光光度计测定叶绿素a含量（方法见附页），将所得不同孔径叶绿素a 含量及占叶绿素a总量比例等数据填入测定数据表中。
附：叶绿素a含量测定方法（分光光度法）：A．检测限：0.02mg/m3。
B．方法概述：已知体积的海水以玻璃纤维过滤器过滤，用90％丙酮将色素从滤器上萃取出来，其浓度以分光光度法测定。
C．仪器和设备：１、分光光度计２、抽滤器３、电动吸引器４、采水瓶５、微孔滤膜６、离心沉淀器７、冰箱８、离心管D．取样方法和贮存：将0.5-10升海水经0.45μm微孔滤膜过滤。
叶绿素的提取、分离和测定
(二）步骤
1、称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆 器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙 酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到 25mL，避光静置5min。用移液管吸取上 面的绿色清液1mL置于一大试管中，加入 丙酮4ml稀释，摇动试管，作测定用。
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2、测量光密度值
取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于 663及645nm下读取光密度值
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1.什么是传统机械按键设计？
传统的机械按键设计是需要手动按压按键触动PCBA上的 开关按键来实现功能的一种设计方式。
传统机械按键结构层图：
按
PCBA
键
开关 键
传统机械按键设计要点： 1.合理的选择按键的类型， 尽量选择平头类的按键，以 防按键下陷。 2.开关按键和塑胶按键设计 间隙建议留0.05~0.1mm，以 防按键死键。 3.要考虑成型工艺，合理计 算累积公差，以防按键手感 不良。
二、叶绿素a和b含量的测定
（一）原理 叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰分别 为为663nm和645nm。 同时在该波长时叶绿素a 、b比吸收系数k 为已知，根据Lambert—Beer定律列出浓 度C与光密度OD之间的关系式：
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OD663=82.04Ca+9.27Cb OD645=16.75Ca+45.6Cb Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度，单位mg/L 解方程式得 Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
实验四 叶绿素的提取、分离和含量测定
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一、叶绿素的提取、分离
（一）原理 叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、 胡萝卜素及叶黄素）。这些色素均不溶 于水，而溶于有机溶剂，故常用酒精或 丙酮等提取。并可根据它们在不同有机 溶剂中的溶解度不同以及在吸附剂上的 吸附能力不同，将它们彼此分离开。
水生生态系统初级生产力的测定—叶绿素法上传版
水生生态系统初级生产力的测定—叶绿素法上传版实验六水生生态系统初级生产力的测定—叶绿素法一、方法和步骤（一）水体透明度的观测将连接有绳子的透明度盘垂直放入湖中，直到看不清透明度盘的黑白界限，提起透明度盘，记下浸入水中的绳子长度。
（二）水样采集与保存用水样瓶采集华南师范大学情人湖的表层水样，3分钟后读取水样瓶上温度计的读数，该读数即为水样温度。
将水样瓶中的水倒入干净的瓶子中，带回实验室进行抽滤。
（三）抽滤在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜，倒入定量体积（250mL）的水样进行抽滤。
水样抽完后，继续抽1min，以减少滤膜上的水分。
（四）提取将载有浮游植物样品的滤膜放入研钵中，加入少量碳酸镁粉末，再加入90%丙酮2ml 左右，充分研磨。
研磨液用90%丙酮定容至6ml，进行离心。
取上清液置于1cm光程的比色皿中，进行光密度测定。
（五）光密度测定将装有上清液的比色皿放在分光光度计上，进行吸光度测定。
分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%丙酮作空白对照，对样品吸光度进行校正。
（六）计算1. 叶绿素a含量的计算按如下公式计算：叶绿素a（mg·m-3）=[11.64×(D663-D750)-2.16×(D645-D750)+0.10×(D630-D750)]·V1/V·δ式中，D为吸光度；V1为提取液定容后的体积（V1=6mL）；V 为抽滤水样体积（V=250mL）；δ为比色皿光程（δ=1cm）。
2. 初级生产力的估算表层水（1m以内）中浮游植物的潜在生产力（Ps）根据表层水叶绿素a的含量计算：Ps（mg C m-3h-1）= Ca·Q式中，Ca为表层叶绿素a的含量（mg/m3）；Q为同化系数（mgC/mgChla·h），表层水的同化系数为3.7。
二、结果与分析（一）情人湖水体的透明度及水温经测定，情人湖水体的透明度为60cm，水温为23℃。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比，即A ＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a 、叶绿素b 的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。
已知在波长663nm 下叶绿素a 、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm 处的吸光系数分别为16.75和45.60。
根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2）式（1） （2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。
解方程（1） （2）组得C a =12.72 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—8.05 A 663 (5) 从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为30.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝5.341000652 A (6)有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
叶绿素与初级生产力的测定方法实验步骤
海洋初级生产力测定方法有
14C示踪法
叶绿素法
叶绿素法 分光法 荧光法
1. 分光法测定叶绿素的原理
• 用丙酮萃取浮游植物中的叶绿素，然后用分光光 度计测萃取液在不同波长下的吸光值，根据①～ ④式计算： • 叶绿素a = 11.85E664－1.54 E647－0.08 E630 ① • 叶绿素b = 21.03 E647－5.43 E664－2.66 E630② • 叶绿素c = 24.52 E630－1.67 E664－7.60 E647 ③
→
960MC荧 光计
测Rb2
2、同化指数Q的测定
BOD白瓶
BOD黑瓶
（250mL） 固定
装满水样A
置于光照培养箱 培养2～4h
本应置于采样区域 相同水深位置光照 6-8h
碘量法测白瓶和黑瓶 DO（Ol和Od）
按（10）式
计算Q
3、水样叶绿素a的测定
按实验步骤1 水样B平行样 20～30mL 过滤 分别用GFY-160荧光法 和960MC荧光计测Rb 按⑥式计算Chl-a
• 式中E为经750nm波长校正后的吸光值，即E值 应扣除E750的数值，光程用1cm比色皿。
由于叶绿素a是浮游植物任一种群都具有 的特征，而b或c不是任一种群都有，因此，通 常用叶绿素a (Chl-a)表示初级生产力水平， 其计算式为④式。
C V 丙酮 mL Ca（mg/m3）= V海水 L
• 碱式滴定管1根 • 10mL移液管 1支 • 2mL移液管 3支 • 1mL移液管 1支 • 10mL移液管 1支
3、试剂(*为学生自配试剂）
• • • • • • • • • • （1）90% 丙酮* （2）1% MgCO3 (3) 0.01mol/L Na2S2O3溶液 （4）0.0100 mol/L KIO3标准溶液* （5）MnCl2溶液 （6）碱性KI溶液 （7）1+1 H2SO4 （8）1＋3 H2SO4 （9）0.5％淀粉指示剂* （10）固体KI
大学植物生物学实验——叶绿素含量的测定
植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验
实验五、 实验五、叶绿体含量的 测定（分光光度法） 测定（分光光度法）
一，实验目的与要求
三、实验步骤
• 提取：叶片洗净、吸干、称重 称重后于研钵中加入 5mL 95%乙醇、少许石英砂和碳酸钙，研磨匀 浆后过滤，再用5mL 95%乙醇冲洗滤渣，定容 混匀； 到10mL，混匀 • 测定：充分过滤后，以95%乙醇调零，测定叶 绿素提取液在649 649nm和664 664nm处的光吸收值。 • 计算： 叶绿素a：C=13.95A664-6.88A649 叶绿素b：C=24.96A649-7.32A665
• 掌握叶绿素a、b含量测定的方法； • 了解不同生境下植物的叶绿素含量和叶 绿素a、b比值。
二、实验材料与试剂
• 95%乙醇。 • 不同生境下的植物叶片。
三、实验原理
• 叶绿素a、b的吸收光谱
• 叶绿素a、b乙醇提取液的光吸收总 和在649nm 665nm处各有一峰值。 649nm和665nm •Lambert-Bear定律： A=nCL n=摩尔消光系数； C=溶液浓度； L=比色杯内径。 •吸光度的相加性 吸光度的相加性： 吸光度的相加性 混合液在某一波长下的吸光度等于各组分 在相应波长下吸光度的总和。
•计算叶绿素含量
叶绿素a（mg/gFW)=? 叶绿素b（mg/gFW)=? 叶绿素a：叶绿素b=?
四、数据分析
• 统计植物生境与叶绿素含量、叶绿素a： b值之间的关系，并分析其生理意义；
பைடு நூலகம்
试验六水生生态系统初级生产力的测定——叶绿素法-PPT文档资料
一、目的和意义
了解测定水生生态系统中初级生产力的意 义和测定方法
二、基本原理
叶绿素a是植物光合作用的重要光合色素。 在一定的光照强度下，叶绿素a的含量与光合 作用强度之间存在密切关系，因此叶绿素a的 含量是水生生态系统初级生产力的重要指标。 Ps = Ca· Q （Q = 3.7） 同时叶绿素a的含量的测定，也可用于水体富 营养化水平的评价，是水质检测的常规项目。 浮游植物叶绿素的测定方法常用分光光度法。
四、方法和步骤
（一）水体环境观测
（二）水样采集与保存 •
（三）抽滤 （四）提取 （五）光密度测定 （六）计算
滤膜剪碎----研钵中，+少量碳酸镁粉末 +2～3 mL 90%丙酮-----充分研磨
•
• •
•
匀浆物移入离心管中，用离心机 （3000～4000 r· min-1）离心10 min 将上清液移入10 mL的容量瓶中 再用2～3 mL 90%丙酮，继续研磨提取， 离心10 min，并将上清液转入容量瓶中。 重复1～2次后， 用90%丙酮定容为10 mL，摇匀。
四、方法和步骤
（一）水体环境观测
（二）水样采集与保存
（三）抽滤 （四）提取 （五）光密度测定 （六）计算
（一）水体环境观测 透明度（透明度盘） 水温（温度计） pH值（pH计或pH试纸） 溶氧量（碘量法、溶氧量仪）
四、方法和步骤
（一）水体环境观测
（二）水样采集与保存
（三）抽滤 （四）提取 （五）光密度测定 （六）计算
三、仪器设备和试剂
冰箱； 离心机（配平）； 分光光度计； 采水器； 透明度盘----透明度 温度计---水温 抽滤器； 真空泵 乙酸纤维滤膜 （孔径0.80 μm& 0.45 μm 研钵； 离心管； 90%丙酮； 碳酸镁粉末； 石英砂； pH值------pH计或pH试纸 （见指导书2页） 溶氧量-----碘量法、溶氧量 仪 （不测）
叶绿素的提取、分离和测定
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（三）步骤
1、用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵 中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精510mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充 分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10 分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
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2、取一张色层分析纸或定性滤纸代用， 剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径； 将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸 取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置， 稍干后，再重复操作几次；然后取另一 滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提 取液，不久即可看到分离的各种色素的 同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为 蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈 鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
二、叶绿素a和b含量的测定
（一）原理 叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰分别 为为663nm和645nm。 同时在该波长时叶绿素a 、b比吸收系数k 为已知，根据Lambert—Beer定律列出浓 度C与光密度OD之间的关系式：
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OD663=82.04Ca+9.27Cb OD645=16.75Ca+45.6Cb Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度，单位mg/L 解方程式得 Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
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三、实验结果
计算结果
代入公式求出各叶绿素的含量（单位mg/L） 最后计算时需考虑稀释因子
叶绿素a含量（mg/g鲜重）=CA*5 *25*2/1Байду номын сангаас00 =0.25CA
叶绿素b的含量（mg/g鲜重）=0.25CB 叶绿素总含量（mg/g鲜重） =0.25CT
实验一水体初级生产力的测定
水体初级生产力：指水生植物（主要 是浮游植物）进行光合作用的强度。
Ⅰ 叶绿素a的测定
一、测定意义
1.是水中浮游植物生物量的指标
2.直接反映水体富营养化的程度
二、测定原理
叶绿素a是有机物，不溶于水，但能溶于丙酮、乙醇等有 机溶剂。要用机械方法使细胞破碎，把叶绿素a从细胞中提 取出来。 在测定过程中先用醋酸纤维滤膜抽滤水样，然后破碎细 胞，用90%丙硐提取叶绿素a，再用分光光度计测叶绿素a 的吸光度，最后利用公式计算叶绿素a的含量。
五、作业
• 整理观察与分析结果，提交实验报告。 课后思考与联系 • 试设计一个微型的正常运行的生态系统。
最高日产量 gO2/m2 0.5～1 1～2.5 2.5～7.5 >7.5
实验二：水生态系统观察与分析
一、实验内容
• 水生态系统的组成、结构，水生态系统的 物质和能量动态。
二、目的要求
• 通过实验，深刻理解生态系统的概念，掌 握生态系统观察与分析的基本方法。
三、实验地点
• 学校莲心湖。
四、观察内容与方法
水色
< 0.1 < 0.001 <1
蓝绿色
0.1～0.3
0.001～ 0.01
> 0.3 > 0.01 > 10
黄绿色
1～10
绿色
Ⅱ 黑白瓶测氧法
一、测定原理
C白
C黑
C原
将几只注满水样的白瓶和黑瓶悬挂在采水深度处，曝光24 小时，黑瓶中的浮游植物由于得不到光照只能进行呼吸作用， 因此黑瓶中的溶解氧就会减少；
Ⅰ 叶绿素a的测定
三、测定方法和步骤
1.水样的采集与保存 求索溪：采样500mL； 莲心湖：300mL 2. 过滤水样：用真空抽滤装置，可添加0.2mLMgCO3悬液 3.提取：取出滤膜折叠→移入刻度离心管→加90%的丙酮 至10mL→充分振荡，放入冰箱避光24h
叶绿素α法估算隆林网箱养殖区初级生产力
［ ２ ｅｏｅＤ １ ］Ｌ ｐｒ Ａ，Ｈ ｒ Ｖ，Ｓ ｗ ｒ Ａ ｕｌ Ｊ ｅ ｔ ａｔ Ｇ，ｅ ａ ｅ ｔ Ｌ，２ ０ ． ｒ ｒ ｅｔ ｔ ｓ ｐ ｖ ｕｖ ａ ｏ ｃｅ ｉ ｐｒ ｓ ０ ０ Ｐｉ ａ ｓ ｅｓｉ ｒ ｅ ｓｒｉ ｌ ｆｓｈｍ ｃｒ ｅｆ ｅ ｏ ｈ ｒ ｍ ｏ ｓ ｖ ｉ ｅ ｕｄ
Ｒｅ ｉｗｓ ４ ｖ ｅ ． ３：２ ９—４ ３
［ １ ｚｍ Ｄ，Ｓ ｔ Ｄ，Ｔ ｍ ｓ １ ］Ａ ｕ ｉ Ｋ ｎ ｓ ａ ｉＲ ｏ ａｏＡ，Ｒｇｕ ｏｌ ｏｈ ａｉ ，ｅ ａ ｉ ｔ ｓ，Ｙ ｓｉ ｋ ｔ Ｌ，２ ０ ．， ｏ ｉ ａ ８ ｉ ｍ ｎｔ ｉ ｏｓ ｚ Ｆ ０ ３ Ｃ ｎｍ ｃａｉ ｉｏ ｍ ｕｉ ｅ ｎ ｙｓ ｆ ｙｎ
天 生桥水 库位 于广 西与 贵州交 汇处 ，近
测定 ，以分析 初级生 产力 变化规 律和原 因 。
年来网箱养殖业发展迅速，形成了生态养殖 和集约化养殖两种方式 ，为了估测水库的网 箱养殖容量 ，确保网箱养殖业可持续发展 ， 我们从 ２０ ０６年 １ Ｏ月至 ２０ ０７年 ７月按季度
对天生 桥水 库隆林 库 区进行 了叶绿 素监测 和 初 级生 产力 的估算 ，同时进行 氮磷 营养盐 的
１ －材料与方法
１ １ 采样点 及 采样方 法 ．
ａｕｏ ｈ ｒａｅａ ｄｔｅｅ ｒｅ ｃ ｆ ｅｖ ｒ ｂ ａｅｉ ｕ ｅｓｓｅ ： “ ａｔ ｇｆｒＧ ｄ ｔ ．ｍｍｕ ｏ ｅ ｅ ｃ． ５： ｒｃ ｏｄ ｔ ｍｅｇ ｎ ｅｏ ｅｔ ｒｔ ｎ ｈ ｈ ｔ ｅ ｍ ｎ ｙ ｔｍ ｗ ｉｎ ｏ ｏ” Ｉ ｉ ｏ ｎ ｇ ｎ ｆ ｓ５ ｉ
产力变动规律 为夏 季 ＞春季 ＞秋季 ＞冬季 。眷 夏 两季磷 为浮游植物 生长的限制 因子，秋冬 两季 氮 转为浮游植 物生长的限制因子 。３种养殖模式 中，投饵 网箱 和生 态网箱混合 养殖 区初级 生产力最 高 ，其次为投饵 养殖区。生态网箱养殖 区初级生产力最低 。