动物细胞培养技术及应用PPT课件
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第八章动植物细胞培养技术ppt课件(全)
特点：细胞分裂增殖不旺盛，与体内 细胞相似。
应用：药物检测实验，药理研究。 生产用的最多的是鸡胚细胞、原代兔 肾或鼠肾细胞，以及血液淋巴细胞等。
（2）二倍体细胞系
二倍体细胞系是原代细胞经过传代、筛选、克隆，从多种细胞成分的组织 中挑选出来的具有某种特征的细胞株。
该细胞仍具有“正常”细胞的特点，即①染色体组是2n的核型；②具有明 显的贴壁依赖和接触抑制的特性；③只有有限增殖能力，一般可连续传代 培养50代；④无致瘤性。
2.细胞传代方法
（1）贴壁生长的消化传代 ①吸弃或倒掉瓶内陈旧培养液。 ②在培养瓶内加入适量消化液。 ③消化2～5min后吧培养瓶放置于显微镜下观察，发现细胞质回缩、细胞间
隙增大后，应立即停止消化。 ④吸除或倒掉消化液。 ⑤用吸管吸取瓶内培养液，按顺序反复吹打瓶壁细胞，从培养瓶底部一边
4.生产用动物细胞系
生产用动物细胞是按生产条件选择、驯化、适于大量培养，用于生产制备生 物制剂的动物细胞。用于动物细胞培养的细胞系主要有四类，即原代细胞、二 倍体细胞、连续细胞系、融合细胞和重组细胞系。
细胞系（cell line）指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为 有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。
第八章 动植物细胞培养技术
第一节动物细胞大规模培养技术 第二节植物细胞大规模培养技术
知识目标
1.掌握动植物细胞培养基本技术。 2.掌握动植物培养生物反应器的类型。 3.了解动植物细胞培养在生物制药领域中的应用。
能力目标
1.掌握主要的动植物细胞培养方式。 2.掌握培养基的组成、制备、细胞培养过程的检测等基 本操作。
冷冻保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质。冷冻保护剂常常配制 成一定的溶液。
应用：药物检测实验，药理研究。 生产用的最多的是鸡胚细胞、原代兔 肾或鼠肾细胞，以及血液淋巴细胞等。
（2）二倍体细胞系
二倍体细胞系是原代细胞经过传代、筛选、克隆，从多种细胞成分的组织 中挑选出来的具有某种特征的细胞株。
该细胞仍具有“正常”细胞的特点，即①染色体组是2n的核型；②具有明 显的贴壁依赖和接触抑制的特性；③只有有限增殖能力，一般可连续传代 培养50代；④无致瘤性。
2.细胞传代方法
（1）贴壁生长的消化传代 ①吸弃或倒掉瓶内陈旧培养液。 ②在培养瓶内加入适量消化液。 ③消化2～5min后吧培养瓶放置于显微镜下观察，发现细胞质回缩、细胞间
隙增大后，应立即停止消化。 ④吸除或倒掉消化液。 ⑤用吸管吸取瓶内培养液，按顺序反复吹打瓶壁细胞，从培养瓶底部一边
4.生产用动物细胞系
生产用动物细胞是按生产条件选择、驯化、适于大量培养，用于生产制备生 物制剂的动物细胞。用于动物细胞培养的细胞系主要有四类，即原代细胞、二 倍体细胞、连续细胞系、融合细胞和重组细胞系。
细胞系（cell line）指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为 有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。
第八章 动植物细胞培养技术
第一节动物细胞大规模培养技术 第二节植物细胞大规模培养技术
知识目标
1.掌握动植物细胞培养基本技术。 2.掌握动植物培养生物反应器的类型。 3.了解动植物细胞培养在生物制药领域中的应用。
能力目标
1.掌握主要的动植物细胞培养方式。 2.掌握培养基的组成、制备、细胞培养过程的检测等基 本操作。
冷冻保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质。冷冻保护剂常常配制 成一定的溶液。
动物细胞工程动物细胞与组织培养课件
动物细胞工程动物细胞与组织培养课件汇报人：2024-01-10•动物细胞工程概述•动物细胞培养技术•动物细胞与组织的体外培养目录•动物细胞工程的应用案例•展望与挑战01动物细胞工程概述定义与特点定义动物细胞工程是以动物细胞为研究对象，通过细胞培养、细胞融合、基因转移等技术手段，实现动物细胞和组织的体外培养、繁殖和生产，以及动物疾病治疗和生物医学研究的技术。
特点动物细胞工程具有高度的技术性、复杂性和应用性，涉及多个学科领域，如生物学、医学、生物工程等。
它能够实现动物细胞的体外大规模培养，生产出大量的生物制品，如疫苗、单克隆抗体等，为人类疾病预防和治疗提供重要的技术支持。
利用动物细胞大规模培养技术，生产出大量的疫苗、单克隆抗体等生物制品，用于疾病的预防和治疗。
生物制品生产通过动物细胞培养和基因工程技术，实现新药的筛选和开发，提高药物研发的效率和成功率。
药物筛选与开发利用动物细胞工程技术，体外培养出人体组织和器官，用于移植和修复人体损伤的组织和器官。
组织工程通过动物细胞培养和基因工程技术，建立各种疾病模型，用于疾病的发病机制研究和药物筛选。
疾病模型建立动物细胞工程的应用德国科学家Rudolf Virchow首次提出“细胞来源于细胞”的著名论断，为动物细胞工程的发展奠定了基础。
1907年美国科学家Graham和Milstein首次成功实现了哺乳动物细胞的体外培养，开启了动物细胞工程的新篇章。
1958年美国科学家Kohler和Milstein首次成功制备出了单克隆抗体，为动物细胞工程在生物制品生产领域的应用奠定了基础。
1975年随着基因工程技术的发展和应用，动物细胞工程进入了一个新的发展阶段，实现了基因转移和基因编辑等先进技术的应用。
1990年代动物细胞工程的发展历程02动物细胞培养技术细胞生存和增殖条件动物细胞培养需要提供适宜的温度、湿度、pH值、营养物质等条件，以维持细胞的生存和增殖。
细胞贴壁与生长动物细胞在培养过程中需要贴附在培养器皿的表面才能生长，因此需要选择适当的细胞培养器皿和贴壁介质。
人教版生物选修三专题--动物细胞工程-课件-共张ppt
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
受精作用
正在融合的细胞
动物细胞融合技术的发展简史：
1、20世纪30年代，在肺结核、天花等病理组织中观 察到多核细胞；
2、20世纪70年代，在蛙的红细胞中观察到多核细胞； 3、1962年，发现日本血凝性病毒能引起艾氏腹水瘤
细胞融合成多核细胞； 4、1965年，证实了灭活的病毒在适当条件下可以诱
疫作用。 3、每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。
不能无限增殖 单克隆抗体
由单个B淋巴细胞经无性繁殖（克隆），形成 基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化 学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 细
胞
小鼠骨髓瘤细胞－－能够无限增殖 融
合
杂交瘤细胞 技 （动物细胞培养技术大量培养）术
此外，体细胞核移植后的重组细胞直接发育成新个体 属于无性繁殖，产生的后代无更大变异性，而环境是
多变的，易造成该个体适应能力降低，易被淘汰。
P50 思考与探究
2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？
动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化 的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个 体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组 织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的 动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量 的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习 性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克 隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不 可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是
《动物细胞培养》课件
用于生产疫苗、生物制药品、研发新型材料等。
结论
动物细胞培养的意义不仅限于学术研究，还在医学和工业领域有着广泛的应用。随着技术的不断进步，动物细 胞培养的未来将更加精确和高效。
《动物细胞培养》PPT课 件
动物细胞培养是一种在实验室中培养和繁殖动物细胞的技术。本课件将介绍 动物细胞培养的简介、工具和材料、细胞的来源、细胞培养的步骤、常见的 细胞培养技术等内容。
简介
动物细胞培养是一种在实验室中使用培养基和合适的条件培养和繁殖动物细 胞的技术。它可以为生物医学研究、药物开发和工业生产提供可靠的细胞模 型。
工具和材料
细胞培养箱
用于提供恒定的温度、湿度 和CO2浓度，以模拟生理环 境。
细胞培养板
用于培养和分离细胞的平底 容器，常用的有培养皿和培 养瓶。
培养基
提供细胞生长所需的营养物 质和生长因子。
无菌枪
用于无菌操作，将细胞和培养基转移到细胞培 养板中。
纯化水
用于制备无菌的培养基和洗涤细胞。
细胞的来源
人体细胞培养
使用人类组织或细胞来源的细胞，如肾细胞、肺细 胞、肝细胞等，用于研究人类疾病和药物筛选。
动物细胞培养
使用其他动物的组织或细胞，如小鼠细胞、猪细胞、 狗细胞等。
细胞培养的步骤
1
细胞的收集和分离
从组织样本中收集细胞，并将其分离为
将分离后的细胞接种在细胞培养
2
单个细胞，以便于培养和繁殖。
板中
将单个细胞或细胞悬液转移到含有培养
基的细胞培养板中。
3
加入培养基和营养物质
提供细胞所需的营养物Байду номын сангаас和生长因子，
以促进细胞的生长和增殖。
细胞的观察和检测
结论
动物细胞培养的意义不仅限于学术研究，还在医学和工业领域有着广泛的应用。随着技术的不断进步，动物细 胞培养的未来将更加精确和高效。
《动物细胞培养》PPT课 件
动物细胞培养是一种在实验室中培养和繁殖动物细胞的技术。本课件将介绍 动物细胞培养的简介、工具和材料、细胞的来源、细胞培养的步骤、常见的 细胞培养技术等内容。
简介
动物细胞培养是一种在实验室中使用培养基和合适的条件培养和繁殖动物细 胞的技术。它可以为生物医学研究、药物开发和工业生产提供可靠的细胞模 型。
工具和材料
细胞培养箱
用于提供恒定的温度、湿度 和CO2浓度，以模拟生理环 境。
细胞培养板
用于培养和分离细胞的平底 容器，常用的有培养皿和培 养瓶。
培养基
提供细胞生长所需的营养物 质和生长因子。
无菌枪
用于无菌操作，将细胞和培养基转移到细胞培 养板中。
纯化水
用于制备无菌的培养基和洗涤细胞。
细胞的来源
人体细胞培养
使用人类组织或细胞来源的细胞，如肾细胞、肺细 胞、肝细胞等，用于研究人类疾病和药物筛选。
动物细胞培养
使用其他动物的组织或细胞，如小鼠细胞、猪细胞、 狗细胞等。
细胞培养的步骤
1
细胞的收集和分离
从组织样本中收集细胞，并将其分离为
将分离后的细胞接种在细胞培养
2
单个细胞，以便于培养和繁殖。
板中
将单个细胞或细胞悬液转移到含有培养
基的细胞培养板中。
3
加入培养基和营养物质
提供细胞所需的营养物Байду номын сангаас和生长因子，
以促进细胞的生长和增殖。
细胞的观察和检测
动物细胞培养(共20张PPT)
一、动物细胞培养
1.概念：动物细胞培养就是从动物
机体内取出相关的组织，将它分散 成单个细胞，然后，放在适宜的培 养基中，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖
目的：获得细胞或细胞产品。
2.过程：
动物胚胎或幼 龄动物的组织、
器官
剪碎组织
胰蛋白酶或 胶原蛋白酶
分散成单 个细胞
成块组织不利于培养，分散了并制成细胞悬浊液，利于细胞与培养液充分接触，利于培养。
二、动物细胞培养条件
1、无菌、施：培养液中加一定量的抗生素。
2、营养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、 激素等）和 动物血清
3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
专题2.2动物细胞工程
动物细胞工程
动物细胞培养
动物细胞工程 动物细胞核移植 常用的技术手段 动物细胞融合
生产单克隆抗体
其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞 工程技术的基础。
动物细胞培养和核移植技术
教学目标
新课标要求 • 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
• 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 和应用前景。
3.用于检测有毒物质。 4.培养正常或病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面
的研究。可用于健康细胞的培养，如获得大量自身的 皮肤细胞，用于植皮；用于筛选抗癌药物等，为治疗
和预防疾病提供理论依据
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
植物组织培养
细胞的全能性 固体培养基 蔗糖、植物激素
资料：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治 疗该病人？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
《动物细胞工程》课件
1
2
3
利用动物细胞工程可以将外源基因导入动物细胞，培育出转基因动物，提高其生产性能和抗病能力。
转基因技术
动物细胞工程可用于生产疫苗，通过培养动物细胞并表达病毒抗原，制备出高效、安全的动物疫苗。
动物疫苗
动物细胞工程可以用于构建生物反应器，通过大规模培养动物细胞生产各类蛋白质和生物活性物质。
生物反应器
选择适当的细胞
通过物理、化学或生物方法诱导细胞融合。常用的物理方法有电融合和激光融合，化学方法有聚乙二醇（PEG）诱导融合，生物方法有病毒诱导融合。
诱导细胞融合
通过特定的筛选和鉴定方法，从大量细胞中筛选出融合细胞，并进行鉴定。常用的筛选和鉴定方法有荧光染色法、免疫学检测法和分子生物学检测法等。
筛选和鉴定融合细胞
技术难度大
动物细胞工程的实施需要高超的技术水平和精细的操作技巧，如何提高技术成熟度和降低成本是亟待解决的问题。
伦理和法律问题
动物细胞工程的实践涉及到伦理和法律问题，如人道关怀、动物权益保护等，需要在实践中严格遵守相关法规和伦理准则。
安全性和有效性问题
动物细胞工程产品的安全性和有效性需要经过严格的评估和验证，以确保其不会对人类健康和生态环境造成不良影响。
1970年代
随着技术的不断进步和应用领域的拓展，动物细胞工程在医学、农业、工业等领域得到广泛应用。
1990年代至今
02
动物细胞培养技术
细胞具有增殖和分化的能力
动物细胞具有自我复制和分化的能力，可以在适宜的环境下生长和繁殖。
03
动物细胞融合技术
选择要进行融合的细胞，通常选择同种或同种的细胞进行融合。
感谢观看
THANKS
基因转移技术
02
动物细胞培养课件
法规实施时间： 2021年4月15日
07 动物细胞培养未来发展
动物细胞培养技术发展趋势
细胞培养技术 将更加成熟， 提高细胞存活 率和生长速度
细胞培养技术 将更加智能化， 实现自动化和
智能化操作
细胞培养技术 将更加环保， 减少对环境的
污染和破坏
细胞培养技术 将更加精准， 实现对细胞生 长和分化的精
动物细胞培养课件
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汇报人：PPT
目录 /目录
01
点击此处添加 目录标题
04
动物细胞培养 基
02
动物细胞培养 概述
05
动物细胞培养 设备
03
动物细胞培养 技术
06
动物细胞培养 安全性
01 添加章节标题
02 动物细胞培养概述
动物细胞培养环境保护
生物安全：确保细胞培养过程中无 病原体污染
化学试剂：使用环保型化学试剂， 减少对环境的影响
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
废物处理：妥善处理培养过程中产 生的废物，避免环境污染
生物伦理：遵守生物伦理原则，保 护实验动物的权益
动物细胞培养伦理问题
动物权益：动物细胞培养 是否侵犯动物权益
动物细胞培养基选择与使用
培养基类型：选择适合细胞生长的培养基类型，如DMEM、RPMI等 培养基成分：根据细胞类型和实验需求，选择合适的培养基成分，如血清、抗生素等 培养基配制：按照说明书进行培养基配制，注意无菌操作和温度控制 培养基更换：定期更换培养基，保持细胞活力和生长状态
05 动物细胞培养设备
完全培养基：含有细胞生长所需的所有 营养物质
《动物细胞培养技术》课件
动物细胞培养技术可以用于组织工程和再 生医学领域，为损伤或病变的组织和器官 提供替代疗法。
02
动物细胞培养的基本原理
细胞周期与细胞分裂
细胞周期
描述细胞生长和分裂的阶段，包 括间期和分裂期。
细胞分裂
细胞繁殖的方式，包括有丝分裂和 减数分裂。
细胞分裂调控
介绍细胞分裂的调控机制，如周期 蛋白、激酶等。
调整细胞浓度
将分离出的单个细胞调整到合适的浓度。
接种
将调整好的细胞悬液接种到培养容器中，轻轻晃 动容器使细胞均匀分布。
培养
将接种好的容器放置在恒温、恒湿、恒光的培养 箱中培养，定期观察记录细胞的生长情况。
细胞观察与检测
01
02
03
04
形态观察
定期观察细胞的形态变化，如 细胞大小、形态、染色深浅等
。
• 干细胞治疗是一种新兴的治疗方法，利用干细胞的再生和分化能力来修复或替换受损的组织和器官。动物细胞培养技术在 干细胞治疗领域的应用，为干细胞分离、培养和扩增提供了重要的技术支持，有助于推动干细胞治疗的发展。
动物细胞培养技术的发展前景 干细胞治疗领域的应用
药物筛选与毒性测试
药物研发过程中，需要进行大量的药物筛选和毒性测试。动物细胞培养技术可以 模拟人体细胞对药物的反应，为药物筛选和毒性测试提供更为准确和可靠的数据 支持，有助于加速新药的研发进程。
动物细胞培养技术广泛应用于生物医 学、药物研发、食品安全等领域。
培养基是动物细胞培养的关键因素， 它为细胞提供营养、生长因子和适宜 的生存环境。
动物细胞培养技术的外培养动物细胞。
20世纪初，随着组织培养技术 的不断发展，动物细胞培养技术
逐渐成熟。
21世纪初，随着基因编辑技术 的发展，动物细胞培养技术在疾 病治疗、药物研发等领域的应用
《动物细胞组织培养》课件
低温保存
将细胞置于-196℃的液氮中长时间保存。
细胞复苏
从液氮中取出细胞，快速解冻后用培养基培养细胞，使细胞重新生长繁殖。
04
动物细胞组织培养的实验操作
实验准备
培养基制备
准备适宜的动物细胞生 长的培养基，确保培养 基的营养成分、pH值和
渗透压适宜。
细胞来源
确保细胞来源可靠，并 经过必要的消毒和检测
异质性的原因
培养细胞异质性主要与细胞在生长和分化过程中 受到的微环境因素、基因突变等因素有关。
解决异质性的措施
采用标准化操作流程、优化培养条件、选用同质 化细胞系等方法，降低培养细胞的异质性。
动物细胞组织培养的前景展望
动物细胞组织培养在科学研究 、生物工程、医学等领域具有 广泛的应用前景。
随着技术的不断进步和应用领 域的拓展，动物细胞组织培养 将迎来更多的发展机遇和挑战 。
细胞鉴定
通过形态学观察、免疫荧光等技术对细胞进行鉴定，确保细胞的种类 和来源。注意事项：选择适当的鉴定方法，确保准确性。
细胞观察与记录
定期观察细胞的生长状态、形态变化等，并记录数据。注意事项：保 持观察的连续性和准确性。
实验结果分析
细胞生长曲线绘制
根据观察数据绘制细胞生长曲 线，分析细胞的生长特性和规
律。
细胞形态学分析
观察细胞的形态变化，分析细 胞的分化、凋亡等情况。
基因表达分析
通过PCR、Western blot等技 术分析细胞中特定基因的表达 情况。
细胞功能检测
根据实验目的，对细胞进行特 定的功能检测，如药物筛选、
毒性测试等。
05
动物细胞组织培养的挑战与前景
培养细胞的污染问题
污染来源
将细胞置于-196℃的液氮中长时间保存。
细胞复苏
从液氮中取出细胞，快速解冻后用培养基培养细胞，使细胞重新生长繁殖。
04
动物细胞组织培养的实验操作
实验准备
培养基制备
准备适宜的动物细胞生 长的培养基，确保培养 基的营养成分、pH值和
渗透压适宜。
细胞来源
确保细胞来源可靠，并 经过必要的消毒和检测
异质性的原因
培养细胞异质性主要与细胞在生长和分化过程中 受到的微环境因素、基因突变等因素有关。
解决异质性的措施
采用标准化操作流程、优化培养条件、选用同质 化细胞系等方法，降低培养细胞的异质性。
动物细胞组织培养的前景展望
动物细胞组织培养在科学研究 、生物工程、医学等领域具有 广泛的应用前景。
随着技术的不断进步和应用领 域的拓展，动物细胞组织培养 将迎来更多的发展机遇和挑战 。
细胞鉴定
通过形态学观察、免疫荧光等技术对细胞进行鉴定，确保细胞的种类 和来源。注意事项：选择适当的鉴定方法，确保准确性。
细胞观察与记录
定期观察细胞的生长状态、形态变化等，并记录数据。注意事项：保 持观察的连续性和准确性。
实验结果分析
细胞生长曲线绘制
根据观察数据绘制细胞生长曲 线，分析细胞的生长特性和规
律。
细胞形态学分析
观察细胞的形态变化，分析细 胞的分化、凋亡等情况。
基因表达分析
通过PCR、Western blot等技 术分析细胞中特定基因的表达 情况。
细胞功能检测
根据实验目的，对细胞进行特 定的功能检测，如药物筛选、
毒性测试等。
05
动物细胞组织培养的挑战与前景
培养细胞的污染问题
污染来源
动物细胞培养ppt课件
培养细胞的分化
❖不适应（Deadaption）
细胞在体内时所拥有的分化特性减 弱或不显。
❖脱分化（Dedifferentiation）
由于基因变异而使细胞失去分化能 力。如肝细胞失掉产生精氨酸酶及氨基 酸转移酶的特性后，储存肝糖元的能力
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
组织培养的分类及基本概念
分类:
1.组织培养(Tissue Culture) 2.细胞培养(Cell Culture) 3.器官培养（Organ Culture）
组织培养的细胞生物学特点:
1.体内外细胞的差异：当人工条件和体内实际情况不
完全相同时，细胞在体外培养后，一旦失去神经体液调节 和细胞间相互影响，生活在缺乏动态平衡的环境中，发生 变化则是必然。细胞最多见的表现是：返祖（Atavism） 现象，即失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显、 细胞趋单一化、不死性、恶性状。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
2) 指 数 生 长 期 （ Logarthmic growth phase）：
细胞增殖最旺盛时期，一般用细胞分裂指 数（Mitotic index，MI）表示，即细胞群中每 1000个细胞中的分裂相数。体外培养细胞分裂 指数介于0.1~0.5%，且受细胞种类培养液成分、 pH、温度等影响。
培养细胞的生长和增殖
1.原代培养（Primary Culture）阶段：或称 初代培养。从体内取出组织接种培养到第一次 传代，随不同的组织时间长短不一，一般为 1~4w 2.传代培养（Subculture）阶段：或称继代培 养。也就是细胞系（Cell line）阶段，细胞增 殖旺盛，一般细胞可传代10-50代）。
❖不适应（Deadaption）
细胞在体内时所拥有的分化特性减 弱或不显。
❖脱分化（Dedifferentiation）
由于基因变异而使细胞失去分化能 力。如肝细胞失掉产生精氨酸酶及氨基 酸转移酶的特性后，储存肝糖元的能力
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
组织培养的分类及基本概念
分类:
1.组织培养(Tissue Culture) 2.细胞培养(Cell Culture) 3.器官培养（Organ Culture）
组织培养的细胞生物学特点:
1.体内外细胞的差异：当人工条件和体内实际情况不
完全相同时，细胞在体外培养后，一旦失去神经体液调节 和细胞间相互影响，生活在缺乏动态平衡的环境中，发生 变化则是必然。细胞最多见的表现是：返祖（Atavism） 现象，即失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显、 细胞趋单一化、不死性、恶性状。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
2) 指 数 生 长 期 （ Logarthmic growth phase）：
细胞增殖最旺盛时期，一般用细胞分裂指 数（Mitotic index，MI）表示，即细胞群中每 1000个细胞中的分裂相数。体外培养细胞分裂 指数介于0.1~0.5%，且受细胞种类培养液成分、 pH、温度等影响。
培养细胞的生长和增殖
1.原代培养（Primary Culture）阶段：或称 初代培养。从体内取出组织接种培养到第一次 传代，随不同的组织时间长短不一，一般为 1~4w 2.传代培养（Subculture）阶段：或称继代培 养。也就是细胞系（Cell line）阶段，细胞增 殖旺盛，一般细胞可传代10-50代）。
2.2.1动物细胞培养 (17张PPT)
5 传代培养
① 概念：贴满瓶壁的细胞 需重新用胰蛋白酶等处理， 然后分瓶继续培养，让细胞 继续增殖，这样的培养过程 称为传代培养。
注意：传一代是指分瓶培养 一次，不是细胞增殖一次。
5 传代培养
② 特点
传代10 代以 内 的细胞 保持 正 常的二 倍体 核
型。
一、动物细胞培养
小结
原代
传代
一、动物细胞培养
4. 条件
防止代谢产物积累对 细胞自身造成伤害
（1）无菌、无毒的环境 灭菌、添加抗生素、定期更换培养液
（2）营养
补充合成培养基缺乏的 物质，有利于细胞培养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等+血清
（3）温度和pH
36.5+0.5℃ pH 7.2-7.4
（4）气体环境
95%O2用于细胞呼吸， 5% CO2维持培养液的pH
一、动物细胞培养
5. 应用
① 生产生物制品 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等
② 应用于基因工程 ③ 检测有毒物质，判断某种物质的毒性 ④ 用于生理、病理、药理等方面的研究
谢谢！
2.2.1 动 物 细 胞 培 养
一、动物细胞培养
1. 定义 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，
将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中， 让这些细胞生长和增殖。
2. 原理 细胞增殖（有丝分裂）
一、动物细胞培养
3. 过 程
1 取动物组织块 2 分散成单个细胞 3 制成细胞悬液 4 原代培养 5 传代培养
胰蛋白酶除了可以消 化细胞间的蛋白质，长时 间作用也会消化细胞膜蛋 白，对细胞有损伤作用， 因此须控制好消化时间。
3 制成细胞悬液
动物细胞工程教学PPT
传代培养
将原代细胞进行传代培养， 使其在体外持续增殖的过 程。
细胞冻存与复苏
通过冷冻保存细胞，以便 在需要时进行复苏和培养。
动物细胞培养的常见问题与解决方案
01 02
污染问题
动物细胞培养过程中常见的污染源包括细菌、霉菌和支原体等。解决方 案包括定期检查培养环境、严格控制培养基和器具的灭菌过程以及及时 处理污染细胞。
动物细胞工程实验技术
动物细胞融合技术
动物细胞融合技术是指将两个或多个 动物细胞融合成一个细胞的过程，是 动物细胞工程中的重要技术之一。
动物细胞融合技术需要使用特定的融 合剂或电刺激等方法，使细胞膜融合， 形成异核或多核细胞。
该技术可用于制备单克隆抗体、诱导 多功能干细胞、研究细胞分化机制等 方面。
动物染色体工程需要严格遵守 伦理和法律规定，确保实验动 物的福利和安全。
动物基因编辑技术
动物基因编辑技术是指通过特定的基 因编辑工具对动物基因进行精确的修 饰和改造的技术。
动物基因编辑技术可以采用CRISPRCas9等基因编辑系统，对目标基因进 行敲除、敲入或定点突变等操作。
该技术可用于研究基因功能、治疗遗 传性疾病、制备转基因动物等方面。
经济和社会发展
动物细胞工程的发展将带动相关产业的发展，创 造就业机会，促进经济发展和社会进步。
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动物细胞工程教学
• 动物细胞工程概述 • 动物细胞培养技术 • 动物细胞工程实验技术 • 动物细胞工程的应用案例 • 动物细胞工程的未来展望
01
动物细胞工程概述
定义与特点
定义
动物细胞工程是以动物细胞为研究对象，通过细胞培养、细胞融合、基因转移 等技术手段，实现动物细胞在数量和质量上的改变，以应用于医学、农业、生 物工程等领域的技术。
guan3动物细胞培养PPT103页课件
悬浮培养类似微生物的深层培养。由于 是悬浮生长，细胞密度一般都较高，培 养的效率也高、操作也容易。
这种方法有多方面的优越性，易于大规 模生产，便于过程的控制。
可惜能在悬浮状态下生长的细胞种类有 限，且不太方便观察。
3.2 动物细胞培养 的基本技术
3.2.1 体外培养的条件
3.2.1.1 与微生物细胞培养相比动物 细胞培养的特殊性
Secondary culture－Cells taken from a primary culture and passed or divided in vitro. These cells have a limited number of divisions or passages.
tissue culture - the maintenance of a tissue or fragment in a way that may allow differentiation and preservation of the architecture and/or function
细胞贴壁延展过程
Contact inhibition When cells contact each other, they cease their growth. Cells arrest in G0 phase of the cell cycle. Transformed cells will continue to proliferate and pile up each other.
死亡。
3.1.2 体外培养
原代培养（亦称初代培养） 传代培养（亦称继代培养）。
Primary Culture
outgrowth and migration of cells
动物细胞培养(三佰)PPT
细胞分裂
细胞分裂是指活细胞增殖及其数 量由一个复制最初的DNA分子， 使遗传信息传递给下一代，是保 证物种稳定的基础。
细胞培养的环境因素
01
02
03
温度
维持一定的温度是细胞培 养的基本要求，因为温度 变化会影响细胞的生长和 代谢。
湿度
培养箱内的湿度应维持在 95%左右，以保证细胞的 正常代谢。
气体环境
细胞系建立与保存
筛选与鉴定
01
从原代细胞或传代细胞中筛选具有特定生物学特性的细胞系，
并进行鉴定。
细胞系建立
02
将筛选出的具有特定特性的细胞系进行培养，建立稳定的细胞
系。
细胞系保存
03
将建立的细胞系进行低温冷冻保存，确保细胞的遗传稳定性和
生物学特性。
细胞克隆技术
细胞克隆
在培养过程中，将单个细胞从群体中分离出来，并在培养瓶中形 成单克隆细胞群。
详细描述
异常的形态和功能可能是由于培养条件不适、基因突变等因 素引起的。为解决这一问题，需要密切观察细胞形态和功能 变化，调整培养条件，并采用适当的检测方法。
细胞传代过程中的变异问题
总结词
在动物细胞培养过程中，传代过程中可能会出现细胞变异问题，影响实验结果。
详细描述
变异可能是由于基因突变、染色体畸变等因素引起的。为解决这一问题，需要采用适当的检测方法，如基因突变 检测、染色体分析等，以确保细胞的稳定性和可靠性。同时，也需要优化传代方法，减少对细胞的损伤和变异的 可能性。
动物细胞培养(三佰)
• 引言 • 动物细胞培养的基本原理 • 动物细胞培养的过程 • 动物细胞培养的挑战与解决方案 • 动物细胞培养培养的定义
动物细胞培养是指在体外人工模拟体 内环境，将动物细胞种植在适宜的培 养基中，使其保持生长和繁殖的技术。
细胞分裂是指活细胞增殖及其数 量由一个复制最初的DNA分子， 使遗传信息传递给下一代，是保 证物种稳定的基础。
细胞培养的环境因素
01
02
03
温度
维持一定的温度是细胞培 养的基本要求，因为温度 变化会影响细胞的生长和 代谢。
湿度
培养箱内的湿度应维持在 95%左右，以保证细胞的 正常代谢。
气体环境
细胞系建立与保存
筛选与鉴定
01
从原代细胞或传代细胞中筛选具有特定生物学特性的细胞系，
并进行鉴定。
细胞系建立
02
将筛选出的具有特定特性的细胞系进行培养，建立稳定的细胞
系。
细胞系保存
03
将建立的细胞系进行低温冷冻保存，确保细胞的遗传稳定性和
生物学特性。
细胞克隆技术
细胞克隆
在培养过程中，将单个细胞从群体中分离出来，并在培养瓶中形 成单克隆细胞群。
详细描述
异常的形态和功能可能是由于培养条件不适、基因突变等因 素引起的。为解决这一问题，需要密切观察细胞形态和功能 变化，调整培养条件，并采用适当的检测方法。
细胞传代过程中的变异问题
总结词
在动物细胞培养过程中，传代过程中可能会出现细胞变异问题，影响实验结果。
详细描述
变异可能是由于基因突变、染色体畸变等因素引起的。为解决这一问题，需要采用适当的检测方法，如基因突变 检测、染色体分析等，以确保细胞的稳定性和可靠性。同时，也需要优化传代方法，减少对细胞的损伤和变异的 可能性。
动物细胞培养(三佰)
• 引言 • 动物细胞培养的基本原理 • 动物细胞培养的过程 • 动物细胞培养的挑战与解决方案 • 动物细胞培养培养的定义
动物细胞培养是指在体外人工模拟体 内环境，将动物细胞种植在适宜的培 养基中，使其保持生长和繁殖的技术。
动物细胞培养的应用PPT课件
磷酸钙与DNA形成不溶性沉淀，带正电荷的DEAE－葡聚 糖与带负电荷的DNA磷酸基团结合，阳离子树脂包裹 DNA形成脂质体。
渗透性休克和DMSO等化学试剂能促进DNA进入细胞。转 染试剂盒商业化供应，特别是脂质体材料的转染试剂。
影响因素：细胞培养物的密度、DNA的大小、纯度与用量、 化学试剂的用量与处理时间、促进剂的使用等。
第5页/共22页
抗体
由B细胞产生的免疫球蛋白，它能识别抗原的某一特定位点。抗体分 子由两个完全相同的重链分子以及两个完全相同的轻链分子组成。存在 于人或哺乳动物的血清之中。
抗原
有毒物质或病原物侵入，即抗原
指诱导产生抗体的物质。
侵入
抗体1 抗体2
如前所述，抗体分子是免疫系统反应的一个重要组分，因为抗体分子可以识 别各种不同的外来抗原，同时可激活宿主的防卫系统。
对于一个免疫刺激（有毒物质或病原物侵入，即抗原），每一个淋巴细胞都 会合成并分泌一种单个的抗体，这些抗体可以高度特异地识别免疫抗原的特定区域， 也就是抗原决定簇。由于一个抗原通常都有几个不同的抗原决定簇，因此每个免疫 淋巴细胞都可能产生一种针对某一个抗原决定簇的抗体，这些由同一抗原而产生的 不同的抗体统称为多克隆抗体。
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C127
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J558L
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0人Βιβλιοθήκη 巴细胞 ++0
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渗透性休克和DMSO等化学试剂能促进DNA进入细胞。转 染试剂盒商业化供应，特别是脂质体材料的转染试剂。
影响因素：细胞培养物的密度、DNA的大小、纯度与用量、 化学试剂的用量与处理时间、促进剂的使用等。
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抗体
由B细胞产生的免疫球蛋白，它能识别抗原的某一特定位点。抗体分 子由两个完全相同的重链分子以及两个完全相同的轻链分子组成。存在 于人或哺乳动物的血清之中。
抗原
有毒物质或病原物侵入，即抗原
指诱导产生抗体的物质。
侵入
抗体1 抗体2
如前所述，抗体分子是免疫系统反应的一个重要组分，因为抗体分子可以识 别各种不同的外来抗原，同时可激活宿主的防卫系统。
对于一个免疫刺激（有毒物质或病原物侵入，即抗原），每一个淋巴细胞都 会合成并分泌一种单个的抗体，这些抗体可以高度特异地识别免疫抗原的特定区域， 也就是抗原决定簇。由于一个抗原通常都有几个不同的抗原决定簇，因此每个免疫 淋巴细胞都可能产生一种针对某一个抗原决定簇的抗体，这些由同一抗原而产生的 不同的抗体统称为多克隆抗体。
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动物细胞培养(201X.3.26)ppt课件
细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞 生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的 改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这 种传代细胞为细胞系。
细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物
质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，
容易传代培养。
.
总结：动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动物的 组织、器官
剪碎、用胰蛋白酶处理
.
3、（旁栏思考）胰蛋白酶真的不会把细胞消 化掉吗？为什么？
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长 时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤 作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
.
4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或 组织做动物细胞培养材料？
.
3、过程
增殖能力强，分裂旺盛，分化 程度低，容易培养
.
原代培养 细胞贴壁
原代细胞
接触抑制
胰蛋白酶 分瓶传代培养
遗传物质未 改变
10—50代细胞(细胞株)
遗传物质己 改变
传代培养 无限传代（细胞系）
.
强调：细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系）
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞 生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存 活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。
分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排 出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞 的营养供应和代谢废物的排出都较困难。
.
2、（旁栏思考）用胰蛋白酶对动物组织进行 处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白 酶可以吗？
细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6 时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的 适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的 适宜pH为7.2～7.4。
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动物细胞培养技术的应用
克隆羊多莉（细胞核移植）
人Hale Waihona Puke 鼠（软骨细胞移植）动物细胞培养技术是动物细胞工程的基础。
动物育种（转基因动物）
保护濒临灭绝的动物(华南虎)
小结
动
概念
物
细
过程（重点）
胞
特点
培
养
应用（难点）
请各位专家批评指正
谢谢
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
动物细胞培养
1 引言 2 动物细胞培养技术 3 动物细胞培养的应用 4 小结
引言
•烧伤病人的治疗通常是取自身 健康皮肤进行自体移植。 •大面积烧伤病人，健康皮肤有 限，请同学们想想如何治疗呢？
引言
取患者的皮肤细胞进 行细胞培养，获得足 量的细胞再移植。
动物细胞培养概念
动物细胞培养就是从动物体 内取出相关的组织，将它分散成单 个细胞，然后，放在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。
传代培养：
将细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬液，分 装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
动物细胞生长的两大特点
■细胞贴壁生长
■细胞接触抑制
动物细胞培养条件
无菌、无毒的环境
（添加抗生素，定期更换培养液）
营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等）
温度和PH
温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4
原理：
细胞增殖
动物细胞培养过程
取组织块
剪碎
二氧化碳 培养箱
胰蛋白酶
加入培养液
贴满瓶壁
胰蛋白酶
原代培养
传代培养
动物细胞培养过程
选取胚胎或幼龄动物的组织器官
剪碎组织
胰蛋白酶处理 加培养液
细胞悬液
原代培养
培养瓶培养细胞
两个或两个以上 培养瓶中培养
传代培养
动物细胞培养的两种方式
原代培养：
从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。动 物组织消化后的初次培养称为原代培养。
气体环境
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
动物细胞培养技术的应用
单个细胞
一群细胞
直接使用
提取细胞产物
动物细胞培养技术的应用
1）生产蛋白生物制品： 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等
2）健康细胞培养： 如获得大量自身皮肤细胞，用于植皮。
3）用于检测有毒物质 MTT法、XTT法等
4）用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据