基于CAR-T治疗结直肠癌的临床探索研究设计(第十六次全国消化系病学术会议)

IL-12 IL-15 ……
CAR-T细胞治疗技术的优缺点
黎明前的黑暗
VS
1）CAR改造的T细胞只能瞄定目标细胞表 面抗原，具有靶向性； 2）CAR改造后的T细胞能够跨越HLA表达 下调这一肿瘤细胞免疫逃逸机制； 3）体内存留时间长，可以提供持续的治； 4）在肿瘤微环境中增强抗肿瘤效果，能够 1）CAR-T细胞治疗是靶点依赖型的治疗 ， 但不少肿瘤类型缺少良好的治疗靶点； 2）已被视为靶点的一些肿瘤相关抗原，也 会在正常细胞低水平表达，导致CART治疗 可能会产生脱靶毒性，引发严重副反应； 3）细胞因子释放综合征（CRS）；
免疫抑制性细胞的存在(regulatory T cells, myeloid derived suppressor cells, and
M2 tumor-associated macrophages)
抑制性细胞因子 (TGF-β, IL-10) 肿瘤细胞表面表达的T细胞功能抑制性蛋白分子 (B7-H family members, Fas ligand） 引导CAR-T向肿瘤灶归巢的趋化因子 从外周血侵润肿瘤组织的足够的CAR-T细胞(blocking endothelin B receptor*, degradation of tumor extracellular matrix ) CAR-T细胞回输前预处理 CAR-T细胞如何在体内有效增殖
Translational research
结直肠癌CAR-T治疗的展望
在结直肠癌的治疗上，采用转染和
表达效率远高于传统的慢病毒系统
的非病毒系统介导CAR基因进入T细 胞， 通过建立独特CAR-T细胞(带刹
车的CAR-T及双信号独立CAR-T系
统)的同时，创新性将CAR基因修饰 与导入其他相关基因，这一策略可
单链抗体LC1、LC2序列测序
Light chain 1
Light chain 2
Light chain 1
Light chain 2
Percent lysis of LOVO
LOVO RKO
Percent lysis of RKO
CAR-T体外杀伤结直肠癌细胞株
LOVO RKO
CAR–T 治疗实体瘤需要克服的障碍
CAR lentiviral vector Hybridoma from ATCC HC&LC sequencing FACS analysis Lentivirus generation CAR-T Construction CAR-T evaluation
FACS检测CD46在结直肠 癌细胞RKO表面的表达水 平
慢病毒系统
有效促进CAR-T细胞对结直肠癌实
体瘤的渗透作用，从而提高该疗法 对结直肠癌的治疗作用。
Thank You！
基于CAR-T治疗结直肠癌的 临床探索研究设计
第十六次全国消化系病学术会议
陈 瑞 高 庆 东南大学 2016-9-24 苏州
龄化进程的加快，我国结直肠癌发病率和死亡率呈逐步上升趋势，结
直肠癌已成为危害我国居民健康的主要恶性肿瘤之一。据统计，2011
年我国新发结直肠癌病例31万余人，死亡约15万人，位列恶性肿瘤发
病及死亡第五位。
CAR-T在结直肠癌上的应用
CD46是结直肠癌中差异表达上调最显著的 外泌型蛋白
CAR-T在结直肠癌上的应用
体细胞 干细胞
免疫系统 识别杀伤
各种癌症发生
外环境：辐射，致癌物，病毒感染 内环境：代谢，随机突变，微生态
细胞凋亡
发生机理-太多的未知领域

基因突变 逆分化 肿瘤干细胞 免疫监视 。。。。。。
*蛋白变异引起肿瘤 ห้องสมุดไป่ตู้肿瘤细胞表达PD-L1，可促进
肿瘤细胞增殖
肿瘤表现形式

相同组织器官癌症引发机理不一致 相同的机理引发癌症部位不一致 肿瘤突变：数千个突变类型
GPC3-CAR-T 全人源CAR-T与人 源化CAR-T CAR-T
爱康得（icartab） 西南医院和北大未名
Contents
一
二 三 四
肿瘤精准免疫治疗
CAR-T在实体瘤上的临床试验
CAR-T在结直肠癌上的应用
结直肠癌CAR-T治疗的展望
CAR-T for solid tumor
Combination therapy strategies
，也不乏一些最新的靶点，比如MCU-1、EPCAM和GPC3等。
而且针对实体瘤的研究占到了CAR-T总临床研究的50%以上。
国内CAR-T研究现状
研发单位 301解放军总医院 方向 CAR-T（最早） 临床实验 招募患者的临床试验 达到了8个 治疗效果 进行中
第三军医大学西南医 院生物治疗中心联合 血液科
肿瘤精准免疫治疗的开端
《科学》杂志评论作为2013年度最重要的科学突破的榜 首——癌症的免疫疗法。治疗的标靶是身体的免疫系统 而不是直接针对肿瘤，利用T细胞和其它免疫细胞来对 抗肿瘤。
肿瘤免疫治疗的突破
程序性死亡因子1 抗体(anti-PD1)
及其它免疫检查点抗体
嵌合抗原受体T细胞疗法（CAR-T 疗法） Cancer immunotherapy drugs have captured nearly 50% of the overall oncology drugs market, generating about $41.0 billion in 2014 alone
基于CAR-T治疗结直肠癌的 临床探索研究设计
第十六次全国消化系病学术会议
陈 瑞 岳 庆 东南大学 2016-9-24 苏州
Contents
一
二 三 四
肿瘤精准免疫治疗
CAR-T在实体瘤上的临床试验
CAR-T在结直肠癌上的应用
结直肠癌CAR-T治疗的展望
肿瘤发生的复杂性
基因突变积累
遗传因素： 原癌基因 100 抑癌基因 30 表观遗传学： 甲基化 组蛋白修饰 基因突变 DNA损伤与修复 恶性转 化细胞
Oncolytic Virus plus CAR-T
Lytic effect plus RANTES and IL-15
Combination therapy strategies
T expressing both CAR and heparanase
in vitro–cultured T lymphocytes lack expression of the enzyme heparanase (HPSE) Overexpression HPSE in T cells promoted tumor T cell infiltration and antitumor activity
抗体药物
过继免疫细胞治疗
嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）技术
CAR-T细胞治疗技术的发展
1st
Linker
2nd
3rd
4th
Extracellular domains
spacer
Leader
Transmembrane domain
CD3 Zeta
Intracellular domain
CD28
4-1BB&OX40
检测方法 基因测序突变 基因测序突变 FISH检测基因含量 基因测序突变 基因测序突变以及基因检测表达
PLX4032
伊马替尼/格列卫
靶向药物存在不足：有效性低；容易产生耐药性；适用范围窄等
抗肿瘤免疫反应
ACT Strategies 1. Promote antigen presentation 2. Enhance protective T cell response 3. Overcome immunosuppression


肿瘤特征精确分型
K-ras密码子12、13、61的突 变。 NCCN 2010年临床指南西妥
昔单抗治疗前基因检测。
肿瘤种类 非小细胞 肺癌 大肠癌 乳腺癌 黑色素瘤 胃间质瘤
靶向药物 易瑞沙（吉非替尼） 特罗凯（厄洛替尼） 西妥昔单抗/爱必妥 曲妥珠单抗 /赫赛汀
检测基因 EGFR、K-RAS、BRAF ALK K-RAS、BRAF HER2 BRAF（v600e) c-kit
CAR-T
白血病
完全缓解
上海肿瘤所
CAR-EGFR T细胞
晚期复发的多形性胶 质母细胞瘤(GBM) 6名难治、复发的肝 细胞癌患者 B急淋 临床试验（4个）
病人恢复状态良好，已 经顺利出院 2名患者体内的甲胎蛋白 （AFP）下降了90%以 上（其中1名患者AFP指 标恢复正常） 完全缓解 进行中
科济与仁济医院合作
靶向性疗法对比
传统抗体药 • • • • ADCC CDC 免疫阻断剂 可大规模工 业化制备 • 鼠抗HAMA反 应 • 实体瘤的浸 润难题 • 体内半衰期 问题 BiTE • 同时靶向肿 瘤细胞和免 疫细胞，一 般是T细胞 • 可大规模工 业化制备 • 体内半衰期 短 • 长期用药费 用高昂 抗体偶联药物 • 偶联小分子 细胞毒素 • 显著降低小 分子毒副作 用 • 可大规模工 业化制备 • 存在与传统 抗体药物同 样的问题 CAR-T • 带有“GPS” 的免疫细胞， 通常是NK、T 细胞 • 基于抗原-抗 体或受体-配 体的相互结 合，识别细 胞表面抗原 • 目前受限于 自体T细胞， 个体化制备 费时费力 • 通用型CAR-T 的需求 TCR-T • 模拟T细胞天 然的识别肿 瘤细胞过程 • 可靶向肿瘤 细胞表面的 抗原，也可 靶向胞内呈 递的肽段 • 高亲和力TCR 筛选难度大 • 受限于MHC/ 肽复合物 • 自体T细胞， 个性化制备 费时费力
在相对较短的时间内产生大量有肿瘤杀伤
效力的T细胞。
4）基于病毒表达体系的CAR-T技术的生物
安全性也需要引起重视。
CAR-T细胞治疗的流程
Naive
TCM
TEM
TEC
国内CAR-T研究现状
国内研究以与全球趋势相同，CD19仍是最受研发单位青睐的靶 点，占到所有临床试验的 34%。值得注意的是，在这些靶点中
Contents
一
二 三 四
肿瘤精准免疫治疗
CAR-T在实体瘤上的临床试验
CAR-T在结直肠癌上的应用
结直肠癌CAR-T治疗的展望
实体瘤-结直肠癌
结直肠癌是世界上仅次于肺癌和乳腺癌的第三大常见肿瘤，属于实体 瘤，发病率在发达国家和地区处于较高水平。20世纪70年代以来，随 着社会经济的发展，我国居民生活习惯、膳食结构的改变以及人口老