还原糖和总糖的测定方法

合集下载

总糖和还原糖的测定-高效液相色谱法

总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法葡萄酒、果酒－总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法(Ⅱ法)1 范围本方法适用于葡萄酒、果酒及其相关产品中总糖和还原糖含量的测定。

2 原理利用样品中各种组分在液固两相分配系数的不同，令样品通过液相色谱柱，而将样品中的果糖、葡萄糖、蔗糖与其他组分分离。

然后再利用示差折光检测器进行鉴定，用外标法定量。

3 试剂与溶液3.1 乙腈：色谱纯；3.2 超纯水；3.3 乙腈-水（75＋25）：将乙腈和水按（75＋25）的比例混合（或根据仪器情况调整该比例至分离效果最佳），用脱气装置充分脱气后，再用0.45μm的油系过滤膜过滤。

该溶液用做流动相；3.4 糖标准溶液（含总糖45.000g/L）：分别称取干燥的葡萄糖、果糖、蔗糖各1.500g（精确至0.001g），移入100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。

该溶液含葡萄糖、果糖、蔗糖分别为15.000g/L。

4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪：（配有记录系统或数据处理装置）；4.2 示差折光检测器；4.3 色谱柱：150 min×5.0mm（内径），Shim－pack CLCNH2 柱；4.4 微过滤膜：0.45μm，油系；4.5 脱气装置（或超声波装置）。

5 试样的制备将样品用超纯水稀释至含总糖量为45g/L 左右，并用0.45μm油系微过滤膜过滤。

6 分析步骤6.1 色谱条件a.柱温：室温；b.流动相：乙腈＋水；c.流速： 2mL/min；d.进样量：20μL。

6.2 测量：在同样的色谱条件下，将糖标准溶液和处理好的试样分别注入色谱仪。

开启记录系统后，扳动进样阀。

实验一-还原糖和总糖的测定-3-5-二硝基水杨酸比色法

实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计）.还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3，5—二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3—氨基—5—硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0。

9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉（1000 g）2．主要仪器(1）具塞玻璃刻度试管:20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2 （4)三角瓶：100 mL×1 (5)容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL×2；10 mL×1 （7)恒温水浴锅（8）煤气炉(9）漏斗（10)天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

(2）3,5-二硝基水杨酸(DNS）试剂3,5－二硝基水杨酸(DNS）试剂：称取6。

5 g DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇,摇匀，冷却后定容至1000 mL。

DNS比色法测定还原糖和总糖

乳粉中还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。

单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。

对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

三、实验材料和试剂1、实验材料乳粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取95℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。

②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。

③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。

④亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。

四、实验器材比色管：25ml×9 烧杯：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；5ml×2；10ml×1恒温水浴锅天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支比色管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

南京大学生化实验一：总糖和还原糖含量的测定

总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。

它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。

还原糖还能形成其他物质如有机酸等。

此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。

还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。

通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。

实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。

分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。

如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。

2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。

3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水杨酸法在波长540nm下，一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。

利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。

mbert-Beer定律A=lg(I0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（张茜配置）（4）6mol/L NaOH（张茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。

实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。

，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。

果蔬中还原糖与总糖的测定

果蔬中还原糖与总糖的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。

2、学习分光光度计的原理和操作方法。

3、了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理。

二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖，在本实验条件下可水解为还原单糖的蔗糖和麦芽糖，以及可部分水解为葡萄糖的淀粉。

多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。

三、实验器材1、材料：梨2.仪器：分光光度计、恒温水浴、电子分析天平、高速冷冻离心机、容量瓶（100ml）×2）玻璃漏斗、量筒、灰浆、锥形瓶、试管、移液管、pH试纸3。

试剂：蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。

标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000ml（可加几滴甲苯作防腐剂）。

6mol/lhcl溶液20%氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠固体，溶于蒸馏水中，稀释至100ml。

4、实验操作1、葡萄糖标准曲线的绘制：取6根大试管，从0到5编号，按下表加入每种试剂试剂管号标准葡萄糖溶液/ml蒸馏水/ml蒽酮试剂/mla620nm01.04.00.10.94.00.20.84.00.30.74.00.40.64.00.50.54.0012345置冰水浴中5min煮沸10min，冷却后室温放置10min，在620nm处比色以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标做图得标准曲线。

2、样品中还原糖的提取和测定称取1g梨，加入约3ml蒸馏水，在研钵中研磨成匀浆，移入三角瓶中，用约12ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，将洗涤液移入三角瓶中。

还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定

还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关1系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1( 实验材料小麦面粉;精密pH 试纸。

2( 主要仪器(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11(2)大离心管:50mL×2(3)烧杯:100mL×1(4)三角瓶:100mL×1(5)容量瓶:100mL×3(6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1(7)恒温水浴锅(8)沸水浴(9)离心机(10)扭力天平(11)分光光度计3( 试剂(1)1mg/mL 葡萄糖标准液2准确称取80?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4?冰箱中保存备用。

(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

食品中总糖、还原糖的测定

食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。

谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。

谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。

2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。

3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。

4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。

5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。

转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。

注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。

6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。

DNS法测定总糖和还原糖

实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

总糖和还原糖的测定实验报告

总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量测定的基本原理和方法。

2、熟悉分光光度计的使用操作。

3、了解样品处理和数据处理的方法。

二、实验原理1、总糖的测定总糖是指样品中所有糖类物质的总和，包括还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等）和非还原糖（如蔗糖等）。

在本实验中，采用酸水解法将非还原糖转化为还原糖，然后通过与 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂反应，测定总糖含量。

酸水解的反应式为：蔗糖＋ H₂O → 葡萄糖＋果糖DNS 试剂与还原糖在碱性条件下共热，被还原成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成正比，通过比色法测定吸光度，可计算出总糖的含量。

2、还原糖的测定还原糖具有还原性，能够直接与 DNS 试剂反应生成棕红色物质。

通过测定样品处理液与 DNS 试剂反应后的吸光度，与标准曲线对照，即可计算出还原糖的含量。

三、实验材料与仪器1、实验材料红薯、葡萄糖标准品、3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂、6mol/L 盐酸溶液、氢氧化钠溶液、酚酞指示剂等。

2、实验仪器电子天平、恒温水浴锅、分光光度计、容量瓶（100ml、500ml）、移液管（1ml、2ml、5ml、10ml）、具塞刻度试管、玻璃棒、漏斗、滤纸等。

四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）配制葡萄糖标准溶液：准确称取100mg 干燥至恒重的葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 100ml，得到浓度为 1mg/ml 的葡萄糖标准储备液。

（2）分别吸取 0、02、04、06、08、10ml 葡萄糖标准储备液于具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 1ml。

（3）向各试管中加入 1ml DNS 试剂，摇匀后在沸水浴中加热 5min，取出后立即用冷水冷却至室温。

（4）用蒸馏水定容至 10ml，摇匀。

以空白管（即 0ml 葡萄糖标准溶液）调零，在 540nm 波长处测定各管的吸光度。

（5）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

实验二、总糖和还原糖的测定

实验二、总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂热滴定法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。

实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。

在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。

糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。

本实验采用费林试剂热滴定法。

费林试剂由甲、乙两种溶液组成。

甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。

将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。

Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。

因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。

根据样液量可计算出还原糖含量。

试剂和器材一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。

乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。

0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入100 0mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。

总糖和还原糖的测定

试剂管号
HO (mL)
标准葡萄糖（mL）
总糖水解液(待测葡萄糖溶液）（mL）
铜试剂（mL）
沸水浴中煮沸 15 分钟
空白试验
1
2
4
2
2
4
标准试验
1
1
1
4
2
1
1
4
总糖试验
1
2
4
2
2
4
2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 1 mol/L HSO，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L Na2SO滴定至碘颜色接近消失时加入淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。五、计算
+ CuO↓
CHOH
+
+
2
酒石酸甲钠
可溶性的氧化铜络合物
葡萄糖பைடு நூலகம்
酒石酸甲钠
葡萄糖酸
实验二总糖和还原糖的测定分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 1 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次；实验二总糖和还原糖的测定 005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化钾溶液、单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖； 005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化钾溶液、而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。试剂铜试剂、0. 另取6个小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号。还原糖的测定方法多种，本实验采用间接滴定法。 005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化钾溶液、 Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 1 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次；实验二总糖和还原糖的测定 Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O 在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会影响滴定结果的准确性。（CHOH）4+ 2 H2O = 2 005 mol/L Na2S2O3滴定至碘颜色接近消失时加入淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。

总糖和还原糖的测定──费林试剂比色法

实验一总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。

实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2+ Na 2SO4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。

Cu 2O + K 4Fe(CN)6 + H 2O K 2Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH（氧化亚铜）（淡黄色）滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。

根据样液量可计算出还原糖含量。

2 O试剂和器材一、试剂碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。

碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。

0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。

6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。

碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

6N NaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。

实验一-3--5--二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖

实验一3, 5 -二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖1、实验目的：掌握还原糖和总糖测定的基本原理掌握比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

2、实验原理：在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

3、实验步骤：（一）葡萄糖标准曲线制作1. 取6个试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水2. 向各试管中分别加入DNS试剂1 ml，充分混合，放入沸水浴中加热煮沸2 min 进行显色，取出试管放入盛有冷水的烧杯中迅速冷却。

3.向各管中分别加入8 ml蒸馏水，充分混合。

4.以空白管（0号管）做对照，于540nm 波长下调0，然后测定各管的OD 值。

5.以光吸收值作为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。

如果该直线不通过零点，必须重做。

（二）还原糖的制备1. 称取2g玉米粉，把它放入一个100ml的三角瓶中，然后加入20~30ml蒸馏水，搅拌均匀。

2. 把三角瓶放于一个50℃水浴中保温30 min，不时搅拌。

3. 拿出三角瓶，将三角瓶内含物转入50ml的容量瓶中：过滤，定溶，充分混合，滤出液即为还原糖提取液。

(三) 样品总糖的水解和提取1. 取1g玉米粉，放在100ml三角瓶中，加15ml水溶解，再加10ml 6mol/L 盐酸，混匀。

2. 将三角瓶置于沸水浴中加热煮沸30 min。

3.取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。

如已水解完全，则不呈现蓝色。

4.拿出三角瓶，冷却，过滤，滤出液即为总糖提取液。

5.加入3-5滴酚酞指示剂，混匀，用6mol/L的NaOH中和至溶液呈微红色。

将中和后的溶液转入100 ml的容量瓶中定容。

（四）样品中含糖量的测定1. 取5支试管，编号，按下表向每支试管中加入试剂。

还原糖和总糖的测定实验报告

还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。

2、学会使用分光光度计进行定量分析。

3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。

二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。

产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。

通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。

2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。

先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。

水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。

三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。

2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。

四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。

（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。

（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。

（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。

（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。

（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

面粉中还原糖和总糖测定

比色法 , 二硝基水杨酸比色法
目的要求
⑴了解3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原理. ⑵掌握还原糖及总糖测定的操作方法.
实验原理
COOH OH
+ 还原糖
O2N NO2
加热碱性 O2N
COOH OH
+ 糖酸
NH2
3,5-二硝基水杨酸(黄色)
3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色)
结果与计算
�
非还原性的双糖(如蔗糖)以及多糖(如淀粉)可用酸水解法彻底水解成单糖进行测定. 由于多糖水解时,在每个单糖残基上加了一分子水,因而在计算时应乘以折算系数(1-18/180)=0.9.
操作步骤
一,样品中还原糖和总糖的提取 1,样品中还原糖的提取 , 2,样品中总糖的提取 ,
二,标准葡萄糖浓度梯度和样品待测液的测定

总糖和还原糖的测定

总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸法目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

黄色桔红色试剂和器材一、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。

葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。

6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。

碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

0.1% 酚酞指示剂。

二、材料藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。

三、器材723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

一、葡萄糖标准曲线制作取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg0 1 00.210.80.42 0.4 0.6 0.83 0.6 0.4 1.24 0.8 0.2 1.65 1 0 2操作方法在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。

以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。

以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

实验二总糖和还原糖的测定(精)

五、计算
X= 0.5 V空－ V标 X（V空－V未知）
六、注意事项
1.
各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸
水中，再同时从沸水浴中取出。
2.
在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会
影响滴定结果的准确性。
3.
滴定终点时溶液呈现二价铜离子的浅蓝色，切勿将它与终点混淆。
七、思考题
1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优点？
沸水浴中煮沸 15 分钟
2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的试管中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。
IO3¯ + 5 I¯ + 6 H Cu2O + I2 + H + I2 + 2 S2O3 2-
+
3 I 2 + 3 H 2O Cu
2+Βιβλιοθήκη + I ¯ + H2 O
S4O6 2-+ 2 I¯
因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度的标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还原糖的含量。
三、试剂与器材
1. 试剂铜试剂、0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化钾溶液、
0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液、1％淀粉指示剂
2. 器材碱式滴定管、恒温水浴锅
四、操作步骤
1. 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6

DNS法测还原糖和总糖

DNS法测还原糖和总糖一、配制试剂1.1mg/mL葡萄糖标准液预先将分析纯葡萄糖置于80℃烘箱内约12小时，至恒重。

准确称取500mg葡萄糖置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容至500mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。

2.3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200ml 2mol/L氢氧化钠溶液中(注意:在加入氢氧化钠过程中, 不适宜用高温促溶，溶液温度不要超过48℃)，接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。

再加入5g苯酚和5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000ml。

储存在棕色瓶中，避光暗处保存备用。

（室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月）二、绘制标准曲线将1mg/mL葡萄糖标准液制成浓度为0.5g/L的葡萄糖标准液，分别取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，补水至1mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值，浓度—吸光值作标准曲线，用1.0mL蒸馏水做空白对照。

三、还原糖测定取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm 处测定吸光值。

用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。

根据标准曲线计算出还原糖浓度。

四、总糖测定取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入6mol/L HCL溶液0.75mL，沸水浴20分钟，冷却至室温，加入6 mol/L NaOH溶液1.0mL，DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值。

用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。

根据标准曲线计算出总糖浓度。

五、原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，将3，5－二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。