根瘤或土壤中固氮酶活性的测定

乙烯形成量（n moles）=
纯乙烯气体体积（L） 22.4（L）
X 109
固氮酶活性用形成n moles/mg瘤鲜重或g干土/min表示。
思考题
固氮酶活性测定的原理是什 么？
为什么测定时要用带异丁基 胶塞密封的血清瓶？
用气相色谱仪时应注意哪些 重要环节？
实验十九
结束
2020/5/25
（但可根据固氮酶活性，改变灵敏度和衰减）。 乙炔气体。 100mL带有异丁基胶塞的血清瓶。 1mL、10mL（密封性能好的）注射器，100mL微量
注射器
实验程序
根瘤固氮活性的测定 土壤固氮酶活性的测定 乙烯含量的计算
实验程序ⅠHale Waihona Puke Baidu
（根瘤固氮活性的测定）
从田间挖取豆科植物植株，剪掉地上部分，根部 洗净，稍干，将结瘤的根系部分分别剪开，主根 上的瘤可直接剥下，侧根上的瘤要带少量根剪断， 将鲜根瘤称重，收集到100mL血清瓶中，立即 用异丁基胶塞密封，然后按瓶子中气相体积用注 射器从瓶中抽出5—10%的空气，再用注射器注 入等体积的C2H2，280C保温2h。取出瓶子，用 注射器吸出100uL的混合气体，用气相色谱仪以 外标法测定其固氮酶活性。
实验程序Ⅱ
（土壤固氮酶活性的测定）
取田间土样15g于100mL血清瓶中，加入 0.1mole/L葡萄糖液2mL，摇匀，塞上异丁 基胶塞，加铝盖密封。用注射器从瓶中抽出 5mL乙炔气体，280C培养2d。培养结束后， 用1mL注射器从瓶中吸出0.5mL气样，用气 相色谱仪测定其固氮酶活性。
实验程序Ⅲ
实验十九
根瘤或土壤固氮酶 活性的测定
2020/5/25
根瘤或土壤固氮酶活性的测定
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
初步掌握根瘤或土壤样品 中固氮酶活性测定的方法
实验材料
豆科植物根瘤或土壤样品。 102G型气相色谱仪/ 标准乙烯 灵敏度为103，衰减为1/128。 待测样品中乙烯 测定：灵敏度为104，衰减为1/1。
（乙烯含量计算）
因乙烯峰高与气体中乙烯含量成正比，故可用外标法来
测定待测样品中乙烯的量。
标准乙烯气体含量（%）X测样中乙烯气体峰高（mm）
测样中乙烯含量（%）=
标准乙烯气体峰高（mm）
X10
由乙烯含量的百分比，再根据血清凭中气相体积计算m moles数：
纯乙烯体积（L）= 测样中乙烯含量百分比 X气相体积（L）