Axopatch 200B膜片钳放大器的使用

面板设置
PIPETTE OFFSET ZAP SERIES RESISTANCE COMP. % PREDICTION SERIES RESISTANCE COMP. % CORRECTION SERIES RESISTANCE COMP. LAG WHOLE CELL CAP. SERIES RESISTANCE HOLDING COMMAND SEAL TEST METER MODE CONFIG. 约5.0左右 0.5 ms 0 %，OFF 0 %，OFF 1μs 0 pF，OFF 0 MΩ 0 mV，×1，OFF OFF VTRACK TRACK WHOLE CELL（β＝1） 单通道记录时选PATCH OUTPUT GAIN α＝0.5或1 LOWPASS BESSEL FILTER 1、2或5kHz LEAK SUBTRACTION ∞MΩ，OFF [注] 若做单通道记录，需要探头的冷却系统以降低噪声，因此要将后面板 HEADSTAGE COOLING的开关打开。
（四）记录 （1）关闭Membrane Test。
（2）打开EXT. COMMAND，从而使放大器与采样软件接通。
（3）选择设定好的Clampex采样软件的Protocol，开始记录细胞电信号。
主要内容
一、仪器功能特点介绍 二、全细胞/单通道记录操作步骤 全细胞/
三、常见问题
问题5： Neher和Sakmann合作主编的有关 膜片钳技术经典的书叫什么名字？现在 是第几版？
操作步骤
（一）准备封接 （1）打开Clampex的Membrane Test，设定封接测试脉冲电流方波的幅度 与频率（默认值分别为5mV和100Hz）、和Holding（一般设为 0mV）。 （2）在玻璃电极内维持一定的正压，用微操纵器使玻璃微电极进入记录液， 在Membrane Test中可见测试方波。观察电极电阻（Rt）的大小。 （3）在200B面板上，调节PIPETTE OFFSET，使Membrane Test中测试方 波的基线为0，使METER显示V-CLAMP模式。
主要内容
一、仪器功能特点介绍
二、全细胞/单通道记录操作步骤 全细胞/ 三、常见问题
二、全细胞/ 二、全细胞/单通道记录操作步骤
仪器连接
面板设置 操作步骤
仪器连接
1. 将放大器探头与放大器后面板HEADSTAGE插孔连接。 2. 放大器前面板（或后面板）SCALED OUTPUT输出给数模/模数转换 器的ANALOG IN模拟信号输入导联。如果使用示波器监测封接过程， 则还应将SCALED OUTPUT输出与示波器的输入连接。 3. 数模/模数转换器ANALOG OUT模拟信号输出导联输入到放大器后面 板EXTERNAL COMMAND INPUT（FRONT SWITCHED）。若要进行 电化学测定，则应输入到EXTERNAL COMMAND INPUT（REAR SWITCHED）。 4. 将转换器的TO DIGIDATA BOARD接口（Digidata 1200系列）或SCSI 输出口（Digidata 132x系列）与计算机转换器板卡接口连接。 Digidata 1440A直接以USB口与计算机连接。 5. 将放大器后面板TELEGRAPH OUTPUTS中的GAIN、FREQUENCY、 MODE和CELL CAPACITANCE输出给数模/模数转换器的ANALOG IN 模拟信号输入导联（Digidata 1200系列）或TELEGRAPH INPUTS （Digidata 132x系列 和1440A系列）导联。
问题4： 膜片钳技术的5种基本记录模式是什么？
CV-203BU探头的噪声
表. CV-203BU 探头的最大输入噪声 电极夹持器的 使用与否 频带宽 线频及倍频 0.1-100 不使用电极夹持器 0.1-1 0.1-5 0.1-10 使用电极夹持器 0.1-10 Hz kHz kHz kHz kHz PATCH 0.005 0.030 0.015 0.060 0.130 0.145 pA (p-p) pA (p-p) pA (rms) pA (rms) pA (rms) pA (rms) WHOLE CELL
β＝1
0.005 pA (p-p) 0.50 0.25 0.65 1.10 1.10 pA (p-p) pA (rms) pA (rms) pA (rms) pA (rms) 1.60 0.75 1.65 3.00 3.00
β＝0.1
0.005 pA (p-p) pA (p-p) pA (rms) pA (rms) pA (rms) pA (rms)
三、常见问题
问题 1. 为什么Axopatch 200B探头在工作时是热的，是不是有问题？ 答：探头冷却系统在工作时能将电容反馈电路的温度降低（约10℃），从而达到降低单通道记录噪声的目的。冷却系统在降低电路温度 时所产生的热量被散发到探头金属外壳，因而使探头变热，这是正常现象。
通过将探头与其固定板紧密接触可将其热量传导出去，这样能降低探头与
热平衡，不能很好地发挥降低噪声的功能。
问题 3. 在对Axopatch 200B进行功能检测时，发现开放电路的rms噪 声比Axopatch 200B规格中的rms噪声大，问题出在哪儿？ 答：请确保： （1）探头屏蔽网与探头地的接触良好。 （2）不要将探头屏蔽网靠探头输入端太近。 （3）200B后面板的SPEED TEST处于OFF位置。
（4）探头冷却功能钮（后面板HEADSTAGE COOLING）置于ON。
（5）电极电容补偿功能钮处于关闭状态（逆时针旋到底）。
问题 4. 可否用pClamp软件输出钳制电位给Axopatch 200B，而同时 又使用放大器SEAL TEST功能？ 答：若采用后面板EXTERNAL COMMAND INPUT (FRONT SWITCHED)输入pClamp的钳制命令，则不能同时使用放大器SEAL TEST 功能；但若采用后面板EXTERNAL COMMAND INPUT (REAR SWITCHED) 输入pClamp的钳制命令，则因其有单独的开关，所以可同时使用SEAL
TEST功能。
Байду номын сангаас
刘振伟 louis.liu@ 1860 7185 619
周围空气之间的温差。
问题 2. 当用Axopatch 200B进行全细胞记录时，需要使用探头冷却 功能吗？ 答：不需要！探头的冷却功能对全细胞记录没有任何帮助，因此全 细胞记录时，最好关闭放大器后面板HEADSTAGE COOLING开关。如果用 Axopatch 200B进行单通道记录，探头的冷却功能可有助于降低噪声。在 使用冷却功能时，要注意必须预热放大器探头，否则冷却系统可能达不到
Axopatch 200B特点 200B特点
（1）可以进行单通道与全细胞记录，由于其杰出的低噪声设计 （探头电容反馈电路、探头冷却设计），使其最适合于进 （探头电容反馈电路、探头冷却设计），使其最适合于进 行小电导的单通道记录。 （2）提供了全细胞记录模式下的高效能串联电阻补偿功能，同 时还可在电流钳模式下进行完善的串联电阻补偿。 （3）其探头提供3种设置，适合于记录从单通道、松散封接膜片 ）其探头提供3 到全细胞记录模式不同大小的电流。 到全细胞记录模式不同大小的电流。
（三）破膜 （1）将Holding设为细胞膜静息膜电位，继续给予负压吸吮或用Zap功能 电击打破细胞膜。 （2）破膜后，缓慢撤除电极内的负压。 （3）破膜成功的标志如下： （a）出现膜电容的充放电反应 （b）将MODE置于I＝0时，Vm显示出细胞静息膜电位 （c）Irms数值增加 （4）补偿膜电容和串联电阻。 • 调节WHOLE. CELL CAP和SERIES RESISTANCE（必要时还需调节 FAST和SLOW τ及MAG.）以消除膜电容瞬变值。 • 调节%PREDICTION、% COMPENSATION以及LAG对串联电阻进行 补偿。
2012年 2012年 Axon膜片钳系统专题培训班 Axon膜片钳系统专题培训班
2012.4.13 上海神经科学研究所
Axopatch 200B膜片钳放大器 200B膜片钳放大器 使用方法
主要内容
一、仪器功能特点介绍 二、全细胞/单通道记录操作步骤 全细胞/
三、常见问题
一、仪器功能特点介绍
特点 仪器前后面板 探头（Headstage）
（二）封接 （1）使玻璃微电极逐渐接触细胞，此时测试脉冲幅度下降，有时甚至消 失。去除正压并轻轻给予负压吸吮以形成稳定封接。封接形成后， 封接测试脉冲消失，仅出现电极电容瞬变值。 （2）观察封接电阻（Rt）的大小，一般全细胞记录要求封接电阻在1 GΩ 以上。根据所记录电流的大小，可能要求封接电阻更高。为了获得 更高的封接电阻，需要在电极制备上下些功夫，如涂胶、抛光等。 （3）补偿电极电容：用FAST和SLOW τ及MAG.对电极电容进行补偿。 （4）漏电流的去除：单通道记录可选Leak Subtraction功能。 全细胞记 录采用Clampex的P/N Leak Subtraction功能（在记录时施加）。 （5）经过上述步骤就形成了细胞贴附式单通道记录模式。如要形成内面 向外式，还需将膜片撕下。如要形成外面向外式或全细胞记录，还 需打破细胞膜。 （6）对于单通道记录，如果不做改变电压的脉冲实验，也可不必对电极 电容进行补偿。此时，若关闭Membrane Test，打开EXT. COMMAND，就可进行单通道记录。若进行全细胞记录，则还需要 进行下面的步骤。
注： p-p: 噪声的峰-峰值. rms: 噪声的均方根. 使用 8-极 Bessel 滤波器的情况下.
（引自 Axopatch 200B 膜片钳放大器用户手册, 美国 Axon 公司, 1999.）
探头输入调零 探头的零点漂移是比较缓慢的，但最好还是在使用后每隔一定 时间（一般为几星期）对零点进行调节。方法是：开启放大器，预 热至少1hr，在前面板MODE中选择电压钳模式（V-CLAMP），在 CONFIG.中选择PATCH（或WHOLE CELL）模式，保持探头断路。 在 后 面 板 PATCH HEADSTAGE OFFSET 中 用 螺 丝 刀 调 节 对 应 于 PATCH（或WHOLE CELL）的螺丝，使前面板仪表盘上所显示的电 流读数为0。