Axopatch 200B膜片钳放大器的使用

（四）记录 （1）关闭Membrane Test。
（2）打开EXT. COMMAND，从而使放大器与采样软件接通。
（3）选择设定好的Clampex采样软件的Protocol，开始记录细胞电信号。
主要内容
一、仪器功能特点介绍 二、全细胞/单通道记录操作步骤 全细胞/
三、常见问题
问题5： Neher和Sakmann合作主编的有关 膜片钳技术经典的书叫什么名字？现在 是第几版？
周围空气之间的温差。
问题 2. 当用Axopatch 200B进行全细胞记录时，需要使用探头冷却 功能吗？ 答：不需要！探头的冷却功能对全细胞记录没有任何帮助，因此全 细胞记录时，最好关闭放大器后面板HEADSTAGE COOLING开关。如果用 Axopatch 200B进行单通道记录，探头的冷却功能可有助于降低噪声。在 使用冷却功能时，要注意必须预热放大器探头，否则冷却系统可能达不到
面板设置
PIPETTE OFFSET ZAP SERIES RESISTANCE COMP. % PREDICTION SERIES RESISTANCE COMP. % CORRECTION SERIES RESISTANCE COMP. LAG WHOLE CELL CAP. SERIES RESISTANCE HOLDING COMMAND SEAL TEST METER MODE CONFIG. 约5.0左右 0.5 ms 0 %，OFF 0 %，OFF 1μs 0 pF，OFF 0 MΩ 0 mV，×1，OFF OFF VTRACK TRACK WHOLE CELL（β＝1） 单通道记录时选PATCH OUTPUT GAIN α＝0.5或1 LOWPASS BESSEL FILTER 1、2或5kHz LEAK SUBTRACTION ∞MΩ，OFF [注] 若做单通道记录，需要探头的冷却系统以降低噪声，因此要将后面板 HEADSTAGE COOLING的开关打开。
（4）探头冷却功能钮（后面板HEADSTAGE COOLING）置于ON。
（5）电极电容补偿功能钮处于关闭状态（逆时针旋到底）。
问题 4. 可否用pClamp软件输出钳制电位给Axopatch 200B，而同时 又使用放大器SEAL TEST功能？ 答：若采用后面板EXTERNAL COMMAND INPUT (FRONT SWITCHED)输入pFra Baidu biblioteklamp的钳制命令，则不能同时使用放大器SEAL TEST 功能；但若采用后面板EXTERNAL COMMAND INPUT (REAR SWITCHED) 输入pClamp的钳制命令，则因其有单独的开关，所以可同时使用SEAL
主要内容
一、仪器功能特点介绍
二、全细胞/单通道记录操作步骤 全细胞/ 三、常见问题
二、全细胞/ 二、全细胞/单通道记录操作步骤
仪器连接
面板设置 操作步骤
仪器连接
1. 将放大器探头与放大器后面板HEADSTAGE插孔连接。 2. 放大器前面板（或后面板）SCALED OUTPUT输出给数模/模数转换 器的ANALOG IN模拟信号输入导联。如果使用示波器监测封接过程， 则还应将SCALED OUTPUT输出与示波器的输入连接。 3. 数模/模数转换器ANALOG OUT模拟信号输出导联输入到放大器后面 板EXTERNAL COMMAND INPUT（FRONT SWITCHED）。若要进行 电化学测定，则应输入到EXTERNAL COMMAND INPUT（REAR SWITCHED）。 4. 将转换器的TO DIGIDATA BOARD接口（Digidata 1200系列）或SCSI 输出口（Digidata 132x系列）与计算机转换器板卡接口连接。 Digidata 1440A直接以USB口与计算机连接。 5. 将放大器后面板TELEGRAPH OUTPUTS中的GAIN、FREQUENCY、 MODE和CELL CAPACITANCE输出给数模/模数转换器的ANALOG IN 模拟信号输入导联（Digidata 1200系列）或TELEGRAPH INPUTS （Digidata 132x系列 和1440A系列）导联。
仪器前后面板
前面板
后面板
探头（Headstage） 探头（Headstage）
探头特点 （1）在单通道记录的电路中，CV-203BU探头 采用的是电容反馈技术，在全细胞记录电路中， 仍使用传统的电阻反馈技术。 （2）CV-203BU探头有3种设置，只需在仪器 前面板CONFIG.中进行选择，即可用来记录单通 道或全细胞电流。 （3）探头呈狭窄长条形，在有限的显微镜工 作距离下便于电极的操作。 （4）探头具有对电容反馈电路的冷却系统， 充分地降低电路温度，使单通道记录的噪声大大 降低。在降低电容反馈电路温度时，其热量通过 探头表面向外散发，所以探头表面是热的。
TEST功能。
刘振伟 louis.liu@dlnaturegene.com 1860 7185 619
Axopatch 200B特点 200B特点
（1）可以进行单通道与全细胞记录，由于其杰出的低噪声设计 （探头电容反馈电路、探头冷却设计），使其最适合于进 （探头电容反馈电路、探头冷却设计），使其最适合于进 行小电导的单通道记录。 （2）提供了全细胞记录模式下的高效能串联电阻补偿功能，同 时还可在电流钳模式下进行完善的串联电阻补偿。 （3）其探头提供3种设置，适合于记录从单通道、松散封接膜片 ）其探头提供3 到全细胞记录模式不同大小的电流。 到全细胞记录模式不同大小的电流。
三、常见问题
问题 1. 为什么Axopatch 200B探头在工作时是热的，是不是有问题？ 答：探头冷却系统在工作时能将电容反馈电路的温度降低（约10℃），从而达到降低单通道记录噪声的目的。冷却系统在降低电路温度 时所产生的热量被散发到探头金属外壳，因而使探头变热，这是正常现象。
通过将探头与其固定板紧密接触可将其热量传导出去，这样能降低探头与
（二）封接 （1）使玻璃微电极逐渐接触细胞，此时测试脉冲幅度下降，有时甚至消 失。去除正压并轻轻给予负压吸吮以形成稳定封接。封接形成后， 封接测试脉冲消失，仅出现电极电容瞬变值。 （2）观察封接电阻（Rt）的大小，一般全细胞记录要求封接电阻在1 GΩ 以上。根据所记录电流的大小，可能要求封接电阻更高。为了获得 更高的封接电阻，需要在电极制备上下些功夫，如涂胶、抛光等。 （3）补偿电极电容：用FAST和SLOW τ及MAG.对电极电容进行补偿。 （4）漏电流的去除：单通道记录可选Leak Subtraction功能。 全细胞记 录采用Clampex的P/N Leak Subtraction功能（在记录时施加）。 （5）经过上述步骤就形成了细胞贴附式单通道记录模式。如要形成内面 向外式，还需将膜片撕下。如要形成外面向外式或全细胞记录，还 需打破细胞膜。 （6）对于单通道记录，如果不做改变电压的脉冲实验，也可不必对电极 电容进行补偿。此时，若关闭Membrane Test，打开EXT. COMMAND，就可进行单通道记录。若进行全细胞记录，则还需要 进行下面的步骤。
问题4： 膜片钳技术的5种基本记录模式是什么？
CV-203BU探头的噪声
表. CV-203BU 探头的最大输入噪声 电极夹持器的 使用与否 频带宽 线频及倍频 0.1-100 不使用电极夹持器 0.1-1 0.1-5 0.1-10 使用电极夹持器 0.1-10 Hz kHz kHz kHz kHz PATCH 0.005 0.030 0.015 0.060 0.130 0.145 pA (p-p) pA (p-p) pA (rms) pA (rms) pA (rms) pA (rms) WHOLE CELL
（三）破膜 （1）将Holding设为细胞膜静息膜电位，继续给予负压吸吮或用Zap功能 电击打破细胞膜。 （2）破膜后，缓慢撤除电极内的负压。 （3）破膜成功的标志如下： （a）出现膜电容的充放电反应 （b）将MODE置于I＝0时，Vm显示出细胞静息膜电位 （c）Irms数值增加 （4）补偿膜电容和串联电阻。 • 调节WHOLE. CELL CAP和SERIES RESISTANCE（必要时还需调节 FAST和SLOW τ及MAG.）以消除膜电容瞬变值。 • 调节%PREDICTION、% COMPENSATION以及LAG对串联电阻进行 补偿。
β＝1
0.005 pA (p-p) 0.50 0.25 0.65 1.10 1.10 pA (p-p) pA (rms) pA (rms) pA (rms) pA (rms) 1.60 0.75 1.65 3.00 3.00
β＝0.1
0.005 pA (p-p) pA (p-p) pA (rms) pA (rms) pA (rms) pA (rms)
2012年 2012年 Axon膜片钳系统专题培训班 Axon膜片钳系统专题培训班
2012.4.13 上海神经科学研究所
Axopatch 200B膜片钳放大器 200B膜片钳放大器 使用方法
主要内容
一、仪器功能特点介绍 二、全细胞/单通道记录操作步骤 全细胞/
三、常见问题
一、仪器功能特点介绍
特点 仪器前后面板 探头（Headstage）
注： p-p: 噪声的峰-峰值. rms: 噪声的均方根. 使用 8-极 Bessel 滤波器的情况下.
（引自 Axopatch 200B 膜片钳放大器用户手册, 美国 Axon 公司, 1999.）
探头输入调零 探头的零点漂移是比较缓慢的，但最好还是在使用后每隔一定 时间（一般为几星期）对零点进行调节。方法是：开启放大器，预 热至少1hr，在前面板MODE中选择电压钳模式（V-CLAMP），在 CONFIG.中选择PATCH（或WHOLE CELL）模式，保持探头断路。 在 后 面 板 PATCH HEADSTAGE OFFSET 中 用 螺 丝 刀 调 节 对 应 于 PATCH（或WHOLE CELL）的螺丝，使前面板仪表盘上所显示的电 流读数为0。
热平衡，不能很好地发挥降低噪声的功能。
问题 3. 在对Axopatch 200B进行功能检测时，发现开放电路的rms噪 声比Axopatch 200B规格中的rms噪声大，问题出在哪儿？ 答：请确保： （1）探头屏蔽网与探头地的接触良好。 （2）不要将探头屏蔽网靠探头输入端太近。 （3）200B后面板的SPEED TEST处于OFF位置。
操作步骤
（一）准备封接 （1）打开Clampex的Membrane Test，设定封接测试脉冲电流方波的幅度 与频率（默认值分别为5mV和100Hz）、和Holding（一般设为 0mV）。 （2）在玻璃电极内维持一定的正压，用微操纵器使玻璃微电极进入记录液， 在Membrane Test中可见测试方波。观察电极电阻（Rt）的大小。 （3）在200B面板上，调节PIPETTE OFFSET，使Membrane Test中测试方 波的基线为0，使METER显示V-CLAMP模式。