泽泻与吴茱萸配伍前后的指标性化学成分变化研究
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[稿件编号 ] 20100409005 [基金项目 ] 中医药管理局方剂学重点学科建设基金和福建省科 技计划项目 (2010Y2004) [通信作者 ] 3 吴水生 ,教授 ,博士 ,主要从事中药复方物质基础与 药效相关性研究 , Tel: 059122861622, E2mail: wsstcm @ yahoo1cn [作者简介 ] 李小艳 ,讲师 ,主要从事中药复方物质基础研究 , Tel: 13599037179
中医杂志 , 1999, 26 ( 8) : 368. [ 2 ] 范济平. 小柴胡汤治疗加味治疗外感性眩晕 [ J ]. 云南中医杂
志 , 1990, 11 ( 3) : 18. [ 3 ] 彭国平 ,潘林梅 ,文红梅. 泽泻的对照品研究 [ J ]. 南京中医
药大学学报 :自然科学版 , 2001, 17 (3) : 154. [ 4 ] 李秀玲 ,徐青 ,张曦 ,等. HPLC 研究柴胡和赤芍配伍的化学成
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第 36卷第 2期
2011年 1月
Vol136, Issue 2
January, 2011
时间 /m in 0～3 3～10 10～25 20～40 40～60
表 1 洗脱梯度
B /%
2 2 ～40 40 ～55 55 ～90
本文以 HPLC为研究手段 ,比较了泽泻 2吴茱萸 药对在共同煎煮与单煎混合后化学成分在质和量上 的变化 。在本实验条件下 ,未能发现此药对共煎煮 后有明显的新化学成分产生 ,但是在主要化学成分 含量上的变化比较明显 。本研究比较了吴茱萸内 酯 、吴茱萸碱 、吴茱萸次碱和 232乙酰泽泻醇 B 4 种 化合物 ,其中保留时间为 25, 43, 46 m in的峰在含量 上的变化非常明显 ,经与对照品的 HPLC分析比对 , 25, 46 m in的峰所对应的化合物分别为吴茱萸内酯 和 232乙酰泽泻醇 B ,而 43 m in 所对应的峰未知 。 实验结果表明中药配伍后的化学成分不同于单味药 化学成分的简单加和 ,配伍后共煎煮过程中发生了 化学成分的量的变化 。通过 1∶1, 1∶3, 1∶6, 3 ∶1, 6∶1 等不同比例泽泻吴茱萸配伍共煎 ,发现以 3 ∶1 的比
中药泽泻和吴茱萸合用 ,在古医籍中有记载的 达 60 多首方剂 ,其中《兰室秘藏 》有 6 首 、《太平圣 惠方 》有 5首 、《普济方 》有 4 首 。当代学者胡强 [ 1 ] 应用木香顺气汤以平肝 ,升清降浊治疗高血压病疗 效肯定 。范济平 [ 2 ] 用加味小柴胡汤治疗外感性眩 晕取得显著效果 。作者在临床实践中也常将泽泻与 吴茱萸作为一个常用药对用于高血压病的治疗取得 肯定的疗效 。
合煎液 /%
31280 3 01955 3 11014 5 01823 1 21834 6 01265 8 01349 6 01099 5 11704 7 01492 7 01532 7 01139 3 61777 5 01398 5 01528 0 01446 5 01439 5 01021 7 01030 2 01119 2
90
A /%
9 98 ～60 60 ～45 45 ～10
10
一提取液进行分析 ,结果发现检测波长为 210 nm 时 所得图谱分离较好 ,出峰较多且响应值也比较高 。 因此 ,选择在 210 nm 检测波长进行 HPLC分析 。 2 结果
本文重点研究了泽泻 、吴茱萸配伍前后化学成 分的异同 ,发现 2药共煎煮导致某些化学成分产生 明显的量变 ,这种变化在 2药分别煎煮 ,再按配伍比 例混合的单煎混合液中未见发生 ,表明共煎煮是导 致化学成分发生明显变化 (下称化学成分动态变 化 )的原因 。笔者选择了泽泻 2吴茱萸配伍的 5种比 例为 1∶1, 1∶3, 1 ∶6, 3 ∶1, 6 ∶1。结果表明 ,在实验条 件下 ,不同比例配伍的泽泻 2吴茱萸合煎液与单煎混 合液相比 ,有明显的化学成分动态变化 ,见表 2。
差值 /%
11164 5 01088 2 01140 2 01110 4 - 01373 2 - 11092 9 - 21617 7 - 01295 9 - 41966 5 - 21793 3 01139 8 - 01211 7 31854 0 01114 8 01324 8 - 01511 2 - 21731 9 - 01102 1 - 01258 8 - 01705 8
化学成 分 含 量 发 生 共 煎 煮 动 态 变 化 的 还 有 HPLC谱图上保留时间为 29 m in所对应的峰 。其含 量变化随 2药比例而变化的规律 ,见表 2。
保留时间在 29 m in的成分溶出量与泽泻 2吴茱 萸的用量比例密切相关 ,增加量的多少与药对比例 间关系为 3∶1 > 1∶1 > 6∶1 > 1∶3 > 1∶6。表明当泽泻 2 吴茱萸 2药用量比为 3∶1时该峰对应物质的溶出率 最大 。
2011年 1月
Vol136, Issue 2
January, 2011
萸的用量比例密切相关 ,增加量的多少与药对比例 间关系为 1∶1 > 1∶6 > 1∶3 > 3∶1 > 6∶1。表明当泽泻 2 吴茱萸两药用量相等时该峰的溶出率最大 。
经过 HPLC同条件下几种对照品保留时间比较 , 供试品在 25, 29, 31, 46 m in对应的化学成分与对照品 的保留时间一致 ,具体为保留时间在 25 m in的峰所 对应的化合物为吴茱萸内酯 ,保留时间在 29 m in的 峰所对应的化合物为吴茱萸碱 ,保留时间在 31 m in 的峰所对应的化合物为吴茱萸次碱 ,保留时间在 46 m in的峰所对应的化合物为定 232乙酰泽泻醇 B。 3 讨论
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以 2药比例 3∶1为例 :合煎液经 HPLC分析 ,发 现合煎液在 210 nm 保留时间约为 25 m in时其峰面 积占全谱的 6178% ,而单混液中 ,该峰对应化学成 分的峰面积仅为 2192% ,所以合煎液中保留时间约 为 25 m in的峰所对应的化学成分在共煎煮过程中 产生了明显的量的变化 ,见图 1。两药配伍比例不 同时该峰对应化学成分的动态变化也随之不同 ,其 规律见表 2。
保留时间在 31 m in的成分溶出量与泽泻 2吴茱 萸的用量比例密切相关 ,增加量的多少与药对比例 间关系为 3∶1 > 1 ∶1 > 1 ∶6 > 6 ∶1 > 1 ∶3 。表明当泽 泻 2吴茱萸 2药用量比为 3∶1时该峰的溶出率最大 。
保留时间在 46 m in的成分溶出量与泽泻 2吴茱
第 36卷第 2期
复方在多药共煎煮后的化学成分并非方中各单 味药物化学成分的简单相加 ,其不同之处必然与复 方疗效优于单味药的事实有着内在的本质联系 。本 文以泽泻吴茱萸方这一药对为研究对象 ,从其化学 成分动态变化入手 ,研究和探讨 2 味药共煎煮前后 化学成分变化情况 ,为中药配伍理论提供科学依据 。 1 材料与方法 111 材料 泽泻 、吴茱萸药材购自福建同春药店 , 由福建中医药大学中药鉴定教研室杨成梓教授鉴定 为泽泻科植物泽泻 A lism a orien ta lis ( Sam1) Juzep 干 燥块茎 和芸 香科 吴茱 萸 Euod ia ru taeca rpa ( Juss1 ) Benth1 的干燥近成熟果实 。吴茱萸内酯 (批号 8002 200102) 、吴茱萸碱 (批号 0800220012)和吴茱萸次 碱对照品 (批号 080129702)均购自中国药品生物制
例共煎所得的有效成分含量是最高的 ,证明了中医 强调配比与用量的重要关系 。在本研究的基础上 , 对包含泽泻与吴茱萸药对更为复杂的复方化学成分 进行研究 ,有可能从本质上阐明复方作用的物质基 础 ,揭示中药方剂配伍的科学内涵 。
[参考文献 ] [ 1 ] 胡强 ,杨玉敏. 中西医结合治疗更年期高血压 30例 [ J ]. 辽宁
泽泻单煎液 :称取泽泻药材 20 g,煎煮与浓缩等 处理方法均同上 ,以保证各样品前处理的平行性与 可比性 。
吴茱萸单煎液 :称取吴茱萸药材 20 g,煎煮与浓 缩等处理方法均同上 。
泽泻 2吴茱萸单煎混合液 :分别取上述已经分别 制备好的泽泻与吴茱萸单煎液 ,按照该药对在方剂 配伍中的比例混合 ,然后样品用乙腈定容为 25 mL , 称重 ,超声 30 m in,补足减少的乙腈 ,静置 ,取上清液 待用 。 113 色谱分离条件 [ 728 ] Kromasil C18 100A 柱 ( 416 mm ×250 mm , 5μm ) ;流速 018 mL ·m in- 1 ;进样量 5μL;检测波长 210 nm ,流动相水 (A ) 2乙腈 (B )梯 度洗脱 ,见表 1。 114 波长的选择 [ 9210 ] 为选择最优化 HPLC 分析 条件 ,分别选用 225, 210, 207 nm 的检测波长 ,对同
表 2 泽泻 2吴茱萸不同配比单煎与共煎化学成分含量对比
比例 1∶1 1∶3 1∶6 3∶1 6∶1
保留时间 /m in
25 29 31 46 25 29 31 46 25 29 31 46 25 29 31 46 25 29 31 46
单煎混合液 /%
21115 8 01867 1 01874 3 01712 7 31207 8 11358 7 21967 3 01395 4 61671 2 31286 0 01392 9 01351 0 21923 5 01283 7 01203 2 01957 7 31171 4 01123 8 01289 0 01825 0
品检定所 。232乙酰泽泻醇 B 对照品由本实验室自 制 , 1 H , 13 C2NMR 和 M S数据与文献 [ 3 ]比较确认 ,纯 度经 HPLC检测大于 9919%。
日本岛津高效液相色谱仪 ( SPD 220A 紫外 2可见 光检测器 , LC220AT二元泵 ,岛津 LC solution 工作 站 ) ;电子分析天平 ( 1 /10 万 ,北京赛多利斯天平有 限公司 ) ;乙腈 (色谱纯 ,德国 MERCK公司 ) ;水 (重 蒸馏水 ) ;蒸馏水 ;其余试剂均为分析纯 。 112 样品的制备 [ 426 ] 泽泻 2吴茱萸合煎液 :按照其 在方剂配伍中的比例 (两药用量之和均为 20 g)混 合后采用传统方式煎煮 ,在砂锅中浸渍 30 m in、煎 2 次 (头煎 40 m in、二煎 30 m in) ,合并煎液浓缩至约 015 g·mL - 1 ,然后样品用乙腈定容为 25 mL ,称重 , 超声 30 m in,补足减少的乙腈 ,静置 ,取上清液待用 。
第 36卷第 2期
2011年 1月
ห้องสมุดไป่ตู้
Vol136, Issue 2
January, 2011
泽泻与吴茱萸配伍前后的指标性化学成分变化研究
李小艳 , 张秋萍 , 吴水生 3 , 许文 , 李德森
(福建中医药大学 药学院 , 福建 福州 350108)
[摘要 ] 选择泽泻 、吴茱萸 2味药为研究对象 ,以 HPLC为主要研究工具 ,研究了不同比例配伍的泽泻 2吴茱萸共煎液与 单煎混合液化学成分的异同 ,重点关注因 2味药共煎煮而产生的化学成分动态变化现象 ,总结了化学成分动态变化与药材配 伍不同比例之间的关系 。
[关键词 ] 泽泻 ;吴茱萸 ;共煎液 ;单煎混合液 ;化学成分 ;动态变化
11吴茱萸内酯 ; 21吴茱萸碱 ; 31吴茱萸次碱 ; 4 1232乙酰泽泻醇 B。
图 1 混合对照品 ( a)与泽泻 2吴茱萸 (3∶1) 药对 ( b) HPLC图 (210 nm )
不难看出 ,保留时间在 25 m in的化学成分含量 与泽泻 2吴茱萸用量比例相关 , 增加的数量依次为 3∶1 > 1∶1 > 1 ∶3 > 6 ∶1 > 1 ∶6 。表明 2 药用量比为 3∶1时该峰对应物质的溶出量最大 。
中医杂志 , 1999, 26 ( 8) : 368. [ 2 ] 范济平. 小柴胡汤治疗加味治疗外感性眩晕 [ J ]. 云南中医杂
志 , 1990, 11 ( 3) : 18. [ 3 ] 彭国平 ,潘林梅 ,文红梅. 泽泻的对照品研究 [ J ]. 南京中医
药大学学报 :自然科学版 , 2001, 17 (3) : 154. [ 4 ] 李秀玲 ,徐青 ,张曦 ,等. HPLC 研究柴胡和赤芍配伍的化学成
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第 36卷第 2期
2011年 1月
Vol136, Issue 2
January, 2011
时间 /m in 0～3 3～10 10～25 20～40 40～60
表 1 洗脱梯度
B /%
2 2 ～40 40 ～55 55 ～90
本文以 HPLC为研究手段 ,比较了泽泻 2吴茱萸 药对在共同煎煮与单煎混合后化学成分在质和量上 的变化 。在本实验条件下 ,未能发现此药对共煎煮 后有明显的新化学成分产生 ,但是在主要化学成分 含量上的变化比较明显 。本研究比较了吴茱萸内 酯 、吴茱萸碱 、吴茱萸次碱和 232乙酰泽泻醇 B 4 种 化合物 ,其中保留时间为 25, 43, 46 m in的峰在含量 上的变化非常明显 ,经与对照品的 HPLC分析比对 , 25, 46 m in的峰所对应的化合物分别为吴茱萸内酯 和 232乙酰泽泻醇 B ,而 43 m in 所对应的峰未知 。 实验结果表明中药配伍后的化学成分不同于单味药 化学成分的简单加和 ,配伍后共煎煮过程中发生了 化学成分的量的变化 。通过 1∶1, 1∶3, 1∶6, 3 ∶1, 6∶1 等不同比例泽泻吴茱萸配伍共煎 ,发现以 3 ∶1 的比
中药泽泻和吴茱萸合用 ,在古医籍中有记载的 达 60 多首方剂 ,其中《兰室秘藏 》有 6 首 、《太平圣 惠方 》有 5首 、《普济方 》有 4 首 。当代学者胡强 [ 1 ] 应用木香顺气汤以平肝 ,升清降浊治疗高血压病疗 效肯定 。范济平 [ 2 ] 用加味小柴胡汤治疗外感性眩 晕取得显著效果 。作者在临床实践中也常将泽泻与 吴茱萸作为一个常用药对用于高血压病的治疗取得 肯定的疗效 。
合煎液 /%
31280 3 01955 3 11014 5 01823 1 21834 6 01265 8 01349 6 01099 5 11704 7 01492 7 01532 7 01139 3 61777 5 01398 5 01528 0 01446 5 01439 5 01021 7 01030 2 01119 2
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A /%
9 98 ～60 60 ～45 45 ～10
10
一提取液进行分析 ,结果发现检测波长为 210 nm 时 所得图谱分离较好 ,出峰较多且响应值也比较高 。 因此 ,选择在 210 nm 检测波长进行 HPLC分析 。 2 结果
本文重点研究了泽泻 、吴茱萸配伍前后化学成 分的异同 ,发现 2药共煎煮导致某些化学成分产生 明显的量变 ,这种变化在 2药分别煎煮 ,再按配伍比 例混合的单煎混合液中未见发生 ,表明共煎煮是导 致化学成分发生明显变化 (下称化学成分动态变 化 )的原因 。笔者选择了泽泻 2吴茱萸配伍的 5种比 例为 1∶1, 1∶3, 1 ∶6, 3 ∶1, 6 ∶1。结果表明 ,在实验条 件下 ,不同比例配伍的泽泻 2吴茱萸合煎液与单煎混 合液相比 ,有明显的化学成分动态变化 ,见表 2。
差值 /%
11164 5 01088 2 01140 2 01110 4 - 01373 2 - 11092 9 - 21617 7 - 01295 9 - 41966 5 - 21793 3 01139 8 - 01211 7 31854 0 01114 8 01324 8 - 01511 2 - 21731 9 - 01102 1 - 01258 8 - 01705 8
化学成 分 含 量 发 生 共 煎 煮 动 态 变 化 的 还 有 HPLC谱图上保留时间为 29 m in所对应的峰 。其含 量变化随 2药比例而变化的规律 ,见表 2。
保留时间在 29 m in的成分溶出量与泽泻 2吴茱 萸的用量比例密切相关 ,增加量的多少与药对比例 间关系为 3∶1 > 1∶1 > 6∶1 > 1∶3 > 1∶6。表明当泽泻 2 吴茱萸 2药用量比为 3∶1时该峰对应物质的溶出率 最大 。
2011年 1月
Vol136, Issue 2
January, 2011
萸的用量比例密切相关 ,增加量的多少与药对比例 间关系为 1∶1 > 1∶6 > 1∶3 > 3∶1 > 6∶1。表明当泽泻 2 吴茱萸两药用量相等时该峰的溶出率最大 。
经过 HPLC同条件下几种对照品保留时间比较 , 供试品在 25, 29, 31, 46 m in对应的化学成分与对照品 的保留时间一致 ,具体为保留时间在 25 m in的峰所 对应的化合物为吴茱萸内酯 ,保留时间在 29 m in的 峰所对应的化合物为吴茱萸碱 ,保留时间在 31 m in 的峰所对应的化合物为吴茱萸次碱 ,保留时间在 46 m in的峰所对应的化合物为定 232乙酰泽泻醇 B。 3 讨论
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以 2药比例 3∶1为例 :合煎液经 HPLC分析 ,发 现合煎液在 210 nm 保留时间约为 25 m in时其峰面 积占全谱的 6178% ,而单混液中 ,该峰对应化学成 分的峰面积仅为 2192% ,所以合煎液中保留时间约 为 25 m in的峰所对应的化学成分在共煎煮过程中 产生了明显的量的变化 ,见图 1。两药配伍比例不 同时该峰对应化学成分的动态变化也随之不同 ,其 规律见表 2。
保留时间在 31 m in的成分溶出量与泽泻 2吴茱 萸的用量比例密切相关 ,增加量的多少与药对比例 间关系为 3∶1 > 1 ∶1 > 1 ∶6 > 6 ∶1 > 1 ∶3 。表明当泽 泻 2吴茱萸 2药用量比为 3∶1时该峰的溶出率最大 。
保留时间在 46 m in的成分溶出量与泽泻 2吴茱
第 36卷第 2期
复方在多药共煎煮后的化学成分并非方中各单 味药物化学成分的简单相加 ,其不同之处必然与复 方疗效优于单味药的事实有着内在的本质联系 。本 文以泽泻吴茱萸方这一药对为研究对象 ,从其化学 成分动态变化入手 ,研究和探讨 2 味药共煎煮前后 化学成分变化情况 ,为中药配伍理论提供科学依据 。 1 材料与方法 111 材料 泽泻 、吴茱萸药材购自福建同春药店 , 由福建中医药大学中药鉴定教研室杨成梓教授鉴定 为泽泻科植物泽泻 A lism a orien ta lis ( Sam1) Juzep 干 燥块茎 和芸 香科 吴茱 萸 Euod ia ru taeca rpa ( Juss1 ) Benth1 的干燥近成熟果实 。吴茱萸内酯 (批号 8002 200102) 、吴茱萸碱 (批号 0800220012)和吴茱萸次 碱对照品 (批号 080129702)均购自中国药品生物制
例共煎所得的有效成分含量是最高的 ,证明了中医 强调配比与用量的重要关系 。在本研究的基础上 , 对包含泽泻与吴茱萸药对更为复杂的复方化学成分 进行研究 ,有可能从本质上阐明复方作用的物质基 础 ,揭示中药方剂配伍的科学内涵 。
[参考文献 ] [ 1 ] 胡强 ,杨玉敏. 中西医结合治疗更年期高血压 30例 [ J ]. 辽宁
泽泻单煎液 :称取泽泻药材 20 g,煎煮与浓缩等 处理方法均同上 ,以保证各样品前处理的平行性与 可比性 。
吴茱萸单煎液 :称取吴茱萸药材 20 g,煎煮与浓 缩等处理方法均同上 。
泽泻 2吴茱萸单煎混合液 :分别取上述已经分别 制备好的泽泻与吴茱萸单煎液 ,按照该药对在方剂 配伍中的比例混合 ,然后样品用乙腈定容为 25 mL , 称重 ,超声 30 m in,补足减少的乙腈 ,静置 ,取上清液 待用 。 113 色谱分离条件 [ 728 ] Kromasil C18 100A 柱 ( 416 mm ×250 mm , 5μm ) ;流速 018 mL ·m in- 1 ;进样量 5μL;检测波长 210 nm ,流动相水 (A ) 2乙腈 (B )梯 度洗脱 ,见表 1。 114 波长的选择 [ 9210 ] 为选择最优化 HPLC 分析 条件 ,分别选用 225, 210, 207 nm 的检测波长 ,对同
表 2 泽泻 2吴茱萸不同配比单煎与共煎化学成分含量对比
比例 1∶1 1∶3 1∶6 3∶1 6∶1
保留时间 /m in
25 29 31 46 25 29 31 46 25 29 31 46 25 29 31 46 25 29 31 46
单煎混合液 /%
21115 8 01867 1 01874 3 01712 7 31207 8 11358 7 21967 3 01395 4 61671 2 31286 0 01392 9 01351 0 21923 5 01283 7 01203 2 01957 7 31171 4 01123 8 01289 0 01825 0
品检定所 。232乙酰泽泻醇 B 对照品由本实验室自 制 , 1 H , 13 C2NMR 和 M S数据与文献 [ 3 ]比较确认 ,纯 度经 HPLC检测大于 9919%。
日本岛津高效液相色谱仪 ( SPD 220A 紫外 2可见 光检测器 , LC220AT二元泵 ,岛津 LC solution 工作 站 ) ;电子分析天平 ( 1 /10 万 ,北京赛多利斯天平有 限公司 ) ;乙腈 (色谱纯 ,德国 MERCK公司 ) ;水 (重 蒸馏水 ) ;蒸馏水 ;其余试剂均为分析纯 。 112 样品的制备 [ 426 ] 泽泻 2吴茱萸合煎液 :按照其 在方剂配伍中的比例 (两药用量之和均为 20 g)混 合后采用传统方式煎煮 ,在砂锅中浸渍 30 m in、煎 2 次 (头煎 40 m in、二煎 30 m in) ,合并煎液浓缩至约 015 g·mL - 1 ,然后样品用乙腈定容为 25 mL ,称重 , 超声 30 m in,补足减少的乙腈 ,静置 ,取上清液待用 。
第 36卷第 2期
2011年 1月
ห้องสมุดไป่ตู้
Vol136, Issue 2
January, 2011
泽泻与吴茱萸配伍前后的指标性化学成分变化研究
李小艳 , 张秋萍 , 吴水生 3 , 许文 , 李德森
(福建中医药大学 药学院 , 福建 福州 350108)
[摘要 ] 选择泽泻 、吴茱萸 2味药为研究对象 ,以 HPLC为主要研究工具 ,研究了不同比例配伍的泽泻 2吴茱萸共煎液与 单煎混合液化学成分的异同 ,重点关注因 2味药共煎煮而产生的化学成分动态变化现象 ,总结了化学成分动态变化与药材配 伍不同比例之间的关系 。
[关键词 ] 泽泻 ;吴茱萸 ;共煎液 ;单煎混合液 ;化学成分 ;动态变化
11吴茱萸内酯 ; 21吴茱萸碱 ; 31吴茱萸次碱 ; 4 1232乙酰泽泻醇 B。
图 1 混合对照品 ( a)与泽泻 2吴茱萸 (3∶1) 药对 ( b) HPLC图 (210 nm )
不难看出 ,保留时间在 25 m in的化学成分含量 与泽泻 2吴茱萸用量比例相关 , 增加的数量依次为 3∶1 > 1∶1 > 1 ∶3 > 6 ∶1 > 1 ∶6 。表明 2 药用量比为 3∶1时该峰对应物质的溶出量最大 。