归一化法内标法外标法及标准加入法
仪器分析
1、仪器分析方法定量的一般方法有哪些归一化法，内标法，内标标准曲线法，外标法2、标准加入法的使用有哪些注意事项：(1) 待测元素的浓度与其对应的吸光度应呈线性关系。
(2 ) 为了得到较为准确的外推结果，最少应采用4个点（包括试样溶液本身）来作为外推曲线，并且第一份加入的标准溶液与试样溶液的浓度之比应适当，这可通过试喷试样溶液和标准溶液，比较两者的吸光度来判断。
增量值的大小可这样选择，使第一个加入量产生的吸收值约为试样原吸收值的一半。
(3) 本法能消除基体效应带来的影响,但不能消除背景吸收的影响。
这是因为相同的信号既加到试样测定值上，也加到增量后的试样测定值上，因此只有扣除了背景之后才能得到待测元素的真实含量，否则将得到偏高结果。
(4) 对于斜率大小的曲线（灵敏度差），容易引进较大的误差。
3、气相色谱方法对试样的要求有哪些？进样器温度对峰型有何影响？(1 ) 只要在气相色谱适用的温度范围内，具有20-1300pa蒸气压或沸点在500.C以下，热稳定性好，相对分子质量在400以下的物质，原则上均可采用气相色谱法进行分析。
(2 ) 当进样器温度过低时，灵敏度过低难以检测出试样峰型当进样器温度过高时，将试样分解，难以测出准确的峰型4、塔板理论的应用通常用塔板数（neff）来评价柱的效能比较符合实际。
neff 越大或Heff越小则色谱柱的柱效越高。
H= L / n5、色谱速率理论与Van-Deemter方程式的物理意义。
速率理论认为，单个组分粒子在色谱柱内固定相和流动相间要发生千万次转移，加上分子扩散和运动途径等因素，它在柱内的运动是高度不规则的，是随机的，在柱中随流动相前进的速度是不均一的。
H=A+B/u+CuA项为涡流扩散项；B/ u项为分子扩散项；C u为传质项；u为载气线速度，单位为cm/s。
6、色谱分析中定性和定量的基础是什么：定性的基础是出峰保留时间，定量的基础是色谱峰面积7、色谱方法中，分离组分与固定相性质，如何决定出峰顺序：相似相溶原理（1）分离非极性物质，一般选用非极性固定液，沸点低的先出峰，沸点高的后出峰（2）分离极性物质，选用极性固定液，极性小的先流出色谱柱，极性大的后流出色谱柱（3）分离非极性和极性混合物时，一般选用极性固定液，这时非极性组分先出峰，极性组分后出峰（4）对于能形成氢键的试样，一般选择极性的或是氢键形的固定液，不易形成氢键的先流出，最易形成氢键的最后流出。
加标
归一化法、内标法、外标法、标准加入法、加标回收率归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。
若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。
中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。
归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。
缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。
不适于微量杂质的含量测定。
把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法，称为归一化法。
各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量的变化的影响很小。
其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。
GC应用广于HPLC。
外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。
具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。
若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。
标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。
当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。
单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。
因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。
因此规定，y=ax+b b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%。
标准曲线法的优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。
特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用。
归一化法_内标法_外标法
归一化法_内标法_外标法归一化法是一种常用的分析方法，也被称为校正方法。
它的主要思想是将分析物与内标物一起处理，通过确定它们之间的响应因子，将分析物的响应信号进行校正，从而消除各种因素对分析结果的影响，提高分析的准确性和可靠性。
归一化法的原理基于分析物和内标物在特定的实验条件下具有相似的物理和化学特性，即在相同的取样条件下，它们在仪器中的峰面积应该是成比例的。
因此，通过比较分析物和内标物的响应信号大小，可以确定它们之间的响应因子，进而校正分析结果，消除引起误差的各种因素。
归一化法的优点是灵活性高，适用于各种样品和仪器。
通过选择适当的内标物和优化实验条件，可以获得较高的准确性和精密度。
由于内标物是与分析物一同处理的，因此还能消除样品制备和分析过程中的误差，提高分析结果的可靠性。
归一化法的主要缺点是需要选择适当的内标物和确定响应因子。
内标物必须和分析物在物理和化学上具有相似的特性，并且不受任何影响，否则将影响校正结果。
另外，响应因子的确定需要进行一系列复杂的实验，包括内标物和分析物的浓度、检测器响应等，因此需要更多的时间和实验成本。
内标法是一种常用的分析方法，它的原理是在样品中加入已知浓度的内标物，通过内标物与分析物的测量信号比较，利用比率的关系消除不可避免的实验误差，从而提高分析结果的准确性和可靠性。
内标法适用于需要深入研究分析物性质，掌握其分析过程的基本规律，通过外加内标物的方式进行校正。
相对于其他方法，内标法需要更少的分析时间和分析成本，并且可以获得较高的精密度和准确性，特别适用于需要分析多个样品的场合。
外标法不像归一化法和内标法那样需要专门选择一种标准物质，而是直接使用外标样品校正分析结果。
与其他方法相比，外标法操作简单，不需要选择内标物或者确定响应因子，因此适用范围广，特别适用于需要快速对大量样品进行分析的场合。
但外标法的精密度和准确性相对较低，因为各种误差因素都包括在了分析物信号和外标信号的比例关系中。
归一化法内标法外标法及标准加入法
归一化法把所有出峰地组分含量之和按计地定量方法，称为归一化法.各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量地变化地影响很小.文档来自于网络搜索其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果地影响也很小.应用广于.外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分地标准样品绘制标准工作曲线.具体作法是：用标准样品配制成不同浓度地标准系列，在与欲测组分相同地色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰地峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点地直线.若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差.标准工作曲线地斜率即为绝对校正因子.文档来自于网络搜索当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分地大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量.单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上地另一个点.因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法地误差较大.因此规定，地绝对值应不大于响应值是地.文档来自于网络搜索标准曲线法地优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适.特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用.文档来自于网络搜索标准曲线法地缺点：每次样品分析地色谱条件（检测器地响应性能，柱温度，流动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差.另外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分地标准样品（或已知准确含量地样品），因此对样品前处理过程中欲测组分地变化无法进行补偿.文档来自于网络搜索内标法选择适宜地物质作为欲测组分地参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上地响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入地量进行定量分析地方法称为内标法.文档来自于网络搜索内标法地关键是选择合适地内标物.内标物应是原样品中不存在地纯物质，该物质地性质应尽可能与欲测组分相近，不与被测样品起化学反应，同时要能完全溶于被测样品中.内标物地峰应尽可能接近欲测组分地峰，或位于几个欲测组分地峰中间，但必须与样品中地所有峰不重叠，即完全分开.文档来自于网络搜索内标法地优点：进样量地变化，色谱条件地微小变化对内标法定量结果地影响不大，特别是在样品前处理（如浓缩、萃取，衍生化等）前加入内标物，然后再进行前处理时，可部分补偿欲测组分在样品前处理时地损失.若要获得很高精度地结果时，可以加入数种内标物，以提高定量分析地精度.文档来自于网络搜索内标法地缺点：选择合适地内标物比较困难，内标物地称量要准确，操作较麻烦.使用内标法定量时要测量欲测组分和内标物地两个峰地峰面积（或峰高），根据误差叠加原理，内标法定量地误差中，由于峰面积测量引起地误差是标准曲线法定量地是由于进样量地变化和色谱条件变化引起地误差，内标法比标准曲线法要小很多，所以总地来说，内标法定量比标准曲线法定量地准确度和精密度都要好.文档来自于网络搜索标准加入法标准加入法实质上是一种特殊地内标法，是在选择不到合适地内标物时，以欲测组分地纯物质为内标物，加入到待测样品中，然后在相同地色谱条件下，测定加入欲测组分纯物质前后欲测组分地峰面积（或峰高），从而计算欲测组分在样品中地含量地方法.文档来自于网络搜索标准加入法地优点：不需要另外地标准物质作内标物，只需欲测组分地纯物质，进样量不必十分准确，操作简单.若在样品地前处理之前就加入已知准确量地欲测组分，则可以完全补偿欲测组分在前处理过程中地损失，是色谱分析中较常用地定量分析方法.文档来自于网络搜索标准加入法地缺点：要求加入欲测组分前后两次色谱测定地色谱条件完全相同，以保证两次测定时地校正因子完全相等，否则将引起分析测定地误差.文档来自于网络搜索。
谱图 & 数据处理外标法,归一化法, 校正面积归一化法, 内标
2014年5月26日星期一
3
2014年5月26日星期一
4
面积百分比法AREA%
AREA(i) AREA%= x 100%
ΣAREA(i)
假定 检测器响应都相同 所有组分都流出 所有组分都被检测到 优点 无需做校正 简单、快速的定量过程 进样量不要求严格 缺点 以上所有的假定 需测量所有的组分 所有的面积都必须准确
外标法（ESTD）
含量＝面积(i) x RF(i) 优点
校正检测器的响应 只对欲分析的组分峰做校正 无需所有峰都能被检测到
缺点
进样量必须准确 仪器必须有良好的稳定性 需定期做再校正
外标法（ESTD）
内标法（ISTD）
内标法 色谱分析中一种比较准确的定量方法，尤其在没有标 准物对照时，此方法更显其优越性。内标法是将一定重量 的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中， 然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物 和被测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子。 在样品中添加内标物，通过组分与内标峰的面积比， 对组分进行定量。 该方法减小了进样误差对定量结果的影响。
内标法（ISTD）
面积(i) x RF(i) x ISTD浓度 含量＝ 面积(ISTD) x RF(ISTD) 优点
进样量不严格要求 只对欲分析的组分峰做校正 校正检测器的响应
缺点
必须加一个组分进到样品
内标法（ISTD）
选择内标物的标准
1. 样品中不存在 2. 容易得到 3. 化学性质与样品相似 4. 不会与样品发生反应 5. 在感兴趣组分附近流出 6. 与其它组分分离度良好
校准面积归一法(NORM)
RF(i) x AREAi)
NORM%=
Σ[RF(i) x AREA(i)] 假定
内标法外标法归一化法的优缺点
内标法外标法归一化法的优缺点内标法、外标法和归一化法，听起来复杂，其实就像厨房里的调料，各有各的味道和用途。
先说说内标法。
这种方法就像在做菜的时候放点香料，增强了整体的风味。
你看，内标法通过加入已知浓度的标准物质来校正结果，这样一来，哪怕测量环境有点小变化，结果也能比较靠谱。
不过，内标法有个小问题，标准物质得和样品性质相似，不然就好比盐放在甜点里，完全不搭调啊。
再来聊聊外标法，这个方法就像是在外面找个好评，直接参考。
你得先测几个标准样品，建立一个关系模型，然后再用这个模型来算未知样品的浓度。
这种方法简单明了，特别适合一些常规分析，仿佛每次出门都能带上一个贴心的指南。
不过，这种方法也有风险，若标准样品的质量有问题，最终的结果可就让人哭笑不得了。
想象一下，你精心准备了一道菜，结果外面的调料全都是过期的，结果不堪入目。
接下来就是归一化法，这个方法有点像我们日常生活中的减肥，旨在消除数据中的干扰因素，确保结果的纯净。
归一化法通过调整数据，使得不同来源的数据可以直接比较，尤其在多样本实验中，简直是神器。
不过，归一化也有个缺陷。
你可能会失去一些关键信息，就好比为了减肥而忌口，最后发现自己失去了原本的风味，反而吃得不那么开心。
想想看，这三种方法就像是厨房里的三个大厨，各有各的绝活。
内标法就像是大厨加了秘制调料，外标法像是找了个食客的推荐，而归一化法则是根据大家的口味调整出最受欢迎的菜品。
选哪个，完全取决于你的需求，哪种更合适。
很多人对这三种方法的选择感到迷茫。
其实没必要太纠结，选适合自己的就好。
就像做饭，关键在于你想要什么样的口味，别太追求完美，有时候“简单就是美”。
所以，面对实验中的各种困惑，试着从实际出发，选择最贴近需求的方法。
分享个小窍门，别忘了在做实验的时候记录下每一个细节，哪怕是微不足道的小变化。
这就好比记下每次烹饪的经验，下一次做菜时能更得心应手。
无论是内标、外标还是归一化，都只是工具，关键在于你如何运用它们。
归一化法_内标法_外标法
归一化法normalization method 一种常用的色谱定量方法。
归一化法是把样品中各个组分的峰面积乘以各自的相对校正因子并求和，此和值相当于所有组分的总质量，即所谓“归一”，样品中某组分i的百分含量可用下式计算：pt%= Aifi/(A1f1+A2f2 + ....Anfn )*100式中f1、f2、fn…为各组分的相对校正因子，A1、A2、…An为各组分的峰面积。
如果操作条件稳定，也可以用峰高归一化法定量，此时组分i的百分含量可按下式计算：pt%= hifi/(h1f1+h2f2 + ....hnfn )*100式中f1、f2、fn、…为各组分在该操作条件下特定的峰高相对校正因子，h1、h2、…hn为各组分的峰高。
用归一化法定量时，必须保证样品中所有组分都能流出色谱柱，并在色谱图上显示色谱峰。
•定量方法色谱中常用的定量方法有：a.校正归一化法当试样中各组分都能流出色谱柱且在检测器上均有响应，各组分的相对校正因子已知时，可用此法定量。
组分i在混合物中的百分含量可由下式计算：其中fi可为质量校正因子，也可为摩尔校正因子。
若各组分的定量校正因子相近或相同（如同系物中沸点接近的组分），则上式可简化为：该法简称为归一化法。
校正归一化法的优点是：简便、准确，当操作条件如进样量、流速变化时，对定量结果影响很小。
缺点是：对该法的苛刻要求限制了该法的使用。
该法适合于常量物质的定量。
b.内标法所谓内标法是将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测物和内标物的质量及在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的百分含量。
当只需测定试样中某几各组分时，而且试样中所有组分不能全部出峰时，可用此法。
此法适合于微量物质的分析。
该法的计算公式如下：是被测组分相对于内标物的相对校正因子。
其中，fsi该法的优点是：受操作条件的影响较小，定量结果较为准确，使用上不象归一化法那样受到限制。
该法的缺点是：每次分析必须准确称量被测物和内标物，不适合于快速分析。
色谱定量计算三种方法,归一化法,内标法和外标法
色谱法是根据色谱峰的面积或高度进行定量分析的。
色谱定量计算方法很多，目前比较广泛应用的有归一化法、内标法和外标法。
1. 归一化法如果试样中所有组分均能流出色谱柱并显示色谱峰，则可用此法计算组分含量。
设试样中共有n个组分，各组分的量分别为m1，m2，……，m n，则i种组分的百分含量为：归一化法的优点是简便、准确，进样量的多少不影响定量的准确性，操作条件的变动对结果的影响也较小，对组分的同时测定尤其显得方便。
缺点是试样中所用的组分必须全部出峰，某些不需定量的组分也需测出其校正因子和峰面积，因此应用受到一些限制。
2. 内标法当试样中所有组分不能全部出峰，或只要求测定试样中某个或几个组分时，可用此法。
准确称取m(g)试样，加入某种纯物质ms(g)作为内标物，根据试样和内标物的质量比m s/m及相应的色谱峰面积之比，基于下式可求组分i的百分含量W i%：因为所以内标物的选择条件是：内标物与试样互溶且是试样中不存在的纯物质；内标物的色谱峰既处于待测组分峰附近，彼此又能很好地分开且不受其它峰干扰；加入量宜与待测组分量相近。
内标法的优点是定量准确，操作条件不必严格控制，且不象归一化法那样在使用上有所限制。
缺点是必须对试样和内标物准确称重，比较费时。
3. 外标法(亦称标准曲线法)该法是在一定色谱操作条件下，用纯物质配制一系列不同的浓度的标准样，定量进样，按测得的峰面积对标准系列的浓度作图绘制标准曲线。
进行试样分析时，在与标准系列严格相同的条件下定量进样，由所得峰面积从标准曲线上即可查得待测组分的含量。
外标法的优点是操作和计算简便，不需要知道所有组分的相对校正因子，其准确度主要取决于进样量的准确和重现性，以及操作条件的稳定性。
气相色谱定性定量分析方法
一、气相色谱定性分析
? 通常利用组分已知的标准物质在相同色谱 分析条件下的色谱峰的保留时间来确定
? 一定色谱条件下，每一种物质都 有一个确 定的保留值
二、气相色谱定量分析
? 气相色谱定量分析主要是确定样品中各种 组分的相对或绝对含量，方法有：
? 归一化法 ? 外标法 ? 内标法
准物质的相关色谱信息 ? 根据公? 归一化法 ? 外标法（标准曲线法） ? 内标准法 ? 标准加入法
（1）归一化法
以试样中被测组分经校正的峰面积（或峰高）占试样各组分 经校正的峰面积（或峰高）的总和的比例
?
i
?
mi m
?
m1 ?
mi m2 ? ?
ms fi hi m样品 f shs
内标法中常以内标物为基准，即fs＝1.0，则：
?i
?
mi m
?
ms fi Ai m试 As
? 内标法最关键是选择合适的内标物，对内标物的 要求：
? 内标物应是试样中不存在的纯物质 ? 内植物的性质应与待测组分性质接近，内标物的色谱
峰应在待测组分色谱峰附近并完全分离 ? 加入内标物的量应接近待测组分的量 ? 内标物应与试样完全互溶，不可发生化学反应
1.定量校正因子
? 色谱定量分析是基于被测物质的量与其峰面积的 正比关系。但由于同一检测器对不同的物质具有 不同的响应值，所以 两个相等量的物质出的峰面 积往往不相等 ，或者说，相同的峰面积并不意味 着相等物质的量 。这样就不能用峰面积来直接计 算物质的量。
? 因此，在计算组分的量时需将面积乘上一个换算 系数，使组分的面积转换成相应物质的量。即必 须将峰面积 A乘上一个换算系数进行“校正”。
? ? mn
归一化法,内标法,外标法
归一化法、内标法、外标法是色谱定量分析中常用的
方法：
归一化法、内标法、外标法是色谱定量分析中常用的方法：
1.归一化法：将色谱峰的面积与标准物的质量直接比较，从而得到组分的含
量。
它是最简便的定量方法，但它的准确性受进样量的重复性和实验条件稳定性的影响。
即使进样量不准确，对结果亦无影响，操作条件的变动对结果影响也较小。
适用于试样中所有组分都能流出色谱柱，并且在色谱图上都显示色谱峰的样品测定。
但若试样中的组分不能全部出峰，则不能应用此方法。
2.内标法：选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，
以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法。
此法的优点是在进样量不超限的范围内，定量结果与进样量的重复性无关。
缺点是样品配制比较麻烦和内标物不易找寻。
3.外标法：用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的
响应信号相比较进行定量的方法。
此法的优点是方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。
缺点是此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。
请根据实际需要和实验条件选择合适的定量分析方法。
归一化法 内标法 外标法
归一化法内标法外标法归一化法、内标法与外标法在科学研究和实验分析中，归一化法、内标法和外标法是常用的数据处理方法。
它们旨在减小误差、提高数据可靠性，从而使实验结果更加准确和可比较。
本文将对这三种方法进行详细介绍，并分析它们的应用场景和优缺点。
一、归一化法归一化法是一种将数据进行标准化处理的方法，通过将数据映射到特定的范围内，消除不同尺度和变化幅度的影响，以便更好地进行比较和分析。
常用的归一化方法有线性归一化、零均值归一化和标准差归一化等。
1.1 线性归一化线性归一化是将数据映射到0和1之间的方法。
公式如下：$$x' = \frac{x - x_{min}}{x_{max} - x_{min}}$$其中，$x$为原始数据，$x_{min}$和$x_{max}$分别为数据的最小值和最大值。
线性归一化保留了原始数据的相对关系，适用于对数据的相对大小进行比较和分析的场景。
1.2 零均值归一化零均值归一化是将数据的均值调整为0的方法。
公式如下：$$x' = \frac{x - \mu}{\sigma}$$其中，$x$为原始数据，$\mu$为数据的均值，$\sigma$为数据的标准差。
零均值归一化可以消除不同数据之间的偏差，使得数据更加可比较和稳定。
1.3 标准差归一化标准差归一化是将数据的均值调整为0，标准差调整为1的方法。
公式如下：$$x' = \frac{x - \mu}{\sigma}$$标准差归一化除了具有零均值归一化的优点外，还可以进一步消除数据之间的尺度差异。
因此，标准差归一化常用于对数据的分布进行分析和建模的场景。
二、内标法内标法是通过在实验过程中引入内部参照物质，将待测物质和内标物质的测量结果进行比较和校正的方法。
内标法的原理是通过内标物质的稳定性和可追踪性，来消除仪器误差和实验误差对结果的影响。
2.1 内标物质的选择在内标法中，选择合适的内标物质非常重要。
内标物质应具备与待测物质相似的特性，并且在实验过程中能够稳定存在。
气相色谱液相色谱归一法操作
气相、液相色谱仪里常说的面积归一法、内标法、外标法等分别是什么意思？面积归一化法,以总面积为100%,计算纯度多用;外标法,需单独用标准品作成一标准曲线,用于分析供试品;内标法,除标准品外,还需引入一种合适的内标物,以标准品与内标物响应值的比值作标准曲线,求解供试品与内标物响应值的比值所对应的供试品的量.气相色谱准归一化法或相对归一化法以及该方法的应用条件定量测量时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法，测定杂质含量时须采用峰面积法。
1、内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量(1)按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。
取一定量注入仪器，记录色谱图。
测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：As／Cs校正因子（f）＝———————AR／CR式中 As—内标物质的峰面积或峰高； AR—对照品的峰面积或峰高；Cs—内标物质的浓度； CR—对照品的浓度。
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或其杂质）和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：Ax含量（C x）＝f×———————As内／Cs内式中 Ax—供试品（或其杂质）峰面积或峰高； C x—供试品（或其杂质）的浓度；As内—内标物质的峰面积或峰高； Cs内—内标物质的浓度；f—较正因子当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液，使用同一浓度的内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。
(2) 内标物质的选择① 内标物质应是样品中部含有的组分，否则会使峰重叠而无法准确测量内标物质的峰面积。
② 内标物质的保留时间应与待测成分接近，并达到完全分离，即分离度R>1.5。
③ 内标物质应是纯度符合要求的化合物，若非纯品，无干扰峰也可使用，已知含量的较蠢物质也可使用，但须扣除内标物质的重量。
8种常见的药物分析方法(附药物分析中各种定量方法的优缺点 )
药物分析是以药品质量标准为依据，对药物中的相关成分、含量进行检测与分析，以对药品质量的优劣及真伪做出评定。
药物分析的主要方法包括化学物理的以及生物分析等方法。
汇总了药物分析中常用的8种检测方法，希望你能对你有所帮助。
药物分析是以药品质量标准为依据，对药物中的相关成分、含量进行检测与分析，以对药品质量的优劣及真伪做出评定。
药物分析检测可研究药品及其制剂的组成、理化性质、真伪鉴别、纯度检查及测定其有效成分的含量，并保证人们用药安全、合理、有效。
开展药物分析之前，需要配备适用的药品质量检测设备等仪器，这是保证药品质量检验工作开展的基础。
在进行药物分析时，需要严格遵守检验操作流程，保证药品质量检测结果准确可靠。
药品质量检验的样品包括药材原材料样品、辅料样品、半成品、包装材料、生产过程中产生的废物以及与药品直接或间接关系的材料等。
检验样品和方法需要经过相关授权人员和药品检验人员按规定操作验证，记录并完成检验报告后及时送审。
药物分析检测对于药物研发至关重要，通过药物分析方法可以了解药物的药效、主要成分及理化性质等。
药物分析的主要方法包括化学物理的以及生物分析等方法。
化学检验则是药品在化学分析仪器等一系列化学反应条件下所表现出来的化学性质、反应强度及其影响等，是现今药品质量检验检测中应用最为广泛、最主要的方法，能够综合全面的分析和评价药品的质量与效果。
物理检测方法是指通过电、热、光等常规物理条件作用下对药品的物理机械性能进行检验。
生物技术方法主要包括电泳技术和PCR技术等。
常见的药物分析方法如下：1、重量分析法重量分析法是药物分析检测中化学分析的基础方法，指的是称取一定重量的试样，用适当的方法将被测组分与试样中其他组分分离后，转化成一定的称量形式，称重，从而求得该组分含量的方法。
根据分离方法的不同，重量分析法通常分为沉淀重量法、挥发重量法、提取重量法和电解重量法，其优点是直接采用分析天平称量的数据来获得分析结果，在分析过程中不需要标准溶液和基准物质，也就不需要容量器皿引入数据，这样引入的误差较小，因此分析结果准确度较高。
色谱定量分析方法可以分为外标法
色谱定量分析方法可以分为外标法、内标法、归一化法三大类。
当能够精确进样量的时候，通常采用外标法进行定量。
这种方法标准物质单独进样分析，从而确定待测组分的校正因子；实际样品进样分析后依据此校正因子对待测组分色谱峰进行计算得出含量。
其特点是标准物质和未知样品分开进样，虽然看上去是二次进样，但实际上未知样品只需要一次进样分析就能得到结果。
外标法的优点是操作简单，不需要前处理。
缺点是要求精确进样，进样量的差异直接导致分析误差的产生。
外标法是最常用的定量方法，其计算过程如下：1．绝对校正因子gi的计算gi＝ms／Ai式中ms是标准样品中组分i的含量，Ai是标准样品谱图中组分i的峰面积。
2．外标法的计算公式mi＝Ai * gi这里mi是未知样品中组分i的含量。
（相对校正因子是某组分的绝对校正因子与标准物质绝对校正因子的商。
计算公式如下：Gi＝gi／gs式中gi是组分i的绝对校正因子，gs是标准物质的绝对校正因子。
对同一类型的不同检测器来说，在组分i和s相同的情况下，相对校正因子是基本一致的。
它只和检测器的性能、待测组分的性质、标准物质的性质、载气的性质相关，与操作条件无关。
也就是说基本上可是认为相对校正因子Gi是一个常数。
相对校正因子在好多相关文献上可以查到，在无法找到所有组分标准样品的时候，可以参考使用。
但是由于不同检测器的性能有一定的差异，因此相对校正因子最好在使用的色谱上单独测定）归一化法有时候也被称为百分法（percent），不需要标准物质帮助来进行定量。
它直接通过峰面积或者峰高进行归一化计算从而得到待测组分的含量。
其特点是不需要标准物，只需要一次进样即可完成分析。
归一化法兼具内标和外标两种方法的优点，不需要精确控制进样量，也不需要样品的前处理；缺点在于要求样品中所有组分都出峰，并且在检测器的响应程度相同，即各组分的绝对校正因子都相等。
选择适宜的物质作为预测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测定组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入量进行定量分析的方法叫内标法。
色谱分析定量方法如何选择
色谱分析定量方法如何选择？色谱分析的重要作用之一是对样品定量。
而色谱法定量的依据是：组分的重量或在载气中的浓度与检测器的响应信号成正比。
常见定量分析方法分为面积归一化法、内标法、外标法、标准曲线法等。
大家常常容易傻傻分不清楚的莫过于内标法、外标法了。
以内标法为例，选一与欲测组分相近但能完全分离的组分做内标物（当然是样品中没有的组分），然后配制欲测组分和内标物的混合标准溶液，进样得相对校正因子。
再将内标物加入欲测组分的样品中，进样后测得欲测组分和内标物的定量参数，用内标法公式计算即可。
其实，从定义上来区分的话，外标法就是用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线,测出样品的峰面积或峰高,在标准曲线上查出其对应的浓度,这是最常用的一种定量方法；内标法是对应外标法说的，内标法是将一定量的纯物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。
外标法需要用样品和标准品对比，但是有时我们很难保证样品和标准品进的体积是一样的，毕竟要有误差，这时候就用内标法，就是在外标法的基础上,在样品和标准品里在加入一种物质，通过加入物质的峰面积或峰高的变化,就可以看出我们标准品和样品进样体积的差别，但同时会引进加入物质的秤量误差。
所以一般用外标法来定量,如果进样体积很难掌握，就用内标法，可以消除进样体积的误差。
外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。
具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。
若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。
标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。
当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。
归一化法外标法内标法的区别
色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。
C.%-―7 -------------- -------- T -------------------- L X 100 =二L‘ 1广X 100%扎求+血去+血迟十…+血£匸扎灵⑺34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。
中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。
(7.35)A.a%- ---------------- ---------- x 100^爲十血十缶十・*■十百丸归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关（在色谱柱不超载的范围内）、操作条件略有变化时对结果影响较小。
缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。
不适于微量杂质的含量测定。
二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。
此法可分为工作曲线法及外标一点法等。
工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。
在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。
通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。
工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量＜外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。
将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W= A(WY / (Ay(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。
(W)三及(A Y分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。
归一化法、内标法、外标法及标准加入法
归一化法、内标法、外标法及标准加入法归一化法把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法，称为归一化法。
各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量的变化的影响很小。
其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。
GC应用广于HPLC。
外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。
具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。
若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。
标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。
当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。
单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。
因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。
因此规定，y=ax+b b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%。
标准曲线法的优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。
特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用。
标准曲线法的缺点：每次样品分析的色谱条件（检测器的响应性能，柱温度，流动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差。
另外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分的标准样品（或已知准确含量的样品），因此对样品前处理过程中欲测组分的变化无法进行补偿。
内标法选择适宜的物质作为欲测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法称为内标法。
归一化法内标法外标法
归一化法normalization method 一种常用的色谱定量方法。
归一化法是把样品中各个组分的峰面积乘以各自的相对校正因子并求和，此和值相当于所有组分的总质量，即所谓“归一”，样品中某组分i的百分含量可用下式计算：pt%= Aifi/(A1f1+A2f2 + ....Anfn )*100式中f1、f2、fn…为各组分的相对校正因子，A1、A2、…An为各组分的峰面积。
如果操作条件稳定，也可以用峰高归一化法定量，此时组分i的百分含量可按下式计算：pt%= hifi/(h1f1+h2f2 + ....hnfn )*100式中f1、f2、fn、…为各组分在该操作条件下特定的峰高相对校正因子，h1、h2、…hn为各组分的峰高。
用归一化法定量时，必须保证样品中所有组分都能流出色谱柱，并在色谱图上显示色谱峰。
定量方法色谱中常用的定量方法有：a.校正归一化法当试样中各组分都能流出色谱柱且在检测器上均有响应，各组分的相对校正因子已知时，可用此法定量。
组分i在混合物中的百分含量可由下式计算：其中fi可为质量校正因子，也可为摩尔校正因子。
若各组分的定量校正因子相近或相同（如同系物中沸点接近的组分），则上式可简化为：该法简称为归一化法。
校正归一化法的优点是：简便、准确，当操作条件如进样量、流速变化时，对定量结果影响很小。
缺点是：对该法的苛刻要求限制了该法的使用。
该法适合于常量物质的定量。
b.内标法所谓内标法是将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测物和内标物的质量及在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的百分含量。
当只需测定试样中某几各组分时，而且试样中所有组分不能全部出峰时，可用此法。
此法适合于微量物质的分析。
该法的计算公式如下：其中，f si是被测组分相对于内标物的相对校正因子。
该法的优点是：受操作条件的影响较小，定量结果较为准确，使用上不象归一化法那样受到限制。
该法的缺点是：每次分析必须准确称量被测物和内标物，不适合于快速分析。
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归一化法、内标法、外标法及标准加入法
归一化法
把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法，称为归一化法。
各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量的变化的影响很小。
其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。
GC应用广于HPLC。
外标法（标准曲线法、直接比较法）
首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。
具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。
若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。
标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。
当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。
单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。
因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。
因此规定，y=ax+b b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%。
标准曲线法的优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。
特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用。
标准曲线法的缺点：每次样品分析的色谱条件（检测器的响应性能，柱温度，流动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差。
另外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分的标准样品（或已知准确含量的样品），因此对样品前处理过程中欲测组分的变化无法进行补偿。
内标法
选择适宜的物质作为欲测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法称为内标法。
内标法的关键是选择合适的内标物。
内标物应是原样品中不存在的纯物质，该物质的性质应尽可能与欲测组分相近，不与被测样品起化学反应，同时要能完全溶于被测样品中。
内标物的峰应尽可能接近欲测组分的峰，或位于几个欲测组分的峰中间，但必须与样品中的所有峰不重叠，即完全分开。
内标法的优点：进样量的变化，色谱条件的微小变化对内标法定量结果的影响不大，特别是在样品前处理（如浓缩、萃取，衍生化等）前加入内标物，然后再进行前处理时，可部分补偿欲测组分在样品前处理时的损失。
若要获得很高精度的结果时，可以加入数种内标物，以提高定量分析的精度。
内标法的缺点：选择合适的内标物比较困难，内标物的称量要准确，操作较麻烦。
使用内标法定量时要测量欲测组分和内标物的两个峰的峰面积（或峰高），根据误差叠加原理，内标法定量的误差中，由于峰面积测量引起的误差是标准曲线法定量的2-2是由于进样量的变化和色谱条件变化引起的误差，内标法比标准曲线法要小很多，所以总的来说，内标法定量比标准曲线法定量的准确度和精密度都要好。
标准加入法
标准加入法实质上是一种特殊的内标法，是在选择不到合适的内标物时，以欲测组分的纯物质为内标物，加入到待测样品中，然后在相同的色谱条件下，测定加入欲测组分纯物质前后欲测组分的峰面积（或峰高），从而计算欲测组分在样品中的含量的方法。
标准加入法的优点：不需要另外的标准物质作内标物，只需欲测组分的纯物质，进样量不必十分准确，操作简单。
若在样品的前处理之前就加入已知准确量的欲测组分，则可以完全补偿欲测组分在前处理过程中的损失，是色谱分析中较常用的定量分析方法。
标准加入法的缺点：要求加入欲测组分前后两次色谱测定的色谱条件完全相同，以保证两次测定时的校正因子完全相等，否则将引起分析测定的误差。