化学发光免疫法(CLIA)较放射免疫法(RIA)的优越性分析

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化学发光免疫分析

糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用成本，利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！

化学发光法与放射免疫法检测血清FT3、FT4及TSH的比较

化学发光法与放射免疫法检测血清FT3、FT4及TSH的比较林英
【期刊名称】《中国现代医学杂志》
【年(卷),期】2003(013)005
【摘要】目的:对化学发光法(CLIA)与放射免疫法(RIA)两种方法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)及促甲状腺激素(TSH)浓度进行比较.方法:分别采用CLIA和RIA平行测定66份临床送检标本并进行线性实验、回收实验、对比实验和精密度实验.结果:两种方法的相关性良好(r=0.995),无显著差异(P＞0.05),回收率均接近100%,但CLIA的批间CV%及批内CV%均低于RIA.结论:CLIA 的精密度和重复性均优于RIA.
【总页数】2页(P71-72)
【作者】林英
【作者单位】中南大学湘雅医院核医学科,长沙,410008
【正文语种】中文
【中图分类】R581
【相关文献】
1.检测血清TSH的化学发光免疫法与免疫放射法两种方法的临床价值比较 [J], 康凤芝
2.全自动酶联免疫法与RIA对FT3、FT4、TSH检测的比较分析 [J], 马伦
3.电化学发光免疫法检测TSH、T3、T4、FT3、FT4相关性观察 [J], 周万军;柳永和;陈卫群;唐孟萱
4.化学发光免疫法与免疫放射法检测血清TSH的临床价值比较 [J], 余剑英;林英
5.化学发光免疫法与放射免疫法检测FT4的比较 [J], 戴宏华
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电化学发光免疫法与放射免疫法检测甲状腺激素结果比较

电化学发光免疫法与放射免疫法检测甲状腺激素结果比较发表时间：2010-12-14T15:45:00.120Z 来源：《中国美容医学》（综合）10年第4期供稿作者：李三喜[导读] ECLIA法对各指标测定的平均批内及批间变异为1.69%和3.68%，均低于RIA法的3.35%和5.04%。

李三喜（解放军第187医院核医学科海南海口571159）【摘要】目的:比较电化学发光免疫法与放射免疫法对甲状腺激素的检测效果。

方法:利用两种方法分别检测血清TT3、TT4、TSH、FT3、FT4，并进行均值、相关性、精密度和准确度对比分析。

结果:两种方法的均值结果差异无统计学意义（P均＞0.05）；TT3和FT4检测结果的两种方法相关有统计学意义（P＜0.01）；ECLIA法对各指标测定的平均批内及批间变异为1.69%和3.68%，均低于RIA法的3.35%和5.04%；对两种方法的回收率作t检验，t值为7.138，P＜0.01，差异有统计学意义，ECLIA法的准确度优于RIA法。

讨论:ECLIA法的精密度、准确度均优于RIA法，适合于临床应用。

【关键词】电化学发光免疫法；放射免疫法；甲状腺激素【中图分类号】R446.6【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2010）10-0059-01 本文分别采用电化学发光免疫法（ECLIA法）与放射免疫法（RIA法）检测甲状腺激素（TT3、TT4、TSH、FT3、FT4），并对结果进行对比分析，旨在为选择一种准确灵敏的甲状腺激素测定方法提供科学依据。

1材料与方法 1.1材料 1.1.1标本来源:40份血清标本取自2010年8月住院、门诊的甲亢或甲减患者和健康者，无脂血和溶血。

1.1.2仪器与试剂:电化学免疫法采用美国罗氏公司生产的2010型电化学发光免疫分析仪及试剂。

放射免疫法采用国产SB-695B 智能放免γ计数器，试剂购于天津九鼎公司。

1.2方法:电化学发光法：首先取定标液分别给TT3、TT4、TSH、FT3、FT4定标，再取血清标本测定结果。

不同方法学白介素6标准

不同方法学白介素6标准白介素6检测的不同方法学探讨白介素6（IL-6）是一种多功能细胞因子，在免疫调节、炎症反应以及多种疾病的发生和发展过程中起着重要作用。

因此，准确检测白介素6的含量对于基础研究和临床应用具有重要意义。

本文将探讨几种不同的白介素6检测方法，并分析其优缺点。

1. 酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的检测白介素6的方法，其原理是利用酶标记的抗体与待测样本中的白介素6结合，形成酶-抗体-抗原复合物，然后通过底物显色反应来定量检测白介素6的含量。

这种方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于大批量样本的检测。

但是，ELISA方法也存在一些局限性，如操作过程中容易受到温度、时间等因素的影响，导致结果的不稳定性。

2. 放射免疫分析法（RIA）放射免疫分析法是一种利用放射性同位素标记的抗体来检测白介素6的方法。

这种方法具有灵敏度高、准确性好的特点，尤其适用于微量白介素6的检测。

然而，由于RIA方法涉及到放射性物质的操作和处理，对实验条件和操作人员的要求较高，且存在一定的安全隐患，因此在一般实验室中的应用受到一定限制。

3. 化学发光免疫分析法（CLIA）化学发光免疫分析法是一种基于化学发光原理来检测白介素6的方法。

该方法利用化学发光物质标记的抗体与白介素6结合后产生的化学发光信号进行定量检测。

CLIA方法具有灵敏度高、线性范围宽、操作简便等优点，且无需使用放射性物质，因此在实际应用中得到了广泛推广。

但是，CLIA方法的试剂成本相对较高，且发光信号的稳定性可能受到多种因素的影响。

4. 荧光免疫分析法（FIA）荧光免疫分析法是一种利用荧光标记的抗体来检测白介素6的方法。

该方法通过荧光信号的强弱来定量检测白介素6的含量，具有灵敏度高、特异性好的特点。

同时，FIA方法还可以实现多色荧光的同时检测，适用于复杂样本中多种细胞因子的同时测定。

但是，FIA方法需要专业的荧光检测设备，且荧光信号可能受到光漂白等因素的影响。

化学发光免疫分析与其他方法对比

化学发光免疫分析的优点：
• 4．分析方法简便快速：绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式。
• 5．结果稳定、误差小：样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
• 6．安全性好及使用期长：在上述优点前提下，更免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现CLIA的危害性。有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶联的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以提高劳动效率，也利于推广应用。
浅刊物定性或定量分析。
• 化学发光免疫检测的灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。
化学发光与酶免的对比表：
测量精度人体伤害有效期干扰因素测试项目
酶标
定性/半定量测量底物有致癌性较长较多少
化学发光
定量测量无长
极少多
化学发光与放免的对比
．厂商试剂与仪器共同开发，试剂基本系列化。
化学发光免疫法（ＣＬＩＡ）
．导入于20世纪90年代，现个别较大医院开展个别项目；．产品处于导入期或成长期；．无厂商开发生产，完全依赖进口
．兴起于20世纪80年代，现已被临床普遍使用，成为临床免疫诊断的支柱方法；．产品处于成熟期；
．厂商试剂与仪器共同开发，仪器自动化程度高，试剂系列化状态.
总结
• 综合以上优点，目前已有的各种免疫分析尚没有出其右者，现在国外发达国家在 CLIA的研究和开发方面进展很快，已有全自动的化学发光（闪光型和辉光型）与电化学发光免疫分析等系列产品。我国在化学发光免疫分析方面的研究还比较落后，这就是我国急需研究和发展CLIA的原因。

化学发光免疫分析与其他方法对比

化学发光免疫分析与其他方法对比化学发光免疫分析（Chemiluminescent Immunoassay，简称CLIA）是一种基于化学发光原理的免疫分析方法。

与其他传统的免疫分析方法相比，CLIA具有许多优点，使其成为当前广泛应用于生物医学领域的重要技术之一首先，CLIA具有极高的灵敏度。

由于化学发光反应产生的光信号非常强烈，因此能够检测到非常低浓度的分析物。

这使得CLIA在检测罕见疾病或者低浓度生物标志物时非常有优势。

其次，CLIA具有广泛的线性范围。

由于化学发光反应的信号强度与分析物的浓度呈线性关系，因此CLIA能够在广泛的浓度范围内准确测定分析物的浓度。

这使得CLIA成为临床实验室中常用的定量分析方法。

此外，CLIA还具有较高的特异性。

由于CLIA是基于免疫反应进行的，只有与特定抗原结合的抗体才能产生化学发光反应。

因此，CLIA能够准确地鉴定和测定特定抗原或抗体，避免了其他非特异性反应的干扰。

另一个优点是CLIA的操作简便和高效。

相对于传统的放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）或酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等方法，CLIA无需使用放射性物质或底物染色等复杂步骤，操作简单、快速，并且能够实现自动化操作，提高检测效率。

此外，CLIA还具有较长的稳定性。

由于化学发光反应所需的试剂通常具有较长的保存期限，且反应条件可控，因此CLIA的试剂稳定性较高，能够长期保存并保持较好的性能。

然而，CLIA也存在一些限制。

首先，CLIA的成本较高。

由于所需试剂和设备较为昂贵，因此CLIA在一些资源匮乏的地区可能不太适用。

其次，CLIA对样本处理的要求较高。

由于CLIA的灵敏度非常高，对样品中可能存在的干扰物敏感，因此需要对样品进行特定的前处理步骤，以确保准确的分析结果。

总体而言，化学发光免疫分析是一种灵敏、特异、简便和高效的免疫分析方法，具有许多优点，使其在生物医学领域得到广泛应用。

化学发光免疫法与放射免疫法检测FT4的比较

化学发光免疫法与放射免疫法检测F T4的比较戴宏华【摘要】　目的　探讨化学发光免疫法(CL IA)较放射免疫法(RIA)的优越性。

方法　利用CL IA和RIA法平行测定50例临床血清标本的FT4含量及相关试验。

结果　两种方法的相关性良好(R= 0.975,P>0.05),回收率均在95%以上,但在线性试验中,CL IA法优越于RIA法。

结论　CL IA法在方法学上对临床微量物质的检测是令人满意的,但是其检测费用高。

【关键词】　化学发光免疫法　放射免疫法　游离甲状腺激素多年来,放射免疫法(RIA)是临床检测微量物质的重要手段。

近年来,化学发光免疫法(CL IA)顺应了时代的发展要求,在标记免疫测定技术上居领先地位[1]。

为进一步了解化学发光免疫法的特点,本文应用CL IA与RIA对比检测50份临床血清标本的FT4含量及相关试验,对数据进行统计分析和比较,现报道如下。

1　材料和方法1.1　标本来源　随机抽取50份临床送检血清标本,包括正常和异常标本,检测结果的范围涵盖了FT4医学决定水平,异常标本中超过仪器检测范围的结果不予统计。

1.2　仪器与试剂　全自动化学发光免疫分析系统为Beck2 man Coulter公司的Access-180(属于微粒子化学发光免疫分析,ECL A)及其配套试剂,其检测FT4免疫学原理为竞争法;RIA法检测FT4的试剂盒由上海核技术研究所提供,其免疫学原理为竞争法,γ计数仪由中国科技大中佳公司提供。

1.3　方法　按仪器操作手册及实验室相关要求做线性、相关性、回收率、精密度测试。

2　结果2.1　对比试验　用上述两法分别对受检血清标本进行FT4定量分析。

结果表明,两法差异无显著性(P>0.05),直线回归方程为:Y=1.204X-0.4581,R=0.975,提示两法相关性良好。

2.2　线性试验　将FT4测定值在50～70Pmol/L范围内5份血清混合,反复测定4次,取其均值作为原倍血清定值即理论值。

磁微粒化学发光免疫法与放射免疫法测定血浆肾素活性的对比分析

【摘要】目的比较分析两种方法测定血浆肾素活性 (PRA) 的准确性、精密度及线性范围的差异. 方法采用磁微粒化学发光免疫法 (CLIA) 与放射免疫法 (RIA) 测定血管紧张素 Ι (AΙ, 肾素活性) 的质控血清及６１例住院患者 AΙ 水平,计算两种方法检测的批内、批间变异系数 (CV),评价其精确性; 将高浓度混合样本 A 加入低浓度混合样本 B 配置成样本 C,分别测量样本 A、B 和 C 中 AΙ水平,计算回收率,评价准确性;测定两法线性范围, 并对样本测定结果的相关性作回归分析.结果 CLIA 法:批内 CV 大于 RIA 法 (P＜０��０１),批间 CV 小于 RIA 法 (P＜０��０１),回收率优于 RIA 法. 两种方法检测的相关性良好 (r＝０��９９６,P ＜０��０１).RIA 法线性范围２２~７００pg/mL, 小于 CLIA 法的线性范围２５~８５０ pg/mL.结论 CLIA 法测定 PRA 除精密度外,其他各项指标多优于 RIA 法, 且自动化程度高、适合批量操作, 是未来应用的趋势.RIA 法技术成熟、价格低廉,有其存在的意义.
【关键词】肾素活性;血管紧张素Ι;磁微粒化学发光免疫法;放射免疫法;回收率;精密度【中图分类号】R４４６��１【文献标识码】B 【文章编号】１００２Ｇ２６００(２０１９)０２Ｇ００８９Ｇ０３
肾素是一种相对分子质量４００００的蛋白酶 , 由肾脏近球小体分泌,其作用于血管紧张素原使转化为血管紧张素Ι (１０肽,相对分子质量１２００),后者继续在转化酶作用下转变成血管紧张素Ⅱ (８肽, 相对分子质量１０４６). 肾素Ｇ血管紧张素系统对机体血压、水和电解质平衡起着重要作用,由于肾素含量低、分子结构复杂, 离体后极易转化、降解, 实验室多通过测量肾素活性 (PRA), 即血浆中血管紧张素Ⅰ (AⅠ) 的产生速率来间接计算肾素活性.PRA 的准确测定可作为原发性和继发性高血压诊断与分型的重要指标 . [１Ｇ２] 实验室工作中准确测定 PRA 并非易事, 传统的 RIA 法影响因素多, 操作复杂、费时费力,难以满足临床需求;全自动 PRA 检测因技术原因依然不够成熟, 相关文献报道较少.本文比较分析磁微粒化学发光免疫法 (CLIA)法与放射免疫法 (RIA) 法测定 PRA 的准确性、精密度及线性范围的差异,旨在寻找切实可行检测方法. １对象与方法１��１对象:选择２０１７年９月至２０１８年６月在本院内科住院的６１例患者进行作 PRA 测定, 其中, 男２９例, 女３２例; 年龄２２ ~ ６０ (３８��４ ± １７��９) 岁 . １��２方法 : １��２��１试剂和仪器:１)RIA 试剂盒 (带质控) 购

clia化学发光免疫法

clia化学发光免疫法作为一种常见的免疫分析技术，clia化学发光免疫法在医学诊断、药物研发和生物学研究等领域被广泛应用。

本文将从简单到深入的方式，探讨clia化学发光免疫法的原理、应用和前景，并分享个人理解和观点。

让我们从clia化学发光免疫法的原理开始介绍。

clia是化学发光免疫酶联免疫吸附测定法（chemiluminescent immunoassay）的缩写。

它是一种基于化学发光反应原理的免疫分析技术。

该方法利用化学发光反应中产生的光信号来检测目标分子的含量。

具体而言，该方法首先将目标分子与特异性抗体结合，形成免疫复合物。

通过添加化学发光底物和酶催化作用，在反应中产生发光信号。

通过光信号的测定，可以确定目标分子的含量。

接下来，我们来探讨clia化学发光免疫法的应用。

该技术在临床诊断中具有广泛的应用前景。

它可以用来检测感染性疾病、肿瘤标志物、药物浓度等生物分子的含量。

与传统的酶联免疫吸附测定法相比，clia 化学发光免疫法具有更高的敏感性和特异性，可以更准确地检测低浓度的目标分子。

它还具有检测速度快、简便操作和高通量分析等优点，使其成为临床实验室和药物研发领域的重要工具。

让我们来展望一下clia化学发光免疫法的未来。

随着生物技术和化学技术的不断发展，clia化学发光免疫法在诊断和研究领域的应用前景将会更加广阔。

随着纳米技术的进步，可以利用纳米颗粒作为发光底物，提高检测灵敏度和信号稳定性。

结合人工智能和大数据分析等技术，可以将clia化学发光免疫法与其他分析方法相结合，实现更高效、准确和个性化的诊断和治疗。

总结回顾性地看，clia化学发光免疫法是一种重要的免疫分析技术，通过化学发光反应实现目标分子的检测。

它广泛应用于医学诊断、药物研发和生物学研究等领域。

该方法具有高敏感性、高特异性、快速、简便和高通量分析等优点。

未来，随着技术的进步，clia化学发光免疫法的应用前景将会更加广阔。

我个人认为，该技术的不断发展将为疾病的诊断和治疗提供更准确、快速和个性化的方法，有助于推动医学进步和健康事业的发展。

化学发光免疫与免疫放射法检测血清TSH对比分析

化学发光免疫与免疫放射法检测血清TSH对比分析目的比较化学发光免疫法（CLIA）和免疫放射法（IRMA）检测血清TSH 的精确度、重复性、相关性，评价两种方法对诊断甲状腺疾病的临床价值。

方法将我单位213例受试人员分为正常组、甲亢组、甲减组，用化学发光免疫法和免疫放射法对其血清TSH标本进行检测，进行精确度、重复性、相关性实验，并对三组的TSH结果进行检测比较。

结果两组的相关性良好，CLIA的重复性和精密度优于IRMA，两组的诊断符合率较高。

结论CLIA和IRMA检测TSH均有临床价值，综合来看，CLIA优势更为明显，值得临床推广。

标签：化学发光免疫法；免疫放射法；促甲状腺激素促甲状腺激素（thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH）是腺垂体分泌的促进甲状腺的生长和机能的激素。

TSH多以游离的形式存在于血液中，其含量很低，是性质稳定的糖蛋白激素。

TSH受下丘脑一脑垂体一甲状腺轴线控制，当人体的甲状腺功能发生变化时，血清TSH的水平出现波动。

甲状腺机能低下即甲减者的表现，多为血清中的TSH水平增高，甲状腺功能亢进即甲亢者，多为血清中TSH的降低。

临床上，因此，TSH是判断甲状腺功能和下丘脑垂体甲状腺轴功能是否正常的一线指标[1-2]。

作者采用化学发光免疫法（CLIA）与免疫放射法（IRMA）两种方法同时测定正常人及患者血清TSH，对其结果比较分析，从不同角度探讨两种检查方法在甲状腺功能疾病中的临床诊断价值，现将结果报告如下。

1资料与方法1.1一般资料所有人员均为来我单位健康查体或就诊的人员，见表1。

1.2仪器与试剂CLIA采用美国雅培公司Axsym免疫化学发光仪，IRMA采用西安262厂F5-20089γ-放射免疫计数器。

免疫化学发光测定试剂盒，由美国雅培公司提供，IRMA采用中国原子能科学研究院提供的试剂盒。

1.3方法1.3.1样品采集于每天上午采集研究对象空腹血清3 ml，然后分离血清，立即进行检测或-20℃冷冻保存，1 w内检测。

放射免疫分析与化学发光免疫检测应用对比及发展趋势

放射免疫分析与化学发光免疫检测应用对比及发展趋势陈宇琼;朱清峰;李国祥;黄火强【摘要】Comparisons in developments and applications between Radioimmunoassay (RIA) and chemiluminescence immunoassay (CLIA) in medical diagnosis were descriped .Accord-ing to my job and the applications of RIA and CLIA in China ,the developments ,detection levels and application prospects of the two methods were reviewed inChina .Both RIA and CLIA were high sensitive ,and there was a good relativity between each other .RIA was va-riety limitless ,widely testing fields and high coverage ,w hich can be used in clinical diagno-sis and lab research .Coupled with the lower fees ,RIA was still one of the most important choices in the future .The operations in CLIA tests weresimple ,fast and automated .No nuclear pollution was a big advantage of CLIA to RIA .CLIA was becoming more and more competitive .Based on the policy and developments of RIA technologies ,the market rateof RIA would grow rapidly in future .%对比放射免疫分析技术（RIA ）与化学发光免疫检测技术（CLIA ）在医学诊断中的发展和应用，结合RIA与CLIA免疫分析技术在临床应用情况，分析两种技术的发展现状、检测水平，并展望发展前景。

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析（Chemiluminescent Immunoassay，CLIA）介绍化学发光免疫分析（CLIA）是一种测定抗原和抗体的实验方法，它是一种特殊的免疫分析，可以用来测定血清中的抗原和抗体的含量。

CLIA的原理是利用抗原和抗体之间的特异性结合，将抗原和抗体结合在一起，然后将特异性结合物添加到一种特殊的化学发光物质中，当发生反应时，特异性结合物会产生发光，并且发光的强度与抗原和抗体的含量成正比。

因此，可以根据发光的强度来测定血清中的抗原和抗体的含量。

优势CLIA的优势在于它有很高的灵敏度和特异性，可以测定血清中抗原和抗体的含量，而且结果准确可靠，可以用于诊断疾病，比如癌症、HIV感染、肝炎等疾病。

此外，CLIA的操作简单，可以在实验室中快速完成，而且它还可以用于大量样本的检测，从而节省时间和成本。

应用CLIA可以用于多种疾病的诊断，比如甲状腺机能减退症（Hypothyroidism）、甲状腺功能亢进症（Hyperthyroidism）、慢性肝病（Chronic Liver Disease）、肝炎病毒感染（Hepatitis Virus Infection）、癌症（Cancer）、HIV感染（HIV Infection）等。

此外，CLIA还可以用于检测抗生素，如青霉素、氨苄西林、头孢菌素等，以及肝素、血清素等药物的含量。

结论CLIA是一种灵敏度和特异性很高的免疫分析方法，可以用来测定血清中抗原和抗体的含量，而且可以用于多种疾病的诊断，比如癌症、HIV感染、肝炎等疾病。

此外，CLIA的操作简单，可以在实验室中快速完成，可以用于大量样本的检测，从而节省时间和成本。

因此，CLIA可以作为一种有效的免疫分析方法，为疾病的诊断提供重要的帮助。

免疫分析

免疫分析免疫分析技术是一种以抗体和抗原的特异性结合来定性和定量分析目标物质的分析技术。

在免疫反应系统中，各种免疫分析的技术原理都是一样的，即抗原抗体反应。

但在检测系统中，根据标记物的不同，可以将免疫分析分为：荧光免疫分析（FIA）、放射免疫分析(RIA)、化学发光免疫分析(CLIA)和酶免疫分析(EIA)。

一、现代免疫分析在农药监测中的应用1）放射免疫分析(RIA)放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)优点是特异性强、灵敏度高、精确、简便易行。

它包括以标记抗原(Antigen, Ag)为特点的放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和以标记抗体(Antibody, Ab)为特点的免疫放射分析(Immunoradiometric assay ,IRMA)。

前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。

最早建立的农药免疫法中，RIA占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4-D和2,4，5-T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫法。

但由于进行RIA需使用昂贵的计数器，存在放射性防护和废物处理等问题，其应用受到较大限制。

1982年后发表的农药免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。

2）酶免疫法(EIA)酶免疫法(Enzyme Immunoassay, EIA)是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。

酶免疫法的检测原理与放射免疫法类似，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。

用作标记物的酶有辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)。

酶标试剂制备容易、稳定、价廉。

酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，而可借助于简单的仪器作定量测定，是目前农药监测中应用最广泛的免疫分析技术。

EIA法包括酶联免疫吸附分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)、酶免疫试验法(Enzyme-monitored Immunotest , EMIT)、竞争结合酶免疫分析法(Competitive Binding Enzyme Immunosorbent Assay, EIA)和免疫酶分析法(Immunoenzymometric Assay, IEMA)。

化学发光免疫分析的优点

化学发光免疫分析的优点1、灵敏度高：这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达10-16/-21mol/L（RIA为10-12mol/L）。

又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。

2．线性范围宽：发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。

这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。

也优于放射免疫分析技术。

3、安全性好：彻底消除了放射性危害，环保、安全。

到目前为止，还未发现CLIA的危害性。

4、试剂有效期长有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用成本，利于推广应用。

5、光信号持续时间长辉光型（glow type）的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。

简化了实验操作及测量。

容易实现连续、动态、重复测定6、分析方法简便快速绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式，容易实现自动化。

7、结果稳定、误差小样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。

免疫定量分析的两大关键技术:1、标记技术：决定方法的理论灵敏度I125、HRP（luminol)、AKP、AE、ABEI、三联吡啶钌。

2、分离技术：决定方法的实际灵敏度、速度、精密度。

纳米磁性微珠分离非纳米磁性微珠分离技术：塑料微孔板、塑料试管、大塑料球、高分子微球化学发光分类酶促化学发光：HRP（lumino)、AKP★试剂稳定性差★反应速度慢★光信号与温度变化显著相关★综合成本高、发光底物不易保存直接化学发光：AE、ABEI、三联吡啶钌★试剂稳定性好★反应速度快★光信号与温度变化无关★综合成本底、发光底物易保存2.载体的选择：新固相材料的应用新固相材料主要体现在(1)表面有与蛋白结合的官能团，可以充分固定抗体抗原；(2)表面性质要保证不影响结合后蛋白的免疫反应活性；(3)比表面积要足够大以固定足够量蛋白(4)应具有亲水性以避免与待测物和样品基质的非共价结合；(5)在载液的冲击下保持表面的抗体结合活性。

化学发光免疫分析

化学发光免疫分析(Chemiluminescence analysis ,CLlA) 诞生于1977 年。

Halmann[1 ]等根据放射免疫分析的基本原理,将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来,建立了化学发光免疫分析法。

CLIA 具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、不需要十分昂贵的仪器设备等特点。

CLIA 应用范围较广,既可检测不同分子大小的抗原、半抗原和抗体,又可用于核酸探针的检测。

CLIA与放射免疫分析(RIA) 、荧光免疫分析( IFA) 及酶免疫分析(EIA) 相比,具有无辐射、标记物有效期长并可实现全自动化等优点。

CLIA 为兽医、医学及食品分析检测和科学研究提供了一种痕量或超痕量的非同位素免疫检测手段。

1. 化学发光免疫分析技术的基本原理化学发光免疫分析含有免疫分析和化学发光分析两个系统[2 ]。

免疫分析系统是将化学发光物质或酶作为标记物,直接标记在抗原或抗体上,经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物。

化学发光分析系统是在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个处于激发态的中间体,会发射光子释放能量以回到稳定的基态,发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测[3 ]。

根据化学发光标记物与发光强度的关系,可利用标准曲线计算出被测物的含量电化学发光分析技术特点最先进的分析原理专利的电化学发光分析技术（ECL）。

ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。

包括了两个过程。

发光底物二价的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。

氧化的三丙胺失去一个H成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原成激发态的二价钌，随即释放光子恢复为基态的发光底物。

最好的发光标记物-三联吡啶钌分子量小，结构简单。

可以标记于抗原，抗体，核酸等各种分子量，分子结构的物质。

从而具有最齐全的检测菜单。

三联吡啶钌为水溶性，且高度稳定的小分子物质。

化学发光标记免疫分析法

化学发光标记免疫分析法化学发光标记免疫分析法（Chemiluminescent Immunoassay，CLIA）是一种常用于检测生物样本中特定分子的高灵敏度和高特异性的方法。

该技术利用化学发光效应，通过特异性抗体与抗原结合，进而检测出样品中的目标物质。

本文将探讨化学发光标记免疫分析法的原理、应用领域以及优点。

化学发光标记免疫分析法的原理是在化学反应中产生发光信号，该信号与目标物质的浓度成正相关。

这种发光反应一般是通过酶-底物体系进行催化反应来实现的。

常用的催化体系有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。

当特异性抗体与抗原结合时，HRP或AP被引入，与底物反应，产生可观察的发光信号。

该发光信号可以通过光子计数器或相关设备进行测量和定量，从而获得目标物质的浓度。

化学发光标记免疫分析法在许多领域中得到广泛应用。

在临床诊断中，它常用于检测生物体内的各种生物标志物，如肿瘤标志物、病毒抗原、抗体和药物浓度等。

在食品和环境安全领域，它可以用于检测食品中的农药残留、重金属和有毒物质等。

此外，化学发光标记免疫分析法还可应用于药物研发、生物学研究和环境监测等各个领域。

化学发光标记免疫分析法具有不少优点。

首先，它具有极高的灵敏度。

由于信号的产生是通过酶催化反应而非染色反应完成的，因此其灵敏度高于传统的染色法。

其次，该方法具有极高的特异性。

由于特异性抗体与抗原的结合是特异性的，因此它不会受到其他物质的干扰。

第三，化学发光标记免疫分析法的操作相对简单。

只需要将样品与标记抗体和底物反应，然后测量发光信号即可得到结果。

最后，该方法具有广泛的线性范围。

不同浓度的目标物质都可以在一定范围内进行准确测量。

尽管化学发光标记免疫分析法具有许多优点，但也存在一些局限性。

首先，该技术需要贵重的设备和试剂，因此成本较高。

此外，发光信号的持续时间较短，限制了信号的记录和测量时间。

最后，由于发光信号的产生涉及一系列的酶反应，因此在一些特殊样品（如高脂血样品）中可能会受到脂质干扰，影响结果的准确性。

CLIA

常见发光免疫分析技术的比较免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。

现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。

发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。

70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，基本上可以分为：化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。

1、化学发光化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。

通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。

退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。

其主要特点为消耗发光剂。

同时量子效率相对较低。

1.1 按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。

其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。

酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。

因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。

酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。

而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。

非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗，同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈，即含量总是相对不足，因此发光信号持续时间较短；如果直接在免疫反应杯中启动发光反应，由于发光剂被很快消耗，故只能进行一次性测量。