生物化学实验指导手册
生物化学实验操作指南
生物化学实验操作指南一、实验前的准备工作在进行生物化学实验之前，我们需要做一些准备工作，以确保实验的顺利进行。
首先，我们需要检查实验室的安全设施是否完备，如灭火器、安全眼镜、实验台等。
其次，我们需要准备实验所需的试剂和设备，包括试管、移液器、天平等。
同时，我们还需要检查这些试剂和设备的质量和完整性，以免对实验结果产生干扰。
最后，我们需要阅读实验操作指南，了解实验的目的、步骤和注意事项。
二、实验步骤1. 实验前的样品处理在进行生物化学实验之前，我们通常需要对样品进行处理。
例如，如果我们要提取蛋白质，我们需要将样品细胞破碎，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
如果我们要提取核酸，我们需要使用酶来消化细胞壁，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
2. 试剂的配制与标定在进行生物化学实验中，我们通常需要配制一些试剂。
例如，我们可以配制缓冲液、酶液等。
在配制试剂之前，我们需要准确称取所需的化学品，并按照实验操作指南中的比例配制。
同时，我们还需要标定试剂的浓度，以确保实验结果的准确性。
3. 实验操作在进行生物化学实验时，我们需要按照实验操作指南中的步骤进行操作。
例如，如果我们要进行酶活性测定实验，我们首先需要将样品和试剂加入试管中，然后在适当的温度和pH下进行反应。
在反应过程中，我们需要定时取样，并使用分光光度计等设备测定反应的吸光度。
最后，我们需要根据实验数据计算出酶的活性。
4. 数据处理与分析在完成实验后，我们需要对实验数据进行处理和分析。
例如，我们可以使用统计学方法对数据进行统计分析，并绘制图表来展示实验结果。
同时，我们还可以使用生物信息学工具对实验数据进行进一步的分析，如序列比对、结构预测等。
三、实验注意事项在进行生物化学实验时，我们需要注意以下几点：1. 实验操作要规范，遵守实验室的安全操作规程，如佩戴实验服和手套，避免接触有害物质等。
2. 试剂的使用要准确，按照实验操作指南中的比例使用，避免使用过量或不足。
生物化学试验指导书
生物化学实验指导适用专业：农学、植物保护、园艺、农产品质量与安全、中草药栽培与鉴定目录生物化学实验室规则 (1)实验记录及实验报告 (2)实验一植物DNA的提取与测定 (3)实验二蛋白质的两性性质及等电点测定 (7)实验三温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 (9)实验四还原糖和总糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法 (12)实验五糖的颜色反应和定性鉴定 (14)实验六双缩脲法测定蛋白质含量 (19)附录 (21)附录1 生物化学实验基本操作 (21)附录2 实验样品的制备 (25)附录3 常用试剂的配制 (26)附录4 市售常用酸、碱的浓度 (26)附录5 一般化学试剂的分级 (27)附录6 易变质及需特殊方法保存的试剂 (27)附录7 标准缓冲液的配制 (28)附录8 常用缓冲液的配制方法 (29)附录9 干燥剂 (36)附录10 硫酸铵饱和度的常用表 (37)附录11 离心机转数(r/min)与相对离心力(RCF)的换算 (38)生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2．实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4．实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5．使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。
6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。
生物化学实验指导
《生物化学》实验指导实验室规则一、实验目的生物化学是医学教育中的一门实践性较强的基础学科。
实验教学是过程的重要组成部分，是理论教学的延伸和补充。
实验目的是：1、初步学会生物化学实验的基本操作技能及实验研究的基本方法。
2、熟悉生物化学实验原理，了解一些临床生化检验项目。
3、培养严肃认真的工作方法、实事求是的科学态度、团结协作的工作作风和观察分析、思考、独立解决问题的能力。
二、实验基本要求实验教学包括实验前准备、实验操作、整理实验结果、书写实验报告等环节，为了提高实验效果，实现实验目的，要求学生必须做到以下几点。
（一）实验前1、仔细阅读实验指导，了解实验目的和要求，充分理解实验原理，熟悉实验步骤、操作程序和注意事项。
2、预测实验各个步骤可能得到的结果，对预期实验结果能做出合理的解释。
3、注意和估计实验中可能发生的误差，并制定防止误差的措施。
（二）实验时1、保持实验室肃静，不能进行与实验无关的活动。
2、在教师或实验技术人员的指导下，熟悉仪器的构造、性能及操作规程。
3、实验器材摆放整齐，有条不紊、装置正确。
4、按照实验步骤，严肃认真的循序操作，不能随意更动。
5、爱护公物，注意节省实验器材和药品。
注意安全，严防触电、火灾、酸碱灼伤及中毒事故的发生。
6、仔细、耐心地观察实验田中出现的现象，随时客观的记录实验结果，以免发生错误或遗漏。
实验条件应始终保持一致，如有变动,应加文字说明。
（三）实验后1、整理实验结果，书写实验报告，按时交给指导教师评阅。
2、整理实验仪器和清洗玻璃仪器，关闭仪器、设备和电源。
清点实验器材，办理借还手续。
3、做好实验室清洁卫生工作，关闭水、气阀门，切断电源，关闭门窗，确保安全。
实验一生化实验基本操作一、实验目的通过基本操作训练，学会熟练进行进行玻璃仪器洗涤；吸量管使用；溶液的混合；离心机使用；７２１型分光光度仪使用。
二、实验用品烧杯、试管；吸量管、移液管；旋涡混合（振荡）器、玻璃棒；离心机使用；７２１型分光光度仪三、实验内容及步骤（一）玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。
20170328修订-生物化学实验指导书(2017) (1)
《生物化学》实验指导书2017年03月28日修订目录实验一生物化学实验常用仪器设备及使用实验二甲醛滴定法实验三糖的定量：3，5－二硝基水杨酸比色法实验四粗脂肪提取和含量测定实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳实验六动物组织中脱氧核糖核酸的制备及测定实验一生物化学实验常用仪器设备及使用一、生物化学实验须知1．实验室规则(1) 实验课必须提前5 分钟到实验室,不迟到,不早退，应自觉遵守课堂纪律。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。
使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告, 由课代表收齐交给教师。
(6)仪器损坏时, 应如实向教师报告, 真填写损坏仪器登记表, 然后补偿一定金额。
(7)每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2．实验记录实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
3．实验报告的书写实验结束后,应及时整理和总结实验结果, 写出实验报告。
（1）标题标题应包括实验名称、实验时间、实验室名称、实验组号、实验者及同组者姓名、实验室条件。
（2）实验目的（3）实验原理应简述基本原理，不要完全照抄实验指导书。
ZY《生物化学》实验指导书.doc
《生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2.严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3.进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。
4.实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5.实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6.使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7.做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8.实验后，要及时完成实验报告。
2006年1月目录生物化学实验细则 (1)目录 (2)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 (3)实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (11)实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (16)实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20)实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24)实验7生物氧化与电子传递 (25)实验8 植物体内的转氨基作用 (27)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应（3学时）目的要求1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
原理在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
生物化学与分子生物学实验指导书-方成.
实验五：血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（验证性；4学时）【实验目的】1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。
2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程。
3.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点和应用范围。
【实验原理】1．聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是一种人工合成的凝胶，由丙烯酰胺（Acrylamide简写为Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（N，N¹-methylene-bisacrylamide，简写Bis）在催化剂（过硫酸胺或核黄素）的作用下，聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链，相邻的两个链通过甲叉桥交联形成就具有三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶。
为了加速聚合，在合成凝胶时还加入四甲基乙二胺作为加速剂。
聚丙烯酰胺凝胶具有三维网状结构，能起分子筛作用。
用它作电泳支持物，对样品的分离不仅取决于各组分所带电荷的多少，也与分子大小有关。
凝胶网孔的大小主要受成胶物的总浓度及Acr和Bis的比例的影响。
一般电泳采用成胶物质总浓度为7.5%，此浓度称为标准凝胶浓度。
如果改变总胶浓度，也应相应改变Acr和Bis的比例。
2．不连续聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的原理根据凝胶各部分缓冲液的种类及pH值，孔径大小是否相同等，可分为连续系统和不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。
连续系统是指电泳槽内缓冲液的pH值与凝胶中的相同，不连续系统则不同。
不连续圆盘电泳一般是在小玻璃管内进行的。
把三种性质不完全一样的聚丙烯酰胺凝胶重叠起来。
上层为样品胶，中间为浓缩胶，这两层胶的凝胶浓度为3%是大孔胶，应用Tris-HCl 缓冲液，其pH6.7。
下层是分离胶，此层凝胶总浓度为7.5%，是小孔胶，也用Tris-HCl缓冲液，pH8.9。
上下电泳槽缓冲液是Tris-甘氨酸缓冲液，pH=8.3。
由于凝胶的孔径和缓冲液的pH值不同，产生浓缩效应、电荷效应和分子筛效应，使电泳的灵敏度、分辨率提高。
（1）浓缩效应：无论哪种电泳方式，要想得到良好的分离效果，电泳开始前必须使样品中各种成分同处于同一起跑线上。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
生物化学实验指导手册
实验一、考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白质含量【实验目的】学习、掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。
【实验原理】考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合则呈现蓝色。
染料的最大吸收从465nm变为595nm，蛋白质－染料复合物在595nm具有很大的光吸收值，蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1ug蛋白质。
本方法操作简便快捷，灵敏度高，测定范围1-1000ug。
【实验材料、仪器及试剂】1．材料：新鲜的植物材料2．仪器：722分光光度计，天平，离心机，研钵，容量瓶，试管，移液管，漏斗（1）标准牛血清蛋白质溶液：0.1mg/ml（2）考马斯亮蓝G-250溶液：【实验步骤】1．样品的提取：准确称取鲜样2克，用2ml蒸馏水在冰浴中研成匀浆，转移到25ml容量瓶中并定容。
在8000rpm冷冻离心10min，取上清液待测。
2．标准曲线的绘制：取8支具塞试管，按表1加入试剂。
将上面8支试管摇匀，放置5分钟后，用1cm光径比色杯在595nm下比色，记录吸光值，以蛋白质浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
根据样品吸光值在标准曲线查得蛋白质含量。
【结果计算】C × V T样品中蛋白质含量（ug/g.FW）＝V S×W F×1000式中：C为查标准曲线值（ug）；V T为提取液总体积（ml）；V S 为测定时加样量（ml）；W F为样品鲜重（g）。
实验二植物组织中游离氨基酸总量的测定【实验目的】学习掌握鲜材料中游离氨基酸含量测定的原理和方法。
【实验原理】当氨基酸与水合茚三酮共热时，能定量地生成酮茚胺。
该产物显示蓝紫色，称为Ruhemans紫。
其最大吸收值在570nm ，并在一定范围内与氨基酸含量成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分为两步进行，第一步：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步：所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和氨缩合生成Ruhemans紫。
生物及分析化学实验指导书(精)
生物及分析化学实验指导书(精)介绍本实验指导书提供了一系列关于生物及分析化学实验的详细指导，旨在帮助实验人员正确有效地进行实验操作。
本指导书包含了实验目的、实验步骤、实验材料、实验原理、实验注意事项以及实验结果的记录等内容。
实验目的本实验旨在培养学生对生物及分析化学实验的基本操作技能，并提供相关知识的实践运用。
通过实验，希望学生能够掌握实验步骤的正确操作，熟悉实验仪器和试剂的使用，以及对实验结果进行分析和解释。
实验步骤1. 准备实验所需材料和试剂。
2. 按照实验步骤进行试验操作。
3. 记录实验过程和实验结果。
4. 对实验结果进行分析和解释。
5. 清洗和归还使用的实验仪器和器材。
实验材料- 试剂：XXX- 仪器：XXX- 其他材料：XXX实验原理本实验的原理基于生物及分析化学相关理论，具体实验原理请参考课程教材或相关文献。
实验注意事项1. 在进行实验前，仔细阅读实验指导书并了解相关实验操作。
2. 按照实验步骤进行实验操作，遵循正确的操作顺序。
3. 注意安全操作，佩戴个人防护装备如实验手套、眼镜等。
4. 在实验中注意实验现象的观察和记录，及时记录实验结果。
5. 实验结束后，清洗实验仪器和器材，并归还到指定的位置。
6. 对实验数据进行仔细分析和解释，形成实验报告。
实验结果记录在这个部分，实验人员需要详细记录实验结果，包括实验数据、实验现象以及实验结果的分析和解释。
总结本实验指导书旨在提供生物及分析化学实验的详细指导，帮助实验人员正确有效地进行实验操作。
通过实验的实践，人们可以获取实验技能和相关知识的实践运用，培养对实验操作的能力和实验结果的分析能力。
> 注意：本指导书仅供参考，请按照实际情况进行实验操作，并根据实验结果进行相应的分析和解释。
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本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==生物化学实验指导书篇一：5-生物化学实验指导书生物化学实验指导书生物化学教研室201X、2、1目录实验须知实验内容实验一蛋白质的两性电离和等电点的测定实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验三血清总蛋白测定（双缩脲法、Folin—酚法）实验四 PH与温度对酶活性的影响实验五激活剂和抑制剂对酶活性的影响实验六酶的特异性实验七琥珀酸脱氢酶活性的抑制实验八分光光度计的使用实验九血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）实验十肝中酮体生成作用实验十一血清胆固醇测定（酶法）实验十二 ALT的测定实验十三血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离实验十四肝组织核酸的提取、分离和鉴定实验十五血清尿素氮的测定实验十六血清胆红素测定实验十七：总糖的测定---蒽酮比色法实验十八：饥饿与饱食对肝糖元含量的影响实验十九：乳酸脱氢酶活力测定生物化学实验须知一、实验目的1．培养学生科学的思维方法和学习作风，独立工作能力。
2．学习基础生物化学实验方法，为今后的学习与研究准备更好的条件。
3．培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。
4．培养学生的书面及口头表达能力。
二、实验的总要求1．按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。
弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。
未预习者不得进实验室。
2．进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。
一切步骤都按正规操作方法进行；样品与试剂勿过量取用；注意力集中，避免差错。
3．实验中观察要仔细，记录要详尽、及时与客观。
无论实验成功与失败，都应直接记录在实验报告本中，不得于实验后追记。
对于失败的实验，要分析其原因。
4．实验室是集体学习与工作的场所，实验时应保持肃静，不得大声喧哗，以免影响他人的工作与思考。
5．注意保持实验室内的整洁。
实验用器具、试剂等应排列整齐有序。
生物化学实验指导书.docx
生物化学实验指导书生命科学与工程学院2007. 09实验一总糖的测定 (2)实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应 (5)实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应 (9)实验四氨基酸的分离鉴定一纸层析法 (13)实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (15)实验六酪蛋白的制备 (18)实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (20)实验八肝细胞核中核酸（RNA和DNA）的分离与测定 (22)实验九紫外吸收法测定DNA含量 (25)实验十维生素C的定量测定 (26)实验-一酶的特性 (29)实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (37)实验十四植物体内的转氨基作用 (40)实验十五SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (44)实验十六葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (50)实验十七质粒DNA的提取 (55)实验十八质粒DNA的酶切 (57)实验十九PCR基因扩增 (59)实验二十琼脂糖凝胶电泳检测DNA (61)实验二十一真核生物基因组DNA制备 (63)附录 (65)实验一总糖的测定一、目的掌握肓接测定法测定总糖的原理和方法。
二、原理样品经处理除去蛋白质等杂志后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糊水解为还原性单旃, 以直接滴定法测定水解后样品屮的还原糖总量。
三、器材1•电炉2.滴定管3.锥形瓶4.容量瓶四、试剂1.6moI/L盐酸溶液2.0. 1%甲基红乙醇溶液:称取0. lg甲基红,用60%乙醇溶解并定容至100mlo3.20%氧氧化钠溶液。
4.0. 1%转化糖标准溶液：称取105°C烘干至恒重的纯蔗糖1.9000g,用水溶解并移入1000ml容量瓶中,定容，混匀。
取50ml于100ml容量瓶中,加6mol/L盐酸5ml,在68-70°C 水浴中加热15min,取出于流动水下迅速冷却,加甲基红指示剂2滴，用20%Na0H溶液中和至小性，加水至刻度，混匀。
此溶液每毫升含转化糖lmg。
5•费林氏A液:称取15g (CuS04 ・5H20)及0.05g次甲基蓝,溶于水并稀释到1L。
核酸生物化学实验手册
核酸生物化学实验手册一、实验目的本实验手册旨在介绍核酸生物化学实验的基本操作流程及注意事项，帮助实验人员准确、高效地进行相关实验，确保实验结果的准确性和可靠性。
二、实验仪器和试剂1. 离心机2. PCR仪3. 电泳仪4. 热循环仪5. 磁力搅拌器6. DNA/RNA提取试剂盒7. 蛋白酶K8. DNase I9. RNase A10. 乙醇11. 琼脂糖12. 干冰13. 紫外可见分光光度计14. 等电聚焦仪三、实验操作流程1. DNA/RNA提取步骤一：将待提取样品加入DNA/RNA提取试剂，进行细胞裂解。
步骤二：加入蛋白酶K、DNase I和RNase A，消化蛋白质和RNA。
步骤三：使用乙醇沉淀DNA/RNA，将上清转移到新离心管中。
2. PCR扩增步骤一：配置PCR扩增体系，包括引物、模板DNA/RNA、dNTPs、Taq酶和缓冲液。
步骤二：设置PCR程序，包括变性、退火和延伸。
步骤三：进行PCR扩增反应，获取目的片段。
3. 凝胶电泳步骤一：制备琼脂糖凝胶，注入样品槽。
步骤二：加入DNA样品，在电泳仪中进行电泳分离。
步骤三：使用紫外可见分光光度计观察凝胶中DNA条带。
4. 蛋白质等电聚焦步骤一：制备等电聚焦槽，配置等电聚焦缓冲液。
步骤二：加载样品，进行等电聚焦分离。
步骤三：使用染色方法显示蛋白条带。
四、实验注意事项1. 操作过程中需注意无菌操作，避免污染实验样品。
2. 实验前需检查实验仪器的工作状态，确保正常运行。
3. 提取DNA/RNA需注意避免RNA降解，加入RNase A防止降解。
4. PCR扩增体系中引物的浓度和配对需合理搭配，避免影响扩增效果。
5. 实验结束后，及时清理实验台和仪器，保持实验环境整洁。
五、实验结果分析1. 根据凝胶电泳结果，识别目的DNA条带，并判定扩增效果。
2. 根据等电聚焦蛋白条带图谱，分析蛋白质的等电点及分子量。
3. 根据实验数据，综合分析实验结果，得出结论并提出下一步研究方向。
生物化学课程实验指导书
《生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2.严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3.进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。
4.实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5.实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6.使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7.做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8.实验后，要及时完成实验报告。
2006年1月目录生物化学实验细则 (1)目录 (2)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 (3)实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (11)实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (16)实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20)实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24)实验7生物氧化与电子传递 (25)实验8 植物体内的转氨基作用 (27)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应（3学时）目的要求1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
4.了解蛋白质两性性质原理在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
生物化学实训手册-维生素C的测定
任务：维生素C的测定(方法一)一、技能目标1、掌握碘量法测定维生素C的方法。
二、知识目标1、掌握碘量法测定维生素C含量的原理。
2、掌握治疗药物生化监测的方法。
（动医）3、掌握饲料中维生素C的分析方法。
（动科）4、掌握果汁饮料中维生素C的测定方法（生物）三、素质目标培养学生操作的准确性和把握终点的能力。
四、对应岗位1、兽药检测（动医）2、饲料营养成份分析（动科）3、食品检测（生物）五、工作原理碘量法测定Vc含量（1）铜盐(硫酸铜)与过量的碘化钾进行反应形成碘化铜。
碘化铜不稳定，随即分解为碘化亚铜和游离的碘。
2CuSO4+4KI→2CuI2+2K2SO42CuI2→Cu2I2+I2（2）释放出来的碘可氧化还原型抗坏血酸形成脱氢抗坏血酸和碘化氢，直到溶液里的还原型抗坏血酸被碘全部氧化为止。
剩余的微量碘与淀粉指示剂生成蓝色，终点明显。
抗坏血酸(还原型)+I2→2HI+抗坏血酸(氧化型)六、器材与试剂（一）器材：离心机;研钵;酸式滴定管;锥形瓶;漏斗等（二）试剂1、0.01 mol/L 硫酸铜(CuSO4.5H2O)溶液：精确称取 0.2497g 硫酸铜加水定容至 100 mL；2、30%碘化钾水溶液 (w/V)；3、1%可溶性淀粉指示剂溶液 (w/V)；4、偏磷酸-醋酸溶液：取15g偏磷酸溶于40mL冰醋酸和450mL蒸馏水的混合液中，在冰箱中过滤，滤液保存在冰箱中。
超过10天需重新配制。
（三）材料：维生素C片剂（动医）、饲料（动科）、果汁饮料（生物）七、操作步骤1、样品:取维生素C片剂0.2g，加10ml偏磷酸-醋酸溶液，在研钵内匀浆3分钟后倒入烧杯，再加入偏磷酸-醋酸40ml,混匀,后1500r离心3分钟，过滤入锥形瓶中。
2、滴定:精确量取一定体积的样品溶液5mL于100mL锥形瓶中，加10mL30%KI溶液。
再加数滴淀粉指示剂溶液。
随即用标准硫酸铜溶液(0.01mol/L)进行滴定。
边滴定边振摇，直至显示出蓝色，保持15s不褪色，为滴定终点，记录滴定量。
生物化学实验操作手册(生物科学专为业)
总论21世纪是生命科学的世纪,生物化学与分子生物学是当代生命科学领域中一门重要的基础学科,它涵盖的基础理论,基本知识,基本技术与医学研究各学科领域密切相关,其理论与技术的发展,推动了生命科学的发展,对人类的科技进步与文明产生巨大影响。
生物化学实验是医学院校学生必修的一门独立的基础实验技术课程，其研究技术的发展与应用是依据物理学、化学及生物学的基本理论和实验方法而建立起来的。
20世纪20年代微量分析的发展，30年代电子显微镜的出现，40年代层析技术和电泳技术的兴起，以及同位素示踪技术、各种光谱技术、核磁共振技术的应用，激光、超导等新技术的出现，电子计算机技术的突飞猛进，使生物化学实验手段提高到一个崭新的水平，掌握生物化学实验方法和研究技术，对医学院校学生来说是十分重要的。
本门课程主要侧重于给学生以基本的实验方法和技能的训练，让学生了解并掌握生物化学的四大基本实验方法，即：分光光度法、离心法、层析法和电泳法。
同时也注意引进一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究技术，作为学生学习其他专业课程和进入科学研究领域的准备。
一、实验要求1．实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果，操作关键步骤及注意事项。
2．实验时要严肃认真专心进行操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果，结果不良时，必须重做。
3．实验中，应及时将实验结果如实记录下来，并请老师当场审核。
根据实验结果进行科学分析，按时将实验报告交教师评阅。
二、实验时注意事项1．进实验室要穿好实验服，以免酸碱腐蚀衣服。
2．进实验室前准备好实验指导、课本、笔记、实验记录本、报告本、文具等。
3．要保持实验台整洁，试剂、仪器应整齐,按次序放置。
实验完毕要按各类仪器的清洗方法和要求将仪器清洗干净。
4．实验室是培养学生独立思考、独立工作能力及良好科学作风的重要场所，操作务必认真不得敷衍，室内应保持肃静，不得吸烟、玩闹，不得随地吐痰，乱丢纸屑。
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实验一、考马斯亮蓝G-250【实验目的】学习、掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。
【实验原理】考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合则呈现蓝色。
染料的最大吸收从465nm变为595nm，蛋白质－染料复合物在595nm具有很大的光吸收值，蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1ug蛋白质。
本方法操作简便快捷，灵敏度高，测定范围1-1000ug。
【实验材料、仪器及试剂】1．材料：新鲜的植物材料2．仪器：722分光光度计，天平，离心机，研钵，容量瓶，试管，移液管，漏斗（1）标准牛血清蛋白质溶液：0.1mg/ml（2）考马斯亮蓝G-250溶液：【实验步骤】1．样品的提取：准确称取鲜样2克，用2ml蒸馏水在冰浴中研成匀浆，转移到25ml容量瓶中并定容。
在8000rpm冷冻离心10min，取上清液待测。
2．标准曲线的绘制：取8支具塞试管，按表1加入试剂。
将上面8支试管摇匀，放置5分钟后，用1cm光径比色杯在595nm下比色，记录吸光值，以蛋白质浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
根据样品吸光值在标准曲线查得蛋白质含量。
【结果计算】C × V T样品中蛋白质含量（ug/g.FW）＝V S×W F×1000式中：C为查标准曲线值（ug）；V T为提取液总体积（ml）；V S 为测定时加样量（ml）；W F为样品鲜重（g）。
实验二植物组织中游离氨基酸总量的测定【实验目的】学习掌握鲜材料中游离氨基酸含量测定的原理和方法。
【实验原理】当氨基酸与水合茚三酮共热时，能定量地生成酮茚胺。
该产物显示蓝紫色，称为Ruhemans紫。
其最大吸收值在570nm ，并在一定范围内与氨基酸含量成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分为两步进行，第一步：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步：所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和氨缩合生成Ruhemans紫。
【实验材料，仪器及试剂】1．材料：新鲜的植物材料2．仪器：722分光光度计，天平，离心机，水浴锅，研钵，容量瓶，试管，移液管，三角瓶，漏斗3．试剂：（1）水合茚三酮试剂（2）乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）（3）标准亮氨酸标准液∶含氮为5ug/ml （4）0.3%抗坏血酸溶液：【实验步骤】1．样品提取∶取新鲜植物样品0.5-1g，加5ml 10%醋酸研磨，离心取上清液0.5ml，用pH5.4醋酸盐缓冲液，定容至25ml。
2．标准曲线的绘制：取6支20ml刻度试管，按下表进行操作。
加完试剂后混匀，在沸水中煮 5分钟，然后在冷水中冷却、摇匀，稀释到20毫升。
用1cm 光径比色杯在570nm下测定吸光度，绘制标准曲线，根据样品吸光值在标准曲线查得氨基态氮含量。
【结果计算】C×V T100克样品中氨基态氮含量＝×100V S×W F式中∶C为从标准曲线上查得的氨基态氮含量(ug)；V T为提取液总体积（ml）；V S 为测定时加样量（ml）；W F为样品鲜重（g）实验三酶的特异性、温度、pH对酶活性的影响（一）酶的特异性【实验原理】酶具有高度的特异性，一种酶只能催化一种化合物或某一类化合物，如淀粉酶，只能催化淀粉水解，而不能使蔗糖水解。
本实验以唾液淀粉酶分别对淀粉及蔗糖的不同作用，来说明酶的特异性。
【实验试剂】1．唾液淀粉酶的制备：用烧杯取蒸馏水或自来水，含于口中，1-2分钟后，吐入50mL烧杯中，备用。
2．0.3%NaCl的0.5%淀粉液3．0.5%蔗糖液4．Benedict试剂A、取CuSO417.3g溶于100mL热蒸馏水中，冷后稀释至150mL；B、取柠檬酸钠173g及Na2CO3（无水）100g，加水600mL加热使之溶解，冷后稀释至850mL；C、将A液缓慢注入B液中，混匀备用。
（可长期保存）。
【实验步骤】1．取试管两支，一支加入0.5%淀粉液2mL，另一支加入0.5%蔗糖液2mL；2．于两支试管中各加入制备好的唾液1mL；3．将两支试管同时放入37℃恒温水浴箱中保温；4．15分钟后，取出两试管，各加入Benedict试剂1mL；5．将两试管同时放入沸水中煮沸6分钟；6．取出两试管，观察记录颜色的变化，并注意有无红色沉淀产生，为什么？（二）温度对酶活性的影响【实验原理】酶促反应同一般化学反应一样都需要在一定的温度下进行，使酶促反应速度最大时的温度称为此酶的最适温度，低于此温度，酶促反应速度缓慢，高于最适温度，酶蛋白变性失活。
本实验以入唾液淀粉酶在不同温度下分解淀粉为例，说明温度对酶活性的影响。
【实验试剂】1．唾液淀粉酶的制备：用烧杯取蒸馏水或自来水，含于口中，1-2分钟后，吐入50mL烧杯中，备用。
2．0.3%NaCl的0.5%淀粉液3．KI-I溶液【实验步骤】1．取三支试管并编号，同时各加入5mL0.5%淀粉液及1mL唾液混匀；2．将管1、管2、管3同时分别放入冰浴，37℃水浴，沸水浴中；3．15分钟后，取出各管，分别加入碘液数滴，观察并记录各管颜色变化，并解释此现象。
（三）pH对酶活性的影响【实验原理】在一定条件下，酶活性最高时的pH值称为最适pH，偏离此pH，酶活性就会有所下降，不同酶的最适pH不同。
例如，胃蛋白酶的最适pH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适pH为8等。
本实验以入唾液淀粉酶（最适pH6.8）在不同pH条件下水解淀粉为例，说明pH对酶活性的影响。
【实验试剂】1．唾液淀粉酶的制备：用烧杯取蒸馏水或自来水，含于口中，1-2分钟后，吐入50mL烧杯中，备用。
2．pH1.5溶液：取0.2M Na2HPO4·2H2O溶液41.2mL加入0.1M柠檬酸38.8mL，然后用浓HCl调至pH1.5左右；2．pH6.8溶液：取0.2M Na2HPO4·2H2O溶液61.8mL加入0.1M柠檬酸溶液18.2mL；3．pH9.8溶液：取0.2M Na2HPO4·2H2O溶液77.8mL加入0.1M柠檬酸溶液2.2mL，然后用0.1N NaOH 调至pH9.8。
【实验步骤】1．取试管3支并编号，如下表加入各试剂；2．3支试管同时放入37℃恒温水浴箱内保温；3．15分钟后，取出3支试管，分别加入碘试剂数滴，每加1滴，注意摇匀，观察并记录颜色变化。
实验四淀粉酶活性的测定【实验目的】本实验的目的在于掌握分别测定这两种淀粉酶的方法。
【实验原理】淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3，5—二硝基水杨酸试剂测定。
由于麦芽糖能将3，5—二硝基水杨酸还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。
以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。
【实验材料、仪器和试剂】1．实验材料：萌发的小麦（芽长1厘米左右）2. 仪器：722分光光度计，天平，离心机，水浴锅，研钵，容量瓶，试管，移液管，三角瓶，漏斗3. 试剂：1％淀粉溶液，0.4N N a O H，，PH5.6的柠檬酸缓冲液，3，5一二硝基水杨酸，麦芽糖标准液，【操作步骤】1. 酶液的提取：称取2克萌发的小麦种子（芽长1厘米左右）,置研钵中加一克石英砂，磨成匀浆倒入50毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，离心6000转/分钟，取上清液备用。
2. a-及β-淀粉酶总活性的测定：取上述酶液2～6毫升，放入容量瓶中，用蒸馏水稀释至100毫升（稀释程度视酶活性大小而定）。
混合均匀后，取4支试管，2支为对照,2支为测定管，各加入稀释之酶液1毫升及1毫升Ph5.6之柠檬酸缓冲液。
以下步骤重复a-淀粉酶测定的第（4）及（5）的操作，同样准备糖的测定。
3. 酶促反应液的制备：取4只试管标号，按下表加入试剂: （反应时间要准确！！！）4. 标准麦芽糖及酶水解液中麦芽糖含量的测定；按下表加入试剂将上表中试剂加完后，充分混匀，放入沸水浴中准确煮沸5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25毫升，用分光光度计在520um波长下进行比色，记录消光值，以消光值为纵坐标，以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线；将酶水解液测定的消光值在麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量，然后进行结果计算。
【结果与计算】（a+β）-淀粉酶总活性[麦芽糖（毫克）/鲜重（克）/ 分钟]= （B-B’）×样品稀释总体积样品重（克）×CB一(a+β)-淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量B一(a+β)-淀粉酶的对照管中麦芽糖量C一比色时所用样品液毫升数实验五植物材料中维生素C含量的测定（染料滴定法）【实验目的】本实验要求学生掌握染料滴定法测定维生素C的原理和方法【实验原理】维生素C在体内是一种较强的还原剂，利用染料2，6-二氯酚靛酚作氧化剂，可将还原态的维生素C氧化成脱氢维生素C，而染料本身还原成无色的衍生物。
2，6-二氯酚靛酚在酸性条件下呈红色。
在滴定终点之前，滴下的2，6-二氯靛酚立即被还原成无色。
当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点。
【实验材料、仪器和试剂】1．实验材料：水果或蔬菜2．仪器：天平，微量滴定管，研钵，容量瓶，移液管，三角瓶，漏斗3．试剂：（1）2%草酸（2）0.001N2，6-二氯酚靛酚钠溶液【操作步骤】1．样品的处理和提取：称取4.0克新鲜样品，置研钵中，加5毫升2%草酸，研成匀浆。
通过漏斗将样品提取液转移到50毫升时瓶中。
残渣再用2%草酸提取2～3次，提取液及残渣一并转入量瓶中最后以2%草酸定容。
摇匀，过滤，滤液待测。
2．空白、样品的测定：吸取滤液10毫升，放入50毫升三角瓶中，立即用2，6-二氯酚靛酚钠溶液滴定到出现明显的粉红色在15秒内不消失为止。
记录所用滴定液体积。
（再重复二次）3．测定：取2%草酸10毫升，放入别一50毫升三角瓶内，用2，6-二氯酚靛酚钠滴定到终点，记录染料用量。
（平行两份）【结果与计算】（V1－V2）×K×VX= ————————————×100W×V3式中：X：100克样品所含维生素C毫克数（毫克/100克）W：称取样品重（克）V1：滴定样品所用染料毫升数V2：滴定空白所用染料毫升数V3：样品测定时所用滤液毫升数（即10毫升）V：样品提取液稀释之总体积（即50毫升）K：1毫升染料液所能氧化维生素C之毫克数，可由标定算出。
实验六血红蛋白凝胶过滤层析【实验目的】通过本实验学习凝胶过滤层析的操作技术，掌握凝胶过滤层析的原理及其应用。
【实验原理】凝胶过滤（gel filtration）是一种利用凝胶按照分子大小分离物质的层析方法，又称分子筛层析（molecularsieve chromatography）或排阻层析（exclusion chromatography）。