急性毒性试验-LD50的测定
实验2 LD50的测定
半数致死量的意义
测定药物的LD50是药物急性毒性实验的重 要内容。 LD50是恒量药物急性毒性的重要指标。
LD50的测定
一、测定LD50的常用方法：
1. 改良冠氏法：方法简单，计算简便。 2. 序贯法（上下法）：使用动物少，费时多， 不适于作用慢的药物 3. Biss法：设计严谨，结果可靠，是目前公认 的最佳方法，但计算复杂，一般需借助于计 算机或计算器才能进行计算。
100个自然数的随机排列
1 0 10 20 30 40 50 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Back
60
70 80 90
26 23 49 51 04 00 58 15 70 64
03 08 34 52 53 27 83 90 63 88
86 20 97 47 98 40 78 57 67 59
37 36 66 83 43 29 23 95 32 64
19 54 65 28 63 05 04 20 89 00
62 81 78 59 48 17 52 68 15 79
47 30 84 92 94 26 71 99 02 08
10 55 61 13 85 33 88 69 87 97
16 86 53 56 80 06 74 67 90 22
86 19 34 69 13 54 26 99 30 22
09 94 96 60 77 01 47 50 55 23
48 73 15 98 06 40 18 88 21 16
53 92 95 85 11 29 58 25 78 83
63 59 28 02 91 42 41 71 56 33
66 00 85 67 76 17 90 14 51 46
药物急性毒性试验LD50的方法
精品文档药物急性毒性试验LD 50的方法对全新结构的药物或中草药复方，先通过小批量动物的摸索，找出0%和100%估计致死量（即Dmin和Dmax），再求出i值。
（1）用10倍稀释的药物浓度系列，用少量动物（每组2~3只），找出大致死亡范围。
如:上述结果提示，大致死亡范围为：50~500 mg/kg。
（2）再用1、2、4、8……等2倍稀释的药物浓度系列，每组4只，找出Dmin和Dmax。
如：Dmax :当出现4/4死亡时，如其前一组为3/4死亡，则取4/4组的剂量为Dmax ;如前一组为1/4或2/4死亡，考虑到4/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率低于70%，为慎重起见，可将4/4组的剂量乘以2作为Dmax。
Dmax=400 X 70% X 2=560 mg/kgDmin :当出现0/4死亡时，如其后一组为1/4死亡，则取0/4组的剂量为Dmin ;如后一组大于1/4，考虑到0/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率高于70%，为慎重起见，可将0/4组的剂量除以2作为Dmin。
Dmin=50 十70% 十2~ 35 mg/kg（3）本法用较少的动物和药物，寻找出正式实验时最高死亡率不低于70%，最低死亡率不高于30%点剂量范围在确定了Dmax和Dmin以后，可求得组间距（i值）：lg Dmax-lgDmini= ------------------------------n-1（4）以Dmin的对数为起点，向上退出n组动物的各组剂量的对数值，求出反对数即可得出各组的剂量值。
注意：①LD50测定中剂量组数的设计，除符合统计学要求外，还应根据预试验所提供的药物的毒性情况而定。
②一般而言，在实际工作中，设4~5个剂量组，组距以0.65~0.85为宜。
③小鼠每组10只（雌雄各半），大鼠不应少于6~8只。
急性毒性试验
试验步骤和操作要点
1
试验设计
2
确定试验物质的给药途径、剂量和
暴露时间，合理设计试验组和对照
组，以确保试验数据的可比性。
3
数据分析
4
收集和整理试验数据，进行统计分 析和结果解读，评估化学物质的毒
性潜力和危害等级。
试验准备
准备动物和试验物质，并遵守试验 室安全和伦理规定，保证试验过程 的准确性和可靠性。
试验操作
按照设定的方案进行实验操作，严 格控制剂量和暴露时间，记录动物 的毒性反应和不良效应。
试验结果的解读和评价标准
急性毒性试验结果一般以LD50值为指标进行解读，在国际上有一系列评价标准，用于评估化学物 质的毒性程度和危害等级。
试验的局限性和改进方向
1 动物模型的局限性 2 测试方法的改进
动物模型不能完全代 表人类生物反应，因 此在试验结果的解读 和评估时需要谨慎考 虑。
急性毒性试验
急性毒性试验是一种评价化学物质对生物体的短期毒性潜力的试验方法，通 过暴露一定剂量的物质给实验动物，观察其对动物的毒性反应以及产生的不 良效学物质对生物体的毒性程度及其可能产生的危害， 为了规范评估过程，国际上制定了一系列的试验方法和评价标准。
常用的试验方法和原理
需要进一步发展和改 进更精准、准确的试 验方法，以提高试验 结果的预测性和可比 性。
3 替代和替补模型
发展替代和替补模型， 例如体外细胞实验和 计算机模拟，以减少 对动物实验的依赖。
试验的应用领域和意义
急性毒性试验在化学品安全评估、药物研发、环境保护等领域具有重要意义， 为保障人类健康和环境安全提供科学依据。
LD50试验 通过确定半数致死剂量（LD50）来评估化学物质的毒性，以毫克/ 千克体重作为单位。 急性口服毒性试验 通过将一定剂量的物质通过口服给予 动物，观察其对动物的毒性反应，用于评估化学物质的毒害程度。 急性皮肤 毒性试验 通过将一定剂量的物质涂抹于动物皮肤上，观察皮肤反应和毒性症 状，用于评估化学物质的皮肤刺激和毒害作用。
实验二 经口急性毒性LD50测定
实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。
一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。
根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。
据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。
以次类推，找出Dmin。
2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。
在确定组数后，按下列公式计算r。
1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。
剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。
毒理学指标及试验操作汇总
.药物毒性试验指标1.急性毒性试验一、半数致死量（LD50）的测定(一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。
(二)动物分组和剂量1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。
2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液.(三)试验方法1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。
2.给药途径和容积:给药途径:应与临床试验的途径相一致。
口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。
水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。
给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g体重。
大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。
3.测定LD:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。
给受试物后立即观察50动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。
详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计算出LD值及95%可信限。
504.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。
死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。
若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进行复试。
(四)试验报告和结果评价应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含量、试验方法。
LD 值及其95%可信限，以及各剂量组的死亡率，或最大耐受量的值及其相当于临床剂量的50倍数.详细报告实验过程中动物出现的中毒表现及致死症状，综合评价受试物毒性大小。
急性毒性及其评价方法
可根据以下公式计算出剂量分组：
i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1)
式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n为设计的剂量组数。
3、正式试验
一般来说，根据试验设计所选用的LD50计算方 法来确定组数。例如改良寇氏法一般设5～7个剂量 组；霍恩法固定设4个剂量组。求得i后，以最低剂 量组(LD0或LD10)的对数剂量加上一个i值，即是第 二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组， 查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。
灌胃操作方法
先固定动物,即用右手将小鼠尾巴提起，置于鼠笼 或粗糙的平面上，当小鼠向前挣扎时，用左手的 拇指和食指捏住小鼠两耳后颈背皮肤，翻转小鼠 置于掌心，拉直后肢，以小指压住小鼠尾巴即可。 在固定小鼠过程中，不要用力过大，勿握其颈部， 以免窒息死亡。
以灌胃器轻轻压其头部，使口腔与食道成一条直 线，再将灌胃针沿上腭壁轻轻进入食道，当灌胃 针进入约3cm左右时即达胃内。
一、急性毒性的概念
急性毒性：是指机体(人或实验动物)一次 或24小时内多次接触外源化学物后在短期 内所产生的毒性效应。
包括外观改变、大体形态变化、行为方式 及死亡效应，最主要观察指标是LD50
❖实验动物接触化学物的方式或途径不同， “一次”的含义也有所不同
➢ 经口和注射接触，“一次”是指在瞬间将 受试化学物输入实验动物体内
（4）体重：
体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重改 变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可 出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减 轻；若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利 用，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取 或肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。 所以，对存活动物尤其是对低于LD50剂量组的存 活动物，应在观察期14天内称量其体重的变化， 以便了解受试物引起毒效应的持续时间。
急性经口毒性实验
等容量稀释法
D：设计的染毒剂量， mg/kg V：动物给药量（相同单位体重体积）均为
10ml/kg X：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml）
，
D X
V
如：第一组染毒剂量D=51.2mg/kg，动物按 V= 10ml/kg体重给药，配制的受试物浓度为 X=51.2mg/10ml
小鼠染毒剂量= V ml ×各组的受试物浓度（mg/10ml)
（四）灌胃方法：
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后 皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹 部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化 道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器， 将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓 缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一 旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小 鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动 物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插 入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即 死亡。小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg
依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为
第一组：51.2mg/10ml 第二组： 64mg/10ml 第三组： 80mg/10ml 第四组： 100mg/10ml 第五组： 125mg/10ml
各剂量组小鼠灌胃容量计算:
小鼠灌胃容量V ml=体重（g）×10ml/1000g
各剂量组小鼠染毒剂量:
（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼
吸深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； （4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳
ld50测定
实验一、LD50的测定[目的] 通过测定药物LD50的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性试验的常规。
[材料] 小鼠50只(体重17－25g，雌雄各半) 注射器及针头1. 探索剂量范围取小鼠8-10只，以2只为一组分成4-5组，选择组距较大的一系列剂量，按腹腔注射哈顿佐剂，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0％及100％死亡率(至少应找出引起20％—80％死亡率)剂量的所在范围。
2. 进行正式试验在预初试验所获得的0％和100％致死量范围内，选用5个剂量按等比级数增减；尽可能使半数组的死亡率都在50％以上，另半数组的死亡率都在50%以下。
每组10只左右，动物的体重和性别要均匀分配。
完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。
最好先从中剂量组开始，以使能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。
LD50测定中应观察记录的项目：1、实验各要素：实验题目，实验日期，室温，检品的批号、规格、来源、理化性状、配制方法及所用浓度等；动物品系、来源、性别、体重、给药方式及剂量(药物的绝对量与溶液的容量)和给药时间等。
给药后各种反应；潜伏期(从给药到开始出现毒性反应的时间)；中毒现象及出现的先后顺序，开始出现死亡的时间；死亡集中时间；末只死亡时间；死前现象。
逐日记录各组死亡只数。
尸解及病理切片：从给药时开始记时，凡两小时以后死亡的动物，均及时尸解以观察内脏的病变，记录病交情况．若有肉限可见变化的则需进行病理检查．整个实验一般要观察7-14天，观察结束时，对全部存活动物称重，尸解，同样观察内脏病变并与中毒死亡鼠尸解情况相比较。
当发现有病变时，也同样作病理检查，以比较中毒后病理改变及恢复情况。
2、结果计算根据试验设计，采用相应的方法计算LD50，一般采用按Reed－Muench法计算或寇氏改进法karber法。
实验二、急性毒性试验试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官和观察指标的设计提供参考信息等。
急性毒性试验-LD50的测定
急性毒性试验-LD50的测定急性毒性试验是一种通过给实验动物注射、灌胃或其他途径给予高剂量试验物质来评估其致死或严重的毒性反应的试验。
LD50是一种常用的急性毒性指标，表示半数实验动物在接受单位剂量试验物质后死亡的剂量。
本文将介绍LD50的测定方法和其应用。
一、LD50的测定方法1. 实验动物的选择LD50实验通常使用小鼠、大鼠、兔子和狗等动物进行。
选用实验动物需要秉持道德原则，并考虑到动物的生物学特征、毒物代谢能力等方面的因素。
例如，小鼠和大鼠体型较小、代谢能力较低，适合于测定具有代谢性毒性的化合物的LD50；兔子和狗体型较大，代谢能力较强，适合于测定纯化、非代谢性毒性的化合物的LD50。
2. 给药途径和剂量选择通常使用口服、皮下注射、静脉注射等给药途径。
对于口服试验，需要注意试验物质的水溶性和毒性，对于毒性高的化合物，通常使用灌胃的方式。
实验的剂量需要考虑到实验动物体型、种类、代谢能力等因素，并进行逐步递增以确定LD50。
3. 实验计划设计实验计划设计需要考虑到试验物质的毒性、剂量效应关系和死亡率等因素。
一般采用正反两次递增的方法，进行急性毒性试验评估。
根据试验物质的毒性情况和实验者的安全考虑，同时采取风险预警措施。
4. 数据处理和计算完成实验后，需要统计每个剂量组的死亡率和死亡时间。
按照统计学原理，可以根据实验数据计算出LD50值。
LD50值表示使用单位剂量试验物质对半数实验动物致死的剂量。
该值越小，试验物质的毒性越高。
二、LD50的应用LD50值可以作为急性毒性评估的定量指标，用于比较不同化合物的毒性。
在化学品、药品等领域里进行LD50测定可以帮助人们更好地预测和评估一些原料与产品的安全性，以便于过程优化和产品开发，同时为相关政策制定提供科学依据。
LD50值的应用最为广泛的领域是毒性测试和安全性评估。
在毒理学和环境毒理学领域里，常用LD50为评估的标准；在某些国家的法律法规中，也要求企业对使用的化学品或产品进行毒性测试，以保证工人和消费者的安全。
中国药典ld50方法
中国药典ld50方法摘要：一、引言二、LD50方法的定义和作用三、中国药典LD50方法的具体步骤四、实验动物的选择与处理五、剂量设计与给药途径六、观察期与死亡率统计七、结果分析与LD50值的计算八、应用与局限性九、总结正文：一、引言在中国药物研究和开发过程中，安全性评价是至关重要的环节。
LD50（Lethal Dose 50）试验是毒性试验中最常用的一种方法，用于评估化学物质的急性毒性。
本文将详细介绍中国药典LD50方法的操作流程、注意事项及其在药物安全性评价中的应用。
二、LD50方法的定义和作用LD50方法是指通过一次性给予实验动物不同剂量的化学物质，观察其在一定时间内产生的毒性反应，以半数动物死亡剂量作为评价指标。
该方法有助于了解化学物质的急性毒性程度，为药物的研发和生产提供安全性依据。
三、中国药典LD50方法的具体步骤1.实验动物的选择：根据实验需求选择合适的动物种类和品系，一般选用小鼠、大鼠等常见实验动物。
2.动物处理：实验前对动物进行健康检查，确保其生理状态良好。
给动物适应环境，消除恐惧感。
3.剂量设计与给药途径：根据化学物质的性质，选择合适的剂量范围和给药途径。
通常采用口服、腹腔注射、皮下注射等途径。
4.观察期与死亡率统计：给药后观察动物的毒性反应，如行为异常、呼吸急促、腹泻等。
记录观察期内动物的死亡情况，计算死亡率。
5.结果分析与LD50值的计算：根据实验数据，绘制剂量-死亡率曲线，计算LD50值。
通常以剂量对数作为横坐标，死亡率作为纵坐标。
四、实验动物的选择与处理1.选择健康、年龄相近、体重均匀的动物。
2.实验前对动物进行健康检查，确保其生理状态良好。
3.给动物提供适宜的生活环境，保持清洁、安静、温暖、通风良好。
4.实验前对动物进行适应性饲养，使其适应实验环境。
5.实验当天，给动物称重，记录体重。
五、剂量设计与给药途径1.设计剂量时，应充分考虑化学物质的毒性、动物种属、给药途径等因素。
急性毒性试验-LD50的测定
急性毒性试验 -LD50 的测定开放性实验总结报告学生姓名班级学号所在院系专业开放实验室名称日期 2013-5-5北京理工大学实验室设备处制一、实验项目概况实验项目的主要结论：戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg用 Bliss 法计算半数致死量，回归方程y(Probit)=-24.916+14.058Log(D)半数致死量 LD50=134.32mg/kg二、实验项目技术报告3145表1 药物对小白鼠产生效应情况【实验结果】：LD50的测定依据药物剂量依次给药。
利用Bliss 法计算LD50样品名称戊巴比妥钠实验动物昆明小鼠给药途径腹腔注射实验日期 2013.5.5用 Bliss 法计算半数致死量6剂量对数剂量动物数死亡数死亡百分率实验机率单位回归机率单位(x) (只) (只)(%) (Y) (Y)77 1.8865 3 0 0.00 --- 1.603196 1.9823 3 0 0.00 --- 2.9495120 2.0792 3 1 33.00 4.5697 4.3119150 2.1761 3 2 67.00 5.4303 5.6742190 2.2788 3 37.11731E27回归方程 y(Probit)=-24.916+14.058Log(D)半数致死量 LD50=134.32mg/kgLD50(Feiller 校正 )95% 的可信限=92.405--205.57mg/kgLD5=102.59mg/kgLD95=175.85mg/kg8三、参加开放性实验的体会与建议9四、评价与认定导教师评价意见与成绩评定：实验态度积极认真，并且能够较好的完成实验包含的内容。
试验后积极思考老师提出的问题。
成绩：指导教师签字：年月日院系主管领导审核与学分评定意见：同意核准该生选修学分数分院系主管签字：年月日10学校主管部门审批意见：部门签章：年月日备注：11。
实验二 经口急性毒性试验
毒理学实验二经口急性毒性试验一、实验目的1、掌握实验动物分组方法2、测定LD50的试验设计原则3、小鼠的经口灌胃技术二、试剂和材料1、实验动物：（1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g（2）样品来源：首都医科大学实验动物部2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。
3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。
三、实验内容1、健康实验动物的选择和性别鉴定选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。
动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。
）肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性2、实验动物称重、编号和随机分组选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。
3、受试化学物溶液的配制（1）确定灌胃量：0.1ml/10g（2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积（3）药品称量及稀释4、小鼠灌胃技术左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。
5、毒性体征的观察和LD50计算（1）毒性体征的观察：染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min组数：各组死亡率：数相邻两组对数剂量之差：最大剂量的对数 P d :X )P P (d 21X lg 150i i k i i k LD ∑++-=)lg 96.1(lg lg 95%:1)P 1(P d lg 50501-50LD S LD ni ni LD S i i ±--=∑可信区间：实验动物数。
标准误公式：（2）LD50的计算：a 、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。
剂量组距 d 为：d 为相邻两个剂量组剂量对数之差利用lgLD0依次加d ，取反对数，即可得出各组剂量。
毒力测定的方法
毒力测定的方法毒力测定是一种用于评估物质对生物体的毒性的方法。
它在药物研发、环境监测和食品安全等领域具有重要意义。
下面将介绍常用的毒力测定方法，包括急性毒性测定、慢性毒性测定和基因毒性测定。
1.急性毒性测定：急性毒性测定用于评估物质对生物体在短时间内的毒性影响。
常用的急性毒性测定方法包括LD50（半数致死剂量）测定和急性毒性试验。
LD50测定通过给实验动物以不同剂量的物质，观察半数动物死亡所需的剂量，来评估物质对生物体的毒性程度。
急性毒性试验通常使用小鼠、大鼠或其他实验动物，观察物质在短时间内对生物体的影响，包括行为、致死率、体重变化等。
2.慢性毒性测定：慢性毒性测定用于评估物质对生物体长期暴露后的毒性影响。
常用的慢性毒性测定方法包括慢性毒性试验和生殖毒性试验。
慢性毒性试验通过给实验动物长期饮食或注射物质，观察其对生物体的影响，包括生长发育、行为、器官功能等。
生殖毒性试验主要评估物质对生殖能力和胎儿发育的影响，包括种鼠试验和胚胎毒性试验。
3.基因毒性测定：基因毒性测定用于评估物质对基因组的损伤和突变的影响。
常用的基因毒性测定方法包括细菌突变试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验和激光束微单带凝胶电泳（COMET）试验。
细菌突变试验通常使用大肠杆菌或沙门氏菌等细菌，观察物质对细菌基因的突变作用。
小鼠骨髓细胞染色体畸变试验通过观察物质对小鼠骨髓细胞的染色体损伤和畸变，评估其对基因组的影响。
COMET试验则通过电泳法测定细胞DNA的断裂和损伤程度，进一步评估物质对基因组的损伤和突变作用。
毒力测定方法在实验过程中应严格遵守伦理原则和实验操作规范。
同时，需要根据实际需求选择合适的物质浓度和实验动物，确保测定结果准确可靠。
此外，还应结合其他相关的生物学指标和实验数据，综合评估物质的毒性。
总而言之，毒力测定方法是评估物质对生物体毒性的重要手段。
各种毒力测定方法在研究领域和监测实践中得到了广泛应用，对保护人类健康和环境安全具有重要意义。
食品的测定实验急性毒性实验
n 致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能 够引起试验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值， 用符号LD50表示。由于LD50的测定较简便、可靠，而且 稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。 LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化 机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等 等。以上方法虽各有特点，但都有共同的要求：
食品的测定实验急性毒性实验
n 分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的 受试药物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开 始，以便从最初几个剂量组动物接受药物后的反应来判断 两端剂量是否合适，便于调整剂量和组数。为了提高实验 的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释法”配置。 即使每只动物的用药体积相等（0.2ml/10g），而溶质不 等。给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况。
食品的测定实验急性毒性实验
五、实验结果记录与计算
组 剂量 Logd(X) 死亡数 死亡率 P2
别 g/kg(d)
（P）
P-P2
1
2
3
4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
食品的测定实验急性毒性实验
n 公式1: （logLD50） X50=Xm-i(ΣP-05)
n
则LD50=log-1 X50
n 公式2： Sx50=i*
n 公式3：LD50的95%可信限=lg-1（X50±1.96S X50）
n （1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体 重相差不得超过4克），或选用体重120～150克（同次试 验体重相差不得超过10克）健康大鼠作实验动物。性别相 同或雌雄各半。
食品的测定实验急性毒性实验
药物急性毒性实验
药物急性毒性实验实验⼀药物急性半数致死量（LD50）的测定【⽬的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定⽅法和计算过程。
【原理】LD50是指在⼀群动物中能使半数动物死亡的剂量。
由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值⼤多在50％质反应的上下呈正态分布。
在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，⽽在50％质反应处曲线斜率最⼤，因此这⾥的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能⽐较准确地反映药物毒性的⼤⼩。
【实验材料】1、动物：⼩⽩⿏，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁⾷12⼩时，不禁⽔。
2、药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。
3、器械：⼩⿏笼，天平，注射器（1mL），电⼦计算器。
【⽅法和步骤】（⼀）预备实验1、探索剂量范围：先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（D m及D n）。
⽅法是先取出⼩⿏9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或⽂献资料定出）给药，如3只⼩⿏全死则降低剂量⼀半，如全不死则增加剂量⼀倍，如部分死亡，则按2：1的⽐例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。
2、确定组数，计算各组剂量：确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，⼀般分5-8个剂量组。
计算各组剂量：要求各组剂量按等⽐级数排列，在找出D m及D n和确定组数后，可按下列公式求出公⽐r：r再按公⽐计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……D m，其中D1=D n=最⼩剂量，D2=D1?r; D3=D2?r; D4=D3?r; D5=D4?r; ……D G=D G-1?r。
r值⼀般以1.7~1.15之间为宜。
计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。
先代⼊公式求r=1.25，再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg,D2=76.8?1.25=96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及D G(D5)分别为120，150，187.5 mg/kg。
急性毒性试验-LD50的测定
急性毒性试验-LD50的测定北京理工大学开放性实验总结报告学生姓名 _____ 班级________ 学号_________ 所在院系 ______ 专业___________开放实验室名称 _________________________日期2013-5-5北京理工大学实验室设备处制一、实验项目概况实验项目的主要结论：戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg用Bliss法计算半数致死量，回归方程y(Probit)=-24.916+14.058Log(D)半数致死量ID50=134 32mg/kg二、实验项目技术报告1 •实验原理表1【实验结果】：LD50的测定依据药物剂量依次给药。
利用Bliss法计算LD50样品名称戊巴比妥钠实验动物昆明小鼠给药途径腹腔注射实验日期2013.5.5用Bliss法计算半数致死量剂量对数剂量动物数死亡数死亡百分率实验机率单位回归机率单位（X）（只）（只）(%)(Y)(Y)77 1.8865300.00— 1.603196 1.9823300.00— 2.9495120 2.07923133.00 4.5697 4.3119150 2.17613267.00 5.4303 5.6742190 2.2788337.11731E2回归方程y(Probit)=-24.916+14.058Log(D)半数致死量LD50=134.32mg/kgLD50(Feiller 校正)95%的可信限=92.405--205.57mg/kgLD5=102.59mg/kgLD95=175.85mg/kg三、参加开放性实验的体会与建议四、评价与认定导教师评价意见与成绩评定：实验态度积极认真，并且能够较好的完成实验包含的内容。
试验后积极思考老师提出的问题。
成绩：指导教师签字：年月日院系主管领导审核与学分评定意见：同意核准该生选修学分数分院系主管签字：年月日学校主管部门审批意见:部门签章：年月日备注:。
LD50测定实验
How to mark?
4
1
7
2
5
8
3
9
6
3. 给药途径
新药报批要求2个，其中1个与临床给药 途径一致
本次实验：ip 0.2ml/10g
Intraperitoneal injection, ip P17
The mouse is grasped tightly, and held in a head-down position.
药物半数致死量ld50的测定p164医学部药理系急性毒性试验acutetoxicity指机体一次或短时间内24h多次接受大剂量某种药物后所产生的快速而剧烈的中毒反应包括死亡效应是药物安全性评价的第1道关卡
药物半数致死量（LD50）的测定 P164
医学部药理系
实验目的
掌握LD50测定的意义 掌握LD50测定的方法、步骤和计算方法
急性毒性试验 Acute Toxicity
指机体一次或短时间内（24 h）多次接 受大剂量某种药物后所产生的快速而剧 烈的中毒反应，包括死亡效应，是药物 安全性评价的第1道关卡。
What is LD50?
半数致死量：能引起50%的实验动物出 现死亡反应时的药物剂量
LD50 ( Median Lethal Dose) is the dose of a substance that will kill half of the test animals.
Number
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Weight (g)
Injection volume (ml)
0.2ml/10g
盐酸普鲁卡因LD50测定结果
No. of group
1
No. of mice
LD50的测定
• 注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间； • 动物的种类、品系、体重范围、给药途径及观
察时间等因素均可影响LD50的结果，故在报告 中应加以说明；
新斯的明
【药理作用】可逆性抑制Ach E，使Ach蓄积而产生 Ｍ、Ｎ样作用。
实验方法
➢1、预备实验 （1）摸索上下限：
即用少量动物粗摸索出使 全部动物死亡的最小剂量（LD100/Dm） 和 无一动物死亡的最大剂量（ LD0/Dn ）。
（2）等比溶液配制： A、确定组数、组间剂量比（r）：
一般地，设组数n＝5~8，r=0.7~0.85
r ( n1) Dn Dm
组距（d）＝
1、针头刺入部位不宜太 接近上腹部或太深，以 免刺破内脏。针头与腹 腔的角度不宜太小，避 免刺入皮下。 2、使用针头不宜太粗， 避免药液注射后从注射 孔流出。
➢灌胃给药
1.用左手拇指和食指抓住鼠两 耳和头部皮肤，其他三指抓住 背部皮肤，将鼠抓持在手掌内， 固定好动物，头部和颈部保持 很平,右手取注射器进行灌胃。 2.灌时针头沿鼠口角通过食管 进入胃内。灌时如很通畅，则 表示针头已进入胃内；如动物 有呕吐动物或强烈挣扎，必须 拔出后按上述方法重新操作。 决不可进针不顺硬向里插。
– 1． 启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处 理选项，再进入半数致死量选项。
– 2． 一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等 相关数据。
– 3． 单击“计算”按钮计算LD50等参数。
实验材料
实验动物： 昆明种小鼠，体重18-22g， 雌雄兼用，实验前禁食12h，不禁水。
实验器材： 1ml注射器、电子秤、鼠笼、电子计算器
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半数致死量LD50=134.32mg/kg
LD50(Feiller校正)95%的可信限=92.405--205.57mg/kg
LD5=102.59mg/kg
LD95=175.85mg/kg
(2)：确定组数并计算各组剂量
确定组数《G》：根据适宜的组距确定组数，一般分为5到8个剂量，这里我们分为5组，按等比级数增减
计算各组剂量：在找出Dm、Dn和确定组数后，课按下列公式求出公比r<r=lg-1[(lgDm—lgDn)/(G—1)]>.再按公比计算各组剂量Dl-Dm,其中D1=Dn=最小剂量。
急性毒性试验-LD50的测定
开放性实验总结报告
学生姓名班级学号
所在院系专业
开放实验室名称
日期2013-5-5
北京理工大学实验室设备处制
一、实验项目概况
开放实验题目：实验动物的基本操作及其相关技术
实验题目类型：□参与科研□科技活动√自选实验□素质培养
指导教师及实验技术人员姓名：李岩
实验项目起止日期：2013-4-5至2013-5-5
乳胶手套，KM小鼠,封口膜
实验项目的主要结论：戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg
用Bliss法计算半数致死量，回归方程y(Probit)=-24.916+14.058Log(D)
半数致死量LD50=134.32mg/kg
LD50(Feiller校正)95%的可信限=92.405--205.57mg/kg
120 2.0792 3 1 33.00 4.5697 4.3119
150 2.1761 3 2 67.00 5.4303 5.6742
190 2.2788 3 3 1E2 ---- 7.1173
--------------------------------------------------------------------------
分组
动物数（N）
剂量（mg/kg）
对数剂量（X）
动物死亡数（n）
死亡率（P=n/N）1234 Nhomakorabea5
3
3
3
3
3
77
96
120
150
190
1.89
1.98
2.08
2.18
2.28
0
0
1
2
3
0％
0％
33.3％
66.7％
100％
表1药物对小白鼠产生效应情况
【实验结果】：LD50的测定
依据药物剂量依次给药。利用Bliss法计算LD50
2．实验内容
(1)探测戊巴比妥钠LD50的剂量范围。
(2)确定组数并计算各组剂量。
（3）正式实验：给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。
（4）记录实验结果，并计算LD50。
3．实验方法：
1、预试溶液配制和样品处理（预实验）
(1)探索剂量范围：
取小鼠9到12只，以3只为一组，分成3到4组，包括组距较大的一系列剂量，按组分别腹腔注射戊巴比妥钠溶液，观察出现的症状并记录动物死亡数，找出引起0及100%有效剂量的所在范围，此即上下限剂量Dn和Dm。
样品名称戊巴比妥钠
实验动物昆明小鼠
给药途径腹腔注射
实验日期2013.5.5
用Bliss法计算半数致死量
--------------------------------------------------------------------------
剂量对数剂量动物数死亡数死亡百分率实验机率单位回归机率单位
利用何种时间段开展实验：课余时间
开展实验的累计总学时数：32学时
实验项目基本原理：
急性毒性试验是临床前新药安全性评价的第一步，与其它毒性实验相比具有简单、经济、易行等特点。因此新药研究开发时往往通过该项试验，尽可能多的了解一些新药的毒理学特点，为早期判断侯选新药是否具有研究开发价值提供毒性强度资料。通常测定药物ED50及LD50以初步估计药物毒性大小。
LD5=102.59mg/kg
LD95=175.85mg/kg
二、实验项目技术报告
1．实验原理
戊巴比妥钠属于巴比妥类镇静催眠药，对中枢神经系统有普遍性抑制作用，可起到镇静、催眠、抗惊厥作用。一定剂量的戊巴比妥钠引起一般实验动物死亡。半数致死量（LD50）,即在一群实验动物中，能使实验动物一半死亡的药量，其值越大越好。
实验项目的实验方法概述：
给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化，通过比较不同组别小鼠出现死亡的数量来计算LD50。
实验项目的仪器设备组成情况：
天平，1000ul的移液枪，200μl移液枪，2ml离心管，1ml注射器，手术器械(包括剪刀、镊子等)，鼠笼，离心管架
实验项目的消耗材料明细：
配置等比药液系列，让每只小鼠给药量相等，一般为0.1ml/10g体重
经过预实验的五个剂量浓度分别是77、96、120、150、190mg/kg,相应浓度：0.77、0.96、1.2、1.5、1.9%，在随后的急性毒实验中对这些剂量进行验证
2、急性毒性试验：
昆明种小鼠共15只，实验前一天晚禁食不禁水，实验当天称重，标记，随机分组。给5组小鼠分别按77、96、120、150、190mg/kg,腹腔注射，给药后观察动物死亡情况。记录小鼠死亡时间，死亡数目。利用Bliss法计算LD50。
(x) (只) (只) (%) (Y) (Y)
--------------------------------------------------------------------------
77 1.8865 3 0 0.00 ---- 1.6031
96 1.9823 3 0 0.00 ---- 2.9495