导数分光光度法-资料
分光光度法ppt课件共84页
A＝ bc
的单位: L·mol-1·cm-1
当c的单位用g·100mL-1表示时，用
E
1% 1cm
表示，
A＝
E
1 1
% cm
bc，
E
Байду номын сангаас
1 1
% cm
叫做比消光系数
例 已知含Cd2+140gL-1的溶液，用双 硫腙比色测定镉，比色皿厚度为2cm， 在波长520nm处测得吸光度为0.220， 计算摩尔吸光系数。
离解、络合、缔合会破坏线性关系
应控制条件(酸度、浓度、介质等)
3. 稀溶液
浓度增大，分子之间作用增强
x104
亚甲蓝阳离子
单体 max= 660 nm 二聚体 max= 610 nm
(nm)
亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱 a. 6.36×10-6 mol/L b. 1.27×10-4 mol/L c. 5.97×10-4 mol/L
0.1 10
200 380 760 nm
λ
电磁波谱
二、物质对光的选择性吸收
溶液呈现不同的颜色是由于它对不同 波长的光具有选择性吸收而引起的.用 白光照射某有色溶液,呈现出的是透射 光颜色.吸收的色光和透过光称为互补 色光.
红
紫
橙
蓝
白光
黄
青蓝
绿
青
三、分子吸收光谱及其产生
吸收光谱
若用一连续辐射的电磁波照射某有色溶 液，测量每一波长下有色液对该波长的 吸收程度，然后以波长为横坐标，以吸 光度 为纵坐标作图，得到一条曲线—— 吸收曲线,亦称吸收光谱。
B
电子能级
转动能级
振动能级
A
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
现代光学分析：第3章 导数分光光度分析
点 极大或极小，这有助于
大
1
精确确定吸收峰的位置
处
和肩峰的存在。
0
(2).偶阶导数(n=2,4
4
•••)曲线的形状与零阶曲
线较为相似，零阶曲线
的极大处相应于偶阶导
3
零
零 数曲线的极大或极小;
阶
阶 零阶曲线的拐点相应于
曲
曲
线
2 线 偶阶导数曲线通过零点。
极
拐
大
点
处
1
0
极 值 数
45
34
23
12 01
（1）.切线法 对相邻两峰 (谷)作切 线，测量两峰间的谷 (峰)至切线间的距离 (图中的b 线). 此法适 合于有线性背景的情 况，只要基线平直， 不论其是否倾斜，都 能得到正确的结果。
(2)·峰-峰法 通过测量相邻峰谷间
的距离（正峰和负峰之 和）来进行定量分析 (图 中的a或 c线)，这是最常 用的方法，灵敏度高。
(3).波长调制法
为调制频率.t为时间
1处用泰勒级数展开得 到强度分布,
如果对含有t, 2t,3t••• 的成份进行检波，即可获 得一阶，二阶，三阶••• •••导数信号。
（4）.双波长扫描法
根据需要, 预先使两个单色器的波长差Δ= 2- 1,固定在Δ足够小(只有1-2nm),可 视为ΔA/Δ=dA/d,若在扫描时保持Δ为常数c,即dA/d=ΔA/c. 因此,即可沿吸收曲线连续记录恒定波长间隔所产生的吸光度差来获得导数曲线.
(3)·峰-零法 在基线平坦时，测量
峰至基线间的距离，如 图中的d线·此法灵敏度 较低，但选择性较好, 测量精度较高。
⑷.零点法(或基线相交法) 一个高斯型谱带经n次求导后,得到n个零点,
分光光度法 科普
分光光度法科普分光光度法（Spectrophotometry），简称分光法，是一种广泛应用于生物、化学、医药等领域的分析技术。
它基于物质对不同波长光的吸收或透射性能，通过测量光的强度变化来定量或定性分析物质的浓度。
本文将介绍分光光度法的原理、仪器配置以及应用。
一、原理分光光度法的原理基于比尔－朗伯定律（Beer-Lambert Law），该定律描述了物质溶液对单色光的吸光度（Absorbance）与物质的浓度以及溶液的光程（即光线通过溶液的路径长度）成正比的关系。
其数学表达式为：A = ε×c×l，其中A表示吸光度，ε是摩尔吸光系数，c是物质的浓度，l是光程。
当物质吸收一束光时，其吸收强度与入射光强度呈指数关系。
通过对不同波长的光通过物质溶液后，测量出透射光的强度变化，可以推算出物质的浓度。
二、仪器配置分光光度法常用的仪器是分光光度计，主要由光源、单色器、样品池、检测器和信号处理器组成。
1. 光源：分光光度计使用的光源通常是白炽灯或者氘灯。
白炽灯可以发出连续谱的光，而氘灯通常用于紫外光区域的分析，因为氘灯可以发出紫外光谱。
2. 单色器：用于将连续谱的光分解为单色光，常见的单色器有棱镜和光栅。
棱镜通过光的折射来将光分解为不同波长，而光栅则是通过光的衍射来实现。
3. 样品池：用于盛放溶液样品，通常是石英或玻璃制成。
不同颜色的玻璃样品池会对特定波长的光产生吸收，因此石英或透明玻璃是更好的选择。
4. 检测器：分光光度计常用的检测器是光电二极管或光电倍增管。
光电二极管可以将光转化为电信号，并输出给信号处理器。
5. 信号处理器：用于接收检测器发出的电信号，将其转化为可读的吸光度值，并进行数据处理。
三、应用分光光度法在许多领域都有着广泛的应用。
1. 生物学领域：在生物学研究中，分光光度法可以用于分析DNA、蛋白质、酶活性等。
例如，通过测量DNA溶液对260nm波长的紫外光的吸光度，可以估算出DNA的浓度和纯度。
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单色器（1）
单色器的作用是获得单色光。 1、滤光片
常用的滤光片是由有色玻璃（或其他材料）构成，使通 过的光与滤光片的颜色相同。为了表示滤光片的质量， 可制作透光率－波长曲线（即透光曲线），以峰高的一 半与曲线相交波长范围（光谱半宽度）来表示单色光的 质量。半宽度愈窄，单色光愈纯。选择滤光片，必须使 能被溶液吸收最大的光通过，也就是滤光片颜色是溶液 的补色。
几种类型的分光光度计（二）
常用的滤光片是由有色玻璃（或其他材料）构成，使通过的光与滤光片的颜色相同。 是一种光敏半导体元件，经常使用的是硒光电池。 是利用光敏阴极把光信号放大的装置。 棱镜获得单色光的纯度与棱镜色散率和出口狭缝宽度有关。 根据两个液层厚度相同而浓度不同的同一种有色溶液，它们的浓度与吸光度成正比： 对于组分含量高的试样，可减少称取量，或是稀释;对于含量低的溶液可增加称样量或浓缩的方法来提高浓度。 有其他物质共存时，可选适当的入射光和参比溶液来消除干扰，提高选择性。 测定时常用的是校正曲线法或比较法。 取一系列不同浓度标准溶液（5－7图），分别测定其吸光度，以浓度c为横坐标，吸光度为纵坐标，作校正曲线. 有其他物质共存时，可选适当的入射光和参比溶液来消除干扰，提高选择性。 A标 /A试 =c标 /c试 故： c试＝ A试×c标/A标 由于溶液对光的吸收是有选择性的，因此必须选择溶液吸收最大的波长作为入射光的波长。 但由于经显色反应后溶液往往不稳定. 试液用同样条件显色，测定吸光度，从曲线上求得试液浓度。 校正曲线法，又称工作曲线或标准曲线法。 此时一系列标准溶液的管中显出由浅到深的色阶。
2.3.2.测量条件的选择（2）
（3）选择适当的参比溶液 参比溶液的作用在于用它来抵消比色
二阶导数分光光度法测定乳酸环丙沙星乳膏含量
冰浴前虽已定容 ,但冰浴取出后应放置至室温 。观察液 面 , 若液面在刻度以下 ,需再次加入乙醇至刻度 , 并摇匀 。 参考文献 :
1 国家药委员会编. 中国药典 M . 北京 : 化学工业出版社 ,2000 ,
安 徽 医 药 A nhui Medical and Pharm aceutical Journal 2004 Dec ;8 (6)
·459 ·
麝香接骨胶囊质量标准的研究
罗士香
(江苏省淮安市药品检验所 ,江苏 淮安 223001)
关键词 :质量标准 ;麝香接骨胶囊 中国图书分类号 : R926 文献标识码 :A 文章编号 :1009 - 6469 (2004) 06 - 0459 - 01
·458 ·
安 徽 医 药 A nhui Medical and Pharm aceutical Journal 2004 Dec ;8 (6)
二阶导数分光光度法测定乳酸环丙沙星乳膏含量
张功武
(安徽省立儿童医院药剂科 ,安徽 合肥 230051)
摘要 :目的 建立乳酸环丙沙星含量测定的分析方法 。方法 采用二阶导数分光光度法 ,以 28215 nm 为检测波长测定乳酸环 丙沙星乳膏含量 。结果 在 5～40 mg·L - 1的范围内吸收度与浓度呈良好的线性关系 ( r = 01999 8) ,平均回收率为 10111 %。 结论 用二阶导数分光光度法可排除基质干扰 ,准确测定乳酸环丙沙星乳膏的含量 。 关键词 :二阶导数分光光度法 ;乳酸环丙沙星乳膏 ;含量测定 中国图书分类号 : R92712 ;O65713 文献标识码 : A 文章编号 : 1009 - 6469 (2004) 06 - 0458 - 02
Determination of ciprofloxacin lactate cream by
溴化钠紫外导数分光光度法测定微量铅
( Depart ment of Chem ist ry , S hanDong U niversity , Ji nan )
Abstract A Ult raviolet derivative spect rophotomet ric met hod for t he determination of t race lead based on t he maximum absorbance and t he sharp peak at 300nm of lead2bromine sodium complex. A great deal of zine have no interference and t he interference f rom copper can be eliminated by t he application of derivative spect re. The Proposed met hod is simple and reliable.
A
0. 5
0. 3
0. 1
2
0
2
4
6
2+
pb
(mL )
图 5 标准加入法曲线
Zn ,2. 005g
Pb2 + 标准液加入量 (mL) ,0 ,2 ,4 ,6
Pb2 + 加入量 ( mol/ L)
Pb 总量 ( mol/ L)
测得总量 (mol/ L)
回收率
7. 78 ×10 - 6
2. 29 ×10 - 5
·44 ·
山 东 科 学 1997 年
采用本方法对同一样品进行了 7 次平行测定 ,测定结果见表 3 标准偏差为 0. 24 ,相 对标准偏差为 1. 7 。
导数分光光度法共20页
光谱。
如何从导数光谱上读取定量数据？
• 峰－峰法与基线法
X阶导数分光光度法
比值—导数法（比光谱导数分光光度法）
导数光谱－峰面积积分法 多波长线性回归导数分光光度法
一阶导数分光光度法测定水中微量铝
Al3+和Fe3+在pH＝3.62的条件下均与 铝试剂生成红色配合物，但两者的吸收 光谱严重重叠
在562nm处，Fe3+配合物的导数值 为零，而Al3+配合物的导数值近似为 最大值。测定此处吸光值，可以有效 的消除Fe3+的干扰，并且测Al3+的灵 敏度又较高。同时，水样中悬浮物的 影响也可以通过导数法消除
d d
dn A cl dn
dn
dn
从上式可以看出各阶导数始终和试液浓度C呈直线关系，这是导数分光光度定量
分析的基础
无论干扰组分吸收曲线形状如何，都可以用一个近似的幂级数来表示
A 2 b 0 b 1 b 22 b 33 b 44
根据吸光度加合性原理，两组分共存时，有下式
A A 1 A 2 c b 0 l b 1 b 22 b 3 3 b 44
A A 2 2 A 2 0 0 A 2 8 2 2 A 2 1 A 2 2 0 1 A 2 9 2 0 A 2 9 A 0 2
A0.0018C309.000557 r0.9998
准确配制盐酸麻黄碱2.48×10-2，4.96×10-2，9.92×10-2,12.40×10-2， 14.88×10-2，17.36×10-2mmol·L-1系列标准溶液7份，以蒸馏水为参比，测 定207，208，209，219，220，221nm处的吸收值，并计算ΔA值，作线形 拟合，给出回归方程并绘制标准曲线图 结果说明在2.48×10-2～17.36×10-2mmol·L-1范围内浓度C与ΔA值呈良好的线形关系
导数分光光度法在药物分析中的应用_肖艳
第23卷,第3期光 谱 实 验 室Vol.23,No.3 2006年5月Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor atory May,2006导数分光光度法在药物分析中的应用肖艳 韩娟 冯霞光 王怀友(山东师范大学化学化工与材料科学学院 济南市文化东路88号 250014)摘 要 本文综述了导数分光光度法在药物分析中的应用及展望。
关键词 紫外-可见导数分光光度法,荧光导数分光光度法,药物分析。
中图分类号:O657.32 文献标识码:A 文章编号:1004-8138(2006)03-0420-081 引言19世纪50年代,M orrison等人提出导数分光光度法[1],它是作为分辨波长相近的谱线的方法而提出来的,利用光吸收(透过)对波长的导数曲线来确定和分析吸收峰的位置和强度。
该方法仪器简单,操作简便,准确度高,可有效消除背景的干扰,特别是它克服了样品烦琐的预处理过程,达到不经分离就可测定的目的。
随着计算机的使用和仪器的改进,使导数分光光度法迅猛发展,从一阶导数发展至二阶、三阶直至八阶、九阶导数。
导数分光光度法已广泛应用于医药、环境、化工、临床、生物以及食品等众多领域,可用来测定无机物和有机物,气体、液体及固体,一元及多元体系。
导数分光光度法的原理及应用[2—7]已有综述,本文拟就近几年来导数分光光度法在药物分析方面的研究工作进行综述。
2 紫外-可见导数分光光度法2.1 一阶导数紫外-可见(UV-VIS)分光光度法一阶导数UV-VIS分光光度法具有简单、快速的特点,广泛应用于血浆、血清、尿样及药物测定。
一阶导数UV-VIS分光光度法既可用于一元体系的直接测定,也可用于二元混合体系的同时测定,还可用于多种混合物中某一组分的测定。
Rodenas等[8]用此方法同时测定了扑热息痛(paracetamol)及丙帕他莫(propacetam ol),并测定了乙醇、葡萄糖及盐溶液中丙帕他莫(propacetamol)的稳定性。
比光谱-导数分光光度法在多光谱成像技术上的应用
该 系 统 的 光 谱 重 建 算 法 ， 取 得 了 辉 煌 的 成 并
就 】】２ ０ 【 ． ０ １年 ，美 国 Ｍｕ ｓｌ 实 验 室 的 科 学 家 ｎｅｌ Ｆ Ｉ ｉ 出了基 于 Ｋ／ Ｈ．ｍａ 提 Ｓ空 间 的 光谱 反 射 比重
收 稿 日期 ： ０ １０ — ８ ２ １ － ９１
假 定 样 本 在 可 见 光 范 围 都 满 足 Ｋｕ ｅｋ— ｂ ｌａ Ｍｕ ｋ理论 ， 么上式 就 可 以被表 述为 ： ｒ 那
（ Ｓ） ． （ ｓ） ． Ｋ／ 一 Ｋ／ 一 Ｃ ・（ ／ ）． Ｃ ｋｓ１ ＋ ２・（ ／ ）， ｋ ｓ２ （） ２
统 中数码 相机 的 响应 值 ． 这里 所 用 的 硬件 系 统是 指 三色 Ｃ ＵＤ 加 吸 收滤 色片组 合 的硬件 系统． 我们
（ ／ ）． （ ／ ） ｋ ｓ１ ＾一 ｋ ｓ （） ６
在 进行二 元混 合颜 料样 本 表面 的光谱 反 射 比 重建之 前 ， 需要 制 备一个 简 单 的基础 数据 库ｍ． 数
据 库里 的样本 是颜 料 １和颜 料 ２按 照指定 的浓 度 梯 度制 备的单 色样本 ， 包含 了样 本 的光 谱 反 射 它
徐 楠 ， 单 长 吉 ， 李 林 ， 张 瑶
（ 通 师 范 高 等 专科 学校 物 理 系 ， 云南 昭 通 ６ ７ ０ ） 昭 ５０ ０
摘 要 ： 对基 于 Ｋｕ ｅｋ— ｎ 针 ｂｌａＭｕ ｋ理 论 光 谱 反 射 比重 建 算 法 中获 得 浓 度 矩 阵难 的 技 术 环 节 ， 出 了 一种 全 新 提 的 光谱 反 射 比 的重 建 方 法 —— 基 于 比 光谱一 数 分 光 光 度 法 的 光谱 反 射 比 重建 算 法 ， 以 获 取 二 元 混合 颜 料样 导 并 本 颜 色信 息 为例 ， 明 了此 算 法 的可 行 性 ． 证 关 键 词 ： ｂｌａＭｕ ｋ理 论 ； 多光 谱 成 像技 术 ； 比 光谱 一 数分 光光 度 法 Ｋｕ ｅｋ— ｎ 导 中图 分 类 号 ： ４ ２ ３ ０ ３ ． 文献标志码 ： Ａ 文章 编号 ：０ ８９ ２ （０ １０ —０ ２０ １０ —３ ２２ １ ）５０ ４ —４
二阶导数分光光度法测定复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑的含量
2. 4 样品的测定 取复方磺胺甲卟恶唑片 10 片 ,精
密称定 。研细后 ,精密称取适量 ,以无水乙醇溶解 , 配成浓度约为 100 μg·ml - 1 的溶液 ,过滤 。取续滤 液 ,以无水乙醇制成浓度约为 20 μg·ml - 1 的溶液 。
以无水乙醇为空白 ,在 220～400 nm 波长处绘制二
Determination of sulfamethoxazole in compound sulfamethoxazole tablets by secondary derivative spectrophotometry
Dai Min ( Yijishan Hospital ,Wannan Medical College ,Wuhu 241001)
The test f or bacterial endotoxins of infatmuli injection
Zhong Fuqing ,Zhu J iangxiang ( The Second Hospital of Jianghua ,Jianghua 425500)
ABSTRACT OBJECTIVE: To inspect on t he feasibility of bacterial endotoxin test for infatmuli injection. METHODS : Inhibition and enhancement test & contrast test . RESUL TS : The test was not disturbed by t hese samples ,as was t he same as rabit test . CONCL U2 SIONS : Infatmuli injectio could be tested wit h t he tachypleus amebocyte lysate t hat sentivity was 0. 5 EU·ml - 1 . KEY WORDS infatmuli injection ,tachypleas amebocyte lysate ,bacterial endotoxin
分光光度法专业知识课件
E1’ molecular vibration E1’’ molecular rotation E0 Ground level
互补（色）光
complementary colors
第一节 分光光度法 基本原理
若溶液选择性地吸收了某种颜色旳光， 则溶液呈吸收光旳互补色。
二．物质旳吸收光谱
用不同波长旳单色光依次
① c 一定, A∝b Lambert ② b 一定, A∝c Beer
A =εbc
三、Lambert-Beer定律
A =bc
溶液厚度b, 单位:cm
浓度c，单位molL-1
摩尔吸光系数，单位Lmol -1cm-1
若用质量浓度替代c
A = ab
质量浓度 , 单位: gL-1
质量吸光系数a, 单位: Lg -1cm-1
常用参比溶液
成份 溶剂 显色剂
溶剂空白 √ ×
试样
×
其他 合用范 围
× 显色剂、试 样均无吸收
试剂空白 √ √ 试样空白 √ ×
×
√ 试样无吸收 显色剂有吸
收
√
√ 显色剂无吸 收，试样有
吸收
第四节
提升测量敏捷度和精确度旳措施 自学 要点看： 分光光度法旳误差起源 显色剂旳选择 测定条件旳选择
本章小结
As，在相同条件下测出试样溶液旳吸光度 Ax，则试样溶液浓度cs可按下式求得：
Ax /As= cx / cs cx = cs Ax /As
参比（空白）溶液 blank
I 参比溶液旳作用：扣除一切不起源于 目旳产物旳光吸收。
如：消除吸收池、溶剂、试剂、干扰物旳影响。
常用参比溶液：
①溶剂空白 ②试剂空白 ③试样空白
分光光度法复习知识点讲解学习
分光光度法复习知识点紫外可见分光光度法：基于物质分子对近紫外至可见光波段(200-800nm) 辐射的选择性吸收而建立的仪器分析方法。
一、 吸收曲线将不同波长的光透过某一固定浓度和厚度的有色溶液，测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度（即吸光度），然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，可得一曲线。
这曲线描述了物质对不同波长的吸收能力，称吸收曲线或吸收光谱。
图: 邻菲罗啉－亚铁溶液的吸收曲线 1－0.2mg/L ；2－0.4mg/L ；3－0.6mg/L➢ 同一浓度的有色溶液对不同波长的光有不同的吸光度,对应最大的地方称为最大吸收波长，用λmax 来表示。
➢ 吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。
对于不同浓度的同一物质，吸收曲线形状相似， λmax 不变,而对不同物质，吸收曲线形状和λmax 不同；不同浓度的同一种物质，浓度愈大，吸光度也愈大，此特性可以作为物质定量分析的依据。
二、有机化合物的紫外可见吸收光谱➢ 有机化合物中存在三种类型的价电子：σ电子（单键）、π电子（双键）和未参与成键的n 电子（孤对电子）； 相应的，存在五种分子轨道：成键轨道σ、 π；反键轨道σ*、 π*；非键轨道n ，其能量顺序为：σ<π<n<π*<σ*➢ 有机化合物中存在三种类型的价电子：σ电子（单键）、π电子（双键）和未参与成键的n 电子（孤对电子）； 相应的，存在五种分子轨道：成键轨道σ、 π；反键轨道σ*、 π*；非键轨道n ，其能量顺序为：σ<π<n<π*<σ*紫外可见吸收光谱和分子结构的关系12 3（1）饱和的有机化合物饱和烃的分子中只有C-C键和C-H键，只能发生→σσ*跃迁，这类跃迁能量最大，对应波长最短，处于200nm以下的远紫外区；含有O、N、卤素等杂原子的饱和有机物存在n电子，还可以发生n→σ*跃迁，其吸收峰在200nm附近。
（2）不饱和脂肪族化合物C=C键可以发生π→π*跃迁，λmax在170~200nm左右；如果分子中存在两个或两个以上的双键（包括三键）形成的共轭体系，随着共轭体系的延长，π→π*跃迁所需能量降低，λmax移向长波长，并伴随吸收强度的增加。
紫外与荧光实验讲义
实验一绘制吸收光谱及测定摩尔吸光系数一.实验目的通过紫外吸收光谱的绘制和摩尔吸光系数的测定，掌握Agilent8453 UV-V is的使用方法。
学习导数光谱计算方法及特点。
二.实验原理1．本实验用Agilent8453型分光光度计绘制氨基酸（苯丙氨酸，色氨酸）的紫外吸收光谱，找出它的吸收峰波长并计算摩尔吸光系数。
紫外分光光度法是利用物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，波长范围为200-400nm的紫外光谱。
各种分子都有其特征的吸收光谱，即吸光度与摩尔吸光系数随波长的变化而变化的规律。
吸收光谱的形状与物质的特征有关，以此进行定性分析。
为了清楚地描述各种物质对紫外区域电磁辐射的选择性吸收的情况，往往需绘制吸收光谱曲线，即吸光度对波长的曲线。
在吸收光谱曲线上可以找到最大吸收峰波长。
根据比尔定律：A = ε b c式中A—吸光度ε—摩尔吸光系数b—液槽厚度，单位：厘米c—摩尔浓度，单位：mol/l摩尔吸光系数可按下式计算：ε=A b c实验测得的吸收光谱及摩尔吸光系数与仪器及其狭缝宽度有关。
因此实验结果须注明所用仪器的型号及缝宽条件。
2．导数分光光度法：利用紫外-可见分光光度计软件系统带有的数学处理功能，对吸收光谱进行处理，可以获得导数光谱。
利用导数光谱进行分光光度测定，称为导数分光光度法。
通常可以获得1-4阶导数光谱。
在各阶导数光谱中，吸光度对波长的微分值与溶液中组分的浓度c保持线性关系：ssd Acdλ∝。
其中s为导数的阶数。
因此，可以利用导数光谱进行定量测定。
导数光谱可用于放大图谱间差别，定性分析中分辨重叠谱带，而且还可以减少定量分析中来自散射、基体、及其它吸收物的干扰影响。
由于导数光谱灵敏度高，因此对于试样纯度检验，多组分混合物的测定，消除共存杂质的干扰和背景吸收，测定混合式样都具有特殊的优越性。
三.实验仪器和试剂1.Agilent8453 UV-Vis分光光度计;2.移液枪(德国BRAND公司生产);3.25ml容量瓶，50ml容量瓶10支;4.氨基酸储备液：色氨酸0.400 g/l，苯丙氨酸2.00 g/l;5.去离子水四.实验步骤1.波长测定（1）用氨基酸储备液及去离子水在50ml容量瓶中配置氨基酸溶液，色氨酸浓度为50mg/l, 苯丙氨酸720mg/l；（2）分别取上述溶液，用1cm石英比色皿，以水作参比溶液，在波长范围为190nm——450nm间测定他们的吸收光谱。
导数分光光度法测定注射用头孢哌酮钠和舒巴坦钠的含量
导数分光光度法测定注射用头孢哌酮钠和舒巴坦钠的含量提要用导数分光光度法不经分离直接测定注射用头孢哌酮钠和舒巴坦钠的含量。
用一阶导数分光光度法测定头孢哌酮钠的含量，平均回收率为99.31%，RSD为0.44%(n=6)。
用二阶导数分光光度法测定舒巴坦钠的含量，平均回收率为100.05%，RSD为0.67%(n=6)；方法简便快速，结果满意。
关键词导数分光光度法头孢哌酮钠舒巴坦钠注射用头孢哌酮钠和舒巴坦钠(1∶1)是一种联合制剂，商品名舒普深，其中头孢哌酮钠为一抗G+菌和抗G-菌的广谱头孢菌素活性剂，舒巴坦钠为一强效β内酰胺酶抑制剂。
两药联用，后者能增强前者的抗菌活性。
舒普深的定量分析方法有高效液相色谱法，但需要特殊设备并且费用较高。
现参照文献［1］建立了导数分光光度法测定头孢哌酮钠和舒巴坦钠的含量。
1 实验部分1.1 仪器与试药UV-260分光光度计(日本岛津)；镀铬游标卡尺(江西工具厂，精密度0.02 mm)。
头孢哌酮钠(92.4%)、舒巴坦钠(90.5%)、注射用头孢哌酮钠、舒巴坦钠均由中国大连辉瑞制药有限公司提供；蒸馏水(自制)。
1.2 条件的选择贮备液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的头孢哌酮钠和舒巴坦钠适量，分别置250 ml量瓶中，水溶解并稀释至刻度，摇匀，使浓度分别为250 μg/ml的头孢哌酮钠和舒巴坦钠贮备液，置冰箱保存备用。
测定波长的选择分别精密吸取上述贮备液各5 ml，置50 ml量瓶中，水溶解并稀释至刻度，摇匀。
制备两种单一溶液和一种混合溶液。
在200～300 nm 波长范围内扫描，分别绘制导数吸收光谱(1，2，3)。
1 零阶导数光谱2 一阶导数光谱3 二阶导数光谱从1看，头孢哌酮钠和舒巴坦钠在同一紫外区均有吸收，相互干扰；从2看，头孢哌酮钠的一阶导数光谱在(279±1)nm有一谷吸收，此处舒巴坦钠无吸收，所以，(279±1)nm的零-谷导数半振幅值D可作为头孢哌酮钠的定量依据；从3看，舒巴坦钠的二阶导数光谱在(234±1)nm有一最大吸收峰，此处头孢哌酮钠吸收为零，所以，(234±1)nm的峰-零导数半振幅值D可作为舒巴坦钠的定量依据。
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dn A cl dn
dn
dn
从上式可以看出各阶导数始终和试液浓度C呈直线关系，这是导数分光光度定量
分析的基础
无论干扰组分吸收曲线形状如何，都可以用一个近似的幂级数来表示
A 2 b 0 b 1 b 22 b 33 b 44
根据吸光度加合性原理，两组分共存时，有下式
A A 1 A 2 c b 0 l b 1 b 22 b 3 3 b 44
其一阶导数为 d d A cd d l b 1 2 b 2 3 b 32 4 b 43
其二阶导数为
d d 2A 2cd d l 222b26b31b 2 42 说明一阶导
当干扰组分为一次吸收曲线时，
d dA cld db1dd1Ab1
数可以消除 线形干扰吸
收
当干扰组分为一次吸收曲线时，
A0.0018C309.000557 r0.9998
准确配制盐酸麻黄碱2.48×10-2，4.96×10-2，9.92×10-2,12.40×10-2， 14.88×10-2，17.36×10-2mmol·L-1系列标准溶液7份，以蒸馏水为参比，测 定207，208，209，219，220，221nm处的吸收值，并计算ΔA值，作线形 拟合，给出回归方程并绘制标准曲线图 结果说明在2.48×10-2～17.36×10-2mmol·L-1范围内浓度C与ΔA值呈良好的线形关系
在吸收曲线和一阶导数曲线中均无上述原则的波峰和波谷，只有在二阶导数曲线图 中盐酸麻黄碱有一较大波谷（208nm）和波峰（220nm），而尼泊金乙酯在 200～300nm波长范围内的二阶导数值基本与基线重合，说明干扰可被消除，故 可采用2峰－谷法通过测定ΔA值，作为盐酸麻黄碱的定量信息。
A A 2 2 A 2 0 0 A 2 8 2 2 A 2 1 A 2 2 0 1 A 2 9 2 0 A 2 9 A 0 2
样品含量测定
精密吸取盐酸麻黄碱滴鼻净5ml于100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度， 摇匀后再精取5ml置于另一个100ml容量瓶中，用蒸馏水定容作为待 测样品溶液。以蒸馏水作为参比，测定ΔA值，用标准曲线求得盐酸麻黄 碱得含量，并和规范法比较，结果如图
导数分光光度法是如何消除背景 干扰的？
Alc dA cl d
导数分光光度法
卢泽辉(04081051) 涂海涛(04081056)
Alcc
把吸收光谱写成波长的函数，那么它 的导函数图像就是导数光谱
如何绘制导 数吸光光谱
导数吸光光度法测定应用步骤
吸收曲线的绘制
导数吸光光度 法如何消除背
景干扰？
测定波长的确定 标准曲线的测定
如何从光谱中 读取定量数据？
回收率实验 样品测定
不同浓度干扰组分影响的实验
准确配制盐酸麻黄碱浓度均为0.124mmol·L-1,二尼泊金乙酯分别为 不同浓度的系列混和溶液共8份，按上法测定盐酸麻黄碱的Δ值，结果 如下
实验结果表明，在测定盐酸麻黄碱时，不同浓度的尼泊金乙酯对其几乎无干扰
回收率测定
按比例配制盐酸麻黄碱与尼泊金乙酯混和溶液6份，做回收率实验，测定结果如下
•
di dbi
cb
di
di
再变形
y cb ca x
y
dAi
di
cc
d ci di
d bi
,x
d ai di d bi
di
di
在多个波长下进行测 定，求得一系列的y、 x,用线性回归法进行 处理，求得直线斜率 为ca 截距为cb
PS：公式编辑真的很痛苦
二阶导数光谱－峰面积积分法测 定芦荟中痕量Fe(Π)和Co(Π)
使用二阶导数－峰零法的处理， 虽然解决了重叠问题，但由于 λmax常发生漂移、准确性差， 并且Co(Π）的灵敏度也无法提 高
选定以试剂空白做参比，在400～ 540nm波长范围内扫描，并做二阶 导数光谱。从图上可以看出Co(Π) 在410～426nm，Fe(Π)在 498～521nm波长范围内络合物的 二阶导数吸收光谱区分度好，选此范 围进行峰面积的测定，并以此作为定 量分析的依据
多波长线性回归－导数分光光度法测定对苯二酚、 领苯二酚和苯酚
在某波长下，三者的吸光度互相叠ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ：
A iab ia cbb ib ccb ic,c
求一阶导
d diiA ca•d d a i i cb•d d b i i cc•d d c ii
变形为
dAi
di
cc
•
dci di
dbi
dai
ca
光谱。
如何从导数光谱上读取定量数据？
• 峰－峰法与基线法
X阶导数分光光度法
比值—导数法（比光谱导数分光光度法）
导数光谱－峰面积积分法 多波长线性回归导数分光光度法
一阶导数分光光度法测定水中微量铝
Al3+和Fe3+在pH＝3.62的条件下均与 铝试剂生成红色配合物，但两者的吸收 光谱严重重叠
在562nm处，Fe3+配合物的导数值 为零，而Al3+配合物的导数值近似为 最大值。测定此处吸光值，可以有效 的消除Fe3+的干扰，并且测Al3+的灵 敏度又较高。同时，水样中悬浮物的 影响也可以通过导数法消除
实验数据来自于 吴京平《导数分光光 度测定中的计算机图 形分析》
在300～190nm波长范围内，以2nm波长间隔， 水为溶剂，测定盐酸黄碱和干扰组分尼泊金乙酯 的吸收值(A)，并绘出吸收光谱一阶导数光谱和 二阶导数光谱
选取待测组分导数曲线上振幅较 大的峰和谷的中间波长，且干扰 组分在此两中间波长处的导数值 相等或接近相等，做出准确的选 择。
d d2A 2 cd d l222b2dd2 A 212b2
说明二阶导数可 消除二次干扰吸
收
如何绘制导数吸光度光谱？
（1）人工作图法：从吸收光谱的数据中每隔一个波长小间隔Δλ（1～ 2nm），逐点计算出ΔA/Δλ的值：
Ai
Ai1 Ai
i1 i
利用这些数值对波长描绘成图像，就得一阶导数光谱。用类似方法又可
从导数光谱中获得高一阶的导数光谱。
（2）仪器扫描法：用双波长分光光度计以固定Δλ（1～2nm）的两束 单色光同时扫描记录样品对两束光吸光度的差值ΔA，便得到样品的一
阶导数光谱。
装有微处理机的分光光度计，利用它的记忆和处理数据的功能，可直接
存储吸收光谱的数据并加以处理，可描述一阶、二阶……等各阶的导数