皮肤科实验室检查技术操作常规原始版..

常见皮肤科

实验室检查技术操作常规

一．真菌（癣菌）直接镜检

【方法】

1．取材部位：临床医师采取头癣，体癣，股癣，足癣，甲癣标本。

2．操作方法：将标本置于载玻片上，加一滴5-10%KOH，加盖玻片，在酒精灯火焰上过三次以消化角质蛋白，普通光学显微镜下检查。

【结果判断】

可见真菌菌丝和/或孢子，可判断为阳性。

二．疥螨虫镜检

【方法】

1．取材部位：临床医师采取标本。

2．操作方法：将标本置于载玻片上，加一滴5-10%KOH（或加NS），加盖玻片，在酒精灯火焰上过三次以消化角质蛋白，普通光学显微镜下检查。

【结果判断】

见到以下任何一项均可判断为阳性。

1．成虫：低倍镜下看到完整或破碎的成虫。如用NS，有可能发现活动的成虫。

2．虫卵：可以见到虫体的同时见到成堆或散在的虫卵。

三．阴虱检查

【方法】

1．取材部位：临床医师夹取标本。

2．操作方法：将标本置于载玻片上，加一滴NS，加盖玻片，普通光学显微镜下检查。

【结果判断】

见到以下任何一项均可判断为阳性。

1．成虫：低倍镜下看到完整或破碎的成虫。如用NS，有可能发现活动的成虫。

2．虫卵：可以见到虫体的同时见到成堆或散在的虫卵。

四．毛囊虫（蠕螨）的检查

【方法】

临床医师采取，在扩张的毛囊口挤压出一点皮脂或用刀片刮出些皮脂，在载玻片加一滴

液体石蜡或甘油，加盖片轻压使皮脂变薄，普通光学显微镜下检查。

【结果判断】

低倍镜下发现活的毛囊虫，可判断为阳性。

五、淋球菌检查

（一）淋球菌直接镜检

【方法】

1．男性患者：先用NS拭尽尿道口，手指挤出尿道内脓液，用无菌棉拭子沾取脓液涂在载物玻片上。

2．女性患者取宫颈口脓液，用无菌棉拭子沾取脓液涂在载物玻片上。

3．自然干燥后，革兰染色或美兰染色待检。

【结果判断】

涂片中见大量多形核白细胞，细胞内有革兰氏阴性球菌，呈卵圆形或圆形，成对排列。为阳性结果。

（二）淋球菌培养

【方法】

临床取材后，立即接种于培养基中，不得冷藏后再接种。在5-10% CO2，37度培养24-48小时后观察结果。（市场上可见试剂盒）

【结果判断】

在血平皿可见圆形，平滑，透明或灰白色菌落，直径0.5-1.0mm，革兰氏染色阴性。必要时，做生化检查确定菌种。

六、衣原体检查

（一）免疫荧光法

【方法】

取材方法：男性患者用白金耳或特制尿道棉拭子插入尿道口内2-4cm，转动1周，停留约10秒钟后取出分泌物；女性患者经窥阴器暴露宫颈，用无菌拭子蘸去宫颈表面分泌物，用另外一个干净拭子伸入宫颈口内1-2cm，转动1周，停留10秒钟后取出分泌物。

取材后用试子头部在载玻片上涂片，无水乙醇室温固定15分钟，室温晾干，加荧光标记的衣原体单克隆抗体，37℃温育30分钟后磷酸盐缓冲液洗涤次。封片后在荧光显微镜下观察结果。

【结果判断】

阳性标本可以见到亮绿色包涵体。敏感性可达70-90%。

（二）细胞培养法

【方法】

1.标本取材方法同“免疫荧光法”。取材后标本可以直接接种，也可-80℃保存备用。

2.利用滋养细胞培养沙眼衣原体。将MyCoy细胞（或Hela细胞）种植于含圆形盖玻片或不含盖玻片的24孔塑料细胞培养板。细胞生长液是含10%胎牛血清Dulbecco改良的MEN 培养液。

3.标本接种标本化冻后将标本管蜗旋振荡15-30秒。将24孔塑料细胞培养板内的细胞培养液吸取，每孔加入0.2-0.3ml接种物，每份标本接种两孔，一孔接种含盖玻片的24孔细胞培养板，另一孔接种不含盖玻片的24细胞培养板。同事将沙眼衣原体血清型E和L2/434/Bu用衣原体培养液1:400稀释，每孔加入0.2-0.3ml作为阳性对照，仅加入衣原体培养液的孔作为阴性对照。接种完毕后离心细胞培养板（×1500g，1小时，35℃）。培养板37℃静置2小时，然后吸去接种物病加入衣原体培养液（含万古霉素、庆大霉素、两性霉素B、放线菌酮等），37℃和5%二氧化碳培养72小时。

4、荧光抗体染色鉴定吸取培养板孔内的培养液，PBS洗涤2次，无水乙醇室温固定15分钟，室温晾干，取出盖玻片，加入抗沙眼衣原体单克隆荧光抗体。37℃温育30分钟后磷酸盐缓冲液洗涤3次。封片后在荧光显微镜下观察结果。

【结果判断】

荧光显微镜下观察，细胞内有3个以上苹果绿色的荧光颗粒者判作阳性。阴性标本的另一不含盖玻片的孔应进行盲传，即用超声波破碎机打击该孔，接种在新一代McCoy细胞上。同样的方法再次荧光抗体染色，鉴定培养结果。

（三）快速酶分析法

【方法】

取材方法同“免疫荧光法”

目前国内外许多生物技术公司都提供沙眼衣原体快速酶免疫分析（EIA）试剂盒，不同厂家对试验要求不尽相同，操作方法有所不同。可以参照试剂盒上提供的具体操作步骤进行。

【结果判断】

通过显色条带肉眼观察，也可采用酶标仪测定结果。此方法的特点时快速、简单，不足之处在于敏感性较低，原因与这种检查需要疣足够多的抗原量有关。

七、疱疹病毒免疫荧光法检查

【方法】

1.取材部位

在新发生1-天内的水疱部位取材（新发疱疹处存在的病毒数量最多，随着疱疹破溃、愈合、病毒数量迅速减少）。

2.操作方法

用手术刀或钝刀将水疱挑破，刮取基底部为取材，然后图片，室温干燥后用冷丙酮固定10分钟，磷酸盐缓冲液洗2次，加入荧光素标记抗HSV抗体，37℃温育30分钟后乙酸盐缓冲液洗涤3次。封片后在荧光显微镜下观察结果。

【结果判断】

阳性结果：细胞内可见亮绿色着色。