生物化学实验内容

《生物化学实验》内容

课程类型：制药工程专业必修

实验总学时：32课时

开设实验项目数：8个

适用对象：2017制药工程1、2班

实验教师：段志芳

一、实验Ll标及基本要求

生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。

二、实验内容

包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成惜况和完成质量（占50%）,每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。

四、要求

（1）实验过程中同组人可以配合进行；

（2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；

（3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；

（4）对实验结果进行简单的分析•

实验一植物组织中可溶性总糖的提取

一、实验目的

1.掌握可溶性总糖的概念和性质。

2.掌握可溶性总糖提取的基本原理。

3.掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。

二、实验原理

可溶性糖是指易溶于水的糖,包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋口的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知洛液体积和原料重量，可以求出总糖含量。

三、实验用品

1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g,配称量纸若干）；可控温电加热板或电炉或电

热套或水浴锅均可。可共用。

2.玻璃器皿：研钵1套；IOOmL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻璃棒1根; IOOmL

烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+ 玻璃漏斗1个+10OmL容量瓶1个+洗瓶1个）；不锈钢刮勺1个；剪刀1 把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。

3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸镭水。

4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若干。每个洗手池常

规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。

四、实验操作

取新鲜植物叶片，洗净表面污物，用滤纸吸去表面水分。称取0.5g,剪碎, 加入5〜IOml蒸憎水，在研钵中磨成均浆，转入锥形瓶中，用蒸憎水少量多次冲洗研钵，洗岀液也转入锥形瓶中，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min,提取液冷却后过滤到IOOml 容量瓶中，同法残渣再提取2~3次，将提取液合并至容量瓶中，用蒸憎水定容至刻度。贴好标签，保存至冰箱中，用于实验二。

五、实验结果与讨论

1、观察产品颜色是否与理论相符，若不符合，分析原因。

2、结合实验二结果计算含量

六、实验注意事项

（1）若有干扰，可滴加饱和中性醋酸铅以除去洛液中的蛋白质，乙醇沉淀除去部

分醇溶性杂质，若色素较多可脱脂。

（2）加热时应小心，避免灼伤皮肤。

七、思考题

1、可溶性糖在植物物质代谢中的作用。

2、用水提取的糖类有哪些？

实验二恵酮比色法测定可溶性总糖含］

一、实验目的

1、掌握蔥酮比色法测定可溶性总糖的原理和方法

2、掌握标准曲线的绘制

3、掌握分光光度计的使用方法

二、实验原理

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或疑屮基糠醛可与蔥酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范兩内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是儿乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应）, 所以用蔥酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。糖类与蔥酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm ,故在此波长下进行比色。

三、实验材料、试剂与仪器设备

1、仪器

分光光度计（配玻璃比色皿、擦镜纸、注明废液回收的具塞广口瓶、洗瓶）；电子天平（配称量纸）；离心机（配离心管），恒温水浴锅。

2、玻璃器皿

0.5mL, ImL. 5mL刻度吸管各2支（配合适大小吸耳球）；IomL具塞具刻度试管10支（应干净干燥，放到试管架上）；IOomL烧杯2个；IomL量筒1 个；玻璃棒1根；长胶头滴管1根。此部分为每组所用，放置各实验台上。

3、试剂：⑴~ （3）山实齡员配制，贴好标签

（1）80 %乙醇

（2）葡萄糖标准溶液（IOopg∕nιL）:准确称取IoOmg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸憎水并定容至lOOOmL。

（3）蔥酮试剂：称取l∙0 g蔥酮，溶于80%浓硫酸（将98%浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸憎水中）IOOO mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用2~3周。

(4)样品贮备液：学生实验一所得可溶性总糖提取物水溶液。

四、实验步骤

1、标准曲线制作

取6支试管，从0~ 5分别编号，按下表加入各试剂：

表恿酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量

将各管快速摇动混匀后在沸水浴中煮IOmin,取出冷却，在620 nm波长下用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量(Pg)为横坐标绘制标准曲线。

2、样品测定

将样品贮备液用蒸憎水稀释到合适范围，取该溶液1.0 mL加恵酮试剂5 mL,同以上操作显色测定光密度。重复3次。

按照下式计算可溶性总糖的含量：

VI w=n×mj- /

ι∏2× 100%

式中：W…表示总糖含量

n…稀释倍数

Hn-从标准曲线査得糖量,μg.

m2-…一样品重(g).

vi_-提取物总体积(ml)

V2……测定时样品体积(InI)

五、结果与讨论：

1.绘制出标准曲线

2.含量的计算

六、实验注意事项

(1)加浓HBCU时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况，应迅速用自来水冲洗。

(2)水浴加热时应打开试管塞。

七、思考题

1、植物组织中糖的测定方法还有哪些？举例说明其原理和优缺点？