美天旎公司磁珠分选产品
miltenyi biotec(德国美天旎生物公司)CD133相关专利产品
CD133是近年在干细胞领域研究较为活跃的细胞膜糖蛋白之一,常表达于未成熟的造血干细胞或祖细胞,新近有报道认为它在脑肿瘤、前列腺癌、小鼠的Lewis肺癌、B16黑色素瘤的干细胞中均有表达,已被认为是这些肿瘤干细胞的标志之一。
miltenyi biotec（德国美天旎）拥有CD133全系列的全球专利。
美天旎部分CD133：一.CD133的分子结构人CD133抗原为5次跨膜糖蛋白，目前发现的同源性抗原有CD133_1和CD133_2，其基因分别定位在人类的4号和2号染色体上，分析CD133的基因结构发现，CD133_1基因至少含有27个外显子，CD133_2基因比CD133_1基因少1个27 bp的4号外显子。
CD133_1抗原cDNA全长为3 794 bp，其中5′端有37 bp的非翻译区，3′端有1 159 bp的UTR，中间为2 598 bp的开放阅读框，编码865个氨基酸的蛋白。
转录起始密码子ATG位于38bp 处，ATG之后还有一编码19个氨基酸的信号肽序列,终止密码子位于第2 763位,第3 906核苷酸处有一长20 bp的polyA序列。
CD133_1与CD133_2的相对分子质量分别为120 KD 和112 KD，CD133_2由含856个氨基酸的肽链组成，比CD133_1少9个位于E1区的氨基酸[2]。
在发现人CD133的同年，在小鼠中也发现了CD133_1的同源性抗原并命名为Prominin_1，二者具有60％的相似结构，之后，成功克隆出Prominin_2，与Prominin_1和人CD133分别有29％和26％的相似结构，认为是Prominin_1的同源性抗原。
CD133的功能目前尚不清楚，存在于C端的酪氨酸暗示它可能是通过酪氨酸残基磷酸化作用而发挥级联效应的生长因子受体。
二. CD133阳性的肿瘤干细胞利用某些干细胞标志物与肿瘤细胞标志物相结合的方法确定肿瘤干细胞特异性的标志物，是当前肿瘤干细胞筛选的主要手段。
美天旎临床产品解决方案
造血和内皮干细胞
心脏疾病-CD133
心脏疾病全球死亡第一原因，在US，CVD死亡率比癌症高 35%。主要是冠状动脉疾病。
起源于造血/肿瘤，作为CD34的替代品，许多研究人员证明 CD133有显著的分化潜力，使CD133产品成为组织再生的基本 产品。 在心脏疾病领域使用自体骨髓CD133进行治疗有很大的潜力。 产品： CD133试剂， tubing set LS，CD133 complete LS kit 骨髓体积大于100ml推荐使用Prodigy。 全球细胞治疗中，MSC是心脏疾病首选干细胞来源
Bags, Medium
Vaccination
Patient
Cryopreservation
DC疫苗
CD14系统从2000年开始已有25篇文献，可行性和安全度得到很 好的验证，2011年继续以试剂折扣支持感兴趣的客户。 一个循环同时获得PDC和MDC 还可结合DendricMACS GMP Medium，GMP细胞因子（ IL4,GM-CSF,IL1,IL6,TNF）,GMP抗原，细胞分化袋等 CD1不需要细胞因子，CD304需要IL3
CliniMACS 管道 150* 167-01
20x109
10x109
MACS技术－从实验室到临床
与科研产品的差异： • 欧共体CE认证，SFDA认证 • 全自动免疫磁性细胞分选系统 • 密闭、无菌管道系统（一次性使用） • 分选后的细胞可直接用于临床治疗 • 样本处理极为安全 • 标准化的、可控的、可靠的分选过程
MACS分选原理
• MACS磁珠标记细胞
• 混和细胞通过分选柱
• 去除磁铁
• 阳性细胞洗脱
去除成分
富集成分
密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合分离脐血中胎儿有核红细胞
密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合分离脐血中胎儿有核红细胞罗欣;杜颖颖;张进;马端【摘要】目的研究密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合方法富集脐血中胎儿有核红细胞.方法对5例脐血首先用密度梯度离心和免疫磁珠分选依次进行胎儿有核红细胞分离,用流式细胞检测和细胞染色对分选前后细胞进行分选纯度分析.结果 1.通过流式细胞仪检测发现CD71单克隆抗体磁珠用于脐血中胎儿有核红细胞分选(CD71+ ,CD45- ),分选后的纯度可以达到81%,而分选前CD71阳性细胞只占23.2%.2.分选前脐血涂片可见大量的成熟红细胞,含少量有核红细胞;密度梯度离心后可见绝大多数细胞为单个核细胞(淋巴细胞、单核细胞和有核红细胞),含少量红细胞;CD71单克隆抗体磁珠分选后阳性细胞多为胞浆丰富略嗜碱性的有核红细胞.结论密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合可以有效提高脐血中胎儿有核红细胞的分选纯度.【期刊名称】《中国产前诊断杂志（电子版）》【年(卷),期】2010(002)003【总页数】4页(P4-7)【关键词】胎儿有核红细胞;密度梯度离心;免疫磁珠分选【作者】罗欣;杜颖颖;张进;马端【作者单位】复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室,上海200032;复旦大学生物医学研究院出生缺陷研究中心,上海200032【正文语种】中文产前诊断是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某些遗传病或先天畸形做出准确的诊断。
目前采用的诊断方法多属于有创性检查，对妊娠妇女和胎儿都有一定的风险［1］。
从妊娠妇女外周血中分离胎儿有核红细胞（fetal nucleated red blood cells，FNRBCs）进行基因分析已成为国内外无创性产前诊断的研究热点。
但是母体循环中的FNRBCs数量稀少，难以达到临床检测的要求，高效富集FNRBCs方法已成为产前诊断中筛查染色体异常和基因异常的必要手段。
MACS如何选择合适的分选器
如何选择合适的分选器？美天旎MACS技术已经成为磁性细胞分选的金标准，其文献引用量一直远超同类其他产品。
MACS磁珠分选所用到的主要组份有：MACS磁珠、MACS分选柱和MACS分选器。
如果您是第一次使用美天旎磁珠，则可以选择合适的起始套装，这样既能满足您的分选要求，又节省成本。
美天旎提供以下套装产品供您选择，针对您的实验，选择最适合您的分选器套装产品。
手动分选产品产品一：MiniMACS Starting Kit （送磁珠）130-090-312 MiniMACS Starting Kit对应使用分选柱：MS适合分选策略：阳性分选最大上样量：2X108最大目的细胞吸附量：107一次上样数量：1个产品二：MidiMACS Starting Kit （送磁珠）130-042-301 MidiMACS Starting Kit（LS）对应使用分选柱：LS适合分选策略：阳性分选和阴性分选最大上样量：2X109最大目的细胞吸附量：108一次上样数量：1个130-090-329 MidiMACS Starting Kit（LS）对应使用分选柱：LD适合分选策略：阴性分选最大上样量：2X109最大目的细胞吸附量：108一次上样数量：1个产品三：Mini & MidiMACS Starting Kit（送磁珠）130-042-501 Mini & MidiMACS Starting Kit（MS LS）对应使用分选柱：MS LS适合分选策略：阳性分选和阴性分选最大上样量：2X108+2X109最大目的细胞吸附量：107+108一次上样数量：2个Mini & MidiMACS Starting KitMACS MultiStand 分选架MidiMACS Separation Unit 分选器130-042-501 Mini & MidiMACS Starting Kit （MS LD）对应使用分选柱：MS LD适合分选策略：阳性分选和阴性分选最大上样量：2X108+2X109最大目的细胞吸附量：107+108一次上样数量：2个产品四：OctoMACS Starting Kit （送磁珠）130-042-108 OctoMACS Starting Kit对应使用分选柱：MS适合分选策略：阳性分选最大上样量：8X2X108最大目的细胞吸附量：8X107一次上样数量：8个产品五：QuadroMACS Starting Kit （送磁珠）130-091-051 QuadroMACS Starting Kit （LS）对应使用分选柱：LS适合分选策略：阳性分选和阴性分选最大上样量：4X2X109最大目的细胞吸附量：4X108一次上样数量：4个130-092-857 QuadroMACS Starting Kit（LD）对应使用分选柱：LD适合分选策略：阴选最大上样量：4X2X109最大目的细胞吸附量：4X108一次上样数量：4个产品六：VarioMACS Separator（手动细胞分选）130-090-282 VarioMACS Separator（手动细胞分选）对应使用分选柱：MS, LS, LD and CS适合分选策略：阳性分选和阴性分选最大上样量：4X10E9最大目的细胞吸附量：2X10E8一次上样数量：1个半自动分选产品130-095-346 MultiMACS Cell24 Separator（半自动分选器）对应使用分选柱：LS LD适合分选策略：阳性分选和阴性分选最大细胞上样量：24X2X10E9最大一次上样量：24个全自动分选产品autoMACS Starting Kit（全自动分选器）对应使用分选柱：自动分选柱（可重复使用）适合分选策略：阳性分选和阴性分选最大细胞上样量：4x10e9最大目的细胞吸附量：2x10e8最大一次上样量：6个。
德国美天妮磁珠分选
MACS® 细胞分选策略
• 阳性分选
• 去除分选 • 去除分选后再阳性分选
• 多重分选
MD0044.02
MACS细胞分选策略
1、阳性分选：
• 根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记
后，作为阳性的标记组分直接分选出来。
• 优点：
》高纯度，尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速
MD0044.02
识别DC和DC亚群 New
DC 亚群特异性标志: Blood Dendritic Cell Antigens
Lineage- (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) HLA-DR+ CD11c+ CD123low/-
BDCA-2/4+ BDCA-1+ BDCA-3+
MD0044.02
MACS® 技术分选与分析功能性T细胞
T细胞分选
T细胞亚群
T细胞功能亚群
抗原特异性 T细胞
Th细胞（ CD4） Tc细胞（ CD8） 调节性 T细胞 (CD4+CD25+) TCRr/d 细胞 (TCRr/d微珠 ) NK/T细胞 (CD56多选微珠＋ CD3微珠 )
NaiveT细胞 (CD45RO阴选 ) 活化 T细胞（ CD69、 CD25、 CD30） 效应 T细胞（ CD27） 记忆 T细胞（ CD45RA阴选、 CD45RO阳选） Th2细胞 (anti-CRTH2)
IFN-r IL-2 IL-4 IL-10 TNF-a
MD0044.02
MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New
Catch Reagent
德国美天妮磁珠分选
New
CD11c
CD11c+ B220+ Gr-1 (Ly-6C/G)+ DC
Conventional DC
Plasmacytoid DC (PDC)
CD11c B220 Gr-1
CD8+ DC
(―lymphoid― DC)
CD4+ DC
(―myeloid― DC)
mPDCA-1
CD11c CD8a
Miltenyi Biotec: 免疫磁珠分选技术及应用
德国美天旎生物技术有限公司 北方区技术支持 王卉
1/1 MD0xxx.01
内容
• MACS技术原理 • MACS技术设备及分选策略 • 几种特殊的MACS分选
分选和分析DC细胞 分选各种T细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选
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主要卖点
干细胞产品：人类：CD133、CD34、MSC试剂盒（CD271） 小鼠：系别阴性试剂盒、CD117微珠 定向分化培养基 DC产品： 人类：BDCA-1、BDCA-2/4 小鼠：CD11c NK产品： 人类：NK细胞阴选试剂盒、CD3/CD56 T细胞产品： CD4+CD25+调节性T细胞（人和小鼠） CSA系列 CD4、CD8微珠及阴选试剂盒 B细胞产品： CD19微珠及阴选试剂盒 肿瘤细胞分选：癌细胞富集试剂盒、HEA微珠、CD45阴选 单核细胞分选：CD14微珠及阴选试剂盒 间标微珠 死细胞去除试剂盒 预选滤器、FCR阻断剂、T细胞活化与扩增试剂盒 流式细胞仪抗体（价廉、包装量大、优质）
MD0044.02
识别DC和DC亚群 New
MACS(磁珠分选)介绍-优宁维
技术一：MACS磁珠分选介绍MACS技术为德国美天旎生物技术有限公司（Miltenyi Biotec GmbH）的专利产品，是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。
MACS技术已成为细胞分选的标准方法，从实验室到临床，从小规模到大规模，从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群，从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞，MACS技术提供了一种可在每一个实验室进行高品质细胞分选的方法。
MACS技术主要组成成分为MACS微珠、MACS分选柱和MACS分选器。
MACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒。
MACS分选柱置于一个永久性磁场—MACS分选器中，可以将磁力增强1000倍，足以滞留仅标记极少量微珠的目的细胞。
用缓冲液冲洗分选柱，所有未标记的细胞被冲洗掉。
分选柱离开磁场，即可获得被标记的细胞组分。
所有的操作在2.5－30分钟内即可完成，得到的细胞可立即用于后继实验。
德国美天旎公司是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。
开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势，CD133、BDCA-2（CD303）、BDCA-4（CD304）单抗为其专利产品。
MACS技术优点1、稳定、高质量的分选使用MACS技术，可获得高纯度（90-99%）、高回收率的分选细胞群。
2、对细胞无损伤50nm微珠和MACS分选柱均无毒性，对细胞无损伤，可以纯化有活力和功能活性的细胞而不影响其活性。
3、操作简便、快速MACS技术操作简单，消毒方便。
磁珠孵育时间很短，仅需15分钟。
手动分选可在30分钟内完成，autoMACS分选可在2.5-10分钟之内完成。
4、从实验室到临床MACS技术可以实现从105到1011个细胞分选。
美天旎临床产品解决方案
德国美天旎临床解决方案
美天旎的完整解决平台–细胞治疗的首选工具
MACS GMP Antibodies CliniMACS and Reagents MACS GMP Antigens MACS GMP Cytokines MACS GMP Media MACS culture bag
细胞治疗领域介绍 3
自身免疫病 - 自体干细胞移植
主要适应症-CD34分选
1. 严重系统性硬化 2. 系统性红斑狼疮 3. 克隆氏病
严重的自身免疫病疾病用SCT治疗是必须的。
重要的临床试验 - ASTIS和ASSIST
ASTIS（系统性硬化）
入选150例患者已经完成，2010年10月完成最后一例入选 2011年发表安全性检测报告 2012年发表有效性报告
肿瘤，感染和耐受包括下列产品
细胞因子捕获系统（IFN-r）用于分离AgT CD8用于富集TIL
CD56,CD3,CD19用于富集NK细胞
CD14用于富集MoDC细胞 CD1c,CD304用于富集BDC，分别为MDC和PDC
CD25用于富集Treg细胞，有时也用CD8,CD19
预防复发，减轻感染，帮助抑制，支持免疫重建，从GVT中分离GvHD
CD45R去除系统：去除naiveT细胞，预防GvHD Treg细胞：CD25，减轻免疫耐受，预防GvHD，也可结合TexMACS GMP Treg
medium和GMP ExpAct Treg kit扩增Treg细胞。
DC疫苗和CCS：CD14，预防移植后的感染
CliniMACS® 富集管道系统
临床用
科研用（临床前期）
美天旎公司磁珠分选产品
美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠（MicroBeads）MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。
微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。
微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。
MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用20－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。
此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。
MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。
其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。
多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。
这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。
MACS技术分选的CD8阳性T细胞（箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠）二、MACS分选柱（Separation Column）MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。
在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。
手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需2.5-10分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。
此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。
三、MACS分选器（MACS Separators）MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。
德国美天妮磁珠分选
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS分选器
autoMACS分选仪 分选仪
• 9种程序，一机完成所有细胞分选 种程序， 种程序 • 成本低，两个可重复使用的分选 成本低， 周内100次 柱（2周内 次） 周内 • 快速（3－10分钟） 快速（ － 分钟 分钟） •重复性好 重复性好 • 全自动分选，仪器操作简单 全自动分选， • 适用范围广：从少量标本（105） 适用范围广：从少量标本（ 到大量标本（ ），进样量 到大量标本（4X109），进样量 0.5ml-50ml • 8种全血微珠，可以做常见细胞的 种全血微珠， 种全血微珠 全血分选， 全血分选，省去了费时的提取单个 核细胞过程
• 去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去 去除分选是磁性标记非目的细胞，
除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。 即未磁性标记的细胞为目的细胞。
• 去除分选策略适用范围： 去除分选策略适用范围：
》去除不需要的细胞 缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群
MD0347.01
MACS® 磁性分选
MACS微珠进行 微珠进行 磁性标记
洗脱阳性分 选的细胞
未标记的细胞 先行流出
MD0651.01
分选前标本制备： 分选前标本制备：过滤
.02
MACS 技术
设备与试剂
» MACS微珠 微珠 » MACS分选柱 MACS分选柱 » MACS 分选器 » 详细分选方案 详细分选方案*
MD0197.02
MACS技术 技术
设备与试剂
• MACS微珠： 微珠： 微珠
MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺 磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。 磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。
美天旎细胞治疗全线-130723
细胞特异性的免 疫磁性标记试剂
管道
Mo-DC culture
5~7 ds
2 ds
美天旎DC细胞治疗方案
GM-CSF 1000 IU/mL IL-4 1000 IU/mL
流式细胞检测CD11c， CD40 ，CD80，CD83，CD86
IL-6 1000 IU/mL TNFα 1100 IU/mL IL-1β 1900 IU/mL PGE2 1 µg/mL
某些不适合手术、不能耐受放化疗的中晚期癌症
非T细胞相关的白血病和淋巴瘤
乙型肝炎，丙型肝炎，慢性寄生虫感染等
对于手术、放化疗或造血干细胞移植后患者体内微小残留病灶的清除， 防止癌细胞扩散和复发
T细胞相关淋巴瘤和白血病；器官移植后，长期使用免疫抑制药物或正 在使用免疫抑制药物的患者；自身免疫病患者
美天旎产品在CIK细胞治疗中的应用
NK治疗简介 NK（Natural Killer）来源尚不清楚，体外实验
表明，胸腺细胞在体外IL-2、 IL-12、IL-15、 IFN-α、TNF-α等细胞因子存在条件下培养也可 诱导出NK细胞。
NK细胞表面标记物为：CD3- CD56+
NK 细胞杀死肿瘤细胞特点
广泛识别肿瘤细胞，自然杀伤活性无MHC限制 分泌穿孔素及肿瘤坏死因子 起效快、杀伤能力强
重悬NK细胞 ，调整 浓度2×10e6
过夜培养(1000 U/ml IL-2)。用 5% HSA溶液洗
涤两次，重悬浮 细胞
NK细胞终产品 ，调整 细胞浓度2×10e7，回输人 体, 注射Hi-Cy/Flu，连续14
天注射IL-21 （1.75*10e6 IU/m2）
流式鉴定表型（CD3,CD4,CD8,CD56，CD25）
美天旎7月新产品
美天旎7月新品细胞分选产品：1、Pan-DC 富集试剂盒，人：适用于阴性分选Pan-DC细胞，可获得高活性，高纯度，高得率的DC细胞，分选细胞与下游实验相兼容。
应用：•分选的细胞适用于免疫表型分析和功能检测，分子分析；•与其他细胞共培养检测其与其他细胞之间的相互作用；•适用于细胞迁移实验。
2、高纯度CD34 磁珠试剂盒，人：该试剂盒可以分选获得超高纯度的CD34+造血干祖细胞，并且能够确保细胞功能和活性不受影响，分选获得的细胞与下游实验相兼容。
应用：分选的细胞适用于细胞培养，分子分析，流式检测。
3、MACSxpress 分选器该分选器适用于MACSxpress大磁珠的分选，无需配合分选柱，分选更方便，更快捷。
4、抗TRA-1-60 磁珠，人：TRA- 1-60单克隆抗体可以特异性的和表达在未分化的ES细胞，包括iPS细胞，EC 细胞和EG 细胞表面的抗原相结合。
伴随着细胞的分化TRA-1-60在人ES细胞表面的表达量会降低。
TRA-1-60磁珠可特异性的分选人未分化的ES和重编程后的iPS。
应用：•适用于阳性分选人未分化的ES细胞，iPS细胞，EC 细胞和EG 细胞；•分选的细胞适用于下游细胞培养；•分选的细胞适用于下游分子分析等；细胞培养产品：1、CytoBox Mo-DC：该试剂盒包括用于刺激单核细胞向DC转换的细胞因子，该试剂盒所含的细胞因子为重组人的粒细胞巨噬细胞克隆刺激因子（GM-CSF）和重组人的IL-4（rIL-4）。
应用：在GM-CSF和IL-4 的共同作用下，可以将单核细胞诱导成未成熟的DC。
2、TLR9 检测试剂该试剂盒中包括4种不同刺激TLR9受体的CpG ODNs 以及相应的ODNs 对照. 该试剂盒包括A-级, B-级, C-级和P-级.。
磁珠分选产品
美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠（MicroBeads）MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。
微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。
微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。
MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用20－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。
此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。
MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。
其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。
多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。
这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。
MACS技术分选的CD8阳性T细胞（箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠）二、MACS分选柱（Separation Column）MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。
在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。
手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需2.5-10分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。
此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。
三、MACS分选器（MACS Separators）MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。
CliniMACS介绍
美天旎细胞治疗平台CliniMACS系统简介第一部分、德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍第二部分、CliniMACS系统在临床细胞治疗中的应用一、CliniMACS细胞分选仪及其配件介绍二、CliniMACS CD34系统的安全性德国美天旎生物技术有限公司上海市仙霞路319号远东国际广场A栋2301室200051电话：（86 21）62351005传真：（86 21）62350953服务热线：800 820 2606北京市东城区朝阳门内大街银河SOHO D座50723室100010电话：（86 10）64107101传真：（86 10）64100990第一部分德国美天旎生物技术有限公司及MACS细胞分离技术介绍德国美天旎生物技术有限公司（Miltenyi Biotec GmbH）是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。
开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势，CD133、BDCA-2（CD303）、BDCA-4（CD304）单抗为我公司专利产品。
我公司总部位于德国科隆，在科隆和德国北部罗斯托克均有cGMP生产机构。
我们的产品有免疫磁珠、特异性细胞及蛋白质或者DNA/RNA分选用的MACS分选设备、单克隆抗体、无菌溶液、基础和特殊培养基、血液/血浆治疗用的生物学吸附剂、LIFE18血浆分离机、流式细胞仪及相关耗材。
MACS技术已成为细胞分选的标准方法，从实验室到临床，从小规模到大规模，从常见细胞到稀有细胞和复杂的细胞亚群，从人类和小鼠细胞到其它种系的细胞，MACS技术提供了可在每个实验室进行高品质细胞分选的方法。
MACS技术原理MACS技术为德国美天旎生物技术有限公司的专利产品，是一种集合了免疫学、细胞生物学、磁力学等知识于一体的高度特异性细胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。
德国美天旎
MACS® MACS® Cell Separation Columns
根据不同的分选策略、细胞的大小和多少等条件， 选择不同的柱柱子。 如适合Positive selection的有MS 如适合Positive selection的有MS Columns, LS Columns, and XS Columns ;MScapacity:2×108 ，LS的 ;MScapacity:2× LS的 capacity:2× capacity:2×109, XS的capacity:2×1010；sparate rare cells XS的capacity:2× by using two columns；Large Cell Columns were designed columns； for positive selection of large human or animal cells Depletion，根据你是用kits 还是用Microbeads，抗原 Depletion，根据你是用kits 还是用Microbeads，抗原 表达水平，细胞多少等选择。
MACS® MACS® Separators
MACS® Separators are designed for fast and easy cell separation in combination with MACS Columns and MACS MicroBeads. They contain strong permanent magnets to induce a highhighgradient magnetic field within the MACS Columns – strong enough to retain cells labeled with minimal amounts of MACS MicroBeads.
免疫磁珠分选两步法纯化原代小胶质细胞
， ｉｉ Ｚ Ｎ ｕ，Ｘ ｕ —ｕｎ ｅｉ ｎｔｕｅ ｏ ｅｍ ｃ ｎｅ ａｉ ｌ ｄ ａ Ｕ ｉ ｒｔ， ｅｉｇ ｕＬ— ， Ｅ Ｇ Ｈ ｉ Ｕ Ｑ ｎｙ ａ ．Ｂ ｉ ｇＩｓ ｔ ｒＮ ｕ ｓｉ ｃ ，Ｃ ｐ ａ Ｍｅｉ ｌ ｎｖ ｓｙ Ｂ ｒｎ ｌ ｊ ｎ ｉ ｔｆ ｅ ｔ ｃ ｅｉ Ｃｎｅ ｏ ｅｒｌ ｅｅｅ ｔ ｎａ ｄＲｐ ｉｎ ， ｅ ａｏａｏ ｆｒ ｅｒｄｇｎｒｔｅ ｉ ａｅ ｏ ｔｅ ｎｓｙｏ ｅｔ ｒｆＮ ｕａ Ｒｇｎｒ ｉ ｎ ｅａｒ ｇ Ｋ ｙＬ ｂｒｔｒ ｏ Ｎ ｕｏｅｅｅａｉ ｓ ｓ ｈ ｉｒ ｆ ａｏ ｉ ｙ ｖＤ ｅ ｓ ｆ Ｍｉ ｔ
【 ｅ ｏｄ 】 Ｍｉ ｏｌ ； ｇｅ ｃａｔ ａｅ ｅ ｏ ｉｇ Ｋ ｙｗ ｒ ｓ ｃ ｇ ａ Ｍａｎｔ ｃｖｔ ｃｌ ｓｒｎ ｒ ｉ ｉ ｉ ｄ ｌ ｔ
小 胶 质 细胞 是 中枢 神 经 系统 中 的 免疫 效 应 细 ａｔ ａｅ ｅ ｏｔ ｇ ＭＡ Ｓ 两 步 法 ， 得 较 高 纯 度 ｃ ｖｔ ｃｌ ｓｒｎ ， Ｃ ） ｉ ｄ ｌ ｉ 获 胞 。虽 然 仅 占 全 脑 神 经 胶 质 细 胞 总 数 的 ５ ～ ％ 并 能够尽 可 能反映其 在体情 况 的原代 小胶 质细胞 。 ２ ０％ ＿ 但 是 ， 胶质 细胞参 与 中枢神 经 系统 的众 多 １ 小 材料 与方法 生 理活 动 ， 与许 多疾病 的发生 发展 密切 相关 【 ， 并 ２ 特 ］
孙珊 珊 王蓓蓓 鞠 莉 莉 曾辉 徐群渊
【 要】 目的 神经 系统感染研究需获得纯度高 、 摘 细胞生物学状态 接近体 内的小胶质细胞 。既 往分离纯化方法不能满足研究需要 ， 需建立新的高效纯化方法。方 法 获得小 鼠全脑单细胞 悬液后 ，
应用磁珠分选 阳选 法 ， 过两 步分 选获 得小 胶 质细胞 。用 流式 细胞仪 检 测小 胶质 细胞 的纯度 ， 经 瑞 氏． 姬姆萨染色观察细胞形态 ， 采用 ７Ａ Ｄ染色鉴定分选后细胞的活性 。结果 －Ａ １ ３ ） 。该方法所获得的小胶质 细胞 活性良好 ， ．５ ％ 形态正常。结论
CliniMACS临床
单核细胞来源的 DCs
CD14+ 单核细胞分选
富集前
23 %
富集后
99 %
CD15-PE
CD15-PE
DC的种类
• 单核细胞来源的DCs - MoDC (CD14)
PBMCs中的频度5－10％
• 髓血细胞来源的DCs – mDC1(BDCA-1)
PBMCs中的频度0.29％(0.09-0.42%)
CABG + TMLR + CD133+ 干细胞
手术干细胞操作流程
干细胞处理 Operating room I 外科手术 Operating room II
决定CD133+ 细胞灌注
骨髓采集Biblioteka 0 min胸阔切开术
收集、洗涤
孵育、洗涤 CliniMACS® 分选
60 min
移植物收集
ECC
90 min 心肌再灌注
CliniMACS 构造
• 2. 无菌管道系统: 一次性使用 滴流管 避免气体激活 液体感受器 预选柱 机械性过滤 非特异性的细胞 分选柱
CliniMACS管道系统
• CliniMACS TS: 60 x 109 （5min/ml) • CliniMACS LS TS: 120 x 109 （10min/ml) • DTS:120 x 109(标记40 x 109)
造血系统恶性肿瘤（自体、异体移植） 自身免疫性疾病 实体瘤 遗传、代谢性疾病
CliniMACS CD133试剂
• • • • 阳性分选CD133＋干细胞 一支试剂最多标记6 x 108 CD133+细胞 应用： 1.造血系统方面：
自体、异体干细胞移植（同CD34）
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美天旎公司磁珠分选产品 This manuscript was revised by the office on December 22, 2012
美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品
一、MACS微珠（MicroBeads）
MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。
微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。
微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。
MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用2 0－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。
此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。
MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。
其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。
多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。
这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。
MACS技术分选的CD8阳性T细胞（箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠）
二、MACS分选柱（Separation Column）
MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。
在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。
手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。
此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。
三、MACS分选器（MACS Separators）
MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。
与分选柱一起组成高强度的梯度磁场。
根据应用范围分为研究用和临床应用的MACS分选器，根据操作方式分为手动和自动分选器。
1、MiniMACS分选器和OctoMACS分选器
MiniMACS分选器是专为手动分选动、植物细胞，细菌、病毒、细胞器和mRNA等分子而设计的。
该设备价格低廉，快速分选，应用广泛，易于操作，是获得少量高纯度细胞的理想设备。
OctoMACS分选器把8个MiniMACS分选器连在一起，可以在一台仪器上同时进行8个标本的分选。
MiniMACS OctoMACS
2、MidiMACS分选器和QuadroMACS分选器
MidiMACS分选器是MiniMACS分选器的扩大版本，与LS和LD分选柱配合使用，可阳性选择或者去除大量高纯度细胞。
QuadroMACS分选器把4个MidiMACS分选器连在一起，可以同时进行多个分选过程，或者同时进行多个样本分选，也可将一个大的样本分成数个部分同时分选。
3、VarioMACS分选器
VarioMACS分选器有多种适配器，可以使用MS、LS、LD和CS分选柱。
可用于阳性选择和去除分选：既可高纯度地分选出稀有细胞（如频率低至10-8），也可用来从细胞悬液中去除多达2×108非目的细胞。
4、SuperMACS II分选器
设计的SuperMACS II分选器专门用于大量细胞分选，一次分选的总细胞数大于101 1，同时该仪器也适用于少量细胞的分选。
uperMACS II分选器备有三个适配器，除了μ分选柱和autoMACS分选柱外，其它所有各型MACS分选柱均可用于SuperMACS II分选器。
Super MACS II
5、μMACS分选器
μMACS分选器是为分子生物学和蛋白生化分选设计的分选器。
同时容纳4个μ分选柱，可以分选出高纯度分子，如mRNA、序列特异性核酸或者蛋白。
μMACS
6、autoMACS分选仪
7、CliniMACS
分选种类分选柱容量适配分选器
手动阳性分选或者强
阳性细胞去除分选MS分选柱
2X108总细胞
107个标记细胞
MiniMACS、VarioMACS、Supe
rMACS
大细胞分选
柱
2X108总细胞
107个标记细胞
MiniMACS、VarioMACS、Supe
rMACS
LS分选柱
2X109总细胞
108个标记细胞
MidiMACS、VarioMACS、Supe
rMACS
XS分选柱2X1010总细胞SuperMACS
109个标记细胞
手动去除分选LD分选柱
5X108总细胞
108个标记细胞
MidiMACS、VarioMACS、Supe
rMACS
CS分选柱
2X108个标记细
胞
VarioMACS、SuperMACS D分选柱
109个标记细胞
SuperMACS
自动分选AutoMACS分
选柱
4X109总细胞
2X108个标记细
胞
AutoMACS CliniMACS
6-12X1010总细
胞
6-12X108个标
记细胞
CliniMACS
分子生物学分选μ分选柱10μg mRNA μMACS M分选柱50μg mRNA MiniMACS Miltenyi磁柱选择及标记问题
（主要针对Miltenyi产品）
一、标记策略
用MACS进行磁分离，最重要的参数就是高质量的标记。
对阳性细胞的标记应尽可能强，而背景要尽可能低，才能获得对磁标记的阳性细胞和未标记的阴性细胞的最好分辨。
有多种不同的标记策略可供参考：
1、直接标记
直接标记是最快速和最特异的磁标记方法。
2、间接标记
几乎所有的单克隆抗体或多克隆抗体都可以用于间接标记。
用无标记的、生物素化的或FITC、PE或APC结合的一抗标记细胞，再用抗免疫球蛋白、抗生物素、链霉菌亲和素、抗FITC、抗PE、或抗APC的微珠分别进行磁标记。
间接标记可以放大磁标记，用于分离表达比较弱的标记很有用。
在间接标记中，以使用生物素化的或PE表记的一抗结果特异性最好。
二、磁分离柱的选择
下表为德国Miltenyi公司的分离柱种类，其中MS, LS, XS柱适合于正性细胞选择，如果磁标记很强，也可用于负性选择。
Large Cell Columns与MS柱相比，孔径较大，适合于人和动物大细胞的正性选择，如巨核细胞。
新的LD柱是为最方便的负选设计，代替了AS 和BS柱。
LD 柱和CD及D柱即使在磁标记很弱的情况下也能获得最高的负选效率。
μ 和M柱是为分子生物学方面的应用而设计的。
三、分选策略
分选策略也要根据实际情况进行选择
1、正性选择（positive selection）
磁珠对细胞功能和活力的影响很小，因此一般首先应该考虑正选策略。
正选具有速度快和单克隆抗体的特异性优势，大多数情况下，正选省时省钱。
2、负性选择（negative selection）
如果正选策略不适合您的实验，比如有可能因抗体结合引起细胞活化或没有针对靶细胞的特异性抗体，可以选择负选策略。
MACS对许多细胞类型提供了合适的试剂盒，含有滴定好的针对非靶细胞的混合抗体。
附：Miltenyi分离柱技术指标及图片
Miltenyi的柱子回收方法
准备使用回收的柱子时，抗体孵育始，即将柱子置于新鲜的75%酒精中，柱的容器内盛满酒精，自动流下，既消毒，又de-gas，去除气泡十分关键。
洗抗体时，即开始洗柱子，将回收柱架于消毒过的长试管口上。
换新的酒精自然滴下，换PBS+%FBS冲洗之，最后用MACS Buffer冲洗。
柱子准备完毕，准备上柱的细胞也就同时准备好了。
回收方法
将长试管注满PBS，回抽柱子的活塞，倒出回抽液。
倒入新的PBS，打出之；重复两次---此时基本上将柱子内的杂细胞除尽。
再抽、打两三次无水酒精或95%酒精，然后置于50-60度烘箱，过夜，即能防止生锈。
此法回收的柱子可用2-5次。
本人用回收的柱子分离血CD4细胞，纯度>90%。