实验三维生素C的定量测定,6二氯靛酚滴定法
6-二氯酚靛酚法测定Vc
2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量一．实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚法测定Vc 的含量二．实验原理Vc具有还原性，可以还原2，6-二氯酚靛酚（由玫瑰色至无色），所以可以用2，6-二氯酚靛酚滴定样品溶液中的Vc。
抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚→脱氢抗坏血酸+2，6-二氯酚靛酚（还原型）（氧化型）玫瑰色（氧化型）（还原型）无色滴定终点：出现浅玫瑰色时，表明样品液中的维生素c全部被氧化。
计算公式：维生素c毫克数/100g 样品=（Va-Vb）*s/w*100Va:滴定样品中提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。
Vb:滴定空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫克数。
S:1ml2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素c的毫克数。
W：10ml样品提取液中含样品的克数。
三．实验试剂与仪器：菜花10%盐酸溶液偏磷酸-醋酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液50ml容量瓶滤纸漏斗滴定管铁架台分析天平研钵四．实验步骤：1、30g菜花在研钵中研磨后，用滤纸过滤，滤液置50毫升容量瓶中，用偏磷酸溶液定容，至50毫升，备用。
2、量取10毫升滤液，用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至玫瑰色5s不退色为滴定终点（滴定过程不超过2分钟），记录2，6-二氯酚靛酚溶液用量。
3、空白取偏磷酸溶液10ml，滴定4、侧S值。
取5ml标准抗坏血酸溶液加入5ml偏磷酸-醋酸溶液，然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成微玫瑰红色持续15s不退为终点，计算2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每毫升2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数（S）来表示。
5、计算结果。
五.数据处理:m=30.07g; V A=2.0mL; V B=0.18mL; w=6.014g; s=0.171mg/ml维生素C毫克数/100g样品=(2.0-0.18)*0.171*100/6.014=5.17 (mg/100g样品)六、注意事项●提取时，滤液过度浑浊会影响滴定终点的判断，纱布过滤时，要尽可能滤干净抽提液，以免有残留的Vc 。
实验三维生素C的定量测定,6二氯靛酚滴定法 (1)
实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K ）。
2、样品的测定：取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml （V 3），用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，记录两次滴定所得的结果，求平均值V 1。
果蔬维生素C含量测定
果蔬维生素C含量测定原理：还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。
还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸，在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
试剂配制：(1)2％草酸溶液：溶解20克草酸结晶于200毫升水中，然后稀释至1000ml(2)0.2 mg/ml抗坏血酸标准溶液：准确称取10 mg抗坏血酸，溶于2％草酸溶液中，定容到50 ml容量瓶中，置冰箱中保存。
(3)2，6-二氯靛酚溶液：称取50 mg2，6-二氯靛酚钠盐，溶于50 ml热水中，冷却后用蒸馏水定容至250 ml容量瓶中。
过滤后，置于棕色药瓶中保存在冰箱内。
步骤1.标准抗坏血酸溶液的标定吸取标准抗坏血酸溶液2 ml，加入5 ml20 g/L的草酸溶液，以2，6-二氯靛酚溶液滴定至桃红色且15 s内不褪色即为终点。
用同时刚配好的V C标准溶液标定，记录每ml 2，6-二氯靛酚溶液相当于V C的毫克数（mg/ml）。
2.样品的准备及滴定取样品匀浆10.0 g，加入90 ml 2％草酸溶液，定容至100 ml，过滤备用。
用标定过的2，6-二氯靛酚溶液滴定至桃红色且15 s内不褪色为止，记下染料的用量，重复三遍。
3.维生素C含量计算W=（V0-V1）A*100/MW为100g鲜样样品中含抗坏血酸的毫克数V0为滴定样品所用的染料的ml数。
V1为空白样品所用的染料的ml数。
A为1ml染料溶液相当于维生素C的毫克数（mg/ml）。
M为取样量即样品克数。
第三法2,6-二氯靛酚滴定法17 原理用蓝色的碱性染料2,6-二氯靛酚标准溶液对含L(+)-抗坏血酸的试样酸性浸出液进行氧化还原滴定,2,6-二氯靛酚被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的2,6-二氯靛酚在酸性介质中显浅红色,由2,6-二氯靛酚的消耗量计算样品中L(+)-抗坏血酸的含量。
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
维生素C的测定 2,6一二氯靛酚滴定法
维生素C的测定 2,6一二氯靛酚滴定法维生素c的测定-2,6一二氯靛酚滴定法实验六、维生素c的测定――2，6一二氯靛酚滴定法（1）原理还原型抗坏血酸可以还原染料2，6一二氯靛酚。
该染料在酸性溶液中就是粉红色（在中性或碱性溶液中呈圆形蓝色），被还原成后颜色消失；还原型抗坏血酸还原染料后，本身被水解成过氧化氢抗坏血酸。
在没杂质阻碍时，一定量的样品提取液还原成标准染料液的量，与样品中抗坏血酸含量成正比。
（2）试剂①1%草酸溶液（m/v）②2%草酸溶液（m/v）③抗坏血酸标准溶液精确称取20mg抗坏血酸，溶1%草酸溶液，并吸收至100ml，复置冰箱中留存。
用时抽出5ml，放在50ml容量瓶中，用1%草酸溶液定容，硝酸锶0.02mg／ml的标准采用液。
标定吸取标准使用液5ml于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5ml、1%淀粉溶液3滴，以0.001mol/l碘酸钾标准溶液滴定，终点为淡蓝色。
v1?0.088v排序c＝2式中c――抗坏血酸标准溶液的浓度，mg/ml；v1―一滴定时消耗0.001mol/l碘酸钾标准溶液的体积，ml；v2―一滴定时所挑抗坏血酸的体积，ml；0.088―一1ml0.001mol/l碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg/ml④2，6-二氯靛酚溶液称取2，6-二氯靛酚50mg，溶200ml所含52mg碳酸氢钠的热水中，待冷，置于冰箱中过夜。
次日过滤于250ml棕色容量瓶中，定容，在冰箱中保存。
每星期标定一次。
标定挑5ml未知浓度的抗坏血酸标准溶液，重新加入1%草酸溶液5rnl，容器，用2，6-二氯靛酚溶液电解至溶液呈圆形粉红色，在15s不退色为终点。
c?v1计算：t＝v2式中t―一每毫升染料溶液相等于抗坏血酸的毫克数，mg/ml；c―一抗坏血酸的浓度，mg/ml；v1－一抗坏血酸标准溶液的体积，ml；v2――消耗2，6-二氯靛酚的体积，ml。
⑤0.000167mol／l碘酸钾标准溶液准确称取潮湿的碘酸钾0.3567g，用水吸收至100ml，抽出lml，用水吸收至100ml，此溶液lml相等于抗坏血酸0.088mg。
实验三 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
操作
1.提取:称取约10g样品，加1%草酸少许，用研钵磨碎（桌 面放置一块纸板），加20ml 1%草酸，静置5-10分钟，然后 把样品全部过滤(或离心）后转入50ml容量瓶中.加1%草酸 定容到50ml，即可进行滴定。
2.滴定 （1）标准液滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml（含 0.1mg抗坏血酸），置50ml 锥形瓶中，加9ml 1%草酸，微 量滴定管以0.1% 2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持 15秒不消失即为终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相 当于多少mg 抗坏血酸。
实验三 蔬菜水果中的维生素 C含量测定（2，6-二氯酚靛酚
滴定法）
基本原理
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚 钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液 中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后呈无色。 且在酸性环境中，干扰物质与染料的反应非常慢， 而抗坏血酸与之反应的特异性有一定程度的提高。 当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使 滴定液呈淡红色，即为终点。如无其它干扰物质 存在，样品提取液所还原的标准染料量与样品中 所含的还原型抗坏血酸量成正比。
V=滴定时所用去的染料ml数； T=1ml染料能氧化抗坏血酸mg数； W=10ml定：准确吸取滤液或上清液三份，每份10.0ml 分别放入三个50ml 锥形瓶中，同标准液进行滴定。
说明： １、滴定速度应迅速，一般不超过２分钟； ２、如样品中Vc含量过高，则取1ml样液加9ml草
酸然后进行滴定,最后计算时W为1ml样液中所含样品的 克数。
计算
V×T/W×100=100g样品中含抗坏血酸mg数；
维生素c测定实验报告
维生素c测定实验报告维生素 C 测定实验报告一、实验目的本次实验旨在准确测定样品中维生素 C 的含量，了解和掌握维生素C 测定的基本原理和实验方法。
二、实验原理维生素 C 又称抗坏血酸，具有较强的还原性。
本实验采用 2,6 二氯靛酚滴定法进行测定。
2,6 二氯靛酚是一种染料，在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
其氧化型在酸性溶液中呈红色，可与维生素 C 发生氧化还原反应。
当维生素 C 全部被氧化后，稍过量的 2,6二氯靛酚会使溶液呈现红色，此时即为滴定终点。
通过滴定消耗的 2,6 二氯靛酚溶液的量，可以计算出样品中维生素 C 的含量。
三、实验材料与设备1、材料新鲜水果（如橙子、草莓等）、标准维生素 C 溶液。
2、试剂2%草酸溶液、0001mol/L 2,6 二氯靛酚溶液。
3、仪器电子天平、容量瓶、移液管、锥形瓶、酸式滴定管、玻璃棒、漏斗、滤纸。
四、实验步骤1、样品处理准确称取适量的新鲜水果，放入研钵中研磨成匀浆。
将匀浆转移至容量瓶中，用 2%草酸溶液定容至刻度，摇匀。
用漏斗过滤，收集滤液备用。
2、标准溶液的配制准确称取一定量的标准维生素 C 晶体，用 2%草酸溶液溶解并定容至一定体积，得到标准维生素 C 溶液。
3、滴定吸取一定量的样品滤液于锥形瓶中，加入2%草酸溶液至一定体积。
用 0001mol/L 2,6 二氯靛酚溶液进行滴定，边滴边摇动锥形瓶，直至溶液呈现淡红色，并保持 15 秒不褪色，即为滴定终点。
记录消耗的2,6 二氯靛酚溶液的体积。
同时进行空白实验，除不加样品滤液外，其他操作与样品滴定相同，记录空白实验消耗的 2,6 二氯靛酚溶液的体积。
五、实验数据处理1、计算 2,6 二氯靛酚溶液的实际浓度吸取标准维生素 C 溶液 1000mL 于锥形瓶中，加入 2%草酸溶液至50mL。
用 2,6 二氯靛酚溶液进行滴定，记录消耗的体积 V1（mL）。
2,6 二氯靛酚溶液的实际浓度（mol/L）＝标准维生素 C 的浓度×1000÷V12、计算样品中维生素 C 的含量样品中维生素 C 的含量（mg/100g）＝（V V0）×C×T×100÷W其中，V 为样品滴定消耗 2,6 二氯靛酚溶液的体积（mL）；V0 为空白滴定消耗 2,6 二氯靛酚溶液的体积（mL）；C 为 2,6 二氯靛酚溶液的实际浓度（mol/L）；T 为 1mL 2,6 二氯靛酚溶液相当于维生素 C 的毫克数；W 为样品质量（g）。
实验三果蔬中维生素C的定量测定
实验三果蔬中维生素C的定量测定实验三果蔬中维生素C的定量测定一、实验目的通过实验掌握果蔬中维生素C含量的测定方法，了解维生素C在果蔬中的分布情况，为合理膳食提供参考。
二、实验原理维生素C是一种水溶性维生素，具有还原性，可采用高效液相色谱法（HPLC）或2,6-二氯靛酚滴定法进行测定。
本实验采用2,6-二氯靛酚滴定法，该方法操作简便、快速，适用于各类果蔬样品的测定。
三、实验步骤1.样品处理：称取适量新鲜果蔬样品，用研钵捣碎，加入适量提取剂（如蒸馏水、酸性乙醇等），研磨成匀浆。
对于一些难以提取的样品（如胡萝卜等），可采用加热或超声波辅助提取。
2.样品过滤：将研磨好的匀浆通过纱布或滤纸过滤，收集滤液备用。
3.滴定：用移液管准确吸取滤液10.0mL，放入250mL三角瓶中，加入2,6-二氯靛酚溶液（浓度约为0.02g/L）约20mL，摇匀后迅速滴定至终点。
记录消耗的2,6-二氯靛酚溶液体积（V1）。
4.空白试验：用移液管准确吸取提取剂10.0mL，按步骤3进行滴定操作，记录消耗的2,6-二氯靛酚溶液体积（V2）。
5.数据记录与处理：根据滴定结果计算维生素C含量，并记录数据。
数据处理可采用表格或图表形式展示。
四、实验结果与数据分析1.实验数据记录：将实验过程中测定的数据记录在表格中，包括样品名称、提取剂用量、滴定消耗体积等。
2.数据分析：根据实验数据计算各类果蔬中维生素C的含量，并对其分布情况进行统计分析。
可以绘制柱状图或饼图来表示不同种类果蔬中维生素C的含量比例。
还可以对不同种类果蔬中的维生素C含量进行对比分析，探讨不同种类果蔬中维生素C含量的差异及其原因。
五、结论通过本实验，我们掌握了果蔬中维生素C含量的测定方法，了解了不同种类果蔬中维生素C的分布情况。
实验结果表明，柑橘类水果（如橙子、柠檬）和草莓等水果中维生素C含量较高，而根茎类蔬菜（如胡萝卜、土豆）中维生素C含量相对较低。
此外，我们还发现不同种类果蔬中维生素C含量的差异可能与品种、生长环境、储存条件等多种因素有关。
Vc的含量测定方法
(5) 若样品滤液颜色较深， 影响滴定终点观 察， 可加入白陶土再过滤。
(6) 若样品中含有Fe2+、Cu2+、 Sn2+、亚硫 酸盐、硫代硫酸盐等还原性杂质时， 会使结 果偏高 。在提取过程中， 可加入EDTA等螯 合剂。
滴定度T (mg/mL) =
C× V
V1-V2
T： 每mL2, 6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数 C： 抗坏血酸的浓度， mg/mL V： 吸取抗坏血酸的体积， mL V1： 滴定抗坏血酸消耗染料的体积， mL V2： 滴定空白消耗染料的体积， mL
(3) 样品溶液的测定： 吸取滤液5mL于 100mL三角瓶中， 加入5mL2%草酸溶液， 用已标定的2, 6-二氯靛酚溶液滴定至出现 微红色， 且15s不褪色为止， 记录消耗染料 的体积， 平行操作三次， 取其平均 。 同时 ， 取10mL2%草酸做空白实验。
2, 6-二氯靛酚： 氧化态： 深蓝色 碱 性： 深蓝色
还原态： 无色 酸 性： 浅红色
3. 实验材料、仪器与试剂 材料： 枣 仪器： 三角瓶、研钵、移液管、漏斗、铁架
台、容量瓶， 滴定管、分析天平
试剂： 2%草酸溶液 标准抗坏血酸溶液 (0.2mg/mL) 0.02% 2, 6-二氯靛酚
4. 实验步骤 ( 1) 样品处理： 称取1g枣， 放在研钵
5. 结果计算
( V1- V2) × T× V4
抗坏血酸含量 (mg/100g) = ×100 W×V3
T： 滴定度 (mg/mL) W： 样品的质量 (g)
V1： 滴定样品消耗染料的体积 (mL) V2： 滴定空白消耗染料的体积 (mL) V3： 滴定时吸取样品溶液的体积 (mL) V4： 样品定容的体积 (mL)
维生素C的定量测定
实验报告实验课程：维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）学生姓名：xxx学号：xxx专业班级：xxx2017年 4 月 18 日实验背景：维生素是维持生物正常生命过程所必须的一类有机物质，其中维生素 C 是人类营养中最主要的维生素之一，对预防和治疗坏血病有特殊的功效，故又称之为抗坏血酸。
维生素 C 能促进细胞间质的合成，和体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
在1928年，从牛的肾上腺皮质中提取出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
如果人体缺乏维生素 C 时则会出现坏血病。
维生素C广泛分布于植物的绿色部分和新鲜的水果、蔬菜中。
人体内不能自身合成维生素C，必须由食物提供，所以对新鲜水果、蔬菜中维生素 C 的存在进行定性检测和定量测定是很有意义的。
一、实验目的了解并掌握用2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、实验原理还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。
因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量和样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
三、实验试剂和仪器1、实验试剂：①2%草酸溶液、②1%草酸溶液、③标准抗坏血酸溶液（0.1 mg/ml）④0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液2、实验仪器：①吸管1.0ml、10.0ml各一个，②两个25 ml容量瓶，③微量滴定管5ml，④电子分析天平，⑤研钵，⑥漏斗.四、实验步骤1、取材和预处理：先在研钵中加入15m 2%草酸，再用分析天平称取2.5g左右青椒和苹果分别放入研钵中，记下数据; 研磨成浆后漏斗过滤，滤液转入25ml容量瓶，用2%草酸定容。
2、滴定（1）标准液滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0 ml（含0.1mg 抗坏血酸）置100 ml锥形瓶中，加9ml 1%草酸，微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s钟即为终点。
维生素C含量测定 2,6-二氯酚靛酚法
注意事项
1.用2%草酸制备提取液,可有效地抑制抗坏血酸氧化酶,
以免抗坏血酸变为氧化型而无法滴定,而1%的草酸无此作 用 。
2.市售的2,6-二氯酚靛酚质量不一,以标定货0.4mg抗坏
血酸消耗费2ml左右的染料为宜,可根据标定结果调整染 料的浓度
3.滴定过程易迅速,一般不超过2min。样品滴定消耗燃料
份。
结果处理
维生素C mg/100g样品=﹙V1－V2﹚×V×M×100/V3×W 式中： V1为滴定样品所消耗染料的平均毫升数. V2为滴定空白对照所耗用染料的平均毫升数 V为样品提取液的总体积; V3为滴定时所取的样品提取液的毫升数; M为1ml染料所能氧化抗坏血酸的量﹙mg﹚ W为待测样品的重量﹙g﹚。
实验器材
材料 新鲜水果或蔬菜
试剂
1%草酸溶液:草酸1g溶于100ml蒸馏水中， 2%草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中，抗坏血 酸标准溶液﹙0.1mg/ml﹚用1%草酸溶液配制， 0.05%2,6-二氯酚靛酚溶液。 ﹙50ml﹚，微量滴定管﹙5ml﹚，刻度吸管﹙ml, 10ml﹚，锥形瓶﹙100ml﹚ 。
实验目的
实验原理
实验 4
维生素C含量测定 2,6-二氯酚靛酚法
实验器材
实验方法 实验结果 注意事项 思考题
实验目的
学习用2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的 原理和方法。 进一步熟悉，掌握微量滴定法的基本操
作技术 。
实验原理
维生素C具有还原性,利用它的还原性可测定其含量. 还原型维生 素 C能被2,6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型 ,染料本身被还原成无色的衍 生物,该氧化性染料在碱性环境中呈蓝色 ,在酸性环境中呈红色.因此
仪器或其他用具 天平，组织捣碎机，容量瓶
二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量维生素C，又称抗坏血酸，是人体十分重要的一种营养素。
它可以帮助身体对抵抗疾病、促进伤口愈合、预防心脑血管疾病等。
然而，人体无法自行合成维生素C，只能通过食物或药物的摄入加以补充。
为了保证身体足够的维生素C供应，需要了解食物或药物中维生素C的含量。
本文将介绍一种利用二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量的方法。
试剂和仪器试剂：二氯酚靛酚指示剂、0.05%的维生素C标准溶液、10%的三氧化二锰溶液、0.1M的草酸溶液、氢氧化钠溶液和去离子水。
仪器：比色皿、分液漏斗、准确的容量管、移液管、磁力搅拌器、分析天平和计时器。
实验步骤1. 准备试样溶液。
将待测食物或药物样品取约5克，用去离子水洗涤干净后切碎。
加入50毫升的去离子水，用磨研器磨碎。
将溶液转移到50毫升容量瓶中，用去离子水稀释至刻度线。
轻轻摇晃均匀。
2. 标准曲线的制备。
用0.05%的维生素C标准溶液依次取出5毫升、10毫升、15毫升、20毫升和25毫升，分别转移到50毫升容量瓶中，并用去离子水稀释至刻度线。
将5个标准溶液的吸光度分别测定，并标注吸光度-体积值。
根据数据得出标准曲线。
3. 滴定。
将50毫升的草酸溶液倒入滴定瓶中，用三氧化二锰溶液滴至草酸变为无色。
这时，加入50毫升试样液和适量的二氯酚靛酚指示剂，并用氢氧化钠溶液滴定至溶液由浅蓝色变为深蓝色。
记录所加入氢氧化钠溶液的体积。
4. 结果计算。
根据标准曲线得知滴定试剂溶液的维生素C含量。
根据所加入的氢氧化钠溶液体积，计算待测样品的维生素C含量。
例如，样品所需氢氧化钠溶液体积为10毫升，试剂溶液的浓度为0.1M，那么待测样品中维生素C的含量为50毫克/升。
注意事项1. 试剂应保持干燥，保存于阴凉、干燥的环境中。
2. 所用容器应干净，不含杂质。
3. 滴定过程中，应适度搅拌，以保证试液均匀混合。
4. 滴定时，草酸和三氧化二锰溶液应溶于去离子水中。
5. 操作时应保证安全，避免试剂接触皮肤、口腔和眼睛。
实验三 维生素C的测定
实验报告研究背景与目的：维生素C具有抗坏血病的效应，又称抗坏血酸，是人体不可缺少的一种重要营养物质。
维生素C常存在于新鲜的蔬菜和水果中，人们每天可以从食物中获取，因此对食物中抗坏血酸的测定，对人们的合理膳食有指导作用。
通过本实验，学习测定维生素C的原理和方法，了解水果中维生素C的含量的同时，熟练微量滴定法的操作技术。
实验原理：维生素C又名抗坏血酸，具有很像的还原性，在中性和微酸性环境中能将染料2,6-二氯酚靛酚还原为无色的还原型2,6-二氯酚靛酚，同时自身氧化为脱氢抗坏血酸。
由于氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中显红色，在中性或碱性溶液中成蓝色，所以用2,6-二氯酚靛酚滴定维生素C的酸性溶液，滴下的2,6-二氯酚靛酚与维生素C迅速反应呈无色，当维生素C全部反应，滴下的染料使溶液呈现粉红色，此时即为滴定终点。
于是可以依据标准2,6-二氯酚靛酚的消耗量求出维生素C的含量。
仪器与试剂：离心机（上海安亭科学仪器厂飞鸽牌系列，Anke 7DL-40B）离心管 2移液器5ml半微量滴定管三角瓶50ml*3玻璃棒小烧杯研钵2%草酸溶液0.2mg/ml的标准抗坏血酸溶液2,6-二氯酚靛酚钠溶液实验材料：2g桔皮和10g桔肉实验步骤：1.2.空白测定取2%草酸10ml，放入50ml三角瓶中，用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至三角瓶内溶液呈粉红色，15秒内不退色为终点，记录所用滴定液体积，重复三次取平均值。
3.标定2,6-二氯酚靛酚钠溶液取2ml标准抗坏血酸溶液加8ml2%草酸溶液，置于50ml三角瓶内，用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至终点，记录所消耗2,6-二氯酚靛酚钠溶液的量，重复三次取平均值。
4.样品的测定取桔皮样品液10ml，放入50ml三角瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的粉红色并保持15秒内不褪色，记录所消耗滴定液的体积，重复三次取平均值。
桔肉样品液同理。
（滴定过程迅速，不要超过2分钟）数据整理与记录：表一空白测定所消耗2,6-二氯酚靛酚钠溶液的量（V）已知公式X=（V1-V2）*K*V*100/(W*V3)K=0.2*2/(V0-V2)其中X—100克样品所含维生素C毫克数（mg/100g）W—称取样品重（g）V0—标定染料时滴定标准维生素C所消耗的染料毫升数V1—滴定样品所用染料毫升数V2—滴定空白所用样品液毫升数V3—样品测定时所用样品液毫升数V—样品提取液稀释之总体积K—1毫升染料液所能氧化维生素C之毫克数将由表一至表四查得的数据代入公式，得K=0.2*2/（2.52-0.05）=0.16桔皮：X=（1.87-0.05）*0.16*100*100/（2*10）=145.6mg/100g桔肉：X=（1.57-0.05）*0.16*100*100/（10*10）=24.32mg/100g结果分析：经过本实验的数据计算，得到桔皮中维生素C的含量为145.6mg/100g，桔肉中维生素C的含量为24.32mg/100g，由数据可以看出桔皮中的维生素C含量远远高于桔肉中的维生素C含量，由此可以看出橘皮的营养价值很高，所以经常使用橘皮泡茶，对补充维生素C很有帮助。
维生素C的定量测定
维生素C的定量测定一、原理：维生素C具有化学还原性。
2，6-二氯酚靛酚钠盐水溶液呈蓝色，在酸性环境中为玫瑰色，当其被还原时，则脱色。
根据其各自性质，利用2，6，-二氯酚靛酚在酸性环境中滴定有维生素C的样品溶液。
开始时，样品液中的维生素C立即将滴入的2，6-二氯酚靛酚还原脱色，当样品液中维生素全部被氧化时，再滴入2，6-二氯酚靛酚就不再被还原脱色而呈玫瑰色。
故当样品液用2，6-二氯酚靛酚标准液滴定时，溶液出现浅玫瑰色时表明样品液中的维生素C全部被氧化，达到滴定终点。
此时，记录滴定所消耗的2，6-二氯酚靛酚标准量，按下述计算出样品中还原型维生素C的含量。
二、材料与试剂绿豆芽、10%盐酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液：称取0.21g碳酸氢钠，0.26g2，6-二氯酚靛酚溶于250ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
过滤，装入棕色瓶内，置于冰箱中保存，不得超过3天。
使用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。
取5ml标准抗坏血酸加入5ml偏磷酸-醋酸溶液。
然后用2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每ml2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每毫升2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数来表示。
标准抗坏血酸溶液：准确称取纯抗坏血酸结晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液定容到250ml。
装入棕色瓶中，储于冰箱内。
偏磷酸-醋酸溶液：称取偏磷酸15g，溶于40ml冰醋酸和450ml蒸馏水所配的混合液中。
过滤。
储于冰箱内，此液保存不得超过10天。
三、操作方法1、制备含维生素C的样品提取液：称取30g绿豆芽置于研钵中研磨，放置片刻(约10分钟)，用2层纱布过滤，将滤液(如混浊可离心)滤入50ml容量瓶中。
反复抽提2-3次，将滤液并入同一容量瓶中。
最后，用酸化的蒸馏水(每10ml蒸馏水加10%盐酸1滴)定容，混匀，备用。
2、维生素C含量的测定：量取样品提取液10ml于锥形瓶中。
用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微弱的玫瑰色，持续5秒钟不褪为终点，记录所用2，6-二氯酚靛酚的ml数。
实验三 果蔬中维生素C的定量测定
实验三果蔬中维生素C的定量测定（紫外法）（4学时）一、实验目的1. 学习用铜离子氧化法测定维生素C（Vc）（紫外法）；2. 了解Vc定量测定的其他方法，如：磷钼酸比色法、碘量法、2,6-二氯酚靛酚滴定法（近年来用全自动电位滴定仪进行电位滴定）、紫外法、2,4-二硝基苯肼测定总抗坏血酸量、高效液相色谱法、毛细管电泳法、荧光法、Flinb近红外分光光度法等。
二、实验原理抗坏血酸在波长243～267nm处有较高的吸收值，但在样品成分比较复杂时，因有强烈的背景吸收而不适宜用紫外法测定其Vc含量。
用碱加热法等处理法都存在试剂较贵、操作复杂、时问长等一系列问题而不能广泛应用。
利用铜离子消除背景误差，能直接测定一些水果蔬菜样品中的Vc含量而不需要进行前处理，操作简单干扰少。
附加说明：在测定Vc的国标方法中，荧光法为测定食物中Vc含量的第一标准方法，2,4-二硝基苯肼法作为第二法。
三、实验器材与试剂实验材料桔子实验器材紫外/可见分光光度计；涡旋混合仪；高速冷冻离心机；榨汁器；电热恒温水浴锅；试管与试管架；胶头器长滴管及移液管；250mL烧杯等。
实验试剂1. 120μg/mL Vc贮液：120mg Vc，加适量蒸馏水溶解，然后用1000毫升容量瓶定容。
存4℃备用。
2. 5μg/mL的铜离子溶液：①先配成1000μg/mL的硫酸铜溶液；②取上述硫酸铜溶液5mL，加入1mol/L的醋酸溶液7mL及1mol/L醋酸钠200mL，用蒸馏水定容。
③5×104mol/L的EDTA溶液：36.5mgEDTA溶于适量蒸馏水，250 mL 馏水定容。
④铜离子-EDTA混合液（6.2×105mol/L）：使用前将上述铜离子溶液和EDTA以4:1（v/v）混合而成（现用现配）。
四、实验步骤1. 标准曲线制作取12支试管（大试管）分成2组，按下表进行操作。
维生素C溶液浓度为120μg/mL。
2. 样品测试取一定量的桔子瓣记录克数。
维生素C的定量测定(精)
实验三维生素C的定量测定【实验目的】1. 学习定量测定维生素C的原理及方法2. 掌握微量滴定法的操作技术【实验原理】维生素C具有很强的还原性，在中性和微酸性环境中，能将染料2，6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型的2，6-二氯酚靛酚，同时被氧化成脱氢维生素C。
氧化型的2，6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点。
从滴定时2，6-二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算出被检物质中还原型维生素C的含量。
【器材与试剂】器材：1. 研钵2. 天平3. 容量瓶（50ml） 4. 量筒5. 刻度吸管6. 锥形瓶（50ml）7. 玻棒8. 微量滴定管9. 漏斗10. 新鲜蔬菜或新鲜水果11. 滤纸试剂：1. 2%草酸溶液 2. 标准维生素C溶液3. 0.02% 2，6-二氯酚靛酚溶液【实验步骤】1. 提取：称取新鲜样品约4g，置于研钵中，加入5ml2%草酸溶液研磨成浆状，残渣再次研磨，一同转入50ml容量瓶中，草酸总量为35ml，加水定容。
2.过滤：提取液充分混匀后，过滤。
3. 样品滴定：准确吸取滤液5或10ml于50ml的锥形瓶中，立即用标定过的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，粉红色，15秒不褪色。
记录所用染料的毫升数（重复测定2～3次）。
4. 空白滴定：准确量取35ml2%的草酸，放入50ml容量瓶中，加水定容。
准确吸5或10ml 于50ml的锥形瓶中，立即用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，粉红色，15秒不褪色。
记录所用染料的毫升数（重复测定2～3次）。
5. 计算维生素C含量（mg/100g样品）=（V1-V2）VK/W）×100式中：V1为滴定样品所耗用的染料的平均ml数V2为滴定空白所耗用的染料的平均ml数K为1ml染料相当于维生素C的mg数W为样品质量g数*标定2，6-二氯酚靛酚：取维生素C标准液5ml及1%草酸溶液5ml于50ml的锥形瓶中，用配制好的2，6-二氯酚靛酚溶液标定。
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实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）
一、原理
维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器
新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗
三、实验试剂
1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤
（一）提取
水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定
1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：
量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
记录所用的毫升数，计算每毫升2，6-二氯酚靛酚所能氧化抗坏血酸的毫克数（K ）。
2、样品的测定：
取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml （V 3），用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，记录两次滴定所得的结果，求平均值V 1。
空白滴定方法同前（V 2），
（三）结果计算
根据实验数据计算出每100g 样品的维生素C 含量：
维生素C （mg/100g 样品）=123()V V K V
W V -⨯⨯⨯×100
式中：V 1为滴定样品液所用去染料体积（ml ）;
V 2为滴定空白所用去染料体积（ml ）;
V 3为样品测定时所用滤液体积（10ml ）;
V 为样品提取液的总体积（100ml ）；
K 为1毫升染料能氧化抗坏血酸的质量（mg ）;
W 为称取样品重量(g )。
五、思考题
1、要测得准确的维生素C 值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么
2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下
3、试简述维生素C 的生理意义。