动物细胞培养心得

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《动物细胞培养》教学反思

《动物细胞培养》教学反思

动物细胞培养教学反思
杨建波
赛课已经结束,但我的表现并不好。

首先,引入新课不够精彩,没有激发学生的求知欲。

我觉得应该以演员SELINA演习时皮肤大面积烧伤,治疗通常是取健康皮肤进行自体移植,但对于大面积烧伤病人来讲,健康皮肤很有限,如何来治疗该病人作为问题引起同学们讨论,引出这节课的主要内容——动物细胞培养。

在此之前学生已经学过了植物组织培养,因此我先回顾植物组织培养的原理并提出了一个问题:动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成新个体?引导同学们思考两者之间的异同。

在讲述培养过程时,学生阅读课本自主总结和借助课件展示过程,帮助学生理解培养的过程及把握注意事项。

本堂课上完后,我发现了自己有不少缺点和不足,需要在以后的教学中加以改正:1.没有充分发挥学生的主体地位。

新课程的理念是要转变教师和学生的角色,让学生成为课堂的主导者,而本节课仍然以传统的教学模式为主,仍然是教师为主体。

在实际教学过程中,主观的想引导学生探究问题,思考问题,得出结论,而事实上学生回答问题答不到点子上,我就匆匆的把答案公布了,没有真正做好引导工作。

2.没有充分调动学生的积极性。

课堂教学的气氛对整堂课的教学质量是至关重要的,纵观整节课,学生对问题的思考、回答等积极性不高。

3.时间安排不够紧凑。

导致最后讲动物细胞培养技术的应用时时间紧,讲得比较匆忙。

当然本节课的成功之处是采用了多媒体教学,使课堂的知识容量比较大,对前面学过的内容可以比较快的复习,真正做到温故而知新。

动物细胞培养 课程思政

动物细胞培养 课程思政

动物细胞培养课程思政动物细胞培养课程思政一、引言动物细胞培养作为生物学和生物技术的重要实验技术,不仅在科学研究中具有重要地位,还在生物工程、医药领域等具有广泛的应用。

本文将从思政的角度探讨动物细胞培养的意义、方法与应用,以及对我们的启示。

二、动物细胞培养的意义动物细胞培养是指将动物体内的细胞分离、培养并进行体外繁殖的技术。

它具有许多重要的意义。

1.推动科学研究:动物细胞培养为科学研究提供了可靠的实验手段,使得研究人员可以更加深入地了解细胞的生理、生化特性,揭示疾病的发生机制,为药物研发提供依据。

2.促进医药发展:动物细胞培养在药物筛选、药效评价、毒性测试等方面具有重要应用价值。

通过体外培养动物细胞,可以模拟人体内的生理和病理过程,提高药物研发的效率和成功率。

3.推动生物工程发展:动物细胞培养是生物工程领域的基础和核心技术之一。

通过细胞培养技术,可以大规模培养和繁殖动物细胞,制备生物制品,如抗体、疫苗、酶等,满足医药和工业领域对高质量生物制品的需求。

三、动物细胞培养的方法动物细胞培养主要包括细胞的分离、培养基的选择、细胞培养条件的优化等步骤。

1.细胞分离:细胞分离是将动物组织中的细胞分离出来,常用的方法有机械分离、酶消化和抗体磁珠法等。

分离出的细胞需要经过筛选、纯化等步骤,以获得纯净的细胞。

2.培养基的选择:培养基是细胞培养的基础,可以提供细胞所需的营养物质和生长因子。

常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等,根据不同细胞类型的需求可以选择适当的培养基。

3.细胞培养条件的优化:细胞培养需要适宜的温度、湿度、CO2浓度等环境条件。

此外,还需注意培养皿的选择、培养液的更换等细节,以保证细胞的正常生长和繁殖。

四、动物细胞培养的应用动物细胞培养在生物学、医药和生物工程领域有广泛的应用。

1.生物学研究:动物细胞培养可以用于研究细胞的生理功能、信号传导、基因表达等,为相关生物学问题的解答提供实验依据。

2.疾病研究:动物细胞培养可模拟人体内的生理和病理过程,用于研究各类疾病的发生机制,如癌症、心血管疾病等,为疾病的早期预防和治疗提供重要线索。

细胞培养的个人体会【优质最全版】

细胞培养的个人体会【优质最全版】
如取20ml 胎牛血清,同时加入180ml DMEM 基础培养基,即可配成200ml含10%胎牛的 DMEM.
可重复利用物品的清洗和灭菌
1. 器皿加洗洁精浸泡数小时后,用自来水冲洗9次,
然后蒸馏水冲洗3次。
2. 烘干:洗干净后烘干。
3. 包装:用牛皮纸或布包装。
4.
消毒前贴上灭菌条,条上写明日期、物品、所有
细胞复苏与冻存的原则是“慢冻速融”。 复苏细胞时,速度要快,使之迅速通过细胞最易
受损的-5℃~0℃。 冻存细胞时,向培养基中加入保护剂二甲基亚砜
(DMSO),可使冰点降低,在缓慢的冻结条件 下,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,减少 细胞冰晶的形成。
复苏的标准方法
1、准备好37℃水浴烧杯。 2、将冻存于液氮中的冻存管取出,迅速放入37~40℃
优选细胞培养的个人体会
注意解冻分装前请混合均匀。
包装:用牛皮纸或布包装。
基础培养基
大多数培养基是建立在平衡盐溶液 (BSS)基础上, 添加了氨基酸、 维生素和与血清中浓度相似的营养 物质。
选择培养基很重要,不同细胞需要 适合的培养基。
常见的培养基有:DMEM、F12、 DMEM/F12、1640等。
长时不用,及时关电源。
缺点是无法模拟体内的情况,结果有局限性。
3、无菌条件下打开冻存管,取细胞悬液至离心管中,补加5mL培养液,1600 rpm低速离心5min。
普通细胞可用: 7份: 2份: 1份
(玻璃器皿第一次洗需要用,以后可以省这一步)。
加入新鲜培养液2mL,吹打成细胞悬液,以1 :2或1 :3的比例接种在新的培养瓶内(已预加新鲜培养基3ml) ,置37℃培养。
者。
4. 高压灭菌:包装好的器皿装入高压锅内,121 ℃, 维持30分钟。

乳鼠肾细胞的培养个人体会

乳鼠肾细胞的培养个人体会

乳鼠肾细胞的培养个人体会乳鼠肾细胞培养是一种常用的细胞培养技术,用于研究和理解生物学过程以及药物筛选等应用。

通过培养乳鼠肾细胞,可以获取大量的细胞,进行进一步的实验和分析。

在进行乳鼠肾细胞培养时,首先需要选择合适的培养基。

一般常用的培养基是含有营养物质和生长因子的DMEM/F12。

培养基的选择对于细胞的生长和增殖具有重要影响。

接下来,需要将乳鼠肾细胞取出并进行传代。

传代是将细胞从一个培养瓶转移到新的培养瓶中,以保证细胞的生长和增殖。

传代时,需要使用胰蛋白酶等消化酶将细胞与培养瓶表面分离,并进行离心洗涤。

在培养过程中,细胞需要在适当的温度、湿度和气体环境下生长。

一般来说,细胞培养室保持在37℃、5% CO2和95%湿度的条件下。

这样的环境可以提供最适合细胞生长的条件。

细胞的培养还需要定期更换培养基,并观察细胞的形态和数量。

细胞形态的变化可以反映其生长状态和健康程度。

当细胞达到一定的密度时,可以进行细胞的分离和传代,以保持细胞的正常生长。

我个人在进行乳鼠肾细胞培养的过程中,发现了几个关键点和注意事项。

首先,确保细胞的无菌条件是非常重要的。

任何细菌、真菌或病毒的污染都会影响细胞的生长和实验结果。

因此,在培养过程中,我始终保持消毒操作,并注意细胞培养器具的清洁和无菌处理。

其次,培养基的配制和使用要精确。

每种细胞株对培养基的要求可能有所不同,因此要根据具体情况调整培养基的成分。

同时,要注意避免培养基的过度或不足,以免影响细胞的生长和增殖。

此外,培养过程中的细胞密度和传代的次数也需要控制。

细胞密度过高或传代频繁可能会导致细胞的老化和凋亡。

因此,要根据具体需要和细胞的生长状态灵活调整细胞密度和传代的时间。

最后,细胞培养的成功还需要耐心和细心的观察和记录。

通过不断观察细胞的形态和数量的变化,可以及时发现细胞的异常和问题,并采取相应的措施进行调整和修复。

总的来说,乳鼠肾细胞的培养是一个需要细心和耐心的过程。

通过合理的培养条件和操作方法,可以成功地培养出大量健康的细胞,并进行进一步的实验和分析。

生物学科实践活动交流发言稿

生物学科实践活动交流发言稿

大家好!今天,我很荣幸能在这里与大家分享我在生物学科实践活动中的心得体会。

首先,请允许我简要介绍一下这次实践活动的基本情况。

这次生物学科实践活动是在我国某高校生物实验室进行的,旨在通过实践活动,让我们这些生物科学专业的学生们深入了解生物学科知识,提高我们的实践操作能力。

在活动中,我们进行了多个实验项目,包括植物组织培养、微生物培养、动物细胞培养等。

以下是我对这些实践活动的总结和感悟。

一、植物组织培养在植物组织培养实验中,我们学习了植物细胞的全能性、愈伤组织的诱导与培养、试管苗的移栽等知识。

通过实验,我们了解到植物组织培养在植物繁殖、育种、基因工程等领域的重要应用。

1. 感悟:植物组织培养实验让我深刻认识到植物细胞的巨大潜力。

在实验过程中,我们亲手操作,亲身体验到了植物细胞的全能性。

这使我更加坚定了在生物科学领域继续深造的决心。

2. 应用:植物组织培养技术在农业生产、生物工程等领域具有广泛的应用前景。

通过学习这一技术,我们为将来的科研工作打下了坚实的基础。

二、微生物培养微生物培养实验让我们了解了微生物的形态、生理、代谢等方面的知识。

在实验过程中,我们学会了如何配制培养基、接种微生物、观察菌落特征等。

1. 感悟:微生物培养实验让我对微生物的世界有了更深入的了解。

微生物在自然界中扮演着重要角色,对人类的生存和发展具有深远影响。

2. 应用:微生物培养技术在食品加工、医药、环保等领域具有广泛应用。

通过学习这一技术,我们为将来的科研工作提供了有力支持。

三、动物细胞培养动物细胞培养实验让我们掌握了动物细胞的基本特性、培养条件、传代技术等知识。

在实验过程中,我们学会了如何制备细胞悬液、观察细胞形态、进行细胞传代等。

1. 感悟:动物细胞培养实验让我对动物细胞的生命活动有了更深入的认识。

动物细胞培养技术在医学、生物工程等领域具有重要意义。

2. 应用:动物细胞培养技术在药物筛选、疫苗研制、基因治疗等领域具有广泛应用。

《动物细胞培养》课堂反思

《动物细胞培养》课堂反思

《动物细胞培养》课堂反思一、教学目标简述动物细胞培养的过程、条件及应用。

二、教学重点、难点1. 教学重点动物细胞培养的过程及条件。

2. 教学难点动物细胞培养的过程及条件三、教学过程【课堂导入】师:烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植,但对于大面积烧伤病人来讲,健康皮肤很有限,请同学们想一想如何来治疗该病人?生:取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植师:如何获得大量健康的自体皮肤来治疗?【新知学习】请同学们阅读课本后,简述动物细胞培养的基本过程?学生结合图2-16简述细胞培养的过程,教师强调其中原代培养和传代培养的含义,及细胞贴壁和接触抑制现象。

师:结合以上过程思考以下问题1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗?2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗?3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢?4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢?5、胰蛋白酶的作用是什么呢?由此可说明细胞间的物质是什么成分?6、细胞膜的主要成分是什么?7、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗?8、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉,那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢?9、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么?10、动物细胞培养取材时,一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官,请解释原因?11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒?12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖?13、如此时细胞数量并未达到人们的需求,应该怎样办?14、如何理解原代培养和传代培养?15、传代培养的细胞能一直传代下去吗?16、有些为何能一直传下去吗?17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗?18、人类一般保存的是哪类细胞呢?为什么?同桌之间相互讨论后回答,教师点评或指正。

师布置任务:1﹑请同学根据以上内容总结出动物细胞培养的定义2﹑多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,请根据所学的知识,分析体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容?同桌之间相互讨论后回答,教师点评或指正。

动物细胞工程实习报告

动物细胞工程实习报告

动物细胞工程实习报告一、实习背景及目的动物细胞工程是一门综合性学科,涉及生物学、医学、生物工程等多个领域。

本次实习旨在让我们了解动物细胞工程的基本原理和技术方法,提高我们的实验操作能力,为今后的科研和工作打下坚实基础。

二、实习内容与过程1. 实习前的准备在实习开始前,我们参加了为期一周的理论学习,学习了动物细胞工程的基本原理、技术方法和实验操作流程。

同时,我们还学习了实验室安全知识,了解了各种实验仪器的作用和操作方法。

2. 实习过程实习过程中,我们分为若干小组,每组负责一个实验项目。

以下是本次实习的几个主要实验项目:(1)动物细胞培养我们使用了体外培养的人胚肝细胞作为实验材料,通过添加适当的培养基、血清等物质,保持了细胞的生长和增殖。

在实验过程中,我们学会了使用细胞计数器进行细胞计数,掌握了细胞培养的基本技术。

(2)动物细胞融合我们采用了电融合法将两种不同类型的动物细胞进行融合,观察了融合后的细胞特性。

通过这个实验,我们了解了细胞融合的原理和方法。

(3)动物细胞核移植我们进行了动物细胞核移植实验,将一个细胞的细胞核移入另一个去核的细胞中,观察了重组细胞的发育情况。

这个实验让我们认识了动物细胞核移植技术及其在生物工程中的应用。

(4)动物细胞载体构建我们利用质粒载体将目的基因导入动物细胞,观察了目的基因在细胞内的表达。

这个实验让我们了解了基因工程的基本原理和方法。

3. 实习成果通过本次实习,我们掌握了动物细胞培养、细胞融合、核移植、基因导入等技术方法,了解了动物细胞工程在生物科研和医学领域的应用。

同时,我们的实验操作能力和团队协作能力得到了提高。

三、实习体会与总结本次实习让我们对动物细胞工程有了更深入的了解,实验过程中的每一个步骤都离不开理论知识的支持。

同时,实践操作也让我们发现了理论知识的不足,促使我们更加努力地学习。

此外,实习过程中的团队协作也让我们学会了与他人共同解决问题,提高了我们的综合素质。

细胞培养技术心得体会范文

细胞培养技术心得体会范文

细胞培养技术心得体会范文细胞培养技术是现代生物科学研究中非常重要的实验技术之一,它可以使科研人员对细胞进行体外培养和研究。

在我进行细胞培养技术学习的过程中,我深深感受到了它的重要性和应用的广泛性。

下面是我对细胞培养技术的一些心得体会。

首先,细胞培养技术是一门基础的实验技术。

在进行任何与生物学相关的实验研究时,细胞培养技术都是不可或缺的。

通过细胞培养技术,科研人员可以获得大量的特定类型细胞,并对其进行后续的实验操作。

比如,通过细胞培养技术,可以获得肝细胞、肺细胞等特定细胞,然后可以对这些细胞进行药物检测、基因转染等实验,从而研究细胞的生命活动和相关机制。

因此,细胞培养技术是生物学等学科的基础。

其次,细胞培养技术对实验操作的要求非常高。

在进行细胞培养的过程中,需要严格控制培养液的成分、温度、湿度、CO2浓度等多个参数,以保证细胞能够正常生长和繁殖。

同时,需要注意培养器具的消毒和无菌操作,以避免培养过程中的细菌和真菌污染。

因此,细胞培养技术对科研人员的实验技术和操作规范要求非常高,这也是我在学习过程中深受启发的地方。

另外,细胞培养技术需要耐心和细心。

由于细胞生长和繁殖的周期相对较长,所以在进行细胞培养实验时,需要耐心等待细胞的生长和繁殖。

此外,由于细胞对环境的变化非常敏感,稍有不慎可能导致细胞的死亡或繁殖异常。

因此,细胞培养技术需要科研人员具备细心和耐心的品质,随时观察和调整培养条件,以保证实验的顺利进行。

此外,细胞培养技术也存在一定的风险。

细胞培养液中的成分和培养条件可能会对细胞产生毒性影响,导致细胞的死亡或繁殖异常。

此外,细胞也可能会被真菌、细菌等微生物污染,从而影响实验结果。

因此,在进行细胞培养实验时,需要对培养液和培养条件进行严格控制和检测,以降低实验风险。

细胞培养技术不仅在科研领域中有广泛应用,在医学领域也有重要的应用价值。

通过细胞培养技术,可以获得人体细胞,并进行药物筛选和毒理学评价等实验。

观察动物细胞的心得体会

观察动物细胞的心得体会

观察动物细胞的心得体会动物细胞是生物学研究中非常重要的研究对象之一。

作为一个生物学专业学生,我曾经通过不同的方法观察了各种不同类型的动物细胞,以了解其构造和功能。

在观察动物细胞的过程中,我获得了诸多心得和体会。

首先,观察动物细胞需要在显微镜下进行。

而好的显微镜可以显著提高观察效果,因为细胞内的结构非常微小。

我首先学习了使用简单的光学显微镜和复杂的电子显微镜,它们都可以提供不同程度的图像细节。

在使用显微镜观察细胞时,不仅需要按照正确的方法来安装样本和调整显微镜,还需要对自己所要观察的细胞类型有足够的了解,以确保观察到合适的细胞部位和细节。

其次,观察细胞需要不断练习,以提高自己的能力。

细胞学是一门非常细致和繁琐的科学,这意味着学习之初很可能会出现很多错误和挫折。

例如,在开始观察细胞时,我发现有些细胞部位相对较难分辨,这可能是因为样本的染色或预处理方法不对。

但是,通过不断实践和学习,我发现自己的观察能力得到了很大提高,开始能更加快速和准确地分辨细胞结构和类型。

此外,观察动物细胞需要注意到细胞类型的多样性及其内部结构的复杂性。

细胞是生命的基本单位,但是在不同的动物中存在着各种各样的细胞类型,它们的形态和功能都各自不同。

例如,肌肉细胞有特殊的蛋白质和细胞器来支持其功能,而神经元通过长轴突传送信号,并通过突触将信号传递到其他细胞。

因此,当观察到这些细胞时,我们需要有足够的知识和背景了解它们的不同特点和构造。

总的来说,观察动物细胞需要需要耐心、细心和实践。

更好的技能和知识会逐渐积累,而新的技术和方法的引入也将更好地支持我们对细胞结构和功能的理解。

通过这些努力,我们可以在未来更好地理解生物学中的许多问题。

《动物细胞培养》一节教学设计及实践反思

《动物细胞培养》一节教学设计及实践反思

《动物细胞培养》一节教学设计及实践反思导读:学校每学期每位老师都有一节校内公开课。

本学期我选择了《2.2.1动物细胞培养和核移植技术(第一课时)》即《动物细胞培养》作为公开课即录像课的教学内容。

在课前经过了自己精心准备但是具体实施的教学结果却不令人满意。

通过“有效上课”专题的学习研究,我认真反思了自己这节课不成功的原因,与大家交流。

说明:第一部分公开课时《动物细胞培养》的教学设计第二部分课后的几点教学反思第三部分反思后的《动物细胞培养》教学设计一、教学目标简述动物细胞培养的过程、条件及应用。

二、教学重点、难点1. 教学重点动物细胞培养的过程及条件。

2. 教学难点动物细胞培养的过程及条件三、教材分析动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。

在动物细胞培养技术之后介绍的核移植技术、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体以及胚胎工程都要用到动物细胞培养技术。

掌握好这项技术才能为其他技术打好铺垫。

所以把动物细胞培养讲的清清楚楚、明明白白就十分重要了。

在动物细胞培养的教学中,可把这部分内容归纳成三个问题:(1)为什么要进行动物细胞的培养?——即培养的用途(2)什么是动物细胞的培养?(3)怎样进行动物细胞的培养?第三个问题是本节课的重点。

四、学情分析动物细胞在体内的增殖学生是了解的,在体外如何实现细胞增殖的,有什么特点以及培养后的细胞有什么用途都是可以激发学生的学习兴趣。

对于动物细胞培养的条件,则要从学生已有的内环境的知识出发,启发学生自己动脑思考这个问题,以加深对培养条件的理解。

学习了植物细胞工程的基础上再去联系动物细胞培养技术,并能作出二者的比较。

五、教学过程(我将本节所以设置的问题或问题组或活动编号)5.1课堂导入:师展示两幅烧伤程度不同的病人图片。

提问如何治疗呢?生答。

师进一步提问:如何获得大量健康的自体皮肤来治疗?生答。

5.2新知学习师:通过培养皮肤细胞可获得健康皮肤细胞,那么什么是动物细胞培养?培养过程有什么特点以及培养的细胞用途有哪些呢?本节课一起来解决?师展示图片:动物细胞培养的概念。

动物细胞培养总结!!!!

动物细胞培养总结!!!!

动物细胞培养总结动物细胞培养的基本步骤包括细胞分离、种植、培养及维护。

首先需要从动物组织中获取细胞,可以通过机械或酶解的方式将组织细胞分离出来。

然后将细胞悬浮液转移到培养皿中,加入适当的培养基,并提供适宜的温度、湿度和气体环境。

细胞在培养皿中会逐渐形成单层或悬浮状态,可以进行细胞形态观察、增殖和鉴定等。

维护细胞的正常生长和增殖,需要定期更换培养基并进行细胞传代,以避免细胞的老化和死亡。

动物细胞培养的关键因素包括细胞种类的选择、培养基的配制、环境参数的控制等。

细胞种类的选择应根据研究需求和细胞特性进行,不同的细胞对培养条件的要求有所差异。

培养基是细胞培养的基础,需要提供充足的营养物质、生长因子和激素等,以满足细胞正常生长和增殖所需。

同时,培养基的pH值、温度和湿度等环境参数也需要严格控制,以维持细胞的健康状态。

细胞培养的应用非常广泛。

首先,动物细胞培养可用于细胞生物学研究,如细胞分化、增殖、凋亡等的机制研究。

通过观察细胞在不同条件下的变化,可以揭示细胞生物学过程中的分子机制。

其次,动物细胞培养在生物医学研究中也有重要应用。

例如,用于评估药物的毒性和疗效,开发新的药物或疫苗,以及研究疾病的发生机制等。

此外,动物细胞培养还可用于生产重组蛋白和细胞疫苗等生物制剂,具有重要的经济价值。

在动物细胞培养中,不可避免地会面临一些挑战和困难。

首先,细胞的质量和纯度是细胞培养成功的关键因素之一、细胞分离和培养的过程中,可能会产生细胞杂交和污染,对细胞的准确鉴定和纯度检测提出了要求。

其次,细胞培养需要严格控制环境参数,如温度、CO2浓度和湿度等,这对实验设备的要求较高。

此外,不同细胞株的生长速度和特性也有所差异,对培养者的经验和技术水平提出了要求。

综上所述,动物细胞培养是一项重要的实验技术,具有广泛的应用前景和经济价值。

通过细胞培养,可以获得大量的细胞材料,用于细胞生物学研究和新药的研发。

然而,动物细胞培养也面临着挑战和困难,需要进行严格的细胞鉴定和纯度检测,以及合理控制环境参数。

动物细胞工程实习报告

动物细胞工程实习报告

一、实习背景随着生物科学技术的不断发展,动物细胞工程作为一门重要的生物技术领域,在医学、农业、生物制药等领域发挥着越来越重要的作用。

为了更好地了解和掌握动物细胞工程的基本原理和应用,我们于2023年在XX生物科技有限公司进行了为期一个月的实习。

二、实习目的1. 了解动物细胞工程的基本概念、原理和实验技术。

2. 掌握动物细胞培养、传代、冻存、复苏等基本操作。

3. 学习动物细胞融合、基因工程等高级技术。

4. 培养团队协作精神和实践能力。

三、实习内容1. 动物细胞培养与传代在实习期间,我们首先学习了动物细胞培养的基本原理和操作流程。

在导师的指导下,我们进行了细胞接种、观察、传代等操作。

通过实验,我们掌握了细胞生长、衰老、死亡等规律,了解了培养基的配制、细胞冻存、复苏等关键步骤。

2. 动物细胞融合细胞融合是动物细胞工程中的重要技术之一。

我们学习了细胞融合的原理和方法,通过电融合、化学融合等手段,成功实现了细胞融合实验。

通过观察融合细胞的形态和功能,我们了解了细胞融合技术的应用前景。

3. 基因工程基因工程是动物细胞工程的核心技术之一。

在实习过程中,我们学习了基因克隆、基因表达等基本原理,并进行了相关实验操作。

通过实验,我们掌握了基因工程的基本技能,为今后从事相关研究奠定了基础。

4. 细胞冻存与复苏细胞冻存与复苏是细胞实验中必不可少的环节。

我们学习了细胞冻存液的配制、细胞冻存与复苏的操作方法,并通过实验掌握了细胞冻存与复苏的技术要点。

四、实习成果1. 成功进行了动物细胞培养、传代、冻存、复苏等基本操作。

2. 掌握了动物细胞融合、基因工程等高级技术。

3. 提高了实验操作技能和团队协作能力。

五、实习体会通过本次实习,我对动物细胞工程有了更深入的了解,认识到动物细胞工程在生物科学领域的重要地位。

以下是我在实习过程中的一些体会:1. 动物细胞工程实验操作严谨,需要严格遵守实验规程,确保实验结果的准确性。

2. 团队协作是实验成功的关键,要学会与他人沟通、交流,共同解决问题。

动物细胞培养及观察的讨论

动物细胞培养及观察的讨论

动物细胞培养及观察的讨论李琼222009317011080我们这组做的事hela细胞的培养,通过这个实验我做了以下几点分析:一、血清牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成分,具有极为重要的功能。

(1)牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。

胎牛血清应取自剖宫产的胎牛;新牛血清取自出生24 h之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30 d的小牛。

显然,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

(2)血清的主要成分血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,主要有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等。

(3)血清主要作用:①提供基本营养物质氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。

②提供激素和各种生长因子胰岛素、肾上腺皮质激素(氢化可的松、地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。

生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因于、血小板生长因子等。

③提供结合蛋白结合蛋白作用是携带重要的低相对分子质量物质,如清蛋白携带维生素、脂肪以及激素等,转铁蛋白携带铁。

结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。

④提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。

⑤对培养中的细胞起到某些保护作用有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。

现在往往有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。

血清蛋白形成了血清的黏度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,利度起到重要作用。

血清还含有一些微量元素和离子,它们在代谢解毒中起重要作用。

购置的血清应做热灭活处理。

将小牛血清置于56℃水浴中灭活30 min,以破坏补体及一些污染微生物(如病毒、支原体等),放置4℃冰箱中,无菌试验阴性。

未灭活的血清不稳定,应保存于-20℃冰箱中。

二、贴壁非依赖型细胞这类细胞无需贴附于支持物表面,可在培养液中悬浮生长,细胞呈球形。

动物细胞培养总结!!!!

动物细胞培养总结!!!!

动物细胞培养总结动物细胞培养总结一.实验准备1.实验器械、器皿的清洗和消毒(1)清洗和包装离心管(1.5ml,2ml,15ml)若干,闷存管若干放入铝饭盒,用牛皮纸包覆,系紧棉绳,用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。

蓝枪头两盒,黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹,用棉绳扎紧。

取适量蒸馏水于4l玻璃瓶,瓶盖拧松半圈。

过滤器,250ml玻璃瓶,500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂冲洗,蒸馏水馨洗脸,研磨。

过滤器两部分分别包裹,先将瓶口部位用锡纸包裹后,再罩以牛皮纸,再用棉布密包起来,用棉绳扎紧。

玻璃瓶圆桶瓶盖,瓶身浸酸。

浸酸时应注意安全,须佩戴耐酸手套和白大褂,特别注意维护不好面部和身体外露部分,提早底上一盆水在旁以便浸酸完结后冲洗耐酸手套,避免站立时酸液滴至地板上不好冲洗。

瓶口慢慢坠入液面下,特别注意缓慢减少瓶身,并使液体慢慢灌入瓶内,以免产生气泡飞溅酸液,出现危险。

浸酸时器皿必须充满著酸液,勿领气泡,煮沸过夜。

抽出瓶身时,须佩戴耐酸手套和白大褂,特别注意维护不好面部和身体外露部分,提早底上一盆水在旁,抽出后将瓶身放进盆内水中在迁移至水池边冲洗,以免酸液凝结地板不好冲洗。

换水洗几次,等待水回应后已经开始冲洗,每瓶都用自来水注满,死掉,重复15次,再用蒸馏水漂洗5次,去离子水漂洗3次,烘干备用。

(2)消毒灭菌1>全自动高压杀菌锅:挂电源,关上控制器,检查水位,若水位严重不足提蒸馏水补齐,放进物品,瓶类物体须扳动盖子后摆最上面一筐,砌上杀菌锅盖,松开盖子至温度表明栏的左上角有一红照亮灯,按start已经开始高涨。

若灭有无菌水或玻璃瓶等待降温至常温再关上,关上后立即松开,无菌水瓶口封上封口膜。

若没灭瓶类物品,降温至80度左右即可关上杀菌锅,须穿上线手套抽出。

2>手提式高压灭菌锅:插电源,打开开关,检查水位,若水位不足加蒸馏水补足,检查设定是否为121度20分钟,放入物品,盖上灭菌锅盖,注意导气管一定插到锅底并不能堵塞,用手对称地拧紧锅盖螺栓,再用扳手继续拧紧。

动物细胞生物技术实训报告

动物细胞生物技术实训报告

一、实训背景动物细胞生物技术是生命科学领域的重要分支,近年来在我国得到了迅速发展。

为了提高我们对动物细胞生物技术的认识和应用能力,我们开展了为期两周的动物细胞生物技术实训。

本次实训旨在通过实验操作,掌握动物细胞培养、传代、冻存、细胞融合等基本技术,并了解相关原理。

二、实训内容1. 动物细胞培养(1)实验目的:掌握动物细胞培养的基本方法,了解细胞生长、增殖和传代过程。

(2)实验原理:动物细胞培养是将动物组织或细胞接种于含有营养物质的培养基中,在适宜的培养条件下,使其生长、增殖和传代。

(3)实验步骤:①取小鼠肝脏组织,剪成小块,用胰蛋白酶消化成单个细胞。

②将消化后的细胞接种于培养皿中,放入CO2培养箱中培养。

③观察细胞生长情况,每隔3-4天传代一次。

2. 动物细胞传代(1)实验目的:掌握动物细胞传代技术,了解传代过程中的注意事项。

(2)实验原理:动物细胞传代是指将培养的细胞从培养皿中取出,接种于新的培养皿中,继续培养。

(3)实验步骤:①将培养皿中的细胞用胰蛋白酶消化。

②将消化后的细胞接种于新的培养皿中。

③放入CO2培养箱中培养。

3. 动物细胞冻存(1)实验目的:掌握动物细胞冻存技术,了解冻存过程中的注意事项。

(2)实验原理:动物细胞冻存是指将细胞在低温下保存,以延长其存活时间。

(3)实验步骤:①将细胞用胰蛋白酶消化。

②将消化后的细胞离心收集。

③将细胞加入冻存液中,装入冻存管。

④将冻存管放入液氮中保存。

4. 动物细胞融合(1)实验目的:掌握动物细胞融合技术,了解融合过程中的注意事项。

(2)实验原理:动物细胞融合是指将两种或两种以上的细胞通过化学或物理方法使细胞膜破裂,使细胞质混合,形成新的细胞。

(3)实验步骤:①将两种细胞分别消化成单个细胞。

②将两种细胞混合,加入聚乙二醇(PEG)诱导融合。

③将融合后的细胞接种于培养皿中,放入CO2培养箱中培养。

三、实训结果与分析1. 动物细胞培养通过实验操作,我们成功培养了小鼠肝脏细胞,观察到细胞生长、增殖和传代过程。

细胞培养实验心得

细胞培养实验心得

细胞培养实验心得篇一:细胞培养技术总结细胞培养技术总结(,,,) 1〃培养环境的要求(切记无菌操作)工作环境的处理1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。

每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。

实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。

操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。

2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。

实验操作应在台面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。

无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放臵,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。

3. 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。

勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。

容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放臵桌面。

吸管口切勿碰到容器瓶口 4. 工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。

对于来自人类或是病毒。

感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。

操作过程中,应避免引起aerosol 之产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头之伤害等。

2〃仪器设备的要求定期检测下列项目:CO2 钢瓶之CO2 压力。

CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。

无菌操作台内之airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300 小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。

水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水。

3〃无菌处理1)器具的无菌操作试验用玻璃塑料用品清洗及其消毒灭菌清洗:a玻璃器皿的清洗(酸液由重铬酸钾,浓硫酸,蒸馏水配臵)浸泡—刷洗—浸酸—冲洗b胶塞的清洗刚买回的常含滑石粉等杂质,先用自来水冲洗后再按常规方法处理。

动物细胞培养实验报告

动物细胞培养实验报告

动物细胞培养实验报告动物细胞培养实验报告引言:动物细胞培养是一项重要的实验技术,广泛应用于生物医学研究、药物开发和生物工程等领域。

本实验旨在通过培养动物细胞,观察细胞的生长、分裂和功能表达,以及研究细胞在不同环境条件下的生理和生化特性。

材料与方法:1. 细胞培养基:选择适合培养动物细胞的培养基,如DMEM或MEM等。

2. 细胞培养器具:细胞培养瓶、细胞培养皿、离心管、显微镜等。

3. 细胞株:选择合适的细胞株,如人类肺癌细胞株A549。

4. 细胞培养条件:温度、湿度、CO2浓度等。

5. 细胞培养试剂:胎牛血清、抗生素等。

实验步骤:1. 细胞传代:将细胞株从冻存管中取出,加入培养基中,将细胞传代至合适的密度。

2. 细胞培养:将细胞悬浮液均匀地加入细胞培养器具中,放入培养箱中培养。

3. 细胞观察:使用显微镜观察细胞的形态、数量和分裂情况。

4. 细胞染色:使用荧光染料或细胞染色剂对细胞进行染色,观察细胞内部结构。

5. 细胞功能表达:通过Western blot、PCR等技术,检测细胞中特定基因或蛋白的表达情况。

6. 细胞处理:在特定条件下处理细胞,如药物处理、温度变化等,观察细胞的反应和变化。

7. 细胞计数:使用细胞计数板或细胞计数仪等工具,统计细胞的数量。

结果与讨论:1. 细胞生长:观察到细胞在培养基中呈现出典型的生长曲线,包括潜伏期、对数期和平台期。

2. 细胞形态:细胞在培养基中呈现出典型的形态特征,如细胞核的形状、细胞质的颜色等。

3. 细胞分裂:观察到细胞在培养基中进行有丝分裂或无丝分裂,并计算细胞分裂指数。

4. 细胞染色:通过荧光染料或细胞染色剂染色后,观察到细胞内部结构的变化,如细胞器的位置和形态。

5. 细胞功能表达:通过Western blot、PCR等技术,检测到特定基因或蛋白在细胞中的表达水平。

6. 细胞处理:在特定条件下处理细胞后,观察到细胞的形态、数量和功能发生变化,如细胞凋亡、增殖等。

动物培养工作总结

动物培养工作总结

动物培养工作总结在过去的一年里,我从事了动物培养工作,这是一项充满挑战和机遇的任务。

在这个过程中,我学到了很多关于动物细胞培养的知识和技能,也总结了一些经验和教训。

首先,我了解到动物细胞培养是一项非常精细和复杂的工作。

它需要严格的无菌操作和精细的实验设计。

在实验前,我们需要进行充分的准备工作,包括实验计划的制定、器皿的清洗和消毒、培养基和其他试剂的配制和灭菌、无菌室或超净工作台的清洁和消毒、以及培养箱和其他仪器的检查和调试。

这些准备工作需要细致和耐心,因为任何一个小错误都可能导致实验失败。

其次,我学到了动物细胞培养需要严格的质量控制。

在实验过程中,我们需要定期检查细胞的生长情况和质量,及时调整培养条件,确保细胞的生长和繁殖。

同时,我们也需要对实验数据进行详细的记录和分析,以便后续的实验设计和改进。

在进行动物细胞培养的过程中,我也遇到了一些挑战和困难。

例如,细胞的污染是一个常见的问题,也是导致实验失败的主要原因之一。

为了防止污染,我们需要在所有的操作中保持无菌环境,使用无菌的器材和试剂,并且在操作过程中避免交叉污染。

另外,细胞的传代和分化也是一个复杂的过程,需要根据细胞的特性进行适当的操作和调整。

尽管动物细胞培养工作充满了挑战,但是当我看到成功的实验结果时,我感到非常的满足和有成就感。

在这个过程中,我也学到了很多关于细胞生物学和生物化学的知识,提高了我的实验技能和科学研究能力。

总的来说,动物细胞培养是一项复杂而精细的工作,需要严格的实验设计和操作,同时也需要细致的观察和记录。

尽管困难重重,但是当我们看到成功的实验结果时,所有的努力和付出都是值得的。

我将继续努力,不断提高自己的实验技能和科学研究能力,为生物科学的发展做出自己的贡献。

生物科学专业学生在实验中的细胞培养心得体会

生物科学专业学生在实验中的细胞培养心得体会

生物科学专业学生在实验中的细胞培养心得体会细胞培养在生物科学研究中扮演着至关重要的角色。

作为一名生物科学专业的学生,在实验中进行细胞培养时,我积累了一些宝贵的心得体会。

本文将通过我在细胞培养实验中的经验,探讨细胞培养的重要性、操作技巧以及注意事项。

一、细胞培养的重要性细胞培养是生物科学研究中一项不可或缺的技术。

通过细胞培养,我们可以获得大量且纯化的细胞,用于研究细胞生理、遗传、病理等方面的问题。

此外,细胞培养还可以用于药物筛选、疫苗生产等实际应用。

因此,掌握细胞培养技术对于生物科学专业的学生来说,至关重要。

二、细胞培养的操作技巧1. 实验前的准备工作在进行细胞培养实验之前,充分准备是至关重要的。

首先,要确保培养环境的洁净。

使用无菌培养器具、培养基等,并在无菌条件下进行操作。

其次,要准备好所需的培养基和细胞培养试剂,确保其纯度和质量。

2. 细胞的分离与传代在进行细胞培养实验时,常常需要进行细胞的分离和传代。

分离细胞时,注意要使用适当的细胞消化酶,掌握合适的消化时间,以保证细胞的完整性和存活率。

传代时,要注意分装合适的细胞数量,以避免细胞过于稀疏或过于密集。

3. 细胞培养条件的控制在细胞培养中,要注意保持适宜的培养条件,包括温度、湿度、二氧化碳浓度等。

这些条件对于细胞的生长和增殖起着至关重要的作用。

此外,及时更换培养基、补充培养液中的营养物质也是必要的。

4. 细胞培养的检测与评估在细胞培养过程中,要定期进行细胞的检测与评估。

可以通过显微镜观察细胞形态的变化、进行细胞计数以及检测特定蛋白的表达等方法来评估细胞培养的质量和健康状况。

三、细胞培养的注意事项1. 安全性在进行细胞培养实验时,要注重个人安全和实验室安全。

戴上适当的防护用品,遵守实验室规章制度,确保自己和同伴的安全。

2. 质量控制细胞培养中的质量控制至关重要。

确保使用的细胞系是正确的,并定期检测细胞的纯度和备皿后的细胞的活性。

3. 实验记录与数据整理在进行细胞培养实验时,要认真记录实验过程和结果。

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动物细胞培养·心得在学习动物细胞培养的过程中,我了解到是动物细胞工程中最常用的技术手段,而且动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础点,细胞培养是生物医学中一项重要技术,应用较为广泛,目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。

在这次PPT 制作中,我对无脊椎动物和脊椎动物两大领域细胞培养取得的进展及应用作了较为详细的了解,并在此基础上探讨了动物细胞培养存在的问题以及未来的发展方向。

为相关领域研究者探讨其他种类细胞系的建立及筛选合适的细胞系培养方法作为理论的参考依据我了解到历史上组织培养技术创建于 18 世纪末,之后于 1907 年美国生物学家Harrison在无菌条件下,以淋巴液为培养基在试管中培养蛙胚神经组织宣告成功后,才逐渐发展成为一种从体内组织取出细胞,模拟体内生存环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下,使其生长繁殖并维持结构和功能的实验技术。

这种技术为细胞学、遗传学、病毒学、免疫学的研究和应用做出了重要贡献。

特别是随着近年来现代生物科学领域的迅速拓展,各种分子生物学实验诸如核移植、细胞杂交、DNA 介导的基因转移等,都是借助细胞培养技术而得以实现的。

然而,在种类繁多的动物世界里,细胞培养实验技术的发展并不均衡,构建动物细胞培养体系的研究效率和效果上也存在较大的局限性。

而动物细胞培养,在1907年,哈里森(Harrison)在无菌条件下用淋巴液作培养基,培养蛙胚神经组织存活数周,并观察到神经细胞突起的生长过程,由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法,奠定了动物组织体外培养的基础。

之后,又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养,提高了传代效率并减少了污染;1923年,卡雷尔(Carrel)设计了卡氏瓶培养法,扩大了组织生存空间。

1951年,厄尔(Earle)发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。

1951年,波米拉(Pomerat)设计了灌流小室,使细胞生活在不断更新的培养液中,便于作显微摄影和细胞代谢的研究。

1957年,格拉夫(Graff)用灌流技术进一步提高了细胞悬浮培养的效率。

1957年,杜尔贝科(Dulbecco)等人采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法,获得了单层细胞培养。

单层培养法的出现,对组织培养的发展起了很大的推动作用。

此后单层培养成为组织培养普遍应用的技术。

20世纪60年代后,动物细胞大规模培养技术开始起步,并逐步发展。

20世纪80年代后,随着基因工程和其他细胞工程技术的发展,细胞培养技术已成为转基因技术、生物制药及其他许多技术的基础,在现代生物技术中发挥着重要的作用我从资料查得根据细胞种类:原代细胞培养,传代细胞培养。

原代细胞:将动物各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA) 或机械方法处理,分散成单细胞,在合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

培养的细胞为正常的动物细胞,一般培养10代后不再增殖,死亡。

传代细胞:传代培养是细胞培养常规保种方法之一,也是所有细胞生物学实验的基础。

当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长,这一过程就叫传代。

传代培养可获得大量供实验所需细胞。

细胞传代要在严格的无菌条件下进行,每一步都需要认真仔细地无菌操作。

培养的细胞为癌变或人为癌化的细胞,理论上可以无限增殖。

癌化的方式有很多:进行癌基因突变,感染病毒,从癌症供体体内分离,物理或化学方法(如紫外,化学试剂)等。

在我们动物细胞培养的实验中,其基本过程是取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。

将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),形成分散的单个细胞,将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。

悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,成为细胞贴壁。

当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制。

此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。

再配成一定浓度的细胞悬浮液。

另外,原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。

当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大以后,科学家接着进行传代培养,即将原代培养细胞分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。

通过一定的选择或纯化方法,从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。

当培养超过50代时,大多数的细胞已经衰老死亡,但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性,即癌变。

此时的细胞被称为细胞系。

我们做实验时,其基本条件:1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。

2、优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清。

血清是细胞培养液中最重要的成分之一,具有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。

3、无菌无毒细胞培养环境,无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。

在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡。

因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物。

4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度。

5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。

实验中,动物细胞培养基按其来源分为合成培养基和天然培养基(目前使用的培养基绝大部分是合成培养基),按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。

干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌,液体培养基由专业商家提供,用户可直接使用,非常方便。

合成培养基的主要成分有:氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质。

氨基酸是组成蛋白质的基本单位。

不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。

其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。

因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。

但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内。

已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺。

无机盐培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。

此外,通过提供钠,钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。

培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg ~320 mOsm/kg。

标准培养液的渗透压在此范围内波动。

特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。

向培养液中添加HEPES 时需按以下方法调节钠离子浓度。

缓冲系统HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒。

HEPES 缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES 引起的渗透压增加。

在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。

大多数培养液中含有酚红作为pH 指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。

老师告诉我们细胞培养温度:维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度。

不同种类的细胞对培养温度要求也不同。

人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡。

培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过39℃时,细胞代谢与温度成正比;人体细胞在39-40℃1 小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复;在40-41℃1 小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复;41-42℃1 小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞死亡,个别细胞仍有恢复可能;当温度在43℃以上1 小时,细胞全部死亡。

相反,温度不低于0℃时,对细胞代谢虽有影响,但并无伤害作用;把细胞放入25-35℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减慢;放在4℃数小时后,再回到37℃培养,细胞仍能继续生长。

细胞代谢随温度降低而减慢。

当温度降至冰点以下时,细胞可因胞质结冰受损而死亡。

但是,如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油),可在深低温下如-80℃或-196℃(液氮)长期保存。

细胞培养中,我们从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染,严格实验操作,细胞培养基和器材要保证无菌,在细胞培养基中加入适量的抗生素。

清除支原体,常用方法有:抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。

支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮;其他类抗生素如氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小抑制作用,所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。

InvivoGen公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin能有效地杀灭支原体,不影响细胞本身的代谢,并且用M-Plasmocin处理过的培养细胞,不会重新感染支原体。

而我了解查资料到,其在生物学基础研究中的应用:离体培养的动物细胞具有培养条件可人为控制且便于观察检测的特点,因而可广泛应用于生物学领域的基础研究中。

在细胞生物学上,动物细胞培养可用于研究动物的正常或病理细胞的形态、生长发育、细胞营养、代谢以及病变等微观过程。

如神经细胞的增殖、突起生长、相互识别、刺激传递等机理就是通过进行各种神经细胞的培养才弄清楚的。

在遗传学研究中,除可用培养的动物细胞进行染色体分析外,还可结合细胞融合技术建立细胞遗传学进行遗传分析和杂交育种;在胚胎工程中通过体外培养卵母细胞并进行体外受精、胚胎分割和移植已发展成了一种较成熟的技术而应用于家畜的繁殖生产中。

另外,分离和培养具有多潜能性的胚胎干细胞,还可用于动物克隆、细胞诱导分化、动物育种的研究,并可作为基因转移的高效表达载体;在病毒学研究中用培养的动物细胞代替试验动物做斑点分析,不仅方法简便、准确、而且重复性好。

利用动物细胞大规模培养技术生产大分子生物制品始于上世纪60年代,当时是为了满足生产FMD 疫苗的需要。

后来随着大规模培养技术的逐渐成熟和转基因技术的发展与应用,人们发现利用动物细胞大规模培养技术来生产大分子药用蛋白比原核细胞表达系统更有优越性。

随着大量永久性细胞株的创建在商业利益的刺激下,动物细胞大规模培养技术也迅速发展起来,并被付之于应用。

目前,用动物细胞可生产的生物制品有各类疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、病毒杀虫剂、单克隆抗体等,其销售收入已占到世界生物技术产品的一半以上。

我们相信,随着动物细胞培养技术的发展,以后还会有更多的生物制品被开发并用于造福人类。

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