实验：细胞化学染色POX
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▪ 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。
▪ 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。
▪ 5、金属沉着法 ▪ 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色
（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断。
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【结果】 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。
（－） 无颗粒沉着； （±） 颗粒细小 ，分布稀疏； （+） 颗粒较粗，局灶分布； （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3； （+++） 颗粒粗大，呈团块分布； （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。
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细胞化学染色
沧州医专医学技术系 侯振江
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▪ 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。
▪ 用于研究血细胞生理、病理和化学结构； ▪ 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、
疗效观察、预后监测和发病机制的探讨， 提供重要依据。
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▪ （5）过氧化物酶染色 ▪ 主要用于鉴别急性白血病类型， ▪ 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， ▪ 故有助于区别M3和M5型。 ▪ 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重 要指标。
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骨髓片POX染色
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▪ 【临床意义】 ▪ （1）粒系： ▪ POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随
着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分 叶核粒细胞为强阳性。 ▪ 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒 比中性粒细胞粗大，有折光。 ▪ 碱性粒细胞为阴性。
丙酮和醋酸等。
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（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物， 在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐 结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶 氮色素，以此证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
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AML-M1
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M1 - POX(+)
×
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二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。
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▪ 血细胞化学染色的基本要求是在原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物，具有一定的稳定性。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、 酶、蛋白质等。
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血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 ▪ 固定有物理法与化学法， ▪ 物理法为干燥和火焰固定， ▪ 化学法最常用的是甲醛、乙醇、
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▪ 【操作】 ▪ 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰
化钠饱和溶液10μl，混合溶液呈淡棕黄色。 ▪ 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,
放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml， 染色6min 。 ▪ 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 ▪ 4. 油镜镜检。
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（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性 反应，颗粒细小，弥散分布。
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（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可Baidu Nhomakorabea作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
注意事项
1. 涂片应新鲜制作、厚薄适宜。 2. TMB 配制在85％～88％的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90
％～95％乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向 胞内渗入而使显色反应减弱或消失。 3. 过氧化氢溶液需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。 涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表 示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示 无效。 4. 染色液适宜pH值应为5.5，若pH值 <5.0会出现假阳性结果。 5. 试剂应置于低温暗处，防止光线照射失效。 6. 染色时加稀过氧化氢溶液之后必须与染色液充分混匀，否则 同一片子上细胞染色情况----不-精品一文档致---。---
▪ 下面介绍几种常用的细胞化学染色方 法
▪ 这些方法学在白血病的鉴别诊断上具 有重要意义。
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一、过氧化物酶染色（POX）
（一）四甲基联苯胺法(TMB) ▪ 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的
髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧化 成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色化合 物沉着于细胞质内。
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▪ （三）细胞化学定量
▪ 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅 ，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。
▪ 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受 色强弱。
▪ 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与 百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低 ，又反映了细胞受色的强弱。
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【原理】
过氧化氢 POX
（基质中）
粒、单核 细胞胞浆
四甲基联苯胺
TMB （无色）
新生态氧
[O]↑
亚硝基铁氰化钠 联苯胺蓝（蓝色）
自我脱氢氧化
蓝色颗粒
（浆内酶部位）
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四甲基苯醌二胺 (棕色)
【试剂】 ▪ 1%TMB ▪ 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 ▪ 1%过氧化氢溶液 ▪ 稀过氧化氢溶液 ▪ 瑞氏染色液
▪ 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。
▪ 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。
▪ 5、金属沉着法 ▪ 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色
（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断。
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【结果】 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。
（－） 无颗粒沉着； （±） 颗粒细小 ，分布稀疏； （+） 颗粒较粗，局灶分布； （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3； （+++） 颗粒粗大，呈团块分布； （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。
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细胞化学染色
沧州医专医学技术系 侯振江
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▪ 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。
▪ 用于研究血细胞生理、病理和化学结构； ▪ 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、
疗效观察、预后监测和发病机制的探讨， 提供重要依据。
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▪ （5）过氧化物酶染色 ▪ 主要用于鉴别急性白血病类型， ▪ 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， ▪ 故有助于区别M3和M5型。 ▪ 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重 要指标。
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骨髓片POX染色
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▪ 【临床意义】 ▪ （1）粒系： ▪ POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随
着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分 叶核粒细胞为强阳性。 ▪ 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒 比中性粒细胞粗大，有折光。 ▪ 碱性粒细胞为阴性。
丙酮和醋酸等。
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（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物， 在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐 结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶 氮色素，以此证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
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AML-M1
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M1 - POX(+)
×
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二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。
-----精品文档------
▪ 血细胞化学染色的基本要求是在原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物，具有一定的稳定性。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、 酶、蛋白质等。
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血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 ▪ 固定有物理法与化学法， ▪ 物理法为干燥和火焰固定， ▪ 化学法最常用的是甲醛、乙醇、
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▪ 【操作】 ▪ 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰
化钠饱和溶液10μl，混合溶液呈淡棕黄色。 ▪ 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,
放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml， 染色6min 。 ▪ 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 ▪ 4. 油镜镜检。
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（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性 反应，颗粒细小，弥散分布。
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（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可Baidu Nhomakorabea作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
注意事项
1. 涂片应新鲜制作、厚薄适宜。 2. TMB 配制在85％～88％的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90
％～95％乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向 胞内渗入而使显色反应减弱或消失。 3. 过氧化氢溶液需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。 涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表 示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示 无效。 4. 染色液适宜pH值应为5.5，若pH值 <5.0会出现假阳性结果。 5. 试剂应置于低温暗处，防止光线照射失效。 6. 染色时加稀过氧化氢溶液之后必须与染色液充分混匀，否则 同一片子上细胞染色情况----不-精品一文档致---。---
▪ 下面介绍几种常用的细胞化学染色方 法
▪ 这些方法学在白血病的鉴别诊断上具 有重要意义。
-----精品文档------
一、过氧化物酶染色（POX）
（一）四甲基联苯胺法(TMB) ▪ 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的
髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧化 成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色化合 物沉着于细胞质内。
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▪ （三）细胞化学定量
▪ 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅 ，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。
▪ 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受 色强弱。
▪ 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与 百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低 ，又反映了细胞受色的强弱。
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【原理】
过氧化氢 POX
（基质中）
粒、单核 细胞胞浆
四甲基联苯胺
TMB （无色）
新生态氧
[O]↑
亚硝基铁氰化钠 联苯胺蓝（蓝色）
自我脱氢氧化
蓝色颗粒
（浆内酶部位）
-----精品文档------
四甲基苯醌二胺 (棕色)
【试剂】 ▪ 1%TMB ▪ 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 ▪ 1%过氧化氢溶液 ▪ 稀过氧化氢溶液 ▪ 瑞氏染色液