实验七 微生物数量的测定――――显微镜直接计数法
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数生32 程雨婧 2013012406一、实验目的1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。
2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)图一:测微尺的校正3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，其面2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。
使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。
设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5图二:血细胞计数室构造三、实验器材1. 菌种:啤酒酵母2. 器材:普通光学显微镜、目镜测微尺镜头、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、试管、无菌水、血细胞计数板、计数器、吸管、生理盐水、移液器。
显微镜直接计数法实验报告
显微镜直接计数法实验报告实验报告：显微镜直接计数法一、实验目的本实验旨在通过显微镜直接计数法，测定微生物样品中细胞的数量，以了解其生长和繁殖情况，为生物工程、生物医学、环境科学等领域的研究提供依据。
二、实验原理显微镜直接计数法是一种通过显微镜直接观察并计数样品中微生物数量的方法。
该方法具有操作简便、快速等优点，适用于测定样品中微生物的数量和生长情况。
通过显微镜直接计数法，可以观察到微生物的形态、大小、分布等情况，从而对其生长环境、生长状况等进行评估。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品进行适当稀释，使微生物细胞分散均匀。
2.显微镜观察：将样品滴加到显微镜载玻片上，用盖玻片固定，调整显微镜焦距，观察并计数微生物的数量。
3.计数方法：采用直接计数法，即直接观察并计数样品中的微生物数量。
对于压在盖玻片下的细胞，可以通过轻轻移动盖玻片进行观察和计数。
4.数据记录：记录每个样品中微生物的数量，并计算平均值。
同时记录观察到的细胞形态、大小、分布等情况。
5.结果分析：根据实验数据，分析微生物的生长情况、繁殖速度等。
四、实验结果及数据分析1.实验数据（见附表1）附表1：显微镜直接计数法实验数据2.数据分析通过附表1的数据，我们可以得出以下结论：（1）样品A中微生物的数量较少，而样品B、C、D中微生物的数量较多。
这表明不同样品中微生物的数量存在差异。
（2）在相同稀释倍数下，观察到的细胞数越多，计数结果越准确。
因此，选择合适的稀释倍数对于准确测定微生物数量至关重要。
在本实验中，选择100倍和1000倍作为稀释倍数，可以较为准确地测定微生物数量。
（3）通过对比不同样品在同一稀释倍数下的计数结果，可以得出不同样品中微生物的生长情况。
例如，样品B和D在1000倍稀释下的计数结果较高，说明这两个样品中微生物的生长情况较好。
而样品A和C在100倍稀释下的计数结果较低，说明这两个样品中微生物的生长情况较差。
（4）根据实验数据，可以进一步分析微生物的生长规律和繁殖速度。
实验七微生物数量的测定
五、实验报告
1、结果记录： 将计数结果记录下表。A表示五个中方格 中的总菌数。B稀释倍数为102。
注:1 mL菌液总数=A/5×25×104×B=5×107×A
五、实验报告
1、思考题： （1）在显微镜下直接测定微生物数量有什么优 缺点？
（2）根据你的体会，说明用血球计数板计数的误 差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力 求准确？ （3）某单位要求知道一种干酵母粉的活菌存活率 请设计1-2种可行的检测方法。
5. 计算方法：
酵母菌细胞数/mL= （X1+X2+X3+X4+X5） 25（或16）X 10 X 1000 x 稀释倍数 X 5
6. 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和 右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时， 若芽体超过母体一半以上，就按单个酵母计数。 7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用 吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
下次实验：微生物大小的测定
ห้องสมุดไป่ตู้
1. 取清洁无油的血球计数板（在显微镜下检查，如不 干净清水冲洗，不可用硬毛刷刷洗），在计数室上面 加盖玻片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴， 使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野 中央。 4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值， 然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出 一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌 数。
实验七
微生物数量的测定
一、目的要求
1．明确血细胞计数板计数的原理 2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的 方法。
二、基本原理
微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂 繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般 以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体 生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。 测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数 法、光电比浊法等。 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液 置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上， 于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的 方法。
测定微生物总数的方法
测定微生物总数的方法测定微生物总数是微生物学研究中的一项重要任务，它可以帮助我们了解微生物在环境中的分布和数量。
本文将介绍几种常用的测定微生物总数的方法。
一、直接计数法直接计数法是最直接、最常用的测定微生物总数的方法之一。
它通过使用显微镜观察样品中的微生物细胞数目来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、土壤样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于玻璃片上，用显微镜观察。
3. 在显微镜下，使用目镜和物镜进行放大观察，并使用计数室或计数网格进行计数。
4. 统计不同视野中的微生物数量，并计算平均值，从而得到微生物总数。
二、培养法培养法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品在培养基上培养并生长，然后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取适量的样品，如空气、食品、药品等，制备适当的稀释液。
2. 取一定量的稀释液接种于含有富营养物的培养基上。
3. 将培养基培养在适当的温度和湿度条件下，使微生物生长繁殖。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
三、膜过滤法膜过滤法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜放置在培养基上进行培养和生长，最后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 将稀释液通过膜过滤装置过滤到膜上。
3. 将膜放置在含有富营养物的培养基上进行培养和生长。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
四、荧光显微镜法荧光显微镜法是一种高级的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品染色，并利用荧光显微镜观察和计数荧光染色的微生物细胞来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于载玻片上，进行定性或定量染色。
2024版微生物实验显微镜直接计数法课件
微生物实验显微镜直接计数法课件•微生物实验概述•显微镜直接计数法简介•显微镜直接计数法操作步骤•显微镜直接计数法结果分析与解读目录•显微镜直接计数法注意事项与常见问题解答•显微镜直接计数法实验报告撰写要求微生物实验概述01010204微生物实验目的与意义了解微生物的形态、结构、生理生化特性掌握微生物的分类鉴定方法研究微生物与环境、人类的关系应用于医学、工业、农业、环保等领域03显微镜直接计数法是通过显微镜观察微生物细胞并直接计数的方法利用特定染色技术使微生物细胞在显微镜下可见通过计算单位面积或体积内的微生物细胞数量来推算总体数量微生物实验基本原理取样并制备微生物悬液，注意保持无菌操作对微生物悬液进行适当稀释，以获得合适的细胞密度准备实验器材和试剂，包括显微镜、计数板、盖玻片、染色剂等在计数板上滴加稀释后的微生物悬液，盖上盖玻片将计数板置于显微镜下观察并计数，注意选择合适的放大倍数和视野根据计数结果计算微生物细胞数量，并进行分析和讨论注意事项包括保持无菌操作、避免污染、控制实验条件等01020304显微镜直接计数法简02介显微镜直接计数法定义与特点定义显微镜直接计数法是一种通过显微镜观察并直接计数微生物数量的方法。
特点直观、准确、可重复性好，但需要较高的操作技能和经验。
显微镜直接计数法适用范围及局限性适用范围适用于各种形态和大小的微生物计数，如细菌、真菌、藻类等。
局限性对样品处理要求较高，如需要均匀涂布、避免细胞重叠等；对操作人员的技能和经验要求较高；无法区分死细胞和活细胞。
显微镜直接计数法与其他方法比较与平板计数法比较01平板计数法通过培养微生物后计数菌落数来推算微生物数量，结果较为准确但耗时较长；显微镜直接计数法快速但可能受操作技能和经验影响。
与流式细胞术比较02流式细胞术是一种自动化、高通量的细胞计数方法，具有快速、准确、灵敏度高等优点，但需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员；显微镜直接计数法相对简单、经济，但通量较低。
显微镜直接计数法实验报告
显微镜直接计数法实验报告显微镜直接计数法实验报告引言：显微镜直接计数法是一种常用的实验方法，用于测量微生物的数量和浓度。
通过直接观察显微镜下的视野，并进行计数，可以得出微生物的数量。
本实验旨在通过显微镜直接计数法，研究不同样本中微生物的数量和浓度变化。
实验材料和方法：1. 高倍显微镜2. 干净的载玻片和盖玻片3. 滴管和移液器4. 无菌培养基5. 不同样本（例如水样、土壤样本等）实验步骤：1. 准备工作：将载玻片和盖玻片用酒精擦拭干净，确保无菌状态。
2. 取一滴待测样本，滴在载玻片上。
3. 将盖玻片轻轻压在载玻片上，使样本均匀分布。
4. 将载玻片放在显微镜下，使用高倍镜观察。
5. 随机选择一个视野，计数视野中的微生物数量。
6. 移动显微镜的平台，选择下一个视野，继续计数。
7. 重复步骤6，直到计数足够多的视野。
8. 计算平均值，并根据视野的大小和显微镜的倍数，计算出微生物的数量和浓度。
实验结果：经过实验，我们得到了不同样本中微生物的数量和浓度数据。
例如，在水样中，我们观察到每个视野中的微生物数量平均为50个，视野的面积为0.01 mm²，显微镜的倍数为400倍。
因此，水样中微生物的数量为50个/0.01 mm² * 400 = 200,000个/mm²。
通过类似的计算，我们可以得出其他样本中微生物的数量和浓度。
讨论与分析：通过显微镜直接计数法，我们可以快速获得微生物的数量和浓度数据。
然而，这种方法也存在一些限制。
首先，由于显微镜的视野有限，我们只能观察到局部区域的微生物数量，可能无法代表整个样本的情况。
其次，显微镜直接计数法对于微生物形态和大小的要求较高，较小或较大的微生物可能无法准确计数。
此外，样本的准备和操作也可能影响到实验结果的准确性。
结论：显微镜直接计数法是一种常用的实验方法，用于测量微生物的数量和浓度。
通过观察显微镜下的视野，并进行计数，可以得出微生物的数量。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法微生物数量的测定方法微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，也存在于人体内外。
了解微生物的数量对于环境监测、食品安全、医学诊断等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物数量测定方法。
1. 直接计数法直接计数法是最直接、最常用的微生物数量测定方法之一。
它通过显微镜观察和计数来确定微生物的数量。
首先，将待测样品制备成适当的悬浮液，然后在显微镜下观察，并使用计数器进行计数。
这种方法适用于细菌和酵母等较大的微生物。
但是，由于显微镜观察需要较高的技术水平和时间，所以无法快速测量大量样品。
2. 培养法培养法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过培养微生物并计数生长的菌落来确定数量。
首先，将待测样品制备成适当的培养基，然后在恰当的温度和湿度条件下培养一段时间。
培养基中的微生物会形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于大部分微生物，但是它需要一定的培养时间，并且某些微生物可能无法在常规培养基上生长。
3. 膜过滤法膜过滤法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过将待测样品过滤到膜上，并将膜培养在适当的培养基上来确定数量。
首先，将待测样品通过特定孔径的过滤器过滤，然后将过滤后的膜放置在培养基上培养。
培养基中的微生物会在膜上形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于水样、空气样等液态和气态样品。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是一种新兴且快速发展的微生物数量测定方法。
它通过检测和分析微生物DNA或RNA来确定数量。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）等。
这些方法可以快速、准确地测定微生物的数量，并且可以检测到少量微生物。
但是，分子生物学方法需要一定的实验设备和技术，并且对样品预处理要求较高。
总结起来，微生物数量的测定方法有直接计数法、培养法、膜过滤法和分子生物学方法等。
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物学实验报告姓名年级班级组别一组同组者科目微生物题目微生物大小和数量的测定仪器编号一、目的要求1．学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2．了解血球计数板的构造、明确其计数原理。
3．学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。
二、基本原理l．显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺没小哥的长度.目镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度,再以后作为测量微生物细胞的长度.目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测微尺格数x10）/两重合线间目镜测微尺格数2.球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示μm图一：测微尺的校正3．显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。
三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
计数区的刻度有两种：一种是计数区（大方格）分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3。
微生物计数方法
微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理测定微生物细胞数量的方法很多，通常采取的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不容易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采取血球计数板，一般细菌则采取彼得罗夫·霍泽（PetrofHausser）细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不克不及使用油镜，计数板下部的细菌不容易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图211），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106 。
因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d）三、实验器材1．活资料：酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）斜面或培养液。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
(1)先将计数板盖上盖片在显微镜下，从低倍找到计数器位 置，不动。
(2)将稀释好菌悬液摇匀，用滴管吸入由盖玻片边缘滴入让 其自行渗透，使室充满（不宜过多，也不可有气泡）。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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(3)静止3-5分钟，先在低倍镜观察，然后换成高倍 镜进行计数。样品不宜太浓或太稀，最好每小格 控制在5-10个菌体为宜，计数需要重复二次。取 平均值。先后二次误差太大，需再重复计数。
2.微生物大小测定
பைடு நூலகம்
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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三、器材
显微镜；血球计数板；手揿计数器；盖玻片； 目镜测微尺；镜台测微尺。
酵母菌菌悬液； 枯草杆菌和金黄色葡萄球菌染色标本。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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四、操作步骤
在计数时，通常以五个中方格总菌数（每个中方格中数四 个小方格）即20个小方格总菌数（求平均值）。
比如：设20个小方格中总菌数为A，悬液稀释度B，那么 大格（0.1立方毫米总菌数） A/20×400×B。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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测量枯草杆菌长和宽及金黄色葡萄球菌直径。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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五、试验结果
1、P48题1 2、P92题1
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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六、思索题
1、依据你体会，用血球计数板误差主要来自 那些方面？应怎样防止误差，力争准确？
2、当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改 变接物镜，目镜测微尺每格所量镜台上物体 实际长度是否相同？为何？
微生物显微直接计数法
一、目的要求
1、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物
细胞数量的原理和方法；
二、基本原理
显微计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的 具有确定容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下 直接观察、计数的方法。目前国内外常用的计菌器有： 血细胞计数板、Peteroff-Hauser计数器以及Hawksley
4、显微镜计数
将加有样品的血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到
计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。若发现菌液太浓或太稀， 需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内有5~10格）中的 菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵 母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一 个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量；
计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液 的计数，基本原理相同。其中血细胞计数板较厚，不能 使用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子 等的计数，而后两种计菌器较薄，可用油镜对细菌等较 小的细胞进行观察和计数。
除了用上述这些计菌器外，还有用已知颗粒浓度 的样品如血液与未知浓度的微生物细胞（孢子）样品 混合后根据比例推算后者浓度的比例计数法。显微计 数法的优点是直观、快速、操作简单，缺点是所测得 的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对运动 性强的活菌进行计数。目前已有一些方法可以克服这 些缺点，如结合活菌染色、微室培养（短时间）以及 加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的， 或用染色处理杀死细胞以计数运动性细菌等。
血细胞计数板
三、器材
1、菌种：酵母菌； 2、溶液和试剂：生理盐水等。
显微镜直接计数法实验报告
显微镜直接计数法实验报告篇一：显微镜直接计数法实验报告显微镜直接计数法一、实验目的1、明确血细胞计数板计数原理；2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
此法的优点是直观、快速。
该计数板（构造如图1所示），是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的即共有400个小格。
2每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜，盖上盖玻片后，载玻片与盖3玻片之间的高度为㎜，所以计数室的容积为㎜。
其计算方法如下：设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B 1．16×25的计数板计算公式细胞数/ml=×16×10000×B=32000AB 个2．25×16的计数板计算公式细胞数/ml=×25×10000×B=50000AB 个三、实验器材（1）菌悬液：酵母菌悬液（2）其他物品：血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。
四、实验步骤1．稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。
（一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜）2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，静置5—10分钟即可计数。
微生物学显微镜直接计数法课件
精品
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4.显微镜计数
静置几分钟, 将计数板放在显微镜 下, 先用低倍镜找到计数室, 再换成 高倍镜进行计数
5.清洗血球计数板
计数完毕, 将计数板在水龙头下冲
洗干净后自行晾干, 镜检观察每小格
内无残留物为止。精品
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注意事项
1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可 有气泡产生；
2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为 宜。
第一室 第二室
二室
B 菌数/ml 平均值
1100 1100
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四 实验方法
1.检查计数板 检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室 在加样前, 先对计数板的计数室进行 镜检。若有污物, 则需清洗后才能进 行计数。
精品
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3. 加样品
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细 口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点 一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗 透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满 菌液。注意不可有气泡产生。
9ml
1ml 1ml
×2 ×2
1ml
×2
最平板或涂布在平板表面，经保 温培养后，每个细胞形成一个菌落，即菌落形成单 位。以平板上出现的菌落数乘以稀释度就可以计算 出原菌液的含菌量。
精品
3
干重法 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分
离出来，然后烘干至恒重(干燥温度可采用 105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重 为湿重的10%—20%。 注: 该法适合菌浓度较高的样品。
5个方格的总菌数
稀释倍数
▪ 计算: 1个计数室的总菌数=A/5×25×B
▪ 1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
《显微镜直接计数法》PPT课件
实验十 显微镜直接计数技术
三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：酿酒酵母菌细胞稀释 液； 2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接 种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻 片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花；
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实验十 显微镜直接计数技术
计数室是一个边长为1mm的正方形，其面积 为1mm2。每个计数室被辅助线划分为25 （中格）×16（小格）个小格，以方便计数。 图10-2为计数室（红色双线围成的即为由25 个中格组成的计数室。）
＋
加样处
＋
图10-1 计数板俯视图
二、基本原理：
显微镜直接计数技术可以对含菌样品所含的 总菌数做出统计，是常用的、较快捷的一种 统计微生物数量的方法和技术。 显微镜直接计数技术使用一特制的、专用的 计数工具——血球计数板进行计数操作。 血球计数板上有四条槽，把计数板分为三个 平台，两侧的平台用于搭放盖玻片，中间的 平台又被分为两个较小的、每个平台上各有 一个计数室的平台。如图10-1
1.将统计、计数结果填入下表：
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实验十 显微镜直接计数技术
2.影响显微镜直接计数结果的因素有哪些， 如何避免？ 3. 整理实验设备，清理实验台。
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1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。14、成长是一场和自己的比赛，不要担心别人会做得比你好，你只需要每天都做得比前一天好就可以了。 15、最终你相信什么就能成为什么。因为世界上最可怕的二个词，一个叫执着，一个叫认真，认真的人改变自己，执着的人改变命运。只要在路上，就没有到不了的地方。 16、你若坚持，定会发光，时间是所向披靡的武器，它能集腋成裘，也能聚沙成塔，将人生的不可能都变成可能。 17、人生，就要活得漂亮，走得铿锵。自己不奋斗，终归是摆设。无论你是谁，宁可做拼搏的失败者 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更5、别着急要结果，先问自己够不够格，付出要配得上结果，工夫到位了，结果自然就出来了。 6、你没那么多观众，别那么累。做一个简单的人，踏实而务实。不沉溺幻想，更不庸人自扰。 7、别人对你好，你要争气，图日后有能力有所报答，别人对你不好，你更要争气望有朝一日，能够扬眉吐气。 8、奋斗的路上，时间总是过得很快，目前的困难和麻烦是很多，但是只要不忘初心，脚踏实地一步一步的朝着目标前进，最后的结局交给时间来定夺。 9、运气是努力的附属品。没有经过实力的原始积累，给你运气你也抓不住。上天给予每个人的都一样，但每个人的准备却不一样。不要羡慕那些总能撞大运的人，你必须很努力，才能遇上好运气。 10、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。失败。11、学会学习的人，是非常幸福的人。——米南德 12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚 14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东 18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫· 托尔斯泰 20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰· 贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最，取平均值； 6.计算样品所含总菌数：根据统计、计数结 果，计算样品所含的总菌数； 7.清洗处理计数板：实验完成后，及时按 规定清洁处理技术板。 本实验所用计数板，可用清水清洁处理后， 吸干水分，妥善保存。
微生物数量测定
微生物数量测定在生物学和医学领域，微生物的数量测定是一个重要的实验技术。
通过对微生物数量的测定，我们可以了解生物体在不同环境中的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，以及监测和治疗疾病等。
微生物数量测定的基本原理是利用单位体积或单位面积上的微生物细胞数，通过统计和计算得到微生物的数量。
常用的方法包括显微镜计数法、比浊法、平板计数法等。
显微镜计数法是一种直接计数法，通过显微镜观察并计数样品中的微生物数量。
该方法需要将样品均匀涂布在载玻片上，干燥后进行染色和固定，然后使用显微镜观察并计数。
该方法的优点是简单易行，适用于微生物数量较少的样品，但不适用于大量样品。
比浊法是一种通过测量样品的浊度来测定微生物数量的方法。
该方法是通过将样品与标准曲线进行比较，得出微生物的数量。
该方法的优点是快速、简便、准确度高，适用于大量样品的测定。
但是，该方法需要使用标准曲线，对于某些微生物可能不太准确。
平板计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物数量的方法。
该方法是将样品稀释后涂布在培养基上，培养一定时间后统计菌落数量，然后计算出微生物的数量。
该方法的优点是准确度高，适用于各种微生物的测定，但需要一定的培养时间和人力。
微生物数量测定的应用领域非常广泛，包括环境科学、医学、食品科学、农业科学等。
例如，在环境科学中，微生物数量测定可以用来评估污染物的毒性对生态环境的影响；在医学中，微生物数量测定可以用来监测和治疗疾病；在食品科学中，微生物数量测定可以用来控制食品的质量和安全；在农业科学中，微生物数量测定可以用来了解土壤的健康状况和作物的生长情况等。
微生物数量测定是一种重要的实验技术，广泛应用于生物学和医学等领域。
通过对微生物数量的测定，我们可以更好地了解生物体的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，监测和治疗疾病等。
未来随着科技的不断进步和应用领域的不断拓展，微生物数量测定的方法和应用将更加多样化和精准化。
在生物学和医学领域，微生物的大小和数量的测定对于研究生命过程、疾病诊断和治疗等方面都具有重要的意义。
微生物实验显微镜直接计数法
1.血球计数板法
利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行
计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。
（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上 盖玻片后，容积为0.1mm3。 （2）计数室刻度的规格
具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。
16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物， 则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管 让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般
六、作业
显微直接计数结果
÷Ð · Ö · ½ · ñ Ö Ð ¾ ú Ê ý 1 Ú Ò µ » Ê Ò Байду номын сангаас ¶ µ þ Ê Ò 2 3 4 5
5个中格总数
þ Ê ¶ Ò
A
B
100
ú Ê ¾ ý /ml Æ ½ ¾ ù Ö µ
微生物数量的测定
实验器材
其他器材：
显微镜、血球计数板、电吹风、 盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、 计数器、滴管、擦镜纸。
活材料：
酿酒酵母 （Saccharomyces cerevisiae）培养液。
实验方法
添加标题
用无菌生理盐水将待测菌稀释成适当浓度的菌悬液 （以每个小方格中5～10个菌为宜）。
添加标题
取洁净的血球计数板一块（事先镜检），盖上一块盖 玻片。
添加标题
将菌悬液摇匀，用无菌滴管吸取少许，沿盖玻片边缘 摘入一小滴，让菌悬液利用毛细渗透作用充满计数区。
添加标题
加样后静止5min，将计数板置显微镜载物台上，先用低倍镜 找到计数区，然后换高倍镜计数。（光不宜太强）
添加标题
计数完毕，将血球计数板在水龙头下流水冲洗干净，用电吹 风吹干，镜检确认计数区无残留菌体或其它沉淀。
光电比浊计数法优缺点
优点：简便、快速、连续测定、适合自动化。 缺点：
○ 光密度受细胞大小、形态、培养液成分以及选用的波长的影响； ○ 对于不同微生物的菌悬液要选择相应的菌株和培养条件制作标准曲线； ○ 对于颜色太深的样品或含其它具有吸光值的物质不能用此法。
器材
菌种 酿酒酵母培养液
仪器或其他用具 分光光度计， 血细胞计数板，个方格网共分为九 个大方格，中间的大 方格即为计数室。
血球计数板是一块特制的载玻片，其上由 四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又 被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各 列有一个方格网。
每个方格网共分为九个大方格，中间的大 方格即为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格：一种是一 个大方格分成25个中方格，而每个中方格 又分成16个小方格；另一种是一个大方格 分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格。
显微镜直接计数法流程
显微镜直接计数法流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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实验七微生物数量的测定――――显微镜直接计数法
一目的要求
了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算；
二实验原理
镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网(图Ⅳ-2)。
每个方格网共分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。
计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成(图5)。
每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l／4000mm3。
使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
图Ⅳ-2 血球计数板的构造
a.平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网)
b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)
图Ⅳ-3 血球计数板计数网的分区和分格
三实验材料
1、菌种：酿酒酵母；
2、血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管；
3、菌种：大肠杆菌菌悬液。
4、1ml无菌吸管，无菌平皿，无菌水，试管，恒温培养箱牛肉膏蛋白胨培养基。
四实验内容与步骤
1．菌悬液制备以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当地菌悬液。
2．镜检计数室在加样前，先对计数板地计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗，吹干后才能细菌计数。
3．加样品
取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。
将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。
也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
4．显微镜计数
加样后静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。
计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。
如果是25中格计数板。
除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。
由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。
如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
每个样品重复分数2-3次(每次数值不应招差过大，否则应重新操作)，取其平均值，按下述公式计算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。
每毫升菌液含菌数＝每小格酵母细胞数×4000×1000×稀释倍数
5．清洗血细胞计数
血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。
洗净后自行晾干或吹风机吹干。
五实验报告
将结果记录于下表中。
A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。
六思考题
1．根据自己体会，说明血球计数板计数的误差主要来自那些方面？如何减少误差？。