NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测试剂盒说明书 微量法
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线:400-1683301或800-8283301 订货e-mail :******************技术咨询:*****************网址:碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介:谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的,且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便,样品用量和检测时间的范围宽,样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整,检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用,可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物,在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应,产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物,从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物,产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响,因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
辅酶 II NADP含量检测试剂盒MTT 显色法)说明书__ 可见分光光度法UPLC-MS-4370

辅酶II NADP(H)含量检测试剂盒(MTT 显色法)说明书货号:UPLC-MS-4370规格:50T/24S可见分光光度法产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体15mL×1瓶2-8℃保存碱性提取液液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体20mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体12mL×1瓶2-8℃保存试剂四A 粉剂×1支-20℃保存试剂四B 液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体70mL×1瓶2-8℃保存NADP 标准品粉剂×1支-20℃保存NADPH 标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制:1、试剂二:临用前加入6mL 蒸馏水充分混匀,溶解后2-8℃保存4周。
2、试剂四:临用前将试剂四A 溶解到试剂四B 中,溶解后分装保存,避免反复冻融,-20℃保存4周。
3、NADP 标准品:临用前加入1.27mL蒸馏水,即5µmol/mL ,-20℃可以保存2周。
4、NADPH 标准品:临用前加入1.2mL 蒸馏水,即5µmol/mL ,-20℃可以保存2周。
产品说明:辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP +和NADPH 含量测定可以计算NADP (NADPH +NADP +)含量和NADPH/NADP +比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。
NADPH/NADP +比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP +和NADPH 。
NADPH 通过PMS 的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT )还原为甲瓒,570nm 下检测吸光值,从而测定NADPH 含量。
辅酶 II NADP(H)含量检测试剂盒说明书

辅酶II NADP(H)含量检测试剂盒(微量法货号:BC1105规格:100T/48S产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体25 mL×1瓶2-8℃保存碱性提取液液体25 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体10 mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体8mL×1瓶2-8℃保存试剂四A粉剂×1支-20℃保存试剂四B液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体30 mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体50 mL×1瓶2-8℃保存NADP标准品粉剂×1支-20℃保存NADPH标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制:1、试剂二:临用前加入4mL蒸馏水充分混匀,溶解后4℃保存2-8周。
2、试剂四:临用前将试剂四A溶解到试剂四B中,溶解后加入5mL蒸馏水,分装保存,避免反复冻融,-20℃保存4周。
3、NADP标准品:临用前加入1.27 mL 蒸馏水,即5 µmol/mL,-20℃可以保存2周。
4、NADPH标准品:临用前加入1.2 mL 蒸馏水,即5 µmol/mL,-20℃可以保存2周。
产品说明:辅酶Ⅱ NADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH 含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。
NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。
NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH 含量。
辅酶类检测
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辅酶类检测辅酶是一小有机非蛋白分子,其用途为在酵素(酶)内载运化学基。
许多辅酶是磷化水溶性维他命。
但非维他命物质也可能是辅酶,如ATP-磷酸基的生化载具。
在细胞内,反应后的辅酶可以被再生,以维持其胞内浓度在一个稳定的水平上。
由于辅酶的再生对于维持酶反应体硫胺素系的稳定是必要的,因此,辅酶再生系统在实验室以及工业中具有广泛应用。
辅酶迪信泰检测平台采用生化的方法检测辅酶类物质,使用相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测辅酶类物质的活性变化。
目前可检测的辅酶类物质包括NADH、NADPH、乳酸脱氢酶、乙醛脱氢酶、柠檬酸合酶和丙酮酸脱羧酶等。
此外,迪信泰检测平台还提供HPLC法测定辅酶类物质的服务,以满足您的不同需求。
pH值对丙酮酸脱羧酶活性的影响迪信泰检测平台可检测辅酶类项目NADH氧化酶((NOX))活性检测乳酸脱氢酶((LDH))活性检测6-磷酸葡萄糖脱氢酶((G6PDH))活性检测NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)/ NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性检测硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)活性检测NAD激酶(NADK)活性检测柠檬酸合酶(CS)活性检测丙酮酸脱羧酶(PDC)活性检测醇脱氢酶(ADH)活性检测胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测NADP磷酸酶(NADPase)活性检测NAD-苹果酸酶(NAD-ME) /NADP-苹果酸酶(NADP-ME)活性检测6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)活性检测肌酸激酶(CK)活性检测脂肪酸合成酶(FAS)活性检测NADH含量检测NADPH含量检测生化法测定辅酶类样本要求:1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL,测定样品不返还,请您保留备份。
周期:2~3周项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:1. 实验步骤(中英文)2. 相关参数(中英文)3. 图片4. 原始数据5. 辅酶类酶活性信息。
辅酶ⅠNAD(H)含量检测测定试剂盒说明书可见分光光度法

辅酶ⅠNAD(H)含量检测测定试剂盒说明书可见分光光度法辅酶ⅠNAD(H)含量检测测定试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0310规格:50T/24S产品内容:酸性提取液:15mL×1瓶,4℃保存;碱性提取液:15mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存,用时加入6.1mL双蒸水,混匀,4℃保存一周;试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存,用时加入6.6mL双蒸水,混匀,4℃保存一周;试剂五:液体3mL×1瓶,4℃保存;试剂六:液体40mL×1瓶,4℃保存;试剂七:自备,将72mL乙醇和3mL蒸馏水充分混合备用。
NAD+标准品:粉剂×1支,-20℃保存。
临用前加入1.5mL蒸馏水,即2μmol/mL,将其稀释为1.25nmol/mL 的NAD标准溶液备用。
NADH标准品:粉剂×1支,-20℃保存。
临用前加入1.4mL蒸馏水,即2μmol/mL,将其稀释为1.25nmol/mL 的NAD标准溶液备用。
产品说明:辅酶I包括还原型和氧化型两种形式,在生物氧化中起传递氢的作用。
氧化型辅酶I又称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是脱氢酶的辅酶,它在糖酵解,糖异生,三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。
中间产物会将脱下的氢递给NAD,使之成为NADH(还原型辅酶I)。
而NADH则会作为氢的载体,在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式,合成ATP。
NAD(H)在机体内有重要的生理意义,与物质代谢、能量代谢、抗细胞衰老、抗氧化以及一些疾病的发生密切相关。
体内辅酶I含量降低会导致细胞损伤或衰亡。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm 下检测吸光值,NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。
苹果酸脱氢酶(MDH)的测定方法及在肝炎中诊断价值的研究

苹果酸脱氢酶(MDH)的测定方法及在肝炎中诊断价值的研究摘要:目的苹果酸脱氢酶(MDH)的测定方法——速率法。
进一步探讨、研究MDH在肝炎诊断中的意义和价值。
方法建立了苹果酸脱氢酶的检测方法——速率法,并制备成试剂盒。
同时对120例健康体检者、120例肝炎病人和65例肝癌、65例肝硬化病人同时进行了MDH的检测分析。
结果肝炎病人血清中苹果酸脱氢酶明显升高,是对照组的5.2倍。
急性肝坏死时升高的更突出,是对照组的11.2倍,经统计学处理P<0.01。
肝炎的初期和病情的极期升高的幅度与严重性相关。
结论用速率法判定MDH快速、简便、准确、试剂样品的用量小,可用于各型自动生化分析仪。
MDH是肝炎的诊断、判断病情、估计愈后、观察疗效的良好指标,可提高肝炎的早期诊断率。
关键词:苹果酸脱氢酶;速率法;肝炎;肝硬化苹果酸脱氢酶发现于1910年,肝脏含量丰富,到目前为止分为线粒体中的M-MDH和位于胞浆中的C-MDH两种[1],国外有人报道临床意义和测定方法,国内报道很少,临床应用主要用于肝炎的检测。
测定方法为分光光度法和比色法。
速率法未见有报道及试剂盒提供。
我们于2005年起对MDH的检测方法和对肝炎的诊断价值进行研究。
旨在于为肝炎的诊断提供新的敏感可靠的指标。
弥补肝功能常规组项的缺陷。
1 材料与方法1.1 试剂盒测定的原理在 340nm波长下,测定每分钟MDH吸光度的变化值(AA/分钟),计算MDH的活性。
1.2 试剂盒测定的方法及主要参数1.2.1 测定方法:速率法1.2.2 主要参数:反应温度37℃,测定时间60s,延迟时间:60s。
试剂用量250μL,样品用量25μL,反应波长340nm,反应方向:正反应。
1.3 研究对象1.3.1 正常对照组从健康体检中取健康人120例,年龄在28~74岁,平均年龄46.8岁,其中男58人,女62人。
1.3.2 试验组:120例,根据肝炎分型九项、肝功能检查、超声、临床症状体症诊断为肝炎的住院病人,不伴有它疾病,年龄30~75岁,平均年龄47.78岁,其中男59人,女61人。
苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)
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苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)简介:苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase,MDH)是合成苹果酸的关键酶之一,催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化,参与众多生理代谢途径如TCA循环C4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等,因此MDH在植物的生长发育中发挥着重要作用,广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上,为三羧酸循环中的一种酶,由于酶的来源不同,其某些性质也不尽相同。
MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
Leagene苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)检测原理是在弱碱条件下,以草酰乙酸(OAA)作为显色底物,OAA在MDH催化下被NADH还原为苹果酸(Mal),每催化1分子OAA消耗1分子NADH,通过分光光度比色法(分光光度计)测定吸光度的变化,计算出NADH的消耗速率进一步推算出苹果酸脱氢酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中苹果酸脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、研钵或匀浆器2、离心管或试管3、低温离心机4、比色杯5、分光光度计操作步骤(仅供参考):编号名称TE046350TStorage试剂(A):MDH Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml-20℃试剂(C):MDH Assay buffer100ml RT试剂(D):NADH1支-20℃试剂(E):ddH2O10ml RT使用说明书1份1、配制MDH Lysis buffer工作液:取出MDH Lysis buffer和PMSF,恢复至室温,MDHLysis buffer:PMSF按一定比例混合,混匀,即配即用,不易久置,否则白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4349

NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测试剂盒说明书微量法货号:UPLC-MS-4349规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三粉剂×1支-20℃保存溶液的配制:1.试剂二:临用前加入500μL双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存;2.试剂三:临用前加入600μL双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明:MDH(EC1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是重要的中间产物,连接多条重要的代谢途径。
因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书 微量法

NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC0635规格:100T/48S产品内容:试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体1mL×1瓶,-20℃保存。
试剂四:液体35mL×1瓶,4℃保存。
试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂六:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入4.5mL双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明:NOX(EC1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD。
该酶不仅参与NAD的再生,而且与免疫反应密切相关。
NOX能够将NADH氧化为NAD,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水操作步骤:一、样品测定的准备:1、组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:2、准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
3、将匀浆600g,4℃离心5min。
4、将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
5、将上清液转移至另一EP管中,用于线粒体中泄露NOX活性测定。
6、沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL试剂三,用于NOX活性测定。
7、NOX总酶活即为上清中NOX活性与沉淀中NOX活性之和。
二、测定步骤和加样表:1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。
2、试剂四37℃保温放置。
试剂名称(µL)测定管对照管试剂四175175试剂五2525样本1010蒸馏水40试剂六40-将上述试剂按顺序在微量玻璃比色皿/96孔板中操作,加入试剂六后立即混匀,同时开始计时,在600nm 波长下记录20秒时的初始吸光度A1,迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃水浴中,准确反应1分钟。
NAD-NADH比率检测试剂盒说明书

NAD/NADH比率检测试剂盒关键词:NADH,NAD+,Nicotinamide adenine dinucleotide,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,还原态,还原型辅酶Ⅰ。
N指烟酰胺,A指腺嘌呤,D 是二核苷酸。
葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的ATP是十分的少的,而代谢产生的NADH 或FADH2经由一个电子传递与氧化磷酸反应可产生大量的ATP。
NADH分子是线粒体中能量产生链中的控制标志物。
NADH水平的上升指示代谢失衡的出现。
监视NAD/NADH的氧化还原状态是表征活体内线粒体功能的最佳参数。
紫外光可以在线粒体中激发NADH产生荧光,用来监测线粒体功能。
一般来说,涉及到氧化还原的反应都用得到,比如呼吸作用,光合作用,等等氨会抑制呼吸过程中的电子传递系统,尤其是NADH。
因此NAD/NADH水平的监控是能量传递、细胞核组织氧化还原态等研究的主要兴趣点。
有没有一款可以同时检测,NAD+,NADH,以及NAD+/NADH比率,这三个指标的试剂盒呢?艾美捷科技特向您推荐,已被广泛使用,发布文章不计其数的高品质试剂盒。
*样品通过NAD萃取,同时检测(NAD+NADH)与(NAD)的结果,相减计算得出NADH 含量,以及NAD/NADH的比率。
原理:Amplite 比色法NAD/NADH 比率试剂盒,提供一个比色法原理的检测培养细胞的总NAD/NADH,和NAD/NADH ratio的方法。
在这个实验中,裂解液中NAD可以被NAD萃取液提取,通过酶反应被转化为NADH,然后利用NADH探针反应,产生黄色染料,此染料可以在460nm处测吸收峰,或者加入增强剂后,可以检测635nm吸收峰。
染料产生颜色与细胞裂解液中NAD 或者NADH的浓度呈正比。
《卓越的标准曲线》《发表文章结果:Ren, T., et al. Oncogene 36.42(2017).》引用文献Norisoboldine, a natural AhR agonist, promotes Treg differentiation and attenuates colitis via targeting glycolysis and subsequent NAD+/SIRT1/SUV39H1/H3K9me3 signaling pathwayAuthors: Qi Lv, Kai Wang, SimiaoQiao, Ling Yang, Yirong Xin, Yue Dai, Zhifeng WeiJournal: Cell death & disease (2018): 258Stochastic expression of lactate dehydrogenase A induces Escherichia coli persister formationAuthors: Naoki Yamamoto, RinoIsshiki, Yuto Kawai, Daiki Tanaka, TetsushiSekiguchi, Shinya Matsumoto, Satoshi TsunedaJournal: Journal of Bioscience and Bioengineering (2018)Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun WangJournal: European Journal of Pharmacology (2017): 124--133Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine FermentationAuthors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L InglisJournal: Fermentation (2017): 61Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing YeJournal: Cell & Bioscience (2017): 27MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cellsAuthors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H YangJournal: Oncogene (2017)Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, MitsuguAkagawaJournal: Biochemistry (2017)Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratioAuthors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping HaoJournal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL,AND MECHANISTIC ASPECTSAuthors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, GaganPaudel, Elena Tarakhovskaya, NadezhdaFrolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain TissierJournal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621--7636AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevationAuthors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie ZhangJournal: Aging cell (2016): 416—427艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:Abbkine、Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、Caisson Labs等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4201

3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4201规格:100T/96S微量法产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二液体20mL×1瓶4℃保存试剂三液体12µL×1瓶4℃保存溶液的配制:1、试剂三:液体置于试剂瓶内EP管中。
根据用量按照试剂三:蒸馏水为3:100的体积比例充分混匀,现用现配;2、工作液的配制:将试剂二全部倒入试剂一瓶中,充分溶解,根据需要取一定的量37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
产品说明:GAPDH(EC1.2.1.12)催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3-二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化1,3-二磷酸甘油酸和NADH生成3-磷酸甘油醛、无机磷和NAD+,340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000g,4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
碱性蛋白酶(AKP)活性测定试剂盒说明书

碱性蛋白酶(AKP)活性测定试剂盒说明书碱性蛋白酶(Alkaline protease, AKP)活性测定试剂盒说明书微量法100T/48S注意:正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类,属于丝氨酸蛋白酶。
此外,该酶还能够水解酯键、酰胺键,具有转酯及转肽的功能。
该酶是主要工业用酶之一,广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理:在碱性条件下,AKP水解酪蛋白生成酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝;钨蓝在680nm有特征吸收峰,测定680nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
自备仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5 mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配制:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加5mL蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。
临用前加入10mL试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。
(可在烧杯上盖一层保鲜膜,注意观察,避免水分全部蒸发,一般加热1530分钟,该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用)。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加20mL蒸馏水溶解。
试剂五:液体5mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提取:1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
2. 血清或培养液:直接测定。
3. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
辅酶ⅡNADP(H)含量检测试剂盒说明书 微量法

辅酶ⅡNADP(H)含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC1105规格:100T/48S产品内容:酸性提取液:50mL×1瓶,4℃保存;碱性提取液:50mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀;溶解后4℃保存一周;试剂三:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀;溶解后4℃保存一周;试剂四:粉剂×1支,4℃保存,用时加入3mL蒸馏水,混匀;溶解后4℃保存一周;试剂五:液体3.6mL×1支,4℃保存;试剂六:液体30mL×1瓶,4℃保存;试剂七:液体50mL×1瓶,4℃保存。
操作步骤:一、NADP和N ADPH的提取:1、血清(浆)中NADP和NADPH的提取:NADP的提取:取0.1mL血清(浆),加入1mL酸性提取液,95℃水浴5min(盖紧);冰浴冷却后,10000g 4℃离心10min;取500µL上清加入等体积碱性提取液使之中和;混匀,10000g4℃离心10min,取上清,冰上保存待测。
NADPH的提取:取0.1mL血清(浆),加入1mL碱性提取液,95℃水浴5min(盖紧),冰浴中冷却后,10000g4℃离心10min,取500µL上清加入等体积酸性提取液使之中和;混匀,10000g4℃离心10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中NADP和NADPH的提取:NADP的提取:称取约0.1g组织,加入1mL酸性提取液,冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧),冰浴冷却后,10000g4℃离心10min,取500µL上清加入等体积碱性提取液混匀,10000g4℃离心10min,取上清,冰上保存待测。
NADPH的提取:称取约0.1g组织,加入1mL碱性提取液,冰浴研磨,95℃水浴5min(盖紧),冰浴冷却后,10000g4℃离心10min,取500µL上清加入等体积酸性提取液混匀,10000g4℃离心10min,取上清,冰上保存待测。
酶法检测试剂盒举例5个

酶法检测试剂盒举例5个酶法检测试剂盒是一种用于测定特定物质或分子在生物样本中的含量或活性的工具。
它们通常由一系列试剂和材料组成,可以通过酶反应来测量目标物质的浓度或活性。
以下是五个常见的酶法检测试剂盒的举例:1. 葡萄糖酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒:G6PD是一种关键的酶,参与细胞内葡萄糖代谢过程中NADPH的产生。
G6PD缺乏会导致溶血性贫血等疾病。
G6PD检测试剂盒可用于测定血液样本中G6PD活性水平,从而帮助诊断和监测相关疾病。
2. 脯氨酸氧化酶(PAO)检测试剂盒:PAO是一种参与氨基酸代谢的重要酶,可以将脯氨酸转化为丙酮酸和亚硝胺。
PAO检测试剂盒可用于测定尿液中PAO活性水平,从而评估肾功能和相关代谢紊乱。
3. 乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒:LDH是一种广泛存在于各种组织和细胞中的酶,参与乳酸代谢过程。
LDH检测试剂盒可用于测定血液、尿液或其他体液中LDH活性水平,从而帮助诊断和监测心肌梗死、肝病、恶性肿瘤等疾病。
4. 超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒:SOD是一种抗氧化酶,能够清除细胞内的超氧阴离子自由基。
SOD 检测试剂盒可用于测定血液或组织样本中SOD活性水平,从而评估抗氧化能力和相关疾病的风险。
5. 淀粉酶(AMY)检测试剂盒:AMY是一种参与淀粉消化的消化酶,能够将淀粉分解为葡萄糖。
AMY检测试剂盒可用于测定食物样本或消化系统分泌物中AMY活性水平,从而评估消化功能和相关消化系统疾病。
以上是五个常见的酶法检测试剂盒的举例。
这些测试剂盒在医学、生物学研究和临床诊断中起着重要的作用,帮助我们了解生物样本中特定物质或分子的含量或活性水平,从而为疾病诊断、治疗和监测提供有力支持。
NAD 激酶(NAD kinase, NADK)试剂盒说明书

货号:QS1010 规格:50 管/48 样NAD 激酶(NAD kinase, NADK)试剂盒说明书分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:NADK(EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是目前所发现的生物体内惟一能够催化 NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应,生成 NADP(H)。
因此,NAD激酶在合成 NADP(H) 以及调节NAD(H)与 NADP(H)的平衡上具有重要作用。
测定原理:NADK催化NAD +磷酸化,生成 NADP+;NADP +可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH;NADPH 通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT),通过在600 nm下测定MTT的还原速度(吸光值的变化)可反映出NADK活性的大小。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:提取液:液体50mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体20mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:液体50mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃保存;试剂五:粉剂×1 瓶, -20℃保存;样本测定的准备:1、细菌、细胞或组织样品的制备:细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或 200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。
乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)含量测定试剂盒说明书 微量法

乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)含量测定试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0985规格:100T/96S产品内容:试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1支,-20℃保存。
临用前加入250μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存一周;试剂三:液体×1支,4℃保存。
临用前加入250μL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存一周;试剂四:粉剂×1瓶,-20℃保存。
临用前加入22.5mL试剂五充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存一周;试剂五:液体30mL×1瓶,4℃保存。
工作液的配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×0.23mL)将试剂二、三和四按照1:1:90的比例混合,或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀(可以测定96样);加样前置37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴锅中预热30min;现配现用。
产品说明:乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。
在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。
糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化,经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水,释放能量用于ATP合成。
此外,乙酰辅酶A是合成脂肪酸,酮体,胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
测定原理苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。
柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。
利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应,乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。
试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
辅酶Ⅰ NAD(H)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4338

可见分光光度法辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒说明书注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:UPLC-MS-4338规格:50T/24S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体15mL×1瓶4℃保存碱性提取液液体15mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二液体6mL×1瓶4℃保存试剂三液体16mL×1瓶4℃保存试剂四液体3mL×1瓶-20℃保存试剂五液体40mL×1瓶4℃保存试剂六液体75mL×1瓶(自备)常温保存NAD标准品粉剂×1支-20℃保存NADH标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制:1、试剂三:需要严格避光;2、试剂六:72mL乙醇和3mL蒸馏水混合,备用;3、NAD标准品:临用前加入1.5mL蒸馏水,即2µmol/mL,将其稀释为1.25nmol/mL的NAD标准溶液备用;4、NADH标准品:临用前加入1.4mL蒸馏水,即2µmol/mL,将其稀释为1.25nmol/mL的NADH标准溶液备用。
产品说明:辅酶I包括还原型和氧化型两种形式,在生物氧化中起传递氢的作用。
氧化型辅酶I又称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)是脱氢酶的辅酶,它在糖酵解、糖异生、三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。
中间产物会将脱下的氢递给NAD,使之成为NADH(还原型辅酶I)。
而NADH则会作为氢的载体,在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式,合成ATP。
NAD(H)在机体内有重要的生理意义,与物质代谢、能量代谢、抗细胞衰老、抗氧化以及一些疾病的发生密切相关。
体内辅酶I含量降低会导致细胞损伤或衰亡。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值,NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。
小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)说明书

小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,组织匀浆及相关液体样本中苹果酸脱氢酶(MDH)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)水平。
用纯化的小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入苹果酸脱氢酶(MDH),再与HRP标记的苹果酸脱氢酶(MDH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的苹果酸脱氢酶(MDH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)浓度。
试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品:135 U/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
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NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测试剂盒说明书微量法
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC1055
规格:100T/96S
产品内容:
提取液:液体100mL×1瓶,在4℃保存;
试剂一:液体20mL×1瓶,在4℃保存;
试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入500μL双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入600μL双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明:
MDH(EC1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是重要的中间产物,连接多条重要的代谢途径。
因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸馏水
操作步骤:
一、粗酶液提取:
细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
血清(浆)样品:直接检测。
二、测定步骤:
1、酶标仪/紫外分光光度计调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、试剂一置于37℃水浴中预热15min以上(保证无沉淀)。
3、操作表:
试剂名称(μL)测定管空白管
样本5-
蒸馏水-5
试剂一185185
试剂二55
试剂三55
将上述试剂按顺序加微量石英比色皿/石英96孔板中,充分吹打混匀后立即记录340nm波长下初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2,计算ΔA空白=A1空白-A2空白,ΔA测定=A1测定-A2测定,计算ΔA=ΔA测定-ΔA空白。
三、NADP-MDH活力单位的计算:
a.按微量石英比色皿计算:
1、血清(浆)NADP-MDH活力的计算
单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟消耗1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH(U/mL)=ΔA÷ε÷d×V反总÷V样÷T×109=6430×ΔA。
ε:NADPH消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;
V反总:反应总体积,0.0002L;V样:加入样品体积,0.005mL;
T:反应时间,1min。
2、组织中NADP-MDH活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH(U/mg prot)=ΔA÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T×109=6430×ΔA÷Cpr。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH(U/g鲜重)=ΔA÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V提取)÷T×109=6430×ΔA÷W。
ε:NADPH消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;
V反总:反应总体积,0.0002L;V样:加入样品体积,0.005mL;
V提取:提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;
W:样本鲜重,g;T:反应时间,1min。
3.细菌或培养细胞中NADP-MDH活力的计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH(U/104cell)=ΔA÷ε÷d×V反总÷(200×V样÷V提取)÷T×109=13×ΔA÷W。
ε:NADPH消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;
V反总:反应总体积,0.0002L;V样:加入样品体积,0.005mL;
V提取:细胞提取液体积,0.4mL;200:200万细胞;
T:反应时间,1min。
b.按96孔板计算:将上述公式中的比色皿光径d=1cm改为石英96孔板光径d=0.6cm进行计算.
注意事项:
1、粗酶液的提取必须在0℃-4℃中操做完成,以防止酶变性失活。
2、实验时,试剂二、试剂三和样本在冰上放置,以免变性和失活。
试剂一37℃放置。
3、建议一人加样一人比色。
因时间监测范围小,不推荐用96孔UV板同时测多个样本。
4、空白管测1-2管即可。
5、用分光光度计时,当初始值小于0.7或者ΔA大于0.5时,建议稀释后测量。