芦荟组织培养

实验十、芦荟的组织培养（自选实验）

前言：芦荟属（学名：Aloe）通称芦荟，原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物，据考证的野生芦荟品种300多种，主要分布于非洲等地。这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。因此芦荟具有积极重要的经济价值。

摘要：本实验以芦荟的芽为外植体进行组织培养，通过不定芽萌发途径再生植株。诱导培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；(4)继代培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L；

关键词：芦荟茎段外植体诱导培养

1、实验目的

芦荟的常规繁殖同许多植物一样有有性繁殖和无性繁殖两种。由于芦荟雌雄花开放时间不一致，授粉不亲和，故而结实少，并且种子细小，再加上芦荟有些品种只开花不结果，因而有性繁殖速度慢,因而无法满足芦荟种植业发展和开发芦荟资源对种苗的要求。芦荟的组织培养不仅可在短期内繁殖大量规格一致、种性稳定的芦荟种苗，还具有可以保持芦荟资源的永续利用。

2、材料和步骤:

2.1材料

1、芦荟幼嫩茎段

2、诱导培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶

3、继代培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶

4、生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L+30g/L白糖+8.5g/L卡拉胶

5、PH： 5.8-6

2.2步骤

2.2.1外植体消毒方法

用自来水冲洗芦荟茎段表面的泥土，用干净的手将幼嫩芦荟苗的叶片大部分摘除，只留下约1cm左右的叶段。将芦荟茎段切成1cm长，用70%酒精消毒15-30 s，用灭菌水冲洗1次后，放入0.15%升汞消毒约10min，灭菌水冲洗3-4次，滤干水分，准备接种。

2.2.2诱导培养

将芦荟茎段放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀剥去几层外裹的叶片，然后切成两半，按生长极性方向植入诱导培养基。每瓶诱导分化培养基接种1小块，共接7瓶。每周观察记录一次。

2.2.3培养条件：

在组培实验室的条件下培养,每个星期观察一次。

3、实验结果与分析：

3.1对芦荟茎段进行诱导时，污染率1

4.3%，诱导率为100%。说明本实验中用的诱导培养基适宜，消毒时间合适。此法可以对芦荟进行大规模的生产提供参照。

芦荟茎段诱导培养结果统计表

3.2由于自选材料时间有限，没有进行继代培养和生根培养。

3.3结果图片：

4、注意事项

1、配制培养基时，要严格精确地称取各种化学试剂。

2、实验时一定要注意无菌操作，万不可引入杂菌污染培养基。

3、观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子。

4、观察记录时要仔细，认真描述并做好记录。

细胞工程自选试验开题报告：

芦荟组织培养

一、基本背景

芦荟属（学名：Aloe）通称芦荟，原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物，据考证的野生芦荟品种300多种，主要分布于非洲等地。这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。

芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。据科学研究，发现芦荟中有不少成分对人体皮肤有良好的营养滋润作用，且刺激性少，用后舒适，对皮肤粗糙、面部皱纹、疤痕、雀斑、痤疮等均有一定疗效。此外芦荟对轻度的撞伤、挫伤、香港脚、冻伤、皮肤龟裂、疣子等都有一定的疗效。根据现代研究显示，其叶含芦荟大黄素、异芦荟大黄素及芦荟苦味素等，药理实验有泻下、抗癌作用。芦荟花性寒，味苦涩，有清热、止咳、止血功效，可治疗咳嗽、吐血。而且芦荟还有极高的营养价值，食用芦荟的发展把对芦荟的研究带入了一个新的研究阶段，尤其是对芦荟组织培养技术发展有了极大地推动作用。

二、实验设备和药品

1、所需设备

高压灭菌锅、超净工作台、培养瓶、称量仪器、移液管、锥形瓶、量筒、镊子、解剖刀、支架、酒精灯、牛皮纸、牛皮袋

2、药品

（1）大量元素、钙盐、微量元素、铁盐、有机元素、蒸馏水、BA、IBA、NAA 、蔗糖、卡拉胶（2）75%酒精、0.1%升汞（加吐温）、95%酒精

3、材料

幼嫩芦荟的芽

三、实验内容及方法

1．研究方法：

对芦荟茎尖、吸芽进行灭菌处理，然后接入无菌培养瓶进行组织培养，快速繁殖试管苗。

采集芦荟→截取根尖、吸芽→外植体消毒→在超净工作台接种→放入培养室培养→继代培养→生根培养

2.试验方法及步骤：

1 )愈伤组织培养将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗1-2次，淋干。在超净台上，先用75%的乙醇将茎尖浸泡30-60s，再用升汞浸5-l0min，最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。培养条件为:每天光照 10-12h，光照度为 1000一2000Lx，温度(25士)2℃。大约15-25d后，试管中接种的外植体

就会长出新芽

3 )生根培养当培养瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌条件下取出，放入装有生根培养基的培养瓶中培养，培养条件同分化培养。大约半个月后，幼苗即可生根。

3.可行性分析：

外植体接种到诱导培养基上培养10天后，顶芽开始伸长生长，到25天左右在组织块的基部开始长出腋芽，并且在每个外植体的嫩茎组织基部长出多个小突起，45-50天后小突起和腋芽逐渐长成7-9个绿色单芽，此时芽约有2.0-2.5cm可进行下一步的培养。

将长至3厘米高以上的无根增殖苗由丛生芽块上单芽切下转到生根培养基上，7天后在苗的基部形成白色的突起，并逐渐伸长，至12天可形成明显的幼根，逐渐长成完整的小植株，小苗长至7cm以上时即可移栽。

四、可能出现的问题及解决方法:

1、要注意严格遵守灭菌操作程序，防止被环境中的微生物的污染，这是组织培养的关键。

2、在培养中，如果出现杂菌污染，应立即将该污染培养瓶中的培养物倒掉并将培养瓶洗净，烘干备用。

3、对于愈伤组织或试管苗长势良好，仅有局部杂菌污染的试管或培养瓶，也可在无菌条件下，将愈伤组织或试管苗取出，重新放入装有相应培养基的试管或培养瓶中，继续培养。

4、严格的把握外植体灭菌时间，消毒时间不能太短，也不能太长，一定要好好把。

五、预期结果

完成对芦荟的诱导培养以及分化培养，如果时间允许，最好可以获得芦荟的组培幼苗，对其进行炼苗移栽，获得完整的植株，如果时间允许，经过炼苗和移栽，获得自然条件的生长的植株。