凝胶成像分析系统

图像采集与分析技术及凝胶成像分析系统使用方法点击次数：15 发布时间：2011-3-25 8:50:36

一、仪器设备

凝胶成像分析系统ChemiGenius2

二、仪器结构

见下图

三、原理

样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样，以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析，就可以确定它的成份和性质。

样品对投射或者反射光有部分的吸收，从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度，通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。

采用最新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀，最大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。

四、适用范围

1．蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析。

2．可以确定生物分子的分子量。

3．可以应用于生物分子的定量分析中。

五、操作步骤

1．打开凝胶成像系统开关。

2．打开电脑，系统自动打开并进入GeneSnap软件。

3．打开凝胶成像系统前面板，选择使用紫外透射光源或者白光透射光源，将相应光源安放到位。

4．将样品放置在透射光源的样品台上。

5．在GeneSnap操作界面里面选择使用Upper white光源，点击绿色(即时成像)按钮。6．根据右侧成像窗口中显示的即时照片，手动调节凝胶在样品台上的位置，直至成像窗口中凝胶在照片的中央位置，关上凝胶成像系统的前面板。

7．选择紫外光源：

No Light 不使用灯照射，直接成像

Transilluminator 紫外透射光源

Epi long wave uv 长波紫外反射光源(365nm)

Epi long wave uv 短波紫外反射光源(254nm)

Upper white 顶部白色反射光源

Lower white 底部白色透射光源

8．E.D.R.及N.F.的选择： E.D.R. 动态范围扩展，可以使照片由

12 位变为16位，更加清晰

N.F. 中间部分区域校正，可以消除背景光

分布不均造成的影响

9．选择照相时所使用的灵敏度：

High resolution 高分辨率

Medium sensitivity 中灵敏度

High sensitivity 高灵敏度

Max sensitivity 最高灵敏度

10. 选择使用的滤光片：No Filter 适用于可见光、荧光

和化学发光物质的照相

EtBr/UV 适用于紫外光照相

11. 点击绿色(即时成像)按钮，按钮变为红色，成像窗口出现即时照片。

12.调整照相机光圈大小，使看到的凝胶照片亮度正合适。

13.调整图片放大/缩小倍数，使所照凝胶所成的照片大小与成像窗口大小相适应。

14.调整照相机的焦距，使凝胶所成的照片最清晰。

15.设置曝光时间，使所成的照片清晰、亮度适中。

16.点击红色按钮，冻结图像并且在成像窗口中显示(freeze image as current view in image window)。

17.调整预览照片的亮度(Reset brightness)，使照片明亮清楚。

18.调整预览照片的对比度(Reset contrast)，使照片上的图案更加。

19.调整预览照片的灰度(Reset gamma)，使照片更加清晰。

20.把各个参数都调节到最佳之后，保存照片。Toggle false color view Show saturation

六、注意事项

1.紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器，在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片，开关凝胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面时要把蓝色和白色胶片取出。

2.注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再打开电脑进入GeneSnap软件。

3.在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。

PCR仪的使用方法

点击次数：55 发布时间：2011-3-18 8:44:37

步骤：

1、开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”,显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单：准备执行程序。

2、放入样本管，关紧盖子。

3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：

按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。

4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM,按《Proceed》，屏幕显示

按《Proceed》，1)选择NEW,命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。

2)输入程序步骤：名字输入后，显示

按《Proceed》则可以输入温度(0～100℃)，按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同

上。

3)选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步(循环数最多可达9999次)(为实际循环数－1)。

4) 选择option,显示

再选择increment,按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值(－0.1℃～6℃)，按《Proceed》确认。

选择extend, 按《Proceed》确认,输入每个循环增加或减少的时间(－60～60秒)，按《Proceed》确认。

选择slop(指温度上升或下降的速率),输入温度的改变值(－0.1～1.5℃)按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认。

4)选择End,输入结束步骤。

5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。

6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。

用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。

编辑程序：

1、可以用《Cancel》键删除输错的值，输入新的值后按《Proceed》确认。

2、对于未输完的程序，要先输入END，按《Proceed》将程序储存后才能删除。

3、删除已经储存的程序：从RUN-ENTER菜单中选择RUN－PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择DELET,用《Select》选择删除。

4、查看程序的步骤：在主菜单上选择LIST，按《Proceed》，用《Select》将选择名称，再按《Proceed》，显示程序的第一步，用《Select》键向前、向后翻页查看，此时不能改变程序的值。

编辑已有的程序：

1、从RUN-ENTER菜单中选择RUN－PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择EDIT，按《Proceed》确认，用《Select》键选择要编辑的程序，按《Proceed》显示程序的第一步。

2、用《Select》键将光标移到要改变的温度或循环的值上，键入新值，按《Proceed》确认，按《Cancel》删除键入的值，出现空格，键入新值后确认。

注：一旦值被改变或删除，原来的值不能恢复，必须重新键入。

3、编辑时间值：必须重新键入小时、分钟、秒，按《Proceed》。

如何设置一个PCR体系：

一般分为8步：

1、预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

2、变性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

3、退火：温度自定，30s~2min。

4、延伸：70～75℃，一般72℃，对于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。

5、循环数：一般25～35个循环。

6、最终延伸：72℃，5～15min。

7、保存：10℃，时间设为0。

8、END。