色氨酸及其主要代谢产物的分离和在生物样品中的测定
快速、灵敏检测生物样本中单胺类递质及其代谢产物的方法――反相色谱-电化学检测分析法
ｎ代表被测物质单个分子的电子得失数， 是法拉 Ｆ
弟常数，Ｖ 表 示溶液通过电极表面时速率的乘方 ａ 数，Ｃ 表示浓度。在相同色谱条件且流量 恒 定 ｂ 时，对任一被测物质来说，Ｋ ｎＦ和Ｖ 都是恒量， 、 ａ 因而Ｉ ＢＣ，即所测量的电流正比于检测池中被 Ｌ ｂ
测化合物 的浓度 ５。ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
三、分析时应注意的几个问题
实验与技术
快速、灵敏检测生物样本中单胺类递质及其代谢
产物的方法— 反相色谱－ 化学检测分析法 电
叶惟泠
中国科学院上海生理研究所， ００１ ２０３） 单胺类神经递质，多巴胺 （ ） ＤＡ 、去甲肾上腺 素（ ）肾上腺素（） － ＮＡ 、 Ａ 和５羟色胺（－ ）是哺乳 ５ＨＴ 动物和人类中枢重要的信息传递物质。检测脑和体 液中微量的单胺递质及其代谢产物对研究这类递质 的生理功能，与递质代谢异常有关的疾病的诊断和 药物及手术疗效的鉴定都有重要意 义。自 １７ ９３年 Ｒｉ ｉ ｅ ｓｎ ｒ１等用高效液相色谱 （ Ｌ ）电化学 ｓｇ ＨＰ Ｃ － 检测法（ Ｃ 分析了儿茶酚胺 Ｃ ， Ｅ Ａ 包括ＤＡ ＮＡ和 、 Ａ 以来，由于高灵敏电化学检测器与高效反相 色 表１罗列了近十年来成功地测定了生物样 本 中这 类化合物的范例。由于令人满意地解决了 同时 分 离、检测这一系列化合物的方法，因而不仅能测出 递质的更新率，还可通过分析单位时间内底物降解
用Ｅ Ｃ分析时，流动相中必须有电解质存在， 以提供合适的离子电导率和传送电荷，通常离子强 度维持在０ １ ． ｏ／ ． —０ ｍ ｌ ０ １ Ｌ水平〔 １ ２，合适的离子强 度应大 于 ０ ５ ｌ ４；其次它必须在电极表面 ． ｍｏ／ ０ Ｌ 呈电化学惰性，即低的背景电流 ２１ ， ２。常用的磷 酸缓冲液、醋酸缓冲液等都适用于这类化 合 物 的
几种中药及生物样品的液相色谱分离—电化学检测新方法
几种中药及生物样品的液相色谱分离—电化学检测新方法液相色谱-电化学联用技术(HPLC-ECD)在多组分复杂样品分析中是一个有趣的实用技术,它将高效液相色谱(HPLC)的高分离效能和电化学检测(ECD)的高灵敏性和高选择性相结合,较好的实现了高效分离和高灵敏度检测。
本论文采用HPLC-ECD及HPLC-MS联用技术,建立了几种中药和生物样品中活性成分的分析新方法；扩展了液相色谱和电分析化学的应用范围,具有较好的理论和应用价值。
具体研究内容如下: 1.采用超声提取法对中药材汉防己中的汉防己甲素和汉防己乙素进行有效提取,并应用HPLC-ECD技术对两种生物碱进行了分离检测。
该方法灵敏度高,操作简单易行,分析结果准确可靠,可应用于汉防己中防己生物碱的检测。
分析结果显示,汉防己甲素和汉防己乙素的浓度分别在1.3×10-6～1.07×10-4mol/L和1.4×10-6～1.09×10-4mol/L范围内和峰面积有良好的线性关系；二种生物碱的检测限分别达到了2.6×10-7mol/L和2.7×10-7mol/L,检测灵敏度比同等条件下紫外检测提高一个数量级；回收率均在95%-105%之间；测得汉防己中汉防己甲、乙素的百分含量分别为0.781%和0.401%。
实验采用LC-ESI-MS 方法验证了建立的HPLC-ECD方法的准确性。
2.建立了一种稳定性好、灵敏度高的中药黄连中四种生物碱的同时检测的液相色谱-电化学检测方法,并成功应用于大鼠血浆样品中对四种生物碱的分析。
采用该方法测定四种生物碱的检测限在1.0×10-8mol/L到3.0×10-8mol/L,与文献LC-UV方法相比较,小檗碱的检测灵敏度提高了了80倍,并且克服了LC-UV方法难以对具有不同最大吸收波长的多种化合物进行同时灵敏检测的缺陷。
采用流动注射分析法,比较了小檗碱样品在电化学检测器与商品化的紫外检测器检测时在重复性方面的差异性,结果显示两种检测器无显著性差异。
发酵饲料色氨酸代谢产物测定标准
发酵饲料色氨酸代谢产物测定标准下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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色氨酸试验操作方法
色氨酸试验操作方法
色氨酸试验是一种常用的生物化学实验方法，用于检测物质中是否含有色氨酸。
操作方法如下：
1. 准备试剂和材料：色氨酸试剂盒、待检测物质溶液、显微镜片、显微镜、吸光度计等。
2. 取一定量的待检测物质溶液，加入试管中。
3. 按照试剂盒说明书的指导，添加试剂。
通常包括显色剂、显色底液等。
按照比例加入试管中。
4. 混合试管溶液，轻轻摇晃，使试剂和待检测物质充分混合。
5. 将试管放入吸光度计中，设置所需检测的波长。
吸光度计会测量溶液的吸光度。
6. 根据试剂盒说明书中的步骤，读取吸光度计的测量值。
7. 根据试剂盒说明书中提供的标准曲线或浓度计算方法，计算待检测物质中色氨酸的浓度。
8. 对于需要进一步确认的结果，可以使用显微镜观察待测物质溶液的特征，例如颜色、沉淀等。
需要注意的是，操作过程中应遵守实验室的安全操作规范，注意试剂的保存和处置。
同时，根据实验目的和样品特性，可以根据需要进行一定的实验优化和方法修改。
饲料色氨酸含量测定
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
分析步骤 1.工作曲线的绘制 （1）吸取色氨酸浓度为100 μ g/mL的标准溶液5.00、7.50、 10.00、12.50、15.00、17.50mL分别置于25mL棕色容量瓶中 用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20、30、40、50、60、70 μ g/mL。 （2 ）吸取各浓度溶液1mL，分置具塞试管中，空白管加 1mL水向每支试管内加入氢氧化钾溶液1mL，混匀，将试管放 入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，从冷水盆中取出 试管，摇匀，在室温（20～30℃，下同）放置30min。 （3 ）向上述每支试管内加0.2mL亚硝酸钠溶液，摇匀，室 温放置25min。 （4 ）以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各 溶液吸光度值。 （5 ）以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工 作曲线，或列出回归方程式。
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
仪器、设备 分析天平：感量0.1mg。 分光光度计。 离心机：转速4000r/min。 实验室用粉碎机。 培养箱。 容量瓶：25mL、50mL、250mL。 10mL具塞试管。 刻度吸管：0.5mL、2mL、5mL、25mL。
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
2.样品测定 （1）称样：按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精 确至0.1mg。 （2） 水解：将试样置于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓 慢加入25mL氢氧化钾溶液，使试样湿润且丌粘壁，置40±1℃ 培养箱中水解16～18h。 （3）离心：取出水解液冷却至室温后，用水定容，摇匀， 取部分水解液以4000r/min转速离心15min。 （4）显色：取2mL上清液置具塞试管中，并将试管放入冷 水盆中，加入5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，摇匀。每个试样另 取2mL上清液于具塞试管中，加5mL硫酸溶液作为样品空白， 摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL亚硝酸钠 溶液，摇匀，室温放置25min。 （5）比色：以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测 定样品溶液的吸光度值。
色氨酸含量测定方法
色氨酸含量测定方法
1. 你知道高效液相色谱法吗？就像给色氨酸做一次特别的“体检”。
比如说，我们想知道牛奶里色氨酸的含量，就可以用这个方法呀！把样本放进去，仪器就像个聪明的侦探，能准确找出色氨酸的量呢！
2. 纸层析法也不错哦！这就好像给色氨酸画一张独特的“地图”。
比如检测麦粒里的色氨酸，用这种方法慢慢展开，色氨酸的位置就清晰可见啦，神奇吧！
3. 分光光度法呢，如同给色氨酸安上一个“信号灯”。
像是在研究某种保健品中色氨酸含量时，通过特定的光线照射，就能知道色氨酸有多少啦。
4. 荧光光度法呀，简直就是给色氨酸加上了一层“闪耀的外衣”。
举个例子，检测药品里的色氨酸含量，那闪烁的光芒就是色氨酸在“亮相”呢！
5. 氨基酸分析仪测定法，好像是为色氨酸准备的专属“舞台”。
想要精确知道饲料里色氨酸的量，让它在这个“舞台”上好好表现一下就知道啦。
6. 酶联免疫吸附测定法呢，就像是给色氨酸设下的一个“陷阱”。
比如在检测血液样本中的色氨酸时，它乖乖地就“落网”啦。
7. 气相色谱法也能用来测定色氨酸哦，这相当于为色氨酸造了一条特别的“跑道”。
拿植物样本来说，色氨酸就能在这条跑道上被检测到呢。
8. 微生物法呀，就如同让色氨酸去参加一场“比赛”。
好比检测食品中的色氨酸含量，它在这个“比赛”中的表现就决定了它的数量呢！我觉得呀，这些方法都各有奇妙之处，都能帮我们准确了解色氨酸的含量呢！。
色氨酸的测定
1.前言1.1测定色氨酸的意义色氨酸(Tryptophan ,Trp)β-吲哚基丙氨酸，化学式C11H12N2O2，相对分子质量204.23,为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。
水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。
色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质，其结构与IAA相似，在高等植物中普遍存在。
色氨酸是人体所需的一种重要的氨基酸，对预防糙皮病、抑郁症，改善睡眠和调节情绪，有着很重要的作用，氨基酸被广泛应用于食品、医药和饲料添加领域。
因此,研究色氨酸的分析测定在生物、医学和化学领域有重要意义。
1．2目前国内外测量色氨酸的研究现状目前测定色氨酸的方法主要有分光光度法[1]、荧光法[2]、高效液相色谱法[3]、毛细管电泳法[4]、原子吸收光谱法[5]和电化学法[6-9]等。
电化学分析法具有灵敏度高、选择性强、准确度好、分析速度快等特点，因而利用电化学方法测定色氨酸引起了人们极大的兴趣。
作为芳香类氨基酸的一种，色氨酸具有一定电化学活性，因此，采用电分析方法直接检测色氨酸是较理想的选择。
如邹永德等人[6]研究了多壁纳米碳管修饰玻碳电极伏安法测定色氨酸，研究了色氨酸在该电极上的电化学行为并优化了测定条件.与玻碳电极相比,该修饰电极明显降低了色氨酸的氧化峰电位,提高了氧化峰电流. 在pH7. 2的磷酸盐缓冲溶液中,测定色氨酸的线性范围为2. 5～140μmol/L,检出限为0. 12μmol/L. 对10μmol/L色氨酸测定的相对标准偏差为3. 4 % ( n = 8). 一些常见物质对测定无干扰,应用于人体尿样中色氨酸的含量测定。
姚军等人[7]利用聚对苯二酚修饰电极对多巴胺和L-色氨酸的电化学进行研究。
实验发现,在pH 515 的NaH2PO4-2Na2HPO4 缓冲溶液中,可用PHQ/ GCE 测定溶液中的DA 和L2Trp ,两者氧化峰电流均与浓度在1 ×10 - 3～5 ×10 - 6 mol/L 范围内呈良好线性关系,相关系数分别为01998 3 和01996 5 ,检出限分别为1 ×10 - 6 mol/L 和5 ×10 - 7 mol/L ,该方法简便快捷。
L-色氨酸含量和纯度的测定实验指导书
L-色氨酸含量和纯度的测定 实验指导书一、实验目的1.了解对二甲氨基苯甲醛与L-色氨酸的反应机理；2.了解高效液相色谱分析的基本原理；3.掌握L-色氨酸的测定方法。
二、概述和原理L-色氨酸的分析方法主要有氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和分光光度法等。
本实验主要采用分光光度法进行L-色氨酸含量测定。
分光光度法测定L-色氨酸的基本原理为：在硫酸溶液中，L-色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应，生成的希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，颜色深度在一定范围内与L-色氨酸含量成线性关系，可在分光光度计下定量测定。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，其系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，由于该法具有高效、快速和灵敏等特点，不仅可用于L-色氨酸含量的测定，还可用于纯度的测定。
其工作原理为：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
三、实验试剂及仪器1.试剂浓硫酸；对二甲氨基苯甲醛；亚硝酸钠；L-色氨酸标准品；磷酸二氢钾；冰醋酸；甲醇（液相纯）；纯净水；乙腈（液相纯）。
2.仪器紫外可见分光光度计，Agilent 1200 Series高效液相色谱仪。
四、发酵液中L-色氨酸含量的测定1.对二甲氨基苯甲醛溶液（3 g/L）制备准确称取0.3 g对二甲氨基苯甲醛，溶于100 mL 1:1浓硫酸中。
2.亚硝酸钠溶液（2%）制备准确称取亚硝酸钠0.2 g于10 mL容量瓶中，以蒸馏水定容，新鲜配制。
3.L-色氨酸标准储备液（100 mg/L）制备准确称取25 mg L-色氨酸标准品，用纯水定容于250 mL棕色容量瓶中，制得浓度为100 mg/L的L-色氨酸标准储备液，于4 ℃冰箱保存备用。
色氨酸的检测
色氨酸、含硫氨基酸和18种蛋白水解氨基酸的检测
色氨酸、含硫氨基酸和蛋白水解氨基酸的检测是氨基酸例行分析中的三个重要组成部分。
色氨酸Tryptophan)是一种重要的人体和畜禽、鱼类生长的必需氨基酸，广泛用于医药、食品和饲料添加剂。
色氨酸分析方法有色谱法（离子交换、HPLC）、比色法、荧光法等。
色谱法由于兼有分离和检测双重功能而被广泛采用。
如何一机多用利用已有的氨基酸分析仪取代HPLC仪器完成色氨酸分析，具有实际意义。
含硫氨基酸是指蛋氨酸（Methionine）和胱氨酸（Cystine）。
它们是动物发育的必需氨基酸。
由于常规的酸水解法导致含硫氨基酸的破坏，测定含硫氨基酸时须采用氧化酸水解法。
经氧化水解后蛋氨酸1:1转化为蛋氨砜（Methionine sulphone），胱氨酸1:1转化为磺基丙氨酸(Cysteic acid)。
本文根据阳离子交换分离、柱后茚三酮衍生光度法检测的化学原理， 借助最新型氨基酸分析仪A300的仪器技术，提出了包括色氨酸、含硫氨基酸和蛋白水解氨基酸在内的21种氨基酸的分析方法。
方法操作简便,重现性好, 灵敏度高。
附图1: 蛋白水解氨基酸、含硫氨基酸和色氨酸的标准谱图
蛋白水解氨基酸、含硫氨基酸和色氨酸的标准谱图。
色氨酸--检测技术
色氨酸BTP-色氨酸代谢相关物质分析动物体色氨酸代谢的色氨酸有两个来源：一个是组织蛋白质分解的内源氨基酸，约占2/3；另外一个是从日粮中消化吸收的外源性氨基酸，约占1/3。
色氨酸代谢途径也有两个：一个是合成组织蛋白质，另一个则是分解代谢。
色氨酸的吸收半周期为1.73 h，清除半周期为0.73～0.74h，其生物利用率为76%。
色氨酸在代谢过程中与碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素和微量元素等各种营养素之间有十分密切的关系。
色氨酸是营养必需的氨基酸，来自饮食中蛋白质供应。
除了自身能够组成体内蛋白质外，色氨酸还是血清素的前体，是一种重要的神经介质，也是犬尿氨酸的前体，生成烟酸、CO2、犬尿喹啉和黄尿酸。
不同的组织中色氨酸的代谢与多种生理功能有关。
肝脏通过降解过量色氨酸调节体内色氨酸平衡。
免疫细胞参与色氨酸降解为犬尿氨酸，在感染、炎症、免疫反应和妊娠反应导致的免疫应答过程中发挥关键作用。
在肠道和脑中，血清紊由色氨酸合成，其中色氨酸利用率能够影响情绪紊乱的敏感性。
百泰派克公司建立了以ACQUITY UPLC/TripleQuad5500（Waters/AB Sciex）为主的分析手段，能够实现对多个色氨酸代谢相关物质进行的定量及定性分析。
BTP可检测色氨酸代谢物百泰派克的技术员们经过多年的技术积累，采用ACQUITY UPLC/TripleQuad5500（Waters/AB Sciex）结合色氨酸及相关物质分析标准品，配合色氨酸及相关物质同位素标准品进行定量及定性分析：色氨酸代谢物分析服务列表。
关于样品血清、血浆、尿液、胆汁、胆酸；细胞、肝脏、脑组织等动物组织及粪便等；植物、酵母、微生物等。
样本需求量：血样、胆汁等：10微升。
各种组织：10毫克。
粪便等：10毫克。
其它样本类型及用量请与百泰派克销售联系。
样品运输：以3-4公斤干冰挥发一天计算，请使用足量的干冰运输（建议尽量选用较大块的干冰，大块的干冰挥发较慢），并用泡沫盒封闭。
一种色氨酸及血清样本中游离色氨酸含量的检测方法[发明专利]
![一种色氨酸及血清样本中游离色氨酸含量的检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c9f8b587ddccda38366bafc6.png)
专利名称：一种色氨酸及血清样本中游离色氨酸含量的检测方法
专利类型：发明专利
发明人：何成,王健,武鹏彦,刘晓花,段然
申请号：CN201210390766.6
申请日：20121016
公开号：CN102914527A
公开日：
20130206
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种色氨酸及血清样本中游离色氨酸含量的检测方法，涉及一种游离色氨酸含量的检测方法。
本发明提供了一种基于荧光功能化的金属有机四面体化合物应用于天然氨基酸和血清样本中游离色氨酸识别和检测并实现生物细胞成像应用的方法。
该方法是以三苯胺为母体构筑出的三三齿配体与硝酸铈自组装得到四面体化合物为材料，该材料能够在20种天然氨基酸中高选择性的识别色氨酸，响应范围在0～0.1mM；另外，该材料还能够有效地区分游离的和结合的色氨酸，实现在血清样本中对游离色氨酸含量的检测，也很好的实现了在活体细胞成像上的应用。
因此，该材料提供了一种灵敏度高、操作简单的测试血清样本中游离色氨酸含量的方法。
申请人：大连理工大学
地址：116024 辽宁省大连市甘井子区凌工路2号
国籍：CN
代理机构：大连星海专利事务所
代理人：王树本
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65、色氨酸检验规程
20℃下对钠光谱
D
线的比旋光度
[
α
]
20 D
，按下式计算：
100×α
[α] 20 D
或
[α] 25 D
=
L×c
式中： D ——旋光仪光源钠光的 D 线波长； α——旋光仪测定的偏转角度数； L ——旋光管长度，单位为分米（dm）； c ——溶液浓度（100mL 溶液中所含物质的克数）。 2.3.5 允许差 同一试样两次测定，绝对值之差不得超过 0.02%。 2.4 干燥失重检验 2.4.1 检验原理 在常压下，将试样置于 103±2 度烘箱中干燥 4h，计算失去的质量。 2.4.2 器材 2.4.2.1 电子天平：精度±0.0001g； 2.4.2.2 称量瓶：玻璃制成，带盖，表面积能使样品铺开约 0.3g/cm2； 2.4.2.3 电热恒温干燥箱：温度可控制在 103℃±2℃； 2.4.2.4 干燥器：具有干燥剂。 2.4.3 操作 称取试样 5g（精确至 0.0001g），平铺于已恒重的称量瓶内，厚度不超过 2mm， 如果样品是晶体，快速粉碎至 2mm 的大小，敞开置于干燥箱内，瓶盖立于旁 边。在 105℃条件下，恒温干燥 4h，结束后盖盖移出，置于干燥器内冷却， 称重，干燥温度波动范围在 2℃之内。 2.4.4 计算
x=
m × 1000
204 . 2 × (V − V 0 )
式中：
m——邻苯二甲酸氢钾质量(g )；
V——滴定时消耗高氯酸滴定液体积数(mL)；
V0——空白试验时消耗高氯酸滴定液体积数(mL)；
204.2——1mol 高氯酸滴定液相当基准邻苯二甲酸氢钾质量（g/mol）。
2.2.3 器材
2.2.3.1 自动电位滴定仪；
平面偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液（即旋光性物质）时，
色氨酸
1、取本品与色氨酸对照品各适量，分别加水溶解并稀释制成每1mL中约含10mg的溶液，作为供试品溶液与对 照品溶液。照其他氨基酸项下的方法试验，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。
2、本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集946图）一致。
酸度 取本品0.50g，加水50mL溶解后，依法测定（通则0631），pH值应为5.4~6.4。 溶液的透光率 取本品0.50g，加2mol/L盐酸溶液20mL溶解后，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在430nm的波长处测 定透光率，不得低于95.0%。 氯化物 取本品0.25g，依法检查（通则0801），与标准氯化钠溶液5.0mL制成的对照液比较，不得更浓（0.02%）。 硫酸盐 取本品1.0g，依法检查（通则0802），与标准硫酸钾溶液2.0mL制成的对照液比较，不得更浓（0.02%）。 铁盐 取本品0.10g，依法检查（通则0808），与标准氯化铵溶液2.0mL制成的对照液比较，不得更深（0.02%）。
谢谢观看
取本品约0.15g，精密称定，加无水甲酸3mL溶解后，加冰醋酸50mL，照电位滴定法（通则0701），用高氯酸 滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg 的C11 H12N2O2。
氨基酸类药。
遮光，密封，在凉处保存。
色氨酸
人体必需氨基酸
01 基本信息
03 药典信息
目录
02 生理作用
ห้องสมุดไป่ตู้
色氨酸（Tryptophan），又称β-吲哚基丙氨酸，是一种有机化合物，化学式C11H12N2O2，是人体的必须氨 基酸之一。
色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质，其结构与IAA相似，在高等植物中普遍存在，也是人体 中重要的神经递质——5-羟色胺的前体，可用于妊娠期妇女营养补充剂和乳幼儿的特殊奶粉，用于烟酸缺乏症 （糙皮病），作为安神药，可调节精神节律，改善睡眠，也是复方氨基酸大输液的原料之一。
色氨酸
色氨酸科技名词定义中文名称：色氨酸英文名称：tryptophan;tryptophane;Trp定义：学名：2-氨基-3-吲哚基丙酸。
一种芳香族、杂环、非极性α氨基酸。
L-色氨酸是组成蛋白质的常见20种氨基酸中的一种，是哺乳动物的必需氨基酸和生糖氨基酸。
在自然界中，某些抗生素中有D-色氨酸。
符号：W。
应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；氨基酸、多肽与蛋白质（二级学科）以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布求助编辑百科名片色氨酸色氨酸β-吲哚基丙氨酸，为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。
水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。
色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质，其结构与IAA相似，在高等植物中普遍存在。
简介[1]拼音名：Se'ansuan学名：β-吲哚基丙氨酸英文名：TryptophanCAS号：73-22-3熔点：281~282℃[2]密度：1.362g/cm3书页号：2010年版二部－281C11H12N2O2 204.23本品为L-2-氨基-3(β-吲哚)丙酸。
按干燥品计算，含C11H12N2O2不得少于99%。
结构式球棍模型性能本品为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。
熔点281~282℃（右旋体），289℃分解，左旋体。
外消旋体微溶于水（0.4%，25℃）和乙醇，溶于甲酸、稀酸和稀碱，不溶于氯仿和乙醚。
0.2%的水溶液pH为5.5~7.0。
生产方法1、3-吲哚乙腈与氨基脲缩合后，氰加成、水解得到外消旋色氨酸。
2、以3-吲哚甲醛与苯胺缩合，然后与a-硝基乙酸脂缩合，经氢化水解得到DL-色氨酸。
3、丙烯醛-苯肼法：丙烯醛与N-丙二酸基乙酸胺在乙醇钠存在下缩合，然后与苯肼缩合、环化，经水解脱羧得到外消旋产品（此方法是最常用、最具经济的生产方法）。
产品标准中国药典2010版Storage：Preserve in well-closed containers密封保存[3]（FCC——1992）含量（%）98.5~101.5干燥失重（105℃，3h，%）≤0.3灼烧残渣（%）≤0.1铅（%）≤0.001重金属（以pb计，%）≤0.004砷（以As计，%）≤0.00015鉴别本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集156图)一致。
色氨酸分析方法的筛选研究
第5卷 第1期2001年3月石河子大学学报(自然科学版)Journal of Shihezi University(Natural Science)V ol.5 N o.1Mar.2001 文章编号:100727383(2001)0120041204色氨酸分析方法的筛选研究Ξ李予霞,王少珩(石河子大学生物科学系,石河子832003)提要:通过对色氨酸分析的研究探讨,筛选出两种操作简单、方便的分析方法,获得了较好的重现性和回收率。
关键词:色氨酸;分析方法;筛选中图分类号: O629171 O65219 文献标识码:A 色氨酸(又名β2吲哚2α氨基丙酸),是蛋白质的重要成分,是人和各种动物生长发育不可缺少的必需氨基酸之一。
色氨酸除在营养代谢中起重要作用外,还广泛用于医药、化妆品、杀虫剂、动植物生长促进剂等领域。
因此,准确测定有关样品中的色氨酸含量,在营养代谢研究、饲料配制、判断蛋白质营养价值等方面有着重要意义。
由于色氨酸在酸水解中受到破坏,不能与其它氨基酸同步测出其含量,因此酸水解不适合色氨酸分析,还需用碱水解或其它方法另外进行测定。
据文献报道,国外对色氨酸测定方法尚未统一,同一样品在7个实验室测定,其结果的变异系数高达24%[1]。
国内开展色氨酸分配研究起步较晚,方法也极不一致。
我们进行了色氨酸测定方法的研究与探索,经反复试验,筛选出上机法和比色法2种设备简单、操作方便的分析方法,并加以改进和完善,得到了较好的重现性与回收率。
1 仪器与试剂111 仪器日立835250型氨基酸自动分析仪(上机法),分光光度计(比色法)。
112 试剂11211 上机法所需主要试剂及其配制 碱水解液(内含5%氯化亚锡的5m ol・L-1NaOH溶液,需现配现用);上机色氨酸标准液[2]为5nm ol/50μL;缓冲溶液的配制:原仪器内的1号、2号、3号、4号、6号缓冲溶液配方保持不变,只将4号配方中每升缓冲溶液多加14g柠檬酸钠定为IPH25,盛于5号缓冲溶液瓶中,目的在于将色氨酸与精氨酸分开。
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４ ｉ ， ｉ Ｗ Ｌ Ｘ ｔ Ｊ ｏ ａ ｇ， ９ ， Ｙ Ｙ Ｌａ Ｐ ｕ ｅａ Ｃ ｒ ｔ ｒ １９ Ｈ ｏ ， Ｆ ｌ ｈ ｍ ｏ ． ４
６ １： ４ － ４ ６ １ ３１ ８
５ 廖卫平， 陆雪芬 ． 色谱， ９， （）１８ １ １ ２１ ２： ～１９ ９ ０ １
６ ｈ ａｇ ， ａａ Ｆ Ｊ ｒｍ ｔ ｒ １９ ，３ ：３ Ｃ ｕｎ Ｃ Ｒ ｇｎ Ｚ Ａ． Ｃ ｏ ａｏ ， ９０ ５４１－ ｈ ｇ
Ｘ 故选 择紫 外波 长为 ２５ ｍ， Ａ， ４ ｎ 以利 于 Ｋ 和 Ｘ Ａ Ａ
的检测。 不少生物样品中的５ Ｔ等物质浓度很低， － Ｈ 需要电化学检测器检测， 其检测条件我们已报道 过［。－Ｋ ４ ３Ｈ Ｎ在检测电压为０４ ］ ． Ｖ以上时开始有响
应 ，． Ｖ 时响应 接近最 大 。而 Ｋ Ｘ ０７ Ｎ， Ａ和 Ｔ Ｐ在 Ｒ
样品 中 ３ Ｋ 检 獬成晌？赡 能。 流 鞫 嘀泻 ５ － 觳测 可 堋 Ｔ诹
ｍ ｏ／ ｍ ｌＬ三氯乙酸的情况下再观察ｐ Ｈ值对各物质
保 留时 间的影 响 ， 发现 其变 化 明显不 同于在 流动相
中胁不 三 含 氯乙 酸 的情 ，尤其 ｐ 那榭况 ≥ ． ５ ０ Ｔ Ｈ － 保
由于３ Ｋ － Ｎ保留时间短， Ｈ 而有的生物样品成分 复杂， 容积峰大，－Ｋ ３Ｈ Ｎ常被掩盖。Ｃ ｕｎ ６ ｈａｇ等［用 ］
研究报告
色氨酸及其主要代谢产物的分离和在生物样品中的测定＊
易咏红
提 要
廖卫平
赵绮华
广州 ５０６） １２０
陆雪芬
（ 广州医学院神经科学研 究所
建 立 以 砸酸 缓 冲 系统 和 联 用 的 高 效 液 相 色 谱 法 ， 离 和 测 定 了 色 分
μ Ｌ直接进样。 血清０５ Ｌ加３５ ｏ／ ．ｍ ．ｍｌ Ｌ过氯酸０２ ． ｍ ， Ｌ 振荡后 ４００ ｆ ０ ｇ 离心 １ ｍｉ， ０ ｎ取上清液 ５ 蘈 ０μ Ｌ
进 样 。
３Ｈ Ｎ无明显影响， －Ｋ 未用于生物样品测定。Ａ － ｓ ｍ ｓ］ ｕ［用三氯乙酸作离子对试剂以帮助分离儿茶酚 ７
胺［ ７ ］ 。 研 芯恐杏闷渥 为 胱 对 烈 加 本 究 用 作 离 佣试剂以增 ３－ ＫＮ
本研究使用的流动相在 ｐ ． 和三氯乙酸浓 Ｈ４０
Ｅ Ｄ上需要较高电压（．９Ｖ） ０９ 才有较好的响应［］ １， ０ 这不利于其它物质的测定， 故用ＵＶ检测。
度为５ ｍ ｏ／ ０ ｍｌ Ｌ时， 各物质可得到较好的分离。但 不同生物样品中Ｔ Ｐ各代谢产物浓度差别很大， Ｒ 其 来源、 意义也各不相同， 在有关研究中常根据不同目 的有所侧重， 检测条件可作一些调整。 与以往报道相似［］血标本中有一波峰出现在 １， ０ ３ Ｋ － Ｎ部位而干扰其检测， Ｈ 逐步降低电压后发现电 压在＋０５ ． Ｖ以下干扰物无响应， 故测定时可将Ｅ Ｄ 电压设在＋０５Ｖ， ． 此条件下 ５ Ｔ也有良好的响 － Ｈ 应， 但血液中许多其它物质则无响应， 从而减少干 扰。在此电压下 ５ Ｔ － Ｐ和 ５ ＩＡ无响应， Ｈ －Ａ Ｈ 但它主 要来源于中枢神经系统， 血中的检测临床意义不大。 Ｔ ＰＫ Ｘ Ｒ ，Ｎ，Ａ在Ｕ Ｖ波长２５ｎ ４ ｍ时可检测，Ａ在 Ｋ 生理状态下由于浓度低未能测到， Ｒ 但Ｔ Ｐ在负荷试 验时可测得。 以往我们已成功地应用乙酸缓冲系统和甲醇流 动相， Ｄ电压为 ０６Ｖ的条件下检测脑脊液中 在Ｅ ． Ｔ Ｐ及其经 ５ Ｔ途径的代谢物， Ｒ － Ｈ 本研究在此基础 上应用三氯乙酸使 ３ Ｋ － Ｎ保留时间延长而被检测。 Ｈ Ｋ Ｘ Ｎ，Ａ和Ｋ Ａ由于浓度太低未能测得，ａ等［在 Ｃｌ １ ］ 脑组织标本中可测到。 尿液是不少代谢物的最后排泄途径， 在一定程 度上能反映Ｔ Ｐ总的代谢情况， Ｒ 已有不少文献报 道［。 ８ 尿中Ｔ Ｐ， Ｈ Ｋ Ｋ ５ＨＡ ］ Ｒ ５ Ｔ，Ｎ，Ａ， ＩＡ等浓度不 － －
低 ， 方法可用 于尿 液检测 。 本
参
考
文
献
１ ｌ Ｍ ，Ｓ ｅｍａ Ａ Ｃａ Ｅ ｈ ｒ ｎ Ｄ．Ｊ ｕ ｏｈ ｍ，１ ７ ， ０ ６ ７ Ｎｅ ｒｃｅ ９ ８ ３ ：０ －
６３ １
２ ａｉ Ｉ Ｎ ｕｏｈｍａｏ， ９２２ ：２ ７１３ Ｌ ｐ Ｐ ｅｒｐ ａ ｃｌ １８ ，１１２－２３ ｎ ． ３ ｏｔ Ａ ，Ｖ ｚ ｎ Ａ，Ｆｅｃ Ｅ Ｓｈ ａｃ Ｒ Ｆ ｓｅ ｒ Ｃ ｅｚ ｉ ｒｎｈ Ｄ， ｃｗ ｒｚ ａ ． Ｎ ｕｏｃＬ ｔ， ９４４ ：７－７ ｅｒｓ ｅｔ １８ ，８１３１８ ｉ
情 见 况 图 。
３３ 各物质检测条件的分析 ． Ｔ Ｐ及其许多代谢产物在ＵＶ波长为 ２４ｎ Ｒ ５ ｍ 时均有一定的响应， 可用于其浓度较高的样品如尿 液中有关物质检测。Ｔ Ｐ在波长增加时响应有改 Ｒ
善， 故有的研究中使用波长为 ２０ ｍ８ ２０ ６ ｎ ［和 ８ ］
ｎ ９ ｍ［。本研究对紫外检测器波长分别为 ２０２５ ］ ４，４， ２４２０ ８ ｍ时各物质吸收情况进行了研究。 ５，６ 和２０ｎ 发现 Ｔ Ｐ在 ２０ｎ Ｒ ６ ｍ和 ２０ｎ ８ ｍ时有较好的响应。 Ｋ Ｎ在上述波长范围内变化不大， Ａ和Ｘ 但Ｋ Ａ的响 应却随着波长的增加而明显的降低， ２５ ｍ处响 在 ４ｎ 应最好。 生物样品中Ｔ Ｒ浓度一般明显高于Ｋ Ｐ Ａ和
条件进行 了讨论 。
关键词 高效 液相色 谱法， 色氨酸， 羟色 ， ５ － 胺 犬尿酸原， 犬尿酸， 羟犬尿酸原， ３ － 黄尿酸
分类号 Ｏ６８Ｑ５ ５／ １
１ 前言 色氨酸（Ｒ ） Ｔ Ｐ 为人体必需氨基酸之一， 其许多 代谢产物有重要生理功能。 在脑Ｔ Ｐ主要通过色氨 Ｒ 酸羟化酶的作用生成５羟色氨酸（－Ｔ ）再脱羧 － ５Ｈ Ｐ ，
３ Ｋ ５Ｈ Ｐ ５ Ｔ，－ Ｉ Ａ 等 ， 测 电压 ０ ４ － Ｎ， Ｔ ，－ ５ Ａ Ｈ － Ｈ Ｈ 检 ．～
０８ Ｖ。 ．５
表明该途径也存在于中枢神经系统。 Ｎ，－Ｋ Ｋ ３ Ｎ和 Ｈ
Ｑ Ｉ 等 有 经 性１，Ａ 有保 作 ［， ＵＮ 具 神 毒 ［］ 则 护 用３故 ，Ｋ ２ ］
Ｔ Ｐ及其上述产物分离与测定在神经科学研究中 Ｒ 十分重要， 以往已有不少报道［ １。 ４０ 但由于生物样品 ～］
３ 结果和讨论
３ １ 流 动 相 ｐ 值 对 各 物 质 保 留 羰 间的影 响 Ｈ
保留时间。以乙酸缓冲系统ｐ ． 为基础， Ｈ４０ 观察不
同三氯 乙酸 浓度对 各物 质保 留时 间的影 响， 结果 如
图 １ ａ 尽 Ｔ尤 黾 氯 纫宜酸 除Ａ Ｘ 留时 缩 齂 保 奔渌
采用乙酸缓冲流动相，Ｈ值对各物质保留时间 ｐ 的影响见图１ Ｔ Ｐ及 ５ Ｔ ， Ｈ ，－Ｉ Ａ的保 。Ｒ － Ｐ５ Ｔ ５ＨＡ Ｈ － 留时间改变已经报道［，－Ｋ Ｋ Ｘ ４ ３ Ｎ，Ｎ，Ａ及 Ｋ ］ Ｈ Ａ的 保留时间在ｐ ．～６０ Ｈ３０ ． 之间随ｐ Ｈ值升高而延 长。 如图１ 所示， Ｈ４０ ． 时可使Ｔ Ｐ各 － ａ 在ｐ ． 或５０ Ｒ
要通过肝 内色氨酸吡咯酶催化 ， 经犬尿 酸原 （ Ｎ） Ｋ 代
谢为犬尿酸（Ａ） ３羟犬尿酸原（－Ｋ ， Ｋ 或 － ３ Ｎ）后者 Ｈ 再继续代谢为黄尿酸（Ａ） Ｘ 或喹啉酸（ＵＩ 等。既 Ｑ Ｎ）
往 已发现 许多疾病该 代谢 途径 异常 ， 近年 来有研 究
控制器和 ２０ １ 型进样阀组成，ｌａｐｅ －Ｍ Ｄ Ｕｔ ｓｈｒ Ｔ Ｏ Ｓ ｒ ｅ 反相色谱柱（． ｍ ｉ ． ５ ｍ， μ 连接 １３ ４６ ｍ ｄ×２ ｃ ５ ｍ） ． ６ 型可变波长紫外检测器及Ｌ －Ｃ型电化学检测器 Ｃ４ （Ａ ＩＣ ， Ｓ 氧化型） Ｂ Ｓ ． Ｕ Ａ， Ｎ 。后者以玻璃碳电极为 工作电极，ｇＡ Ｃ 电极为参考电极。紫外检测器 Ａ ／ｇ ｌ 用于Ｔ ＰＫ Ｘ Ｋ Ｒ ，Ｎ，Ａ，Ａ等测定， 电化学检测器测定
三 乙胺作 为一种离子对试剂成功地 使某些洗 脱较快
的 色 氨彼 酸岽 ò 代 谢 晃 物 锉保 留 Ａ 时 奔 间 溲 延 长 而 有欣 于 利 分 离 耄 但 对 ǘ
留时间明显延长（ － 考虑各物质的最佳保留时 图１ ｃ。 间和分离效果， 一般情况下可选流动相ｐ ．、 Ｈ４０三 氯乙酸浓度 ５ ｍ ｏ／ ， ０ ｍ ｌ 在此条件下各物质的分离 Ｌ
氨酸 经 ５羟色胺和犬尿酸原两条主要代谢途径 的 ８ － 种代谢物 。使用三氯 乙酸作离子对试剂 以延长 ３羟犬尿酸 －
原的 保留时间， 分析了 流动相 ｐ Ｈ值和三氯乙酸浓度对各物质分离的 影响 及检测条件。 结果表明， ｐ Ｈ值及三氯 乙酸浓 度对各 物质保留 时间 有明显影响， 可作为控制分离的主要因素。 此外， 对生物样品中 各物质分离和检测
７ ｍｌ ５ｍ ｏ／ Ｌ三氯 乙酸 ， 后 用冰 乙酸调 ｐ 值 至所 然 Ｈ
需值。用前减压抽气５ ｎ流速１０ ／ ｉ。 ｍｉ， ． ｍＬｍｎ ２４ 标本处理方法 ．
脑 脊液 （ Ｓ ） ０２μ 的微滤器过 滤后取 ５ Ｃ Ｆ用 ． ｍ ０
Ｘ Ａ等 ８ 种物质的分离和测定方法。
＊ 家 自 国 然科学基金项目 ３３０４）广州市科委课题（７ － － ） （９００５， ９－ ０ Ｏ Ｋ ５１ 本文收稿 日 １９ ０ ２， 期：９８ ５ ５修回日 １９－ －５ －－ 期： ８ ９２ ９ ０
物 Ｔ Ｐ ５ Ｔ ，－ Ｔ，－ Ｉ Ａ，－ Ｋ Ｋ Ｋ Ｒ ，－ Ｐ ５Ｈ ５ Ａ ３ Ｎ， Ｎ， Ａ， Ｈ Ｈ Ｈ
标准品均为Ｓｇ 公司产品， ｉ ｍａ 甲醇为北京化工 厂产品， 其余为国产分析纯试剂。 标准品贮备液浓度 为１ ｍｌ ， ｍｎ ／ 工作液由流动相稀释。 ｏＬ ２３ 流动相 ． 流动相为含０１ ｍ ｌ Ｎ ２Ｄ Ａ的０１ ｏ／ ． ｍ ｏ／ ａＥ Ｔ Ｌ ．ｍ ｌ Ｌ乙酸钠溶液与甲醇按体积比９ ５ ５： 混合， ０ 或加 ～
Ａｃｓ ９ ０ １２ ２ ７２ １ ｔ ，１８ ，０ ： ４－ ５
９ ｉ ａ ｓ ．Ｊ ｒｍａ ｇ ， ９９１５２３２９ Ｒｃ ｒ Ｄ Ｃ ｏ ｔ ｒ １７ ，７ ：９－９ ｈｄ Ａ ｈ ｏ